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Resumo

Este estudo ilustra o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral, enfatizando o procedimento específico e o protocolo padronizado. Para avaliar o protocolo, foram realizadas medidas de peso corporal, teste Rotarod, escore de falha no pé, outros testes comportamentais e detecção de hormônio do crescimento.

Resumo

A paralisia cerebral (PC) é uma doença pediátrica refratária com alta prevalência, alta taxa de incapacidade e tratamento difícil. Atualmente, uma variedade de tratamentos é usada para PC. O tratamento envolve terapia medicamentosa e não medicamentosa. A terapia externa da medicina tradicional chinesa é um método de tratamento muito distinto na terapia não medicamentosa. Como uma das terapias externas da medicina tradicional chinesa, a massagem é usada no tratamento da paralisia cerebral e tem boa eficácia, pequenos efeitos colaterais e forte operabilidade. Como parte da terapia externa da MTC, a manipulação seletiva da coluna vertebral pode efetivamente promover o crescimento e o desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. A operação foi dividida principalmente em quatro etapas: primeiro, o método de fricção foi aplicado na coluna e em ambos os lados da coluna por 1 min. O método de prensagem e amassamento foi aplicado na coluna por 5 min e nos músculos de ambos os lados da coluna por 5 min. Em segundo lugar, foram realizadas prensas e amassos nos pontos de acupuntura locais sensíveis na coluna por 2 minutos. Em terceiro lugar, o membro afetado foi tratado pelo método de torção por 1 min. Quarto, o método de fricção foi aplicado em uma linha média da testa até a parte de trás do cérebro por 1 min. Este estudo teve como objetivo usar a manipulação seletiva da coluna vertebral para tratar ratos infantis com paralisia cerebral. O peso, o teste Rotarod, o escore de falha do pé e o hormônio do crescimento de ratos infantis com paralisia cerebral foram detectados para entender o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. Os resultados mostraram que ele pode promover o ganho de peso, melhorar a capacidade de equilíbrio e a função motora, promover o crescimento e o desenvolvimento de ratos com paralisia cerebral infantil, promover a secreção do hormônio do crescimento e aumentar a temperatura das partes sensíveis das costas.

Introdução

A Paralisia Cerebral (PC), causada por danos não progressivos ao cérebro no feto ou na infância, é um grupo de distúrbios caracterizados por desenvolvimento motor e postural anormal1, distúrbios do desenvolvimento, incluindo ganho de peso lento 2,3,4 e disfunção motora. A incidência de paralisia cerebral na China é de 2,48% e a prevalência é de 2,46‰ (1-6 anos)5, respectivamente. Estudos estrangeiros relataram uma prevalência de 2,4%-3,6%6. A paralisia cerebral é uma das principais causas de lesões físicas e incapacidade em crianças, entre as quais os distúrbios do equilíbrio e do movimento afetam significativamente as atividades de vida diária1. A paralisia cerebral pode ser causada por parto prematuro, infecção, genética, isquemia e hipóxia neonatal, icterícia neonatal e outros fatores patogênicos complexos e diversos7. O objetivo do tratamento da paralisia cerebral é melhorar a função física e a qualidade de vida 8. Atualmente, os métodos de tratamento para paralisia cerebral incluem estimulação cerebral profunda9, treinamento de marcha assistido por robô10, acupuntura de punho e tornozelo11 e acupuntura meridiana combinada com massagem12.

A medicina tradicional chinesa (MTC) tem sido cada vez mais utilizada como tratamento eficaz para a PC13,14. A massagem, como parte dela, também desempenha um certo papel. Por exemplo, a manipulação seletiva da coluna vertebral pode regular o estado de hidroximetilação do DNA para regular o desenvolvimento neural e melhorar a função de aprendizado e memória15. No tratamento de ratos infantis com paralisia cerebral, a manipulação seletiva da coluna vertebral pode melhorar a homeostase inflamatória do córtex e do hipocampo, regulando o nível de metilação das citocinas inflamatórias TNF-α e da região promotora do gene IL-1016 e desempenhar um papel terapêutico positivo na capacidade de equilíbrio de ratos infantis com paralisia cerebral16. A manipulação seletiva da coluna vertebral pode melhorar a função cognitiva de ratos infantis com paralisia cerebral17. A manipulação seletiva da coluna vertebral foi utilizada no tratamento de ratos infantis com paralisia cerebral, e observou-se que também teve efeitos terapêuticos sobre seu crescimento e desenvolvimento18.

O objetivo deste estudo é ilustrar o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral, medindo o peso corporal, o teste Rotarod19, o escore de falha do pé20,21 e outros testes comportamentais e a detecção do hormônio do crescimento, e fornecer ideias de pesquisa para o pessoal relevante.

Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Animal Experimental da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan. Todas as operações experimentais em animais seguiram o princípio 3R de redução, otimização e substituição de animais experimentais (nº R-06202018). Ratos Sprague Dawley (SD) saudáveis (14 machos e 7 fêmeas) de grau livre de patógenos específicos (FPS) com peso corporal médio de 250-300 g foram utilizados neste experimento. Os ratos foram criados na sala de animais SPF da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan, número do certificado: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Todos os ratos foram alojados em um ciclo claro/escuro de 12 horas com um ambiente controlado por luz natural a uma temperatura ambiente de 22-26 °C e uma umidade relativa de 40%-50%. Após 1 semana de alimentação adaptativa, a relação macho/fêmea foi mantida em 1:2. Após 1 semana, as ratas prenhes foram alojadas em uma única gaiola, alimentadas normalmente, comendo e bebendo livremente. Após o parto natural, foram selecionados os ratos saudáveis nascidos das ratas prenhes. Os ratos infantis foram divididos nos grupos Simulado, Controle e Tratamento para observar o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. De cada grupo, 6 filhotes machos foram selecionados para o experimento. O grupo Tratamento foi tratado com manipulação seletiva da coluna vertebral a partir do5º dia após o nascimento, e o tratamento foi administrado por 6 dias, seguido de repouso por 1 dia.

1. Estabelecendo o modelo de paralisia cerebral

  1. Esterilize o microscópio, tesouras oftálmicas, fórceps, sutura, placa cirúrgica, tesoura, cotonetes e luvas necessárias para a cirurgia e coloque-os na sala de cirurgia.
  2. Separe um filhote temporariamente de sua mãe no terceiro dia de vida, coloque-o em um único quadro e transporte-o para a sala de cirurgia estéril.
  3. Meça o peso corporal. Inclua ratos infantis com peso corporal variando de 7 a 9 g no estudo e exclua aqueles que não se conformaram com o peso corporal. Divida aleatoriamente os ratos infantis em grupos Simulados, Controle e Tratamento.
  4. Induza a anestesia com isoflurano na concentração de 2% e mantenha a anestesia a 1% usando uma máquina de anestesia com gás inalatório de pequenos animais.
    NOTA: Este experimento é principalmente para observar os efeitos da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. A anestesia foi realizada de acordo com os requisitos gerais durante o processo de modelagem, e a analgesia adicional afetará os resultados da observação.
    1. Conecte o anestésico de gás de pequeno porte animal à fonte de alimentação e abra a válvula conectada à caixa de indução.
    2. Coloque o rato infantil na caixa de indução, gire o botão de ajuste de concentração e ajuste a concentração de isoflurano para 2% para induzir a anestesia.
    3. Quando o rato bebê estiver inconsciente, remova-o da caixa de indução. Coloque-o na placa de operação e feche o canal 1 da máquina de anestesia.
    4. Coloque o rato infantil em decúbito dorsal. Fixe a máscara de inalação de anestesia para manter a anestesia.
    5. Abra o canal conectado à máscara de inalação de anestesia. Mantenha a anestesia girando o botão de ajuste de concentração e ajustando a concentração de isoflurano para 1%.
      NOTA: Após a anestesia, avalie a profundidade do anestésico levantando e beliscando à força os dedos dos pés e a cauda dos ratos bebês. Uma ausência de resposta quando os dedos dos pés e a cauda foram levantados e comprimidos confirma que a profundidade da anestesia foi atingida.
  5. Desinfete a pele do pescoço do rato bebê três vezes com álcool a 75% e faça uma incisão longitudinal de 1 cm na pele do pescoço para expor o tecido subcutâneo.
    NOTA: A incisão longitudinal da pele do pescoço não causa defeito na pele.
  6. Corte a pele do pescoço esquerdo sob um microscópio de dissecação e use uma pinça oftálmica para separar sem rodeios o músculo esterno-hióideo e o músculo esternomastóideo esquerdo.
    1. Encontre a artéria carótida comum esquerda e o nervo vago e separe a artéria carótida comum esquerda e o nervo vago.
    2. No grupo Modelo, corte a artéria carótida comum esquerda com uma caneta de coagulação elétrica. Limpe e suture a incisão no pescoço.
    3. No grupo Sham, separe a artéria carótida comum esquerda do nervo vago.
  7. Após a operação, coloque o rato em banho-maria termostático em decúbito ventral para ressuscitação por 1 h.
    NOTA: Após a recuperação natural, a cor da pele dos membros e de todo o corpo ficou avermelhada. O rato bebê poderia mover seus membros de forma autônoma e engatinhar de forma independente.
  8. Colocar os ratos ressuscitados dos grupos de controlo e tratamento numa incubadora fechada a 37 °C em decúbito ventral. Introduza uma mistura de 5% de oxigênio e 95% de gás nitrogênio para induzir hipóxia e remova os ratos após 2 h.
  9. Remova o rato bebê que completou o processo de hipóxia da caixa de hipóxia e coloque-o em decúbito ventral em uma caixa com conteúdo normal de oxigênio atmosférico. Colocá-los em banho-maria termostático a 37 °C durante 1 h. Após a recuperação completa, transfira o rato bebê de volta para a gaiola da mãe.
    NOTA: Depois de se recuperar naturalmente, a cor da pele dos membros e de todo o corpo ficou vermelha. O rato bebê podia mover seus membros de forma autônoma e engatinhar de forma independente.
  10. Colocar o rato bebé do grupo Sham numa caixa com teor normal de oxigénio atmosférico e colocar a caixa num banho-maria termostático a 37 °C durante 1 h. Após a recuperação completa, coloque o rato bebê de volta na gaiola da mãe para alimentação.
    NOTA: Depois de se recuperar naturalmente, a cor da pele dos membros e de todo o corpo ficou vermelha. O rato bebê podia mover seus membros de forma autônoma e engatinhar de forma independente. Todo o processo de operação foi concluído na sala de operações especiais da sala de animais SPF da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan. Durante a ressuscitação e hipóxia, o operador observa o rato bebê o tempo todo para evitar a morte causada por postura inadequada. Ratas lactantes foram alimentadas com ração de reprodução livre de patógenos específicos (FPS) e, quando os filhotes foram capazes de se autoalimentar, os filhotes foram desmamados (dia 21 pós-natal) e alimentados com ração de manutenção com FPS.

2. Experimento de reflexo de endireitamento

  1. No4º dia após o nascimento (2º dia após a modelagem), realizar o experimento do reflexo de endireitamento para verificar se o modelo foi bem-sucedido (Figura 1 e Tabela 1).
    1. Levante a cauda do rato bebê, descanse suas costas em uma tábua horizontal e use o polegar e o indicador para prender a barriga e o pescoço. Verifique se o rato pode retornar à sua posição normal. A incapacidade do rato de retornar à posição normal a partir da posição anormal devido à perda do reflexo de endireitamento é registrada como um modelo bem-sucedido16,22.
    2. Registre o tempo que cada grupo de filhotes leva para passar da posição supina para a posição prona. Comece a registrar o momento em que os dedos polegar e indicador são liberados simultaneamente na posição supina, permita que o rato bebê vire para a posição de bruços e pare de gravar quando as patas dianteiras e traseiras forem colocadas no chão. Se o rato bebê não puder retornar à posição normal por mais de 20 s, registre o tempo de endireitamento como 20 s.

3. Preparação antes da operação

  1. Após a modelagem, separe o rato bebê com paralisia cerebral de sua mãe e leve-o para uma sala de cirurgia com temperatura ambiente constante de 22-26 °C por 2 min para se adaptar ao ambiente circundante.
  2. Use luvas descartáveis para manter a palma da mão suave e macia e a temperatura entre 36-37 °C.
  3. Coloque o rato suavemente na palma da mão esquerda. Dobre o polegar esquerdo para cobrir os olhos do rato por 2 min para formar um campo de visão escuro para que o rato possa se adaptar ao ambiente da palma da mão do operador. Use os dedos indicador e médio direitos para manipulação.
    NOTA: Cobrir os olhos do rato bebê pode criar um ambiente escuro. Isso evitará que o rato bebê fique agitado por causa do ambiente inseguro e incerto que afeta os resultados experimentais.

4. Dividindo os ratos nos grupos Controle e Tratamento

  1. No segundo dia após a modelagem (P5), verificar o modelo pelo teste do reflexo de endireitamento e dividir aleatoriamente os ratos infantis nos grupos Controle e Tratamento. Realize manipulação seletiva da coluna vertebral nos ratos infantis do grupo de tratamento.
  2. Coloque o rato bebê na posição de bruços. Certifique-se de que a lombada seja sempre mantida em um nível reto (Figura 2A).
  3. Massageie a coluna e ambos os lados da coluna por 1 min usando o método de fricção e use o método de pressionar e amassar a coluna e os músculos de ambos os lados da coluna por 5 min.
    1. Massageie a coluna e a pele de ambos os lados usando o método de fricção para relaxar o rato bebê e aliviar totalmente sua tensão. Certifique-se de que a frequência de fricção seja de 100 a 120 vezes/min por 1 minuto depois que o rato bebê estiver quieto e sem agitação.
      1. Use o dedo indicador direito, o dedo médio e o dedo anelar como superfície de contato e faça um movimento circular de fricção na superfície da pele da coluna cervical, torácica e lombar da cabeça à cauda sem perturbar o tecido subcutâneo.
      2. Com o dedo indicador direito, o dedo médio e o dedo anelar como superfícies de contato, realizar movimentos circulares na superfície da pele do músculo trapézio, glúteo superficial, músculo romboide cervical, músculo romboide peitoral, músculo grande dorsal e músculo oblíquo externo em ordem da cabeça à cauda de acordo com o padrão anatômico animal23, sem perturbar o tecido subcutâneo.
    2. Trate a coluna vertebral primeiro pressionando e amassando por 5 min, seguido de pressionar e amassar os músculos de ambos os lados da coluna por 5 min.
      1. Aplique o método de amassar na coluna a uma frequência de 120 vezes/min por 5 min. Use o indicador direito ou o dedo médio como superfície de contato. Da cabeça à cauda, faça amassamento circular na pele superficial das vértebras cervicais, torácicas e lombares, combinado com pressão para baixo (1,77 ± 0,54 N). Certifique-se de que a força atinja as vértebras cervicais, vértebras torácicas, vértebras lombares e ligamentos supraespinhosos.
      2. Aplique o método de pressão e amassamento nos músculos de ambos os lados da coluna a uma frequência de 120 vezes/min por 5 min. Use o dedo indicador direito ou o dedo médio como superfície de contato. De acordo com o padrão anatômico animal23, pressione a superfície da pele do trapézio, glúteo superficial, colo romboide, peitoral romboide, grande dorsal e músculos abdominais oblíquos externos em um movimento redondo de amassamento da cabeça à cauda, com uma força de 1,77 ± 0,54 N, de modo que a força atinja o trapézio, glúteo superficial, colo romboide, peitoral romboide, grande dorsal e músculos abdominais oblíquos externos (Figura 2B)23.
  4. Pressione e amasse os pontos de acupuntura espinhais sensíveis (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu24) a uma frequência de 100-120 vezes/min por 2 min. Usando o dedo indicador ou médio direito como superfície de contato, amasse circular e pressione para baixo (1,77 ± 0,54 N) na superfície da pele dos pontos de acupuntura locais (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu) em ratos infantis com paralisia cerebral.
    NOTA: Os pontos de acupuntura foram selecionados de acordo com o "Mapa de Pontos de Acupuntura Animal" formulado pelo Ramo de Pesquisa de Acupuntura Experimental da Sociedade Chinesa de Acupuntura (Figura 3)25.
  5. Estimule localmente o membro afetado pelo método de torção a uma frequência de 25 vezes/min por 1 min.
    1. Com o polegar direito e o indicador, belisque o membro afetado do rato infantil com paralisia cerebral, exercendo força simétrica nos dois dedos. Certifique-se de que a força seja suave e a ação seja leve e suave. Esfregue o extensor radial do carpo direito, extensor comum dos dedos, extensor ulnar do carpo, falange, articulação interfalangeana, músculo gastrocnêmio, músculo semitendíneo, osso metatarso e articulação intermetatarsal de rato infantil para frente e para trás.
  6. Aplique o método de fricção na linha média da testa até a parte de trás do cérebro a uma frequência de 100-120 vezes/min por 1 min. Use o dedo indicador direito como superfície de contato e use o método de fricção em uma linha imaginária da testa até o meio do cérebro posterior do rato infantil (ou seja, uma linha de Baihui, Fengfu e Dazhui) (Figura 3).
    NOTA: A massagem é aplicada principalmente na pele. É um movimento circular na superfície da pele da cabeça do rato infantil com paralisia cerebral. Não precisa conduzir o movimento muscular subcutâneo de um rato infantil com paralisia cerebral.
  7. No final do procedimento, deixe o rato bebê sozinho por 30 minutos antes de devolvê-lo à gaiola da mãe rato.
    NOTA: Com a idade, o cabelo dos ratos infantis torna-se espesso, por isso é necessário remover os pelos traseiros de todos os grupos de ratos infantis durante a operação de massagem para evitar afetar o efeito experimental.

5. Detecção da temperatura dos pontos de acupuntura locais

  1. Use um termovisor infravermelho para detectar a temperatura da área do ponto de acupuntura local antes e depois da operação.
    1. Antes da massagem seletiva da coluna, conecte a interface Type-C do telefone celular com a interface USB do dispositivo de imagem infravermelha com um cabo de dados e ligue o botão Liga / Desliga.
    2. Clique em Analisar para entrar no terminal de celular do software, selecione Foto para entrar no modo de foto e clique no modo Picture in Picture no canto inferior direito.
    3. Foque a câmera nas áreas de acupuntura dos pontos de acupuntura Dazhui, Xinshu e Shenshu (Figura 3) nas costas do rato bebê para tirar fotos de temperatura. Clique em Foto para concluir a captura da imagem e salve-a no formato JPG.
    4. Conecte o computador com um cabo de dados e carregue a imagem salva em um computador instalado com o software Fotric para análise.
      1. Abra o software Fotric no PC, abra o arquivo local e encontre o local da imagem.
      2. Selecione a área de trabalho do Thermogram, selecione a imagem a ser analisada e entre na interface de análise.
      3. Na tela Análise , selecione a imagem na caixa Imagem térmica à direita e abra o Bloqueio.
      4. Selecione a função de zoom, ajuste o tamanho da imagem térmica e a caixa esquerda Imagem de fundo para coincidir e desative o bloqueio à direita.
      5. Encontre o retângulo de medição Definir na barra de ferramentas na parte superior e marque o ponto de acupuntura a ser detectado na figura.
      6. Clique em Relatório à direita para registrar o valor da temperatura.

6. Detecção da função do equilíbrio motor de ratos infantis com paralisia cerebral

  1. Use o teste Behavioral Rotarod19 para detectar a função motora de ratos nos grupos Simulado, Controle e Tratamento no61º dia após o nascimento.
    1. Configurações de parâmetros: Inicie o interruptor de alimentação, selecione Fazer experimento para entrar na próxima etapa, selecione Positivo, Ratos, Tempo 5 min para entrar na próxima etapa e selecione Tempo de conta: 10s, Velocidade: 10rpm.
    2. Em seguida, coloque os ratos na pista de corrida e comece o teste clicando em Executar depois que eles ficarem firmes. Ajuste o estado de execução de cada execução para ON. Treine cada rato uma vez por 5 minutos e, em seguida, comece a realizar o teste três vezes.
    3. Após o treinamento, coloque os ratos bebês na pista de corrida com haste rotativa. Depois que estiver estável, clique em Executar e ajuste o estado de execução para ON. Ao final de 5 min, selecione Data para registrar o tempo e a velocidade de cada rato caindo da pista de corrida rotarod pela primeira vez, ou seja, os dados de tempo de execução.
  2. Utilizar o teste de falha do pé20,21 para avaliar a função motora do equilíbrio do membro torácico direito dos grupos Sham, Controle e Tratamento no61º dia após o nascimento.
    1. Coloque os ratos bebês na extremidade inicial da escada horizontal e grave um vídeo deles cruzando-a até a outra extremidade (100 cm de comprimento e a distância entre cada escada é de 2 cm). Após uma sessão de treinamento, execute o teste formal três vezes para cada rato em um intervalo de 5 minutos.
    2. Observe o membro torácico direito quando o animal cruza a escada usando a reprodução em baixa velocidade para fazer uma pontuação, conforme mostrado no padrão de pontuação (Tabela 2).

7. Western blotting

  1. Realize a análise de western blotting das amostras de tecido conforme descrito anteriormente26.
    NOTA: A quantidade de lisado foi determinada de acordo com o tamanho do bloco de tecido. Os anticorpos utilizados foram os seguintes: anticorpo primário anti-hormônio do crescimento (0,5 μg [0,5 ng/pista]); anticorpo anti-receptor do hormônio do crescimento (1/1000); anticorpo anti-beta actina de referência interna (1/2000) para anticorpos primários; Cabra anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) para anticorpo secundário.

8. Detectando a força da mão

  1. Use o dispositivo usado para detectar a força de manipulação na mão usada para massagem. Encaixe o dedo usado para massagear o rato bebê com o chip sensor do dispositivo e ligue o botão Liga / Desliga .
  2. Conecte a interface do disco rígido que armazena o software do testador manual ao computador e digite o endereço IP dedicado do testador manual na caixa de entrada URL .
  3. Instale o cliente SpringVR no computador, clique para entrar na interface de coleta e selecione o Padrão de Dedo no canto inferior direito para testar a força de manipulação.
  4. Selecione a opção Pressão e clique em Iniciar para começar a registrar a força manual do operador durante a operação. O software registrará automaticamente a intensidade da manipulação e gerará uma tabela de dados no disco local onde os dados no nome do arquivo PressureSensor serão encontrados.

9. Estatísticas de dados

NOTA: O software SPSS26.0 foi usado para análise estatística, o Graphpad Prism9.0.0 para a produção do gráfico de barras e o Image J para análise do valor de cinza das bandas de proteínas.

  1. Analisar e apresentar todos os dados como média ± desvio padrão (Média ± DP).
    NOTA: O padrão do teste foi α = 0,05, e P ≤ 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. O teste de Fisher foi utilizado porque os dados foram analisados por análise de variância e normalidade e conformaram-se às características de distribuição normal e homogeneidade de variância.

Resultados

A manipulação seletiva da coluna vertebral pode promover o ganho de peso corporal em ratos infantis com paralisia cerebral.
Durante o tratamento, o peso corporal foi medido nos dias pós-natais 3, 14, 28, 42 e 61 (Figura 4, Tabela 3). No terceiro dia após o nascimento, o peso corporal do grupo Sham foi de 5,53 ± 0,035 g, e o peso corporal do grupo Controle foi de 3,15 ± 0,43 g. O peso corporal do grupo Tratamento foi...

Discussão

Como a isquemia e a hipóxia são importantes fatores patogênicos da paralisia cerebral, o método internacionalmente reconhecido de estabelecer o modelo de paralisia cerebral é combinado com a hipóxia para preparar o modelo de paralisia cerebral 16,28,29,30. Quando a paralisia cerebral se desenvolve, causa atraso global no desenvolvimento, incluindo peso e ...

Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse financeiros ou outros concorrentes neste trabalho.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelo Programa Geral da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82374614), o Projeto Biomédico Principal do Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Yunnan (202102AA100016), o Projeto Principal Conjunto de Pesquisa Básica Aplicada do Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Yunnan - Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan (201901AI070004), Apoiado pelo Laboratório Chave de Acupuntura, Moxabustão e Massagem para Prevenção e Tratamento de Encefalopatia em Faculdades e Universidades da Província de Yunnan (2019YGZ04), Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Yunnan - Projeto Juvenil do Programa de Pesquisa Básica da Província de Yunnan (202101AU070002), Programa de Pós-Graduação do Fundo de Pesquisa Científica do Departamento de Educação da Província de Yunnan, (2023Y0433); Fundação de Pesquisa Científica do Departamento de Educação da Província de Yunnan, (2023Y0462).

Materiais

NameCompanyCatalog NumberComments
96-well platesBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determination of protein concentration
Anti-beta Actin antibodyAbacmAb8227Dilution: 1/2000
Anti-Growth Hormone antibodyAbacmAb1268820.5 µg (0.5 ng/lane)
Anti-Growth Hormone receptor antibodyAbacmAb202964Dilution: 1/1000
Basic operating microscopeShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101The common carotid artery was isolated under microscope during modeling
BCA developerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determination of protein concentration
Chemiluminescence imaging systemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein banding imaging
Direct-load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatic snow ice makerHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023Ice-making
ECL luminescent substrate kitBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvert latent images in exposed film into visible images
Electric-heated thermostatic water bathTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIThe young rats were resuscitated after modeling
Electronic scalesKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002The body weight of the young rats was measured
German small white electric coagulation pen hemostatHaohangL55×W125×H37It was used to coagulate the left common carotid artery
GloveJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017For massage operation
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Electrophoretic solution, Configure the transfer fluid
Goat Anti-RabbitIgG H&L (HRP) AbacmAb6721Dilution: 1/10000
Intelligent laboratory ultra-pure water machineChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTDN/AFiltration (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198Anesthesia was maintained by induction in young rats
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Infrared image analysis software
Low temperature high speed tissue grinderWuhan Servicebio technology CO.,LTDSKZ3F20200191Tissue grinding
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configure the transfer fluid
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Electrophoresis
Multiskan Spectrum Microplate SpectrophotometerTECANSparkThe absorbance and concentration of tissue protein were detected
Pressure-sensing smart glovesJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveIt is used to measure the manipulative strength of the operator
PVDF membraneMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Refrigerated centrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuge
Research three-in-one thermal imagerFOTIRC226S (384 x 288)Temperature measurement
RIPA lysateBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytic tissue
SHA-CA digital display water bath thermostatic oscillatorChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CAYoung rats were used in hypoxia
Six-rat fatigue rotarod apparatusShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703CP motor function was detected
Skim milk powderGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Confining liquid
SPF breeding feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285266Lactating female rats were fed
SPF maintenance feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285267The pups were fed after weaning
Surgical plateShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002The model operating table was established in young rats
TS-200 Orbital shakerHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SGel fixation
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configure TBST 
ZS-MV Portable anesthesia machineZHONGSHI SCIENCE &TECHNOLOGYZS-MV-IAnesthesia was induced and maintained in experimental animals

Referências

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