JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מחקר זה ממחיש את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין, תוך שימת דגש על ההליך הספציפי והפרוטוקול הסטנדרטי. מדידת משקל גוף, בדיקת רוטרוד, ציון תקלה בכף הרגל, בדיקות התנהגותיות אחרות וזיהוי הורמון גדילה בוצעו כדי להעריך את הפרוטוקול.

Abstract

שיתוק מוחין (CP) היא מחלת ילדים עקשנית עם שכיחות גבוהה, שיעור נכות גבוה וטיפול קשה. כיום משתמשים במגוון טיפולים לשיתוק מוחין. הטיפול כולל טיפול תרופתי ולא תרופתי. טיפול חיצוני ברפואה הסינית המסורתית הוא שיטת טיפול ייחודית מאוד בטיפול שאינו תרופתי. כאחד הטיפולים החיצוניים של הרפואה הסינית המסורתית, עיסוי משמש לטיפול בשיתוק מוחין ובעל יעילות טובה, תופעות לוואי קטנות ויכולת פעולה חזקה. כחלק מטיפול חיצוני ברפואה הסינית המסורתית, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לקדם ביעילות את הצמיחה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. הניתוח חולק בעיקר לארבעה שלבים: ראשית, שיטת השפשוף יושמה על עמוד השדרה ומשני צידי עמוד השדרה למשך דקה. שיטת הלחיצה והלישה יושמה על עמוד השדרה למשך 5 דקות, ועל השרירים משני צידי עמוד השדרה למשך 5 דקות. שנית, בוצעו לחיצה ולישה של נקודות הדיקור המקומיות הרגישות בעמוד השדרה למשך 2 דקות. שלישית, הגפה הפגועה טופלה בשיטת פיתול למשך דקה אחת. רביעית, שיטת השפשוף יושמה על קו אמצע מהמצח לחלק האחורי של המוח למשך דקה אחת. מחקר זה נועד להשתמש במניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה כדי לטפל בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. המשקל, מבחן רוטרוד, ציון תקלה בכף הרגל והורמון הגדילה של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין זוהו כדי להבין את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. התוצאות הראו שהוא יכול לקדם עלייה במשקל, לשפר את יכולת שיווי המשקל והתפקוד המוטורי, לקדם צמיחה והתפתחות של חולדות עם שיתוק מוחין בתינוקות, לקדם הפרשת הורמון גדילה ולהעלות את הטמפרטורה של חלקים רגישים בגב.

Introduction

שיתוק מוחין (CP), הנגרם על ידי נזק לא מתקדם למוח בעובר או בינקות, הוא קבוצה של הפרעות המאופיינות בהתפתחות מוטורית ויציבה לא תקינה1, הפרעות התפתחותיות כולל עלייה איטית במשקל 2,3,4 ותפקוד מוטורי לקוי. שכיחות שיתוק מוחין בסין היא 2.48%, והשכיחות היא 2.46‰ (גילאי 1-6)5, בהתאמה. מחקרים זרים דיווחו על שכיחות של 2.4%-3.6%6. שיתוק מוחין הוא גורם עיקרי לפציעות פיזיות ונכות בילדים, ביניהן הפרעות שיווי משקל ותנועה משפיעות באופן משמעותי על פעילויות החיים היומיומיות1. שיתוק מוחין יכול להיגרם על ידי לידה מוקדמת, זיהום, גנטיקה, איסכמיה והיפוקסיה של יילודים, צהבת יילודים וגורמים פתוגניים מורכבים ומגוונים אחרים7. מטרת הטיפול בשיתוק מוחין היא לשפר את התפקוד הגופני ואיכות החיים 8. נכון לעכשיו, שיטות הטיפול בשיתוק מוחין כוללות גירוי מוחי עמוק9, אימון הליכה בעזרת רובוט10, דיקור שורש כף היד והקרסול11 ודיקור מרידיאן בשילוב עיסוי12.

הרפואה הסינית המסורתית (TCM) משמשת יותר ויותר כטיפול יעיל ל-CP13,14. עיסוי, כחלק ממנו, ממלא גם תפקיד מסוים. לדוגמה, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לווסת את מצב ההידרוקסימתילציה של ה-DNA כדי לווסת את ההתפתחות העצבית ולשפר את תפקוד הלמידה והזיכרון15. בטיפול בחולדה תינוקת עם שיתוק מוחין, מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה עשויה לשפר את ההומאוסטזיס הדלקתי של קליפת המוח וההיפוקמפוס על ידי ויסות רמת המתילציה של ציטוקינים דלקתיים TNF-α ואזור מקדם הגן IL-1016 ולמלא תפקיד טיפולי חיובי ביכולת האיזון של חולדה תינוקת עם שיתוק מוחין16. מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לשפר את התפקוד הקוגניטיבי של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין17. נעשה שימוש במניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה בטיפול בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין, ונצפה כי יש לה גם השפעות טיפוליות על צמיחתן והתפתחותן18.

מטרת מחקר זה היא להמחיש את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה על גדילה והתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין על ידי מדידת משקל הגוף, מבחן רוטרוד19, ציון תקלת כף רגל20,21, ובדיקות התנהגות אחרות וזיהוי הורמון גדילה, ולספק רעיונות מחקר לאנשי צוות רלוונטיים.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של חיות ניסוי של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית מסורתית. כל פעולות הניסוי בבעלי חיים עקבו אחר עקרון 3R של הפחתה, אופטימיזציה והחלפה של חיות ניסוי (מס' R-06202018). בניסוי זה נעשה שימוש בחולדות Sprague Dawley (SD) בריאות (14 זכרים ו-7 נקבות) בדרגה נטולת פתוגנים ספציפיים (SPF) עם משקל גוף ממוצע של 250-300 גרם. החולדות גודלו בחדר החיות SPF של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית מסורתית, מספר תעודה: SYXK (Yunnan) K2022-0004. כל החולדות שוכנו במחזור אור/חושך של 12 שעות עם סביבה מבוקרת אור טבעי בטמפרטורת החדר של 22-26 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 40%-50%. לאחר שבוע אחד של הזנה אדפטיבית, היחס בין זכר לנקבה נשמר על 1:2. לאחר שבוע, החולדות ההרות שוכנו בכלוב יחיד, הוזנו כרגיל, אכלו ושתו בחופשיות. לאחר הלידה הטבעית, נבחרו החולדות הבריאות שנולדו לחולדות ההרות. החולדות התינוקות חולקו לקבוצות דמה, ביקורת וטיפול כדי לבחון את ההשפעה של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. מכל קבוצה נבחרו 6 גורים זכרים לניסוי. קבוצת הטיפול טופלה במניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה החל מהיוםהחמישי לאחר הלידה, והטיפול ניתן במשך 6 ימים ולאחר מכן מנוחה למשך יום אחד.

1. ביסוס מודל שיתוק מוחין

  1. יש לעקר את המיקרוסקופ, מספריים לעיניים, מלקחיים, תפרים, צלחת ניתוחית, מספריים, צמר גפן וכפפות הנדרשות לניתוח, ולהניח אותם בחדר הניתוח.
  2. הפרידו גור באופן זמני מאמו ביום השלישי לחייו, הניחו אותו במסגרת אחת והעבירו אותו לחדר הניתוח הסטרילי.
  3. מדוד את משקל הגוף. כלול במחקר חולדות תינוקות עם משקל גוף שנע בין 7-9 גרם, והוציא את אלה שלא התאימו למשקל הגוף. חלקו באופן אקראי את החולדות התינוקות לקבוצות דמה, ביקורת וטיפול.
  4. השראת הרדמה עם איזופלורן בריכוז של 2% ושמירה על הרדמה של 1% באמצעות מכונת הרדמה בגז אינהלציה של בעלי חיים קטנים.
    הערה: ניסוי זה נועד בעיקר לבחון את ההשפעות של מניפולציה סלקטיבית בעמוד השדרה על הגדילה וההתפתחות של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין. ההרדמה בוצעה בהתאם לדרישות הכלליות במהלך תהליך המידול, ומשככי כאבים נוספים ישפיעו על תוצאות התצפית.
    1. חבר את חומר ההרדמה הקטן לבעלי חיים לאספקת החשמל ופתח את השסתום המחובר לתיבת האינדוקציה.
    2. הכניסו את החולדה התינוקת לקופסת האינדוקציה, סובבו את כפתור כוונון הריכוז והתאימו את ריכוז האיזופלורן ל-2% כדי לגרום להרדמה.
    3. כאשר החולדה התינוקת מחוסרת הכרה, הוציאו אותה מתיבת האינדוקציה. הנח אותו על לוחית הניתוח וסגור את ערוץ 1 של מכונת ההרדמה.
    4. הניחו את החולדה התינוקת בשכיבה. תקן את מסכת שאיפת ההרדמה כדי לשמור על ההרדמה.
    5. פתח את התעלה המחוברת למסכת שאיפת ההרדמה. שמור על ההרדמה על ידי סיבוב כפתור כוונון הריכוז והתאמת ריכוז האיזופלורן ל-1%.
      הערה: לאחר ההרדמה, העריכו את עומק ההרדמה על ידי הרמה וצביטה בכוח של אצבעות הרגליים והזנב של החולדות התינוקות. אי תגובה כאשר אצבעות הרגליים והזנב הורמו וצבטו מאשרת שעומק ההרדמה הגיע.
  5. יש לחטא את עור הצוואר של החולדה התינוקת שלוש פעמים ב-75% אלכוהול ולחתוך חתך אורכי של 1 ס"מ בעור הצוואר כדי לחשוף את הרקמה התת עורית.
    הערה: חתך אורכי של עור הצוואר אינו גורם למום בעור.
  6. חתכו את עור הצוואר השמאלי תחת מיקרוסקופ מנתח, והשתמשו בפינצטה עיניים כדי להפריד בצורה בוטה בין שריר הסטרנוהיואיד לשריר הסטרנומסטואיד השמאלי.
    1. מצא את עורק הצוואר המשותף השמאלי ועצב הנרתיק, והפרד את עורק הצוואר המשותף השמאלי ועצב הנרתיק.
    2. בקבוצת המודל, חתכו את עורק הצוואר המשותף השמאלי בעזרת עט קרישה חשמלי. נקה ותפור את חתך הצוואר.
    3. בקבוצת השאם, הפרד את עורק הצוואר המשותף השמאלי מהעצב התועה.
  7. לאחר הניתוח, הניחו את החולדה התינוקת באמבט המים התרמוסטטי במצב נוטה להחייאה למשך שעה.
    הערה: לאחר החלמה טבעית, צבע העור של הגפיים ושל כל הגוף היה אדמדם. החולדה התינוקת יכלה להזיז את גפיה באופן אוטונומי ולזחול באופן עצמאי.
  8. הנח את החולדות שעברו החייאה מקבוצות הביקורת והטיפול באינקובטור סגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במצב שכיבה. הכניסו תערובת של 5% חמצן ו-95% גז חנקן כדי לגרום להיפוקסיה, והוציאו את החולדות לאחר שעתיים.
  9. הסר את החולדה התינוקת שהשלימה את תהליך ההיפוקסיה מקופסת ההיפוקסיה והנח אותה במצב שכיבה בקופסה עם תכולת חמצן אטמוספרית רגילה. הניחו אותם באמבט מים תרמוסטטי של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר החלמה מלאה, העבירו את החולדה התינוקת בחזרה לכלוב האם.
    הערה: לאחר ההחלמה הטבעית, צבע העור של הגפיים וכל הגוף היה אדום. חולדה תינוקת יכלה להזיז את גפיה באופן אוטונומי ויכלה לזחול באופן עצמאי.
  10. הנח את החולדה התינוקת מקבוצת השאם בקופסה אחת עם תכולת חמצן אטמוספרית רגילה, והנח את הקופסה באמבט מים תרמוסטטי של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר החלמה מלאה, החזירו את החולדה לכלוב האם להאכלה.
    הערה: לאחר ההחלמה הטבעית, צבע העור של הגפיים וכל הגוף היה אדום. חולדה תינוקת יכלה להזיז את גפיה באופן אוטונומי ויכלה לזחול באופן עצמאי. כל תהליך הניתוח הושלם בחדר הניתוח המיוחד של חדר החיות SPF של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית מסורתית. במהלך החייאה והיפוקסיה, המפעיל מתבונן בחולדה התינוקת בכל עת כדי למנוע מוות הנגרם כתוצאה מיציבה לא נכונה. נקבות חולדות מניקות הוזנו במזון רבייה ללא פתוגנים ספציפיים (SPF), וכאשר הגורים הצליחו להאכיל את עצמם, הגורים נגמלו (יום 21 לאחר הלידה) והוזנו במזון תחזוקה של SPF.

2. ניסוי רפלקס יישור

  1. ביום הרביעי לאחר הלידה (היוםהשני לאחר המידול), בצעו את ניסוי הרפלקס הימני כדי לוודא אם המודל הצליח (איור 1 וטבלה 1).
    1. הרימו את הזנב של החולדה התינוקת, הניחו את גבה על קרש אופקי והשתמשו באגודל ובאצבע המורה כדי לאבטח את בטנה וצווארה. בדוק אם החולדה יכולה לחזור למצבה הרגיל. חוסר היכולת של החולדה לחזור למצב הרגיל מהמיקום החריג עקב אובדן רפלקס היישור נרשם כמודל מוצלח16,22.
    2. רשמו את הזמן שלוקח לכל קבוצת גורים להפוך ממצב שכיבה למצב שכיבה. התחל לתעד את הזמן שבו האגודל והאצבע המורה משתחררים בו זמנית במצב שכיבה, אפשר לחולדה התינוקת להסתובב למצב שכיבה, והפסק להקליט כאשר הכפות הקדמיות והאחוריות מונחות על הרצפה. אם החולדה התינוקת לא יכלה לחזור למצב הרגיל במשך יותר מ-20 שניות, רשום את זמן היישור כ-20 שניות.

3. הכנה לפני הניתוח

  1. לאחר הדוגמנות, הפרד את החולדה התינוקת עם שיתוק מוחין מאמה והביאו אותה לחדר ניתוח עם טמפרטורת חדר קבועה של 22-26 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות כדי להסתגל לסביבה שמסביב.
  2. ללבוש כפפות חד פעמיות כדי לשמור על כף היד עדינה ורכה ועל הטמפרטורה בין 36-37 מעלות צלזיוס.
  3. הניחו את החולדה בעדינות בכף יד שמאל. כופפו את האגודל השמאלי כדי לכסות את עיני החולדה למשך 2 דקות כדי ליצור שדה ראייה כהה כך שהחולדה תוכל להסתגל לסביבת כף היד של המפעיל. השתמש באצבע המורה והאמצעית הימנית למניפולציה.
    הערה: כיסוי העיניים של החולדה התינוקת יכול ליצור סביבה חשוכה. זה ימנע מהחולדה התינוקת להיות נסערת בגלל הסביבה הלא בטוחה וחסרת הוודאות המשפיעה על תוצאות הניסוי.

4. חלוקת החולדות לקבוצות הביקורת והטיפול

  1. ביום השני לאחר הדוגמנות (P5), בדקו את המודל על ידי מבחן רפלקס הימני וחלקו באופן אקראי את החולדות התינוקות לקבוצות הביקורת והטיפול. לבצע מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה על חולדות תינוקות בקבוצת הטיפול.
  2. הנח את החולדה התינוקת במצב שכיבה. ודא שעמוד השדרה נשמר תמיד ברמה ישרה (איור 2A).
  3. עסו את עמוד השדרה ושני צידי עמוד השדרה למשך דקה בשיטת השפשוף, והשתמשו בשיטת הלחיצה והלישה לעמוד השדרה ולשרירים משני צידי עמוד השדרה למשך 5 דקות.
    1. עסו את עמוד השדרה והעור משני הצדדים בשיטת השפשוף כדי להרגיע את החולדה התינוקת ולהפיג את המתח שלה באופן מלא. ודא שתדירות השפשוף היא 100-120 פעמים לדקה למשך דקה אחת לאחר שהחולדה התינוקת שקטה וללא תסיסה.
      1. השתמש באצבע המורה הימנית, האצבע האמצעית והאצבע הקמיצה כמשטח המגע, ובצע תנועת שפשוף מעגלית על פני העור של עמוד השדרה הצווארי, עמוד השדרה החזי ועמוד השדרה המותני מכף רגל ועד ראש מבלי להפריע לרקמה התת עורית.
      2. עם האצבע המורה הימנית, האצבע האמצעית והאצבע הקמיצה כמשטחי מגע, בצע תנועה מעגלית על פני העור של שריר הטרפז, שריר העכוז השטחי, שריר המעוין הצווארי, שריר מעוין החזה, שריר הלטיסימוס דורסי והשריר האלכסוני החיצוני לפי הסדר מהראש ועד הזנב על פי התקן האנטומי של בעלי חיים23, מבלי להפריע לרקמה התת עורית.
    2. יש לטפל בעמוד השדרה תחילה בלחיצה ולישה למשך 5 דקות, ולאחר מכן לחיצה ולישה של השרירים משני צידי עמוד השדרה למשך 5 דקות.
      1. יש למרוח את שיטת הלישה על עמוד השדרה בתדירות של 120 פעמים לדקה למשך 5 דקות. השתמש באצבע המורה או האמצעית הימנית כמשטח המגע. מכף רגל ועד ראש יש לבצע לישה מעגלית על פני העור של חוליות צוואר הרחם, בית החזה והמותני, בשילוב עם לחיצה כלפי מטה (1.77 ± 0.54 N). ודא שהכוח מגיע לחוליות צוואר הרחם, חוליות בית החזה, החוליות המותניות והרצועות העל-ספינות.
      2. יש ליישם את שיטת הלחיצה והלישה על השרירים משני צידי עמוד השדרה בתדירות של 120 פעמים לדקה למשך 5 דקות. השתמש באצבע המורה הימנית או באצבע האמצעית כמשטח המגע. על פי התקן האנטומי של בעלי חיים23, לחץ כלפי מטה על פני העור של הטרפז, העכוז השטחי, הצוואר המעוין, החזה המעוין, הלטיסימוס דורסי ושרירי הבטן האלכסוניים החיצוניים בתנועת לישה עגולה מהראש לזנב, בכוח של 1.77 ± 0.54 N, כך שהכוח יגיע לטרפז, גלוטאוס שטחי, צוואר מעוין, חזה מעוין, חזה מעוין, latissimus dorsi, ושרירי בטן אלכסוניים חיצוניים (איור 2B)23.
  4. לחץ ולוש את נקודות הדיקור הרגישות בעמוד השדרה (כגון Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu ו-Feishu24) בתדירות של 100-120 פעמים לדקה למשך 2 דקות. באמצעות האצבע המורה או האמצעית הימנית כמשטח המגע, בצע לישה מעגלית ולחיצה כלפי מטה (1.77 ± 0.54 N) על פני העור של נקודות דיקור מקומיות (כגון Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu ו- Feishu) בחולדות תינוקות עם שיתוק מוחין.
    הערה: נקודות הדיקור נבחרו על פי "מפת נקודות הדיקור של בעלי חיים" שנוסחה על ידי ענף המחקר לדיקור ניסיוני של האגודה הסינית לדיקור סיני) (איור 3)25.
  5. גירוי מקומי של הגפה הפגועה בשיטת הפיתול בתדירות של 25 פעמים לדקה למשך דקה.
    1. בעזרת האגודל הימני והאצבע המורה, צבט את האיבר הפגוע של החולדה התינוקת עם שיתוק מוחין, והפעיל כוח סימטרי על שתי האצבעות. ודא שהכוח עדין והפעולה קלה ועדינה. שפשפו את המאריך הימני carpi radialis, extensor digitorum נפוץ, extensor carpi ulnaris, פלנקס, מפרק בין-פלנגיאלי, שריר גסטרוקנמיוס, שריר חצי גיד, עצם מטטרסל ומפרק בין-מטטרסלי של חולדה תינוקת קדימה ואחורה.
  6. יש למרוח את שיטת השפשוף על קו האמצע של המצח בחלק האחורי של המוח בתדירות של 100-120 פעמים לדקה למשך דקה. השתמשו באצבע המורה הימנית כמשטח המגע, והשתמשו בשיטת השפשוף על קו דמיוני מהמצח ועד לאמצע המוח האחורי של החולדה התינוקת (כלומר, קו אחד של Baihui, Fengfu ו-Dazhui) (איור 3).
    הערה: העיסוי מוחל בעיקר על העור. זוהי תנועה מעגלית על פני העור של ראש החולדה התינוקת עם שיתוק מוחין. זה לא צריך להניע את תנועת השרירים התת עורית של חולדה תינוקת עם שיתוק מוחין.
  7. בתום ההליך, השאירו את החולדה התינוקת לבד למשך 30 דקות לפני החזרתה לכלוב האם.
    הערה: עם הגיל, שיער החולדות התינוקות הופך עבה, ולכן יש צורך להסיר את השיער האחורי של כל קבוצות החולדות התינוקות במהלך פעולת העיסוי כדי למנוע השפעה על אפקט הניסוי.

5. זיהוי הטמפרטורה של נקודות הדיקור המקומיות

  1. השתמש בהדמיה תרמית אינפרא אדום כדי לזהות את הטמפרטורה של אזור הדיקור המקומי לפני ואחרי הפעולה.
    1. לפני עיסוי עמוד שדרה סלקטיבי, חבר את ממשק Type-C של הטלפון הנייד לממשק ה-USB של מכשיר ההדמיה האינפרא אדום באמצעות כבל נתונים, והפעל את לחצן ההפעלה.
    2. נקישה נתח כדי להיכנס למסוף הטלפון הנייד של התוכנה, בחר תמונה כדי להיכנס למצב הצילום ולחץ על תמונה במצב תמונה בפינה השמאלית התחתונה.
    3. מקדו את המצלמה באזורי נקודות הדיקור של נקודות הדיקור Dazhui, Xinshu ו-Shenshu (איור 3) על גב החולדה התינוקת כדי לצלם צילומי טמפרטורה. נקישה תמונה כדי להשלים את לכידת התמונה ולשמור אותה בפורמט JPG.
    4. חבר את המחשב באמצעות כבל נתונים והעלה את התמונה השמורה למחשב המותקן עם תוכנת Fotric לניתוח.
      1. פתח את תוכנת Fotric במחשב, פתח את הקובץ המקומי ומצא את מיקום התמונה.
      2. בחר את סביבת העבודה Thermogram, בחר את התמונה לניתוח והיכנס לממשק הניתוח.
      3. במסך ניתוח , בחר את התמונה בתיבה תמונה תרמית משמאל ופתח את הנעילה.
      4. בחר את פונקציית הזום, התאם את גודל התמונה התרמית ואת התיבה השמאלית תמונת רקע כך שתתאים זה לזה, וכבה את המנעול בצד ימין.
      5. מצא את הגדר מלבן מדידה בסרגל הכלים למעלה וסמן את נקודת הדיקור שתזוהה באיור.
      6. לחץ על דוח בצד ימין כדי לרשום את ערך הטמפרטורה.

6. איתור תפקוד האיזון המוטורי של חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין

  1. השתמש במבחן רוטרוד התנהגותי19 כדי לזהות את התפקוד המוטורי של חולדות בקבוצות השאם, הביקורת והטיפול ביוםה-61 לאחר הלידה.
    1. הגדרות פרמטרים: הפעל את מתג ההפעלה, בחר בצע ניסוי כדי להיכנס לשלב הבא, בחר חיובי, חולדות, תזמון 5 דקות כדי להיכנס לשלב הבא, ובחר זמן Acc: 10 שניות, מהירות: 10 סל"ד.
    2. לאחר מכן, הניחו את החולדות על מסלול הריצה והתחילו את המבחן על ידי לחיצה על Run לאחר שהן עומדות איתן. התאם את מצב הריצה של כל ריצה ל-ON. אמן כל חולדה פעם אחת למשך 5 דקות, ולאחר מכן התחל לבצע את הבדיקה שלוש פעמים.
    3. לאחר האימון, הניחו את החולדות התינוקות על מסלול הריצה של הרוטרוד. לאחר שהוא יציב, לחץ על הפעלה והתאם את מצב הריצה ל-ON. בתום 5 דקות, בחר תאריך כדי לתעד את הזמן והמהירות של כל חולדה שנופלת ממסלול הריצה של הרוטארוד בפעם הראשונה, כלומר, נתוני זמן הריצה.
  2. השתמש במבחן תקלת כף הרגל20,21 כדי להעריך את התפקוד המוטורי של שיווי המשקל של הגפה הקדמית הימנית של קבוצות ה-Sham, Control ו-Treatment ביוםה-61 לאחר הלידה.
    1. הניחו את החולדות התינוקות בקצה ההתחלתי של הסולם האופקי והקליטו סרטון שלהן חוצות אותו לקצה השני (100 ס"מ אורך, והמרחק בין כל סולם הוא 2 ס"מ). לאחר אימון אחד, בצעו את המבחן הרשמי שלוש פעמים עבור כל חולדה במרווח של 5 דקות.
    2. התבונן בגפה הקדמית הימנית כאשר החיה חוצה את הסולם באמצעות השמעה במהירות נמוכה כדי ליצור ניקוד, כפי שמוצג בתקן הניקוד (טבלה 2).

7. כתמים מערביים

  1. בצע ניתוח כתמים מערביים של דגימות הרקמה כמתואר קודם לכן26.
    הערה: כמות הליזאט נקבעה בהתאם לגודל גוש הרקמה. הנוגדנים ששימשו היו כדלקמן: נוגדן ראשוני נגד הורמון גדילה (0.5 מיקרוגרם [0.5 ננוגרם/נתיב]); נוגדן נגד קולטן הורמון גדילה (1/1000); נוגדן אקטין ייחוס פנימי (1/2000) לנוגדנים ראשוניים; עז נגד ארנבIgG H&L (HRP) (1/10000) לנוגדנים משניים.

8. זיהוי חוזק היד

  1. ללבוש את המכשיר המשמש לזיהוי כוח המניפולציה על היד המשמשת לעיסוי. התקן את האצבע המשמשת לעיסוי החולדה התינוקת עם שבב החיישן של המכשיר, והפעל את לחצן ההפעלה .
  2. חבר את ממשק הדיסק הקשיח המאחסן את תוכנת הבודק הידני למחשב, והזן את כתובת ה-IP הייעודית של הבודק הידני בתיבת קלט ה-URL .
  3. התקן את לקוח SpringVR במחשב, לחץ כדי להיכנס לממשק האיסוף ובחר את דפוס האצבע בפינה השמאלית התחתונה כדי לבדוק את כוח המניפולציה.
  4. בחר באפשרות לחץ ולחץ על התחל כדי להתחיל להקליט את הכוח הידני של המפעיל במהלך הפעולה. התוכנה תתעד אוטומטית את עוצמת המניפולציה ותייצר טבלת נתונים בדיסק המקומי בה יימצאו הנתונים בשם הקובץ PressureSensor .

9. סטטיסטיקת נתונים

הערה: תוכנת SPSS26.0 שימשה לניתוח סטטיסטי, Graphpad Prism9.0.0 לייצור תרשימי עמודות, ותמונה J לניתוח ערך אפור של רצועות חלבון.

  1. לנתח ולהציג את כל הנתונים כממוצע ± סטיית תקן (ממוצע ± SD).
    הערה: תקן הבדיקה היה α = 0.05, ו-P ≤ 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית. המבחן של פישר שימש מכיוון שהנתונים נותחו על ידי ניתוח שונות ונורמליות והתאימו למאפייני ההתפלגות הנורמלית והומוגניות השונות.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

מניפולציה סלקטיבית של עמוד השדרה יכולה לקדם עלייה במשקל הגוף אצל חולדות תינוקות עם שיתוק מוחין.
במהלך הטיפול נמדד משקל הגוף בימים 3, 14, 28, 42 ו-61 לאחר הלידה (איור 4, טבלה 3). ביום השלישי לאחר הלידה, משקל הגוף של קבוצת השאם היה 5.53 ± 0.035 גרם, ומש?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

מכיוון שאיסכמיה והיפוקסיה הם גורמים פתוגניים חשובים לשיתוק מוחין, השיטה המוכרת בעולם לביסוס מודל שיתוק מוחין משולבת עם היפוקסיה להכנת מודל שיתוק מוחין 16,28,29,30. כאשר מתפתח שיתוק מוחין, הוא גורם לעיכוב ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

למחברים אין ניגודי אינטרסים כספיים או אחרים מתחרים במסגרת עבודה זו.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי התוכנית הכללית של הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82374614), הפרויקט הביו-רפואי העיקרי של מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז יונאן (202102AA100016), הפרויקט הגדול המשותף למחקר בסיסי יישומי של המחלקה למדע וטכנולוגיה של מחוז יונאן - אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית מסורתית (201901AI070004), נתמך על ידי המעבדה המרכזית לדיקור, מוקסה ועיסוי למניעה וטיפול באנצפלופתיה במכללות ובאוניברסיטאות של מחוז יונאן (2019YGZ04), המחלקה למדע וטכנולוגיה של מחוז יונאן - פרויקט נוער של תוכנית המחקר הבסיסי של מחוז יונאן (202101AU070002), תוכנית לתארים מתקדמים של קרן המחקר המדעי של מחלקת החינוך של מחוז יונאן, (2023Y0433); קרן המחקר המדעי של מחלקת החינוך של מחוז יונאן, (2023Y0462).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
96-well platesBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determination of protein concentration
Anti-beta Actin antibodyAbacmAb8227Dilution: 1/2000
Anti-Growth Hormone antibodyAbacmAb1268820.5 µg (0.5 ng/lane)
Anti-Growth Hormone receptor antibodyAbacmAb202964Dilution: 1/1000
Basic operating microscopeShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101The common carotid artery was isolated under microscope during modeling
BCA developerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determination of protein concentration
Chemiluminescence imaging systemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein banding imaging
Direct-load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatic snow ice makerHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023Ice-making
ECL luminescent substrate kitBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvert latent images in exposed film into visible images
Electric-heated thermostatic water bathTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIThe young rats were resuscitated after modeling
Electronic scalesKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002The body weight of the young rats was measured
German small white electric coagulation pen hemostatHaohangL55×W125×H37It was used to coagulate the left common carotid artery
GloveJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017For massage operation
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Electrophoretic solution, Configure the transfer fluid
Goat Anti-RabbitIgG H&L (HRP) AbacmAb6721Dilution: 1/10000
Intelligent laboratory ultra-pure water machineChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTDN/AFiltration (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198Anesthesia was maintained by induction in young rats
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Infrared image analysis software
Low temperature high speed tissue grinderWuhan Servicebio technology CO.,LTDSKZ3F20200191Tissue grinding
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configure the transfer fluid
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Electrophoresis
Multiskan Spectrum Microplate SpectrophotometerTECANSparkThe absorbance and concentration of tissue protein were detected
Pressure-sensing smart glovesJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveIt is used to measure the manipulative strength of the operator
PVDF membraneMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Refrigerated centrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuge
Research three-in-one thermal imagerFOTIRC226S (384 x 288)Temperature measurement
RIPA lysateBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytic tissue
SHA-CA digital display water bath thermostatic oscillatorChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CAYoung rats were used in hypoxia
Six-rat fatigue rotarod apparatusShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703CP motor function was detected
Skim milk powderGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Confining liquid
SPF breeding feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285266Lactating female rats were fed
SPF maintenance feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285267The pups were fed after weaning
Surgical plateShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002The model operating table was established in young rats
TS-200 Orbital shakerHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SGel fixation
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configure TBST 
ZS-MV Portable anesthesia machineZHONGSHI SCIENCE &TECHNOLOGYZS-MV-IAnesthesia was induced and maintained in experimental animals

References

  1. Paul, S., Nahar, A., Bhagawati, M., Kunwar, A. J. A review on recent advances of cerebral palsy. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. , 2622310(2022).
  2. Şimşek, T. T., Tuç, G. Examination of the relation between body mass index, functional level and health-related quality of life in children with cerebral palsy. Turk Pediatri Arsivi. 49 (2), 130-137 (2014).
  3. Dahlseng, M. O., et al. Feeding problems, growth and nutritional status in children with cerebral palsy. Acta Paediatrica. 101 (1), Oslo, Norway. 92-98 (2012).
  4. Fogarasi, A., et al. The purple n study: Objective and perceived nutritional status in children and adolescents with cerebral palsy. Disability and Rehabilitation. 44 (22), 6668-6675 (2022).
  5. Xiaojie, L., et al. Epidemiological characteristics of cerebral palsy in twelve province in China. Chinese Journal of Practical Pediatrics Clinical. 33 (5), 378-383 (2018).
  6. Kakooza-Mwesige, A., et al. Prevalence of cerebral palsy in Uganda: A population-based study. The Lancet. Global Health. 5 (12), e1275-1282 (2017).
  7. Korzeniewski, S. J., Slaughter, J., Lenski, M., Haak, P., Paneth, N. The complex aetiology of cerebral palsy. Nature Reviews. Neurology. 14 (9), 528-543 (2018).
  8. Vargus-Adams, J. N., Martin, L. K. Domains of importance for parents, medical professionals and youth with cerebral palsy considering treatment outcomes. Child: Care, Health and Development. 37 (2), 276-281 (2011).
  9. Koy, A., et al. Quality of life after deep brain stimulation of pediatric patients with dyskinetic cerebral palsy: A prospective, single-arm, multicenter study with a subsequent randomized double-blind crossover (stim-cp). Movement Disorders. 37 (4), 799-811 (2022).
  10. Pool, D., Valentine, J., Taylor, N. F., Bear, N., Elliott, C. Locomotor and robotic assistive gait training for children with cerebral palsy. Developmental Medicine and Child Neurology. 63 (3), 328-335 (2021).
  11. Li, J., et al. Evaluating the effects of 5-hz repetitive transcranial magnetic stimulation with and without wrist-ankle acupuncture on improving spasticity and motor function in children with cerebral palsy: A randomized controlled trial. Frontiers In Neuroscience. 15, 771064(2021).
  12. Chen, K., Shu, S., Yang, M., Zhong, S., Xu, F. Meridian acupuncture plus massage for children with spastic cerebral palsy. American Journal of Translational Research. 13 (6), 6415-6422 (2021).
  13. Gao, J., et al. Rehabilitation with a combination of scalp acupuncture and exercise therapy in spastic cerebral palsy. Complementary Therapies in Clinical Practice. 35, 296-300 (2019).
  14. Chen, Z., et al. Effects of traditional Chinese medicine combined with modern rehabilitation therapies on motor function in children with cerebral palsy: A systematic review and meta-analysis. Frontiers In Neuroscience. 17, 1097477(2023).
  15. Zhang, Y., et al. Tuina massage improves cognitive functions of hypoxic-ischemic neonatal rats by regulating genome-wide DNA hydroxymethylation levels. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2019, 1282085(2019).
  16. Zhang, P., et al. Chinese tuina protects against neonatal hypoxia-ischemia through inhibiting the neuroinflammatory reaction. Neural Plasticity. 2020, 8828826(2020).
  17. Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by nlrp3 and caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2021, 1028909(2021).
  18. Bowen, Z., Guangyi, X., Qian, Z., Xueping, H., Xiantao, T. Time-dose effect of spinal manipulation on growth and motor function in infant rat with cerebral palsy. Shi Zhen National Medicine and National Medicine. 28 (09), 2274-2277 (2017).
  19. Yang, L. J., Cui, H. Olig2 knockdown alleviates hypoxic-ischemic brain damage in newborn rats. Histology and Histopathology. 36 (6), 675-684 (2021).
  20. Martins, L. A., Schiavo, A., Xavier, L. L., Mestriner, R. G. The foot fault scoring system to assess skilled walking in rodents: A reliability study. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 16, 892010(2022).
  21. Li, S., et al. Plxna2 knockdown promotes m2 microglia polarization through mtor/stat3 signaling to improve functional recovery in rats after cerebral ischemia/reperfusion injury. Experimental Neurology. 346, 113854(2021).
  22. Wei, W., et al. Neuroprotective effect of verbascoside on hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rat. Neuroscience Letters. 711, 134415(2019).
  23. Taiyi, W., Ziyu, H. Anatomical Atlas of Experimental Animals in Chinese and English. , Liaoning Fine Arts Publishing House; Shenyang: Liaoning Science and Technology Press. Shenyang. (2000).
  24. Na, X. Study on the sensitization rule of dorsal acupoints in children with spastic cerebral palsy based on infrared thermal imaging technology and the effect of massage intervention. , (2021).
  25. China Association for Acupuncture and Moxibustion. Names and localization of commonly used acupoints in laboratory animals Part 2: Rats. Acupuncture Research. 46 (04), 351-352 (2021).
  26. Yinghua, S., Xiantao, T. Effect of spinal manipulation on the expression of growth hormone and its receptor protein in hypothalamus of infant rat with cerebral palsy. Sichuan Traditional Chinese Medicine. 39 (02), 55-59 (2021).
  27. Qi, H., et al. Effect of spinal manipulation on learning and memory in infant rat with cerebral palsy and its mechanism. Guide to Traditional Chinese Medicine. 24 (11), 36-39 (2018).
  28. Tai, W. -C., Burke, K. A., Dominguez, J. F., Gundamraj, L., Turman, J. E. Growth deficits in a postnatal day 3 rat model of hypoxic-ischemic brain injury. Behavioural Brain Research. 202 (1), 40-49 (2009).
  29. Huang, L., et al. Animal models of hypoxic-ischemic encephalopathy: Optimal choices for the best outcomes. Reviews In the Neurosciences. 28 (1), 31-43 (2017).
  30. Lyu, H., et al. A new hypoxic-ischemic encephalopathy model in neonatal rats. Heliyon. 7 (12), e08646(2021).
  31. Hegazi, M. A., et al. Growth hormone/insulin-like growth factor-1 axis: A possible non-nutritional factor for growth retardation in children with cerebral palsy. Jornal de Pediatria. 88 (3), 267-274 (2012).
  32. Boboc, I. K. S., et al. A preclinical systematic review and meta-analysis of behavior testing in rat models of ischemic stroke. Life. 13 (2), Basel, Switzerland. 567(2023).
  33. Lubrich, C., Giesler, P., Kipp, M. Motor behavioral deficits in the cuprizone model: Validity of the rotarod test paradigm. International Journal of Molecular Sciences. 23 (19), 11342(2022).
  34. Tan, Y., et al. Vof-16 knockout improves the recovery from hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats. Brain Research. 1748, 147070(2020).
  35. Xiantao, T., Pengyue, Z., Xinghe, Z. Construction and application of selective spinal manipulation in the treatment of children with cerebral palsy. China's Scientific and Technological Achievements. 23 (9), 1-2 (2022).
  36. Matos, L. C., Machado, J., Greten, H. J., Monteiro, F. J. Changes of skin electrical potential in acupoints from ren mai and du mai conduits during qigong practice: Documentation of a clinical phenomenon. Journal of Bodywork and Movement Therapies. 23 (4), 713-720 (2019).
  37. Levkovets, I. L., Kiryanova, V. V. Systemic and pathogenetic approach: A new look at traditional Chinese medicine. Voprosy Kurortologii, Fizioterapii, I Lechebnoi Fizicheskoi Kultury. 99 (1), 80-88 (2022).
  38. Efferth, T., Xu, A. -L., Lee, D. Y. W. Combining the wisdoms of traditional medicine with cutting-edge science and technology at the forefront of medical sciences. Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology. 64, 153078(2019).
  39. Zhang, Z., et al. Correlated sensory and sympathetic innervation between the acupoint bl23 and kidney in the rat. Frontiers In Integrative Neuroscience. 14, 616778(2020).
  40. Zhu, X., et al. Effects of electroacupuncture at st25 and bl25 in a sennae-induced rat model of diarrhoea-predominant irritable bowel syndrome. Acupuncture In Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 35 (3), 216-223 (2017).
  41. Gimarc, K., Yandow, S., Browd, S., Leibow, C., Pham, K. Combined selective dorsal rhizotomy and single-event multilevel surgery in a child with spastic diplegic cerebral palsy: A case report. Pediatric Neurosurgery. 56 (6), 578-583 (2021).
  42. Zhang, W. -B., Wang, Y. -P., Li, H. -Y. Analysis on correlation between meridians and viscera in book the yellow emperor's internal classic. Acupuncture Research. 43 (7), 424-429 (2018).
  43. Wang, Y. -P., Hou, X. -S. Discussion on the classification of acupoints. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (10), 1069-1072 (2019).
  44. Chen, R. -X., Kang, M. -F. Clinical application of acupoint heat-sensitization. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 27 (3), 199-202 (2007).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved