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In questo articolo

  • Riepilogo
  • Abstract
  • Introduzione
  • Protocollo
  • Risultati
  • Discussione
  • Divulgazioni
  • Riconoscimenti
  • Materiali
  • Riferimenti
  • Ristampe e Autorizzazioni

Riepilogo

Questo studio illustra l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale, sottolineando la procedura specifica e il protocollo standardizzato. Per valutare il protocollo sono stati eseguiti la misurazione del peso corporeo, il test di Rotarod, il punteggio del difetto del piede, altri test comportamentali e il rilevamento dell'ormone della crescita.

Abstract

La paralisi cerebrale infantile (CP) è una malattia pediatrica refrattaria con un'alta prevalenza, un alto tasso di disabilità e un trattamento difficile. Una varietà di trattamenti sono attualmente utilizzati per la paralisi cerebrale. Il trattamento prevede una terapia farmacologica e non farmacologica. La terapia esterna della medicina tradizionale cinese è un metodo di trattamento molto distintivo nella terapia non farmacologica. Come una delle terapie esterne della medicina tradizionale cinese, il massaggio viene utilizzato nel trattamento della paralisi cerebrale e ha una buona efficacia, piccoli effetti collaterali e una forte operatività. Come parte della terapia esterna della MTC, la manipolazione spinale selettiva può promuovere efficacemente la crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale. L'operazione è stata principalmente suddivisa in quattro fasi: in primo luogo, il metodo di sfregamento è stato applicato alla colonna vertebrale e ad entrambi i lati della colonna vertebrale per 1 minuto. Il metodo di pressatura e impastamento è stato applicato alla colonna vertebrale per 5 minuti e ai muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale per 5 minuti. In secondo luogo, sono stati eseguiti la pressione e l'impasto dei sensibili punti di agopuntura locali nella colonna vertebrale per 2 minuti. In terzo luogo, l'arto interessato è stato trattato con il metodo della torsione per 1 minuto. In quarto luogo, il metodo di sfregamento è stato applicato a una linea mediana dalla fronte alla parte posteriore del cervello per 1 minuto. Questo studio mirava a utilizzare la manipolazione spinale selettiva per trattare ratti neonati con paralisi cerebrale. Il peso, il test di Rotarod, il punteggio del difetto del piede e l'ormone della crescita dei ratti neonati con paralisi cerebrale sono stati rilevati per comprendere l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale. I risultati hanno mostrato che può promuovere l'aumento di peso, migliorare la capacità di equilibrio e la funzione motoria, promuovere la crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale, promuovere la secrezione dell'ormone della crescita e aumentare la temperatura delle parti sensibili della schiena.

Introduzione

La paralisi cerebrale infantile (CP), causata da un danno non progressivo al cervello nel feto o nell'infanzia, è un gruppo di disturbi caratterizzati da uno sviluppo motorio e posturale anormale1, disturbi dello sviluppo tra cui un lento aumento di peso 2,3,4 e disfunzione motoria. L'incidenza della paralisi cerebrale infantile in Cina è del 2,48% e la prevalenza è rispettivamente del 2,46‰ (1-6 anni)5. Studi stranieri hanno riportato una prevalenza del 2,4%-3,6%6. La paralisi cerebrale infantile è una delle principali cause di lesioni fisiche e disabilità nei bambini, tra cui i disturbi dell'equilibrio e del movimento hanno un impatto significativo sulle attività della vita quotidiana1. La paralisi cerebrale infantile può essere causata da parto prematuro, infezione, genetica, ischemia e ipossia neonatale, ittero neonatale e altri fattori patogeni complessi e diversificati7. L'obiettivo del trattamento per la paralisi cerebrale è migliorare la funzione fisica e la qualità della vita 8. Attualmente, i metodi di trattamento per la paralisi cerebrale includono la stimolazione cerebrale profonda9, l'allenamento della deambulazione assistito da robot10, l'agopuntura del polso e della caviglia11 e l'agopuntura dei meridiani combinata con il massaggio12.

La medicina tradizionale cinese (MTC) è stata sempre più utilizzata come trattamento efficace per la CP 13,14. Anche il massaggio, come parte di esso, gioca un certo ruolo. Ad esempio, la manipolazione spinale selettiva può regolare lo stato dell'idrossimetilazione del DNA per regolare lo sviluppo neurale e migliorare l'apprendimento e la funzione della memoria15. Nel trattamento di ratti neonati con paralisi cerebrale, la manipolazione spinale selettiva può migliorare l'omeostasi infiammatoria della corteccia e dell'ippocampo regolando il livello di metilazione delle citochine infiammatorie TNF-α e della regione16 del promotore del gene IL-10 e svolgere un ruolo terapeutico positivo nella capacità di equilibrio del ratto neonato con paralisi cerebrale16. La manipolazione spinale selettiva può migliorare la funzione cognitiva dei ratti neonati con paralisi cerebrale17. La manipolazione spinale selettiva è stata utilizzata nel trattamento di ratti neonati con paralisi cerebrale infantile ed è stato osservato che aveva anche effetti terapeutici sulla loro crescita e sviluppo18.

Lo scopo di questo studio è illustrare l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo di ratti neonati con paralisi cerebrale misurando il peso corporeo, il test di Rotarod19, il punteggio di errore del piede20,21 e altri test comportamentali e il rilevamento dell'ormone della crescita, e di fornire idee di ricerca per il personale interessato.

Protocollo

Questo studio è stato approvato dal Comitato Etico Animale Sperimentale dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan. Tutte le operazioni sperimentali sugli animali hanno seguito il principio 3R della riduzione, ottimizzazione e sostituzione degli animali da esperimento (n. R-06202018). In questo esperimento sono stati utilizzati ratti Sprague Dawley (SD) sani (14 maschi e 7 femmine) di grado libero da patogeni specifici (SPF) con un peso corporeo medio di 250-300 g. I ratti sono stati allevati nella stanza degli animali SPF dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan, numero di certificato: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Tutti i ratti sono stati alloggiati in un ciclo luce/buio di 12 ore con un ambiente controllato dalla luce naturale a una temperatura ambiente di 22-26 °C e un'umidità relativa del 40%-50%. Dopo 1 settimana di alimentazione adattativa, il rapporto maschi/femmine è stato mantenuto a 1:2. Dopo 1 settimana, i ratti gravidi sono stati alloggiati in un'unica gabbia, nutriti normalmente, mangiando e bevendo liberamente. Dopo il parto naturale, sono stati selezionati i ratti neonati sani nati dai ratti gravidi. I ratti neonati sono stati divisi nei gruppi Sham, Controllo e Trattamento per osservare l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale. Da ogni gruppo, 6 cuccioli maschi sono stati selezionati per l'esperimento. Il gruppo di trattamento è stato trattato con manipolazione spinale selettiva dal 5° giorno dopo la nascita e il trattamento è stato somministrato per 6 giorni seguiti da riposo per 1 giorno.

1. Stabilire il modello di paralisi cerebrale

  1. Sterilizzare il microscopio, le forbici oftalmiche, le pinze, la sutura, la placca chirurgica, le forbici, i tamponi di cotone e i guanti necessari per l'intervento chirurgico e posizionarli in sala operatoria.
  2. Separare temporaneamente un cucciolo dalla madre il terzo giorno di vita, posizionarlo in un unico telaio e trasportarlo in sala operatoria sterile.
  3. Misura il peso corporeo. Includere nello studio ratti neonati con peso corporeo compreso tra 7 e 9 g ed escludere quelli che non si conformavano al peso corporeo. Dividi casualmente i ratti neonati in gruppi Sham, Controllo e Trattamento.
  4. Indurre l'anestesia con isoflurano a una concentrazione del 2% e mantenere l'anestesia all'1% utilizzando una macchina per anestesia a gas per inalazione di piccoli animali.
    NOTA: Questo esperimento serve principalmente ad osservare gli effetti della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo di ratti neonati con paralisi cerebrale. L'anestesia è stata eseguita in conformità con i requisiti generali durante il processo di modellazione e un'ulteriore analgesia influenzerà i risultati dell'osservazione.
    1. Collegare l'anestetico gassoso per piccoli animali all'alimentazione e aprire la valvola collegata alla scatola di induzione.
    2. Metti il ratto neonato nella scatola di induzione, ruota la manopola di regolazione della concentrazione e regola la concentrazione di isoflurano al 2% per indurre l'anestesia.
    3. Quando il ratto neonato è incosciente, rimuoverlo dalla scatola di induzione. Posizionarlo sulla piastra operativa e chiudere il canale 1 della macchina per anestesia.
    4. Posiziona il ratto neonato supino. Fissare la maschera per inalazione dell'anestesia per mantenere l'anestesia.
    5. Aprire il canale collegato alla maschera di inalazione per anestesia. Mantenere l'anestesia ruotando la manopola di regolazione della concentrazione e regolando la concentrazione di isoflurano all'1%.
      NOTA: Dopo l'anestesia, valutare la profondità dell'anestesia sollevando e pizzicando con forza le dita dei piedi e la coda dei ratti neonati. Una mancata risposta quando le dita dei piedi e la coda sono state sollevate e pizzicate conferma che la profondità dell'anestesia è stata raggiunta.
  5. Disinfettare la pelle del collo del ratto neonato tre volte con alcol al 75% e praticare un'incisione longitudinale di 1 cm sulla pelle del collo per esporre il tessuto sottocutaneo.
    NOTA: L'incisione longitudinale della pelle del collo non causa difetti cutanei.
  6. Taglia la pelle del collo sinistro con un microscopio da dissezione e usa una pinzetta oftalmica per separare senza mezzi termini il muscolo sternoioide e il muscolo sternomastoideo sinistro.
    1. Trova l'arteria carotide comune sinistra e il nervo vago e separa l'arteria carotide comune sinistra e il nervo vago.
    2. Nel gruppo Modello, tagliare l'arteria carotide comune sinistra con una penna elettrica per la coagulazione. Pulire e suturare l'incisione del collo.
    3. Nel gruppo Sham, separare l'arteria carotide comune sinistra dal nervo vago.
  7. Dopo l'operazione, mettere il ratto neonato nel bagnomaria termostatico in posizione prona per la rianimazione per 1 ora.
    NOTA: Dopo il recupero naturale, il colore della pelle degli arti e di tutto il corpo era rubicondo. Il ratto neonato poteva muovere gli arti in modo autonomo e gattonare in modo indipendente.
  8. Collocare i ratti rianimati dei gruppi di controllo e trattamento in un'incubatrice chiusa a 37 °C in posizione prona. Introdurre una miscela di ossigeno al 5% e azoto gassoso al 95% per indurre l'ipossia e rimuovere i ratti dopo 2 ore.
  9. Rimuovere il ratto neonato che ha completato il processo di ipossia dalla scatola dell'ipossia e posizionarlo in posizione prona in una scatola con un normale contenuto di ossigeno atmosferico. Metterli a bagnomaria termostatico a 37 °C per 1 ora. Dopo il completo recupero, trasferisci il ratto neonato nella gabbia della madre.
    NOTA: Dopo il recupero naturale, il colore della pelle degli arti e di tutto il corpo era rosso. Il ratto neonato poteva muovere gli arti in modo autonomo e poteva gattonare in modo indipendente.
  10. Mettere il ratto neonato del gruppo Sham in una scatola con un normale contenuto di ossigeno atmosferico e mettere la scatola in un bagno d'acqua termostatico a 37 °C per 1 ora. Dopo il completo recupero, rimetti il ratto neonato nella gabbia della madre per l'alimentazione.
    NOTA: Dopo il recupero naturale, il colore della pelle degli arti e di tutto il corpo era rosso. Il ratto neonato poteva muovere gli arti in modo autonomo e poteva gattonare in modo indipendente. L'intero processo operatorio è stato completato nella sala operatoria speciale della sala animali SPF dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan. Durante la rianimazione e l'ipossia, l'operatore osserva il ratto neonato in ogni momento per prevenire la morte causata da una postura scorretta. Le femmine di ratto in allattamento sono state alimentate con mangimi da riproduzione privi di patogeni specifici (SPF) e, quando i cuccioli sono stati in grado di alimentarsi da soli, i cuccioli sono stati svezzati (21° giorno postnatale) e nutriti con mangime di mantenimento SPF.

2. Esperimento del riflesso raddrizzante

  1. Il 4° giorno dopo la nascita (il 2° giorno dopo la modellazione), eseguire l'esperimento del riflesso di raddrizzamento per verificare se il modello ha avuto successo (Figura 1 e Tabella 1).
    1. Solleva la coda del ratto neonato, appoggia la schiena su una tavola orizzontale e usa il pollice e l'indice per fissare la pancia e il collo. Controlla se il ratto può tornare alla sua posizione normale. L'incapacità del ratto di tornare alla posizione normale dalla posizione anormale a causa della perdita del riflesso raddrizzante è registrata come un modello di successo 16,22.
    2. Registra il tempo impiegato da ciascun gruppo di cuccioli per passare dalla posizione supina a quella prona. Inizia a registrare il momento in cui il pollice e l'indice vengono rilasciati contemporaneamente in posizione supina, consenti al ratto neonato di girarsi in posizione prona e smetti di registrare quando le zampe anteriori e posteriori sono posizionate sul pavimento. Se il ratto neonato non è riuscito a tornare alla posizione normale per più di 20 s, registrare il tempo di raddrizzamento a 20 s.

3. Preparazione prima dell'operazione

  1. Dopo la modellazione, separare il ratto neonato con paralisi cerebrale dalla madre e portarlo in una sala operatoria con una temperatura ambiente costante di 22-26 °C per 2 minuti per adattarsi all'ambiente circostante.
  2. Indossare guanti monouso per mantenere il palmo della mano delicato e morbido e la temperatura tra i 36-37 °C.
  3. Posiziona delicatamente il topo nel palmo della mano sinistra. Piega il pollice sinistro per coprire gli occhi del ratto per 2 minuti per formare un campo visivo scuro in modo che il ratto possa adattarsi all'ambiente del palmo dell'operatore. Usa l'indice e il medio destro per la manipolazione.
    NOTA: Coprire gli occhi del ratto neonato può creare un ambiente buio. Ciò impedirà al ratto neonato di agitarsi a causa dell'ambiente insicuro e incerto che influisce sui risultati sperimentali.

4. Divisione dei ratti nei gruppi di controllo e di trattamento

  1. Il secondo giorno dopo la modellazione (P5), verificare il modello mediante il test del riflesso di raddrizzamento e dividere casualmente i ratti neonati nei gruppi di controllo e trattamento. Eseguire la manipolazione spinale selettiva sui ratti neonati del gruppo di trattamento.
  2. Metti il ratto neonato in posizione prona. Assicurarsi che la colonna vertebrale sia sempre mantenuta a un livello dritto (Figura 2A).
  3. Massaggiare la colonna vertebrale ed entrambi i lati della colonna vertebrale per 1 minuto utilizzando il metodo di sfregamento e utilizzare il metodo di pressatura e impastamento sulla colonna vertebrale e sui muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale per 5 minuti.
    1. Massaggia la colonna vertebrale e la pelle su entrambi i lati usando il metodo di sfregamento per rilassare il ratto neonato e alleviare completamente la sua tensione. Assicurarsi che la frequenza dello sfregamento sia di 100-120 volte/min per 1 minuto dopo che il ratto neonato è tranquillo e senza agitazione.
      1. Usa l'indice, il medio e l'anulare destro come superficie di contatto e fai un movimento circolare di sfregamento sulla pelle superficiale del rachide cervicale, del rachide toracico e della colonna lombare dalla testa alla coda senza disturbare il tessuto sottocutaneo.
      2. Con l'indice destro, il medio e l'anulare come superfici di contatto, eseguire movimenti circolari sulla superficie cutanea del muscolo trapezio, del muscolo gluteo superficiale, del muscolo romboidale cervicale, del muscolo romboide pettorale, del muscolo gran dorsale e del muscolo obliquo esterno in ordine dalla testa alla coda secondo lo standard anatomico animale23, senza disturbare il tessuto sottocutaneo.
    2. Trattare prima la colonna vertebrale con la pressione e l'impasto per 5 minuti, quindi premere e impastare i muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale per 5 minuti.
      1. Applicare il metodo di impasto sulla colonna vertebrale a una frequenza di 120 volte/min per 5 minuti. Usa l'indice o il medio destro come superficie di contatto. Dalla testa alla coda, eseguire un impasto circolare sulla pelle superficiale delle vertebre cervicali, toraciche e lombari, combinato con una pressione verso il basso (1,77 ± 0,54 N). Assicurarsi che la forza raggiunga le vertebre cervicali, le vertebre toraciche, le vertebre lombari e i legamenti sovraspinosi.
      2. Applicare il metodo di pressatura e impastamento sui muscoli di entrambi i lati della colonna vertebrale a una frequenza di 120 volte/min per 5 minuti. Utilizzare l'indice o il medio destro come superficie di contatto. Secondo lo standard anatomico animale23, premere verso il basso la superficie della pelle del trapezio, del gluteo superficiale, del collo romboidale, del pettorale romboide, del gran dorsale e dei muscoli addominali obliqui esterni in un movimento rotondo di impasto dalla testa alla coda, con una forza di 1,77 ± 0,54 N, in modo che la forza raggiunga il trapezio, il gluteo superficiale, il collo romboidale, il pettorale romboide, gran dorsale e muscoli addominali obliqui esterni (Figura 2B)23.
  4. Premere e impastare i punti di agopuntura spinali sensibili (come Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu24) a una frequenza di 100-120 volte/min per 2 minuti. Usando l'indice o il medio destro come superficie di contatto, eseguire l'impasto circolare e la pressione verso il basso (1,77 ± 0,54 N) sulla pelle superficiale dei punti di agopuntura locali (come Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu) nei ratti neonati con paralisi cerebrale.
    NOTA: I punti di agopuntura sono stati selezionati in base alla "Mappa dei punti di agopuntura animale" formulata dal ramo di ricerca sull'agopuntura sperimentale della Società cinese di agopuntura) (Figura 3)25.
  5. Stimolare localmente l'arto interessato con il metodo della torsione a una frequenza di 25 volte/min per 1 minuto.
    1. Con il pollice e l'indice destri, pizzicare l'arto interessato del ratto neonato con paralisi cerebrale, esercitando una forza simmetrica sulle due dita. Assicurarsi che la forza sia delicata e che l'azione sia leggera e delicata. Strofinare avanti e indietro l'estensore radiale del carpo destro, l'estensore delle dita comune, l'estensore ulnare del carpo, la falange, l'articolazione interfalangea, il muscolo gastrocnemio, il muscolo semitendinoso, l'osso metatarsale e l'articolazione intermetatarsale del ratto neonato.
  6. Applicare il metodo di sfregamento sulla linea mediana della fronte fino alla parte posteriore del cervello a una frequenza di 100-120 volte/min per 1 minuto. Usa l'indice destro come superficie di contatto e usa il metodo di sfregamento su una linea immaginaria dalla fronte al centro del cervello posteriore del ratto neonato (vale a dire, una linea di Baihui, Fengfu e Dazhui) (Figura 3).
    NOTA: Il massaggio viene applicato principalmente sulla pelle. È un movimento circolare sulla superficie della pelle della testa del ratto neonato con paralisi cerebrale. Non ha bisogno di guidare il movimento muscolare sottocutaneo di un ratto neonato con paralisi cerebrale.
  7. Al termine della procedura, lasciare il ratto neonato da solo per 30 minuti prima di rimetterlo nella gabbia madre per topi.
    NOTA: Con l'età, i peli dei ratti neonati diventano spessi, quindi è necessario rimuovere i peli posteriori di tutti i gruppi di ratti neonati durante l'operazione di massaggio per evitare di compromettere l'effetto sperimentale.

5. Rilevamento della temperatura dei punti di agopuntura locali

  1. Utilizzare una termocamera a infrarossi per rilevare la temperatura dell'area locale del punto di agopuntura prima e dopo l'operazione.
    1. Prima del massaggio spinale selettivo, collegare l'interfaccia di tipo C del telefono cellulare con l'interfaccia USB del dispositivo di imaging a infrarossi con un cavo dati e accendere il pulsante di accensione.
    2. Fare clic su Analizza per accedere al terminale del telefono cellulare del software, selezionare Foto per accedere alla modalità foto e fare clic su Picture in Picture Mode nell'angolo in basso a destra.
    3. Focalizza la fotocamera sulle aree dei punti di agopuntura Dazhui, Xinshu e Shenshu (Figura 3) sulla schiena del ratto neonato per scattare foto della temperatura. Fare clic su Foto per completare l'acquisizione dell'immagine e salvarla in formato JPG.
    4. Collegare il computer con un cavo dati e caricare l'immagine salvata su un computer installato con il software Fotric per l'analisi.
      1. Apri il software Fotric sul PC, apri il file locale e trova la posizione dell'immagine.
      2. Selezionare l'area di lavoro Termogramma, selezionare l'immagine da analizzare e accedere all'interfaccia di analisi.
      3. Nella schermata Analisi , selezionare l'immagine nella casella Immagine termica a destra e aprire il lucchetto.
      4. Seleziona la funzione di zoom, regola le dimensioni dell'immagine termica e dell'immagine di sfondo della casella di sinistra in modo che coincidano e disattiva il blocco a destra.
      5. Trova il rettangolo Imposta misura nella barra degli strumenti in alto e contrassegna il punto di agopuntura da rilevare nella figura.
      6. Fare clic su Report a destra per registrare il valore della temperatura.

6. Rilevamento della funzione dell'equilibrio motorio di ratti neonati con paralisi cerebrale

  1. Utilizzare il test comportamentale di Rotarod19 per rilevare la funzione motoria dei ratti nei gruppi Sham, Controllo e Trattamento il 61° giorno dopo la nascita.
    1. Impostazioni dei parametri: Avviare l'interruttore di alimentazione, selezionare Fai esperimento per accedere al passaggio successivo, selezionare Positivo, Ratti, Temporizzazione 5 min per accedere al passaggio successivo e selezionare Tempo acc: 10 secondi, Velocità: 10 giri/min.
    2. Quindi, posiziona i ratti sulla pista da corsa e inizia il test facendo clic su Esegui dopo che si sono fermati. Regolare lo stato di esecuzione di ogni seduta su ON. Addestra ogni ratto una volta per 5 minuti, quindi inizia a eseguire il test tre volte.
    3. Dopo l'addestramento, posizionare i ratti neonati sulla pista da corsa rotarod. Dopo che è stabile, fare clic su Esegui e regolare lo stato di esecuzione su ON. Al termine dei 5 minuti, selezionare Data per registrare il tempo e la velocità di ogni ratto che cade per la prima volta dalla pista di corsa della rotarod, ovvero i dati del tempo di esecuzione.
  2. Utilizzare il test del difetto del piede20,21 per valutare la funzione motoria dell'equilibrio dell'arto anteriore destro dei gruppi Sham, Control e Treatment il 61° giorno dopo la nascita.
    1. Posiziona i ratti neonati all'inizio dell'estremità della scala orizzontale e registra un video di loro che la attraversano fino all'altra estremità (lunga 100 cm e la distanza tra ogni scala è di 2 cm). Dopo una sessione di addestramento, eseguire il test formale tre volte per ogni ratto a un intervallo di 5 minuti.
    2. Osservare l'arto anteriore destro quando l'animale attraversa la scala utilizzando la riproduzione a bassa velocità per ottenere un punteggio, come mostrato nello standard di punteggio (Tabella 2).

7. Western blotting

  1. Eseguire l'analisi del western blotting dei campioni di tessuto come descritto in precedenza26.
    NOTA: La quantità di lisato è stata determinata in base alle dimensioni del blocco di tessuto. Gli anticorpi utilizzati erano i seguenti: anticorpi primari contro l'ormone della crescita (0,5 μg [0,5 ng/corsia]); anticorpo anti-recettore dell'ormone della crescita (1/1000); anticorpo anti-beta actina di riferimento interno (1/2000) per gli anticorpi primari; Capra anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) per anticorpi secondari.

8. Rilevare la forza della mano

  1. Indossare il dispositivo utilizzato per rilevare la forza di manipolazione sulla mano utilizzata per il massaggio. Inserire il dito utilizzato per massaggiare il ratto neonato con il chip del sensore del dispositivo e accendere il pulsante di accensione .
  2. Collegare l'interfaccia del disco rigido che memorizza il software del tester manuale al computer e immettere l'indirizzo IP dedicato del tester manuale nella casella di input URL .
  3. Installa il client SpringVR sul computer, fai clic per accedere all'interfaccia di raccolta e seleziona il modello di dita nell'angolo in basso a destra per testare la forza di manipolazione.
  4. Selezionare l'opzione Pressione e fare clic su Avvia per iniziare a registrare la forza manuale dell'operatore durante il funzionamento. Il software registrerà automaticamente l'intensità della manipolazione e genererà una tabella di dati sul disco locale in cui si troveranno i dati nel nome del file PressureSensor .

9. Statistiche dei dati

NOTA: Il software SPSS26.0 è stato utilizzato per l'analisi statistica, Graphpad Prism9.0.0 per la produzione di grafici a barre e l'immagine J per l'analisi del valore di grigio delle bande proteiche.

  1. Analizza e presenta tutti i dati come media ± deviazione standard (media ± SD).
    NOTA: Lo standard del test era α = 0,05 e P ≤ 0,05 è stato considerato statisticamente significativo. Il test di Fisher è stato utilizzato perché i dati sono stati analizzati mediante analisi della varianza e della normalità e conformi alle caratteristiche di distribuzione normale e all'omogeneità della varianza.

Risultati

La manipolazione spinale selettiva può promuovere l'aumento di peso corporeo nei ratti neonati con paralisi cerebrale.
Durante il trattamento, il peso corporeo è stato misurato nei giorni postnatali 3, 14, 28, 42 e 61 (Figura 4, Tabella 3). Il terzo giorno dopo la nascita, il peso corporeo del gruppo Sham era di 5,53 ± 0,035 g e il peso corporeo del gruppo di controllo era di 3,15 ± 0,43 g. Il peso corporeo del gruppo...

Discussione

Poiché l'ischemia e l'ipossia sono importanti fattori patogenetici della paralisi cerebrale, il metodo riconosciuto a livello internazionale per stabilire il modello di paralisi cerebrale è combinato con l'ipossia per preparare il modello di paralisi cerebrale 16,28,29,30. Quando si sviluppa la paralisi cerebrale, provoca un ritardo dello sviluppo globale, co...

Divulgazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse finanziari o di altro tipo concorrenti nell'ambito di questo lavoro.

Riconoscimenti

Questo lavoro è stato sostenuto dal Programma Generale della Fondazione Nazionale di Scienze Naturali della Cina (82374614), dal Grande Progetto Biomedico del Dipartimento di Scienza e Tecnologia della Provincia dello Yunnan (202102AA100016), dal Grande Progetto Congiunto di Ricerca di Base Applicata del Dipartimento di Scienza e Tecnologia della Provincia dello Yunnan - Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan (201901AI070004), Supportato dal Laboratorio chiave di agopuntura, moxibustione e massaggio per la prevenzione e il trattamento dell'encefalopatia nei college e nelle università della provincia dello Yunnan (2019YGZ04), Dipartimento di Scienza e Tecnologia della Provincia dello Yunnan - Progetto giovanile del Programma di ricerca di base della provincia dello Yunnan (202101AU070002), Programma di laurea del Fondo per la ricerca scientifica del Dipartimento dell'istruzione della provincia dello Yunnan, (2023Y0433); Fondazione per la ricerca scientifica del Dipartimento dell'Istruzione della provincia dello Yunnan, (2023Y0462).

Materiali

NameCompanyCatalog NumberComments
96-well platesBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determination of protein concentration
Anti-beta Actin antibodyAbacmAb8227Dilution: 1/2000
Anti-Growth Hormone antibodyAbacmAb1268820.5 µg (0.5 ng/lane)
Anti-Growth Hormone receptor antibodyAbacmAb202964Dilution: 1/1000
Basic operating microscopeShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101The common carotid artery was isolated under microscope during modeling
BCA developerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determination of protein concentration
Chemiluminescence imaging systemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein banding imaging
Direct-load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatic snow ice makerHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023Ice-making
ECL luminescent substrate kitBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvert latent images in exposed film into visible images
Electric-heated thermostatic water bathTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIThe young rats were resuscitated after modeling
Electronic scalesKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002The body weight of the young rats was measured
German small white electric coagulation pen hemostatHaohangL55×W125×H37It was used to coagulate the left common carotid artery
GloveJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017For massage operation
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Electrophoretic solution, Configure the transfer fluid
Goat Anti-RabbitIgG H&L (HRP) AbacmAb6721Dilution: 1/10000
Intelligent laboratory ultra-pure water machineChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTDN/AFiltration (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198Anesthesia was maintained by induction in young rats
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Infrared image analysis software
Low temperature high speed tissue grinderWuhan Servicebio technology CO.,LTDSKZ3F20200191Tissue grinding
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configure the transfer fluid
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Electrophoresis
Multiskan Spectrum Microplate SpectrophotometerTECANSparkThe absorbance and concentration of tissue protein were detected
Pressure-sensing smart glovesJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveIt is used to measure the manipulative strength of the operator
PVDF membraneMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Refrigerated centrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuge
Research three-in-one thermal imagerFOTIRC226S (384 x 288)Temperature measurement
RIPA lysateBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytic tissue
SHA-CA digital display water bath thermostatic oscillatorChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CAYoung rats were used in hypoxia
Six-rat fatigue rotarod apparatusShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703CP motor function was detected
Skim milk powderGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Confining liquid
SPF breeding feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285266Lactating female rats were fed
SPF maintenance feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285267The pups were fed after weaning
Surgical plateShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002The model operating table was established in young rats
TS-200 Orbital shakerHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SGel fixation
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configure TBST 
ZS-MV Portable anesthesia machineZHONGSHI SCIENCE &TECHNOLOGYZS-MV-IAnesthesia was induced and maintained in experimental animals

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