JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Это исследование иллюстрирует влияние селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом, подчеркивая специфику процедуры и стандартизированный протокол. Для оценки протокола были проведены измерение массы тела, тест Ротарода, оценка ошибки стопы, другие поведенческие тесты и обнаружение гормона роста.

Аннотация

Детский церебральный паралич (ДЦП) является рефрактерным детским заболеванием с высокой распространенностью, высоким уровнем инвалидности и сложным лечением. В настоящее время для лечения ДЦП используются различные методы лечения. Лечение включает в себя медикаментозную и немедикаментозную терапию. Традиционная китайская медицина наружной терапии является весьма характерным методом лечения в немедикаментозной терапии. Как один из наружных методов традиционной китайской медицины, массаж применяется при лечении детского церебрального паралича и обладает хорошей эффективностью, небольшими побочными эффектами, сильной оперативностью. Как часть наружной терапии ТКМ, селективные манипуляции с позвоночником могут эффективно способствовать росту и развитию детенышей крыс с церебральным параличом. Операция в основном была разделена на четыре этапа: сначала метод растирания применялся к позвоночнику и обеим сторонам позвоночника в течение 1 минуты. Метод нажатия и разминания применялся к позвоночнику в течение 5 минут, а мышцы с обеих сторон позвоночника в течение 5 минут. Во-вторых, выполняли надавливание и разминание чувствительных локальных акупунктурных точек в позвоночнике в течение 2 мин. В-третьих, пораженную конечность обрабатывали методом скручивания в течение 1 минуты. В-четвертых, метод растирания применялся к средней линии от лба до задней части мозга в течение 1 минуты. Это исследование было направлено на использование селективных манипуляций с позвоночником для лечения детенышей крыс с церебральным параличом. Вес, тест Ротарода, оценка ошибки стопы и гормон роста у крыс с церебральным параличом были обнаружены для понимания влияния селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие крыс с церебральным параличом. Результаты показали, что он может способствовать увеличению веса, улучшению способности к равновесию и двигательной функции, способствовать росту и развитию крыс с детским церебральным параличом, способствовать секреции гормона роста и повышать температуру чувствительных частей спины.

Введение

Церебральный паралич (ДЦП), вызванный непрогрессирующим повреждением головного мозга у плода или в младенчестве, представляет собой группу нарушений, характеризующихся аномальным моторным и постуральнымразвитием1, нарушениями развития, включая медленный набор веса 2,3,4, и двигательной дисфункцией. Заболеваемость церебральным параличом в Китае составляет 2,48%, а распространенность – 2,46‰ (1-6 лет)5 соответственно. В зарубежных исследованиях сообщалось о распространенности 2,4%-3,6%6. Детский церебральный паралич является основной причиной физических травм и инвалидности у детей, среди которых нарушения равновесия и движения значительно влияют на повседневную жизнедеятельность1. Детский церебральный паралич может быть вызван преждевременными родами, инфекцией, генетикой, ишемией и гипоксией новорожденных, неонатальной желтухой и другими сложными и разнообразными патогенными факторами7. Целью лечения детского церебрального паралича является улучшение физической функции и качества жизни 8. В настоящее время методы лечения ДЦП включают глубокую стимуляцию мозга9, роботизированную тренировку ходьбы10, иглоукалывание запястья и голеностопного сустава11 и меридианную акупунктуру в сочетании с массажем12.

Традиционная китайская медицина (ТКМ) все чаще используется в качестве эффективного лечения ЦП13,14. Массаж, как его часть, также играет определенную роль. Например, селективные манипуляции с позвоночником могут регулировать состояние гидроксиметилирования ДНК для регулирования развития нейронов иулучшения функции обучения и памяти. При лечении детенышей крыс с церебральным параличом селективные манипуляции с позвоночником могут улучшить воспалительный гомеостаз коры головного мозга и гиппокампа за счет регуляции уровня метилирования воспалительных цитокинов TNF-α и промоторной области гена IL-1016 и играть положительную терапевтическую роль в балансоспособности детенышей крыс с церебральным параличом16. Селективные манипуляции с позвоночником могут улучшить когнитивные функции у детенышей крыс с церебральным параличом17. Селективные манипуляции с позвоночником использовались при лечении крыс с церебральным параличом, и было замечено, что они также оказывают терапевтическое воздействие на их рост и развитие.

Цель данного исследования состоит в том, чтобы проиллюстрировать влияние селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом путем измерения массы тела, теста Ротарод19, баллаFoot-fault 20,21 и других поведенческих тестов и выявления гормона роста, а также предоставить исследовательские идеи для соответствующего персонала.

протокол

Это исследование было одобрено Комитетом по этике экспериментальных животных Юньнаньского университета традиционной китайской медицины. Все экспериментальные операции на животных проводились по принципу 3R по сокращению, оптимизации и замене экспериментальных животных (No R-06202018). В эксперименте использовались здоровые крысы породы Sprague Dawley (SD) (14 самцов и 7 самок) класса Specific pathogen-free (SPF) со средней массой тела 250-300 г. Крысы были выращены в комнате для животных SPF Юньнаньского университета традиционной китайской медицины, номер сертификата: SYXK (Yunnan) K2022-0004. Все крысы содержались в 12-часовом цикле свет/темнота в естественной среде с контролируемым освещением при комнатной температуре 22-26 °C и относительной влажности 40%-50%. После 1 недели адаптивного кормления соотношение самцов и самок поддерживалось на уровне 1:2. Через 1 неделю беременных крыс поместили в одну клетку, кормили нормально, они свободно ели и пили. После естественных родов отбирали здоровых крысят-детенышей, рожденных от беременных крыс. Крысы-детеныши были разделены на группы «Фикция», «Контроль» и «Лечение» для наблюдения за влиянием селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие крыс-младенцев с церебральным параличом. Из каждой группы для эксперимента было отобрано по 6 щенков мужского пола. Лечебная группа получала лечение с помощью селективных манипуляций на позвоночнике с5-го дня после рождения, и лечение проводилось в течение 6 дней с последующим отдыхом в течение 1 дня.

1. Установление модели ДЦП

  1. Простерилизуйте микроскоп, офтальмологические ножницы, щипцы, шовный материал, хирургическую пластину, ножницы, ватные палочки и перчатки, необходимые для операции, и поместите их в операционную.
  2. Временно отделите щенка от матери на третий день жизни, поместите его в одну рамку и транспортируйте в стерильную операционную.
  3. Измерьте массу тела. Включите в исследование крыс-детенышей с массой тела от 7 до 9 г и исключите тех, кто не соответствовал массе тела. Случайным образом разделите детенышей крыс на фиктивные, контрольные и лечебные группы.
  4. Индуцировать анестезию изофлураном в концентрации 2% и поддерживать анестезию на уровне 1% с помощью аппарата для ингаляционной газовой анестезии мелких животных.
    Примечание: Этот эксперимент в основном направлен на наблюдение за влиянием селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом. Обезболивание проводилось в соответствии с общими требованиями в процессе моделирования, и дополнительная анальгезия повлияет на результаты наблюдения.
    1. Подключите газовый анестетик для мелких животных к источнику питания и откройте клапан, подключенный к индукционной коробке.
    2. Поместите детеныша крысы в индукционную коробку, поверните ручку регулировки концентрации и отрегулируйте концентрацию изофлурана до 2%, чтобы вызвать анестезию.
    3. Когда детеныш крысы находится в бессознательном состоянии, извлеките его из индукционной коробки. Поместите его на операционную пластину и закройте канал 1 наркозного аппарата.
    4. Поместите детеныша крысы в положение лежа на спине. Зафиксируйте анестезиологическую ингаляционную маску для поддержания анестезии.
    5. Откройте канал, подключенный к анестезиологической ингаляционной маске. Поддерживайте анестезию, поворачивая ручку регулировки концентрации и регулируя концентрацию изофлурана до 1%.
      ПРИМЕЧАНИЕ: После анестезии оцените глубину анестезии, принудительно поднимая и зажимая пальцы ног и хвост детенышей крыс. Отсутствие реакции при поднятии и защемлении пальцев ног и хвоста подтверждает, что глубина анестезии достигнута.
  5. Продезинфицируйте кожу шеи детеныша крысы трижды 75% спиртом и сделайте продольный разрез шириной 1 см на коже шеи, чтобы обнажить подкожную клетчатку.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Продольный разрез кожи шеи не вызывает дефектов кожи.
  6. Разрежьте кожу левой шеи под препарирующим микроскопом, и с помощью офтальмологического пинцета тупо разделите грудиновидную мышцу и левую грудино-сосцевидную мышцу.
    1. Найдите левую общую сонную артерию и блуждающий нерв и разделите левую общую сонную артерию и блуждающий нерв.
    2. В группе Модель отрежьте левую общую сонную артерию с помощью электрической коагуляционной ручки. Очистите и зашите разрез на шее.
    3. В группе Шама отделите левую общую сонную артерию от блуждающего нерва.
  7. После операции поместите крысы-детеныша в термостатическую водяную баню в положение лежа для реанимации на 1 ч.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После естественного выздоровления цвет кожи конечностей и всего тела стал румяным. Детеныш крысы мог самостоятельно двигать своими конечностями и ползать.
  8. Реанимированных крыс контрольной и лечебной групп поместить в закрытый инкубатор при температуре 37 °C в положении лежа. Введите смесь 5% кислорода и 95% газообразного азота, чтобы вызвать гипоксию, и удалите крыс через 2 часа.
  9. Извлеките детеныша крысы, завершившего процесс гипоксии, из бокса для гипоксии и поместите его в положение лежа в бокс с нормальным содержанием кислорода в атмосфере. Поместите их на термостатическую водяную баню при температуре 37 °C на 1 час. После полного выздоровления переведите крысы-детеныша обратно в клетку матери.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После естественного выздоровления цвет кожи конечностей и всего тела стал красным. Детеныши крысы могли самостоятельно передвигать конечностями и ползать самостоятельно.
  10. Поместите детеныша крысы группы Шам в одну коробку с нормальным содержанием кислорода в атмосфере, и поместите коробку в термостатическую водяную баню при температуре 37 °C на 1 ч. После полного выздоровления поместите крысы-детеныша обратно в клетку матери для кормления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После естественного выздоровления цвет кожи конечностей и всего тела стал красным. Детеныши крысы могли самостоятельно передвигать конечностями и ползать самостоятельно. Весь процесс операции был завершен в специальной операционной комнаты для животных SPF Юньнаньского университета традиционной китайской медицины. Во время реанимации и гипоксии оператор постоянно наблюдает за детенышем крысы, чтобы предотвратить смерть, вызванную неправильной осанкой. Лактирующих самок крыс кормили кормом для разведения, свободным от специфических патогенов (SPF), а когда щенки были способны к самостоятельному питанию, щенков отлучали от груди (на 21-й день после рождения) и кормили поддерживающим кормом с SPF.

2. Эксперимент с выпрямляющим рефлексом

  1. На4-й день после рождения (на2-й день после моделирования) проведите эксперимент по коррекционному рефлексу, чтобы проверить, была ли модель успешной (Рисунок 1 и Таблица 1).
    1. Поднимите хвост детеныша крысы, положите его спину на горизонтальную доску и большим и указательным пальцами закрепите его живот и шею. Проверьте, может ли крыса вернуться в свое нормальное положение. Неспособность крысы вернуться в нормальное положение из ненормального положения из-за потери рефлекса выпрямления зафиксирована как успешная модель16,22.
    2. Запишите время, которое требуется каждой группе щенков, чтобы перевернуться из положения лежа на спине в положение лежа. Начинайте записывать время, когда большой и указательный пальцы отпускаются одновременно в положении лежа на спине, позволяйте детенышу крысы повернуться в положение лежа и прекращайте запись, когда передние и задние лапы опускаются на пол. Если детеныш крысы не мог вернуться в нормальное положение более 20 с, запишите время выпрямления как 20 с.

3. Подготовка перед операцией

  1. После моделирования отделите детеныша крысы с ДЦП от матери и привезите его в операционную с постоянной комнатной температурой 22-26 °C на 2 минуты для адаптации к окружающей среде.
  2. Надевайте одноразовые перчатки, чтобы ладонь оставалась мягкой и мягкой, а температура колебалась в пределах 36-37 °C.
  3. Аккуратно положите крысу на ладонь левой руки. Согните большой палец левой руки, чтобы закрыть глаза крысы на 2 минуты, чтобы сформировать темное поле зрения, чтобы крыса могла адаптироваться к окружающей среде ладони оператора. Для манипуляций используйте указательный и средний пальцы правой руки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Закрытие глаз детеныша крысы может создать темную среду. Это убережет детеныша крысы от возбуждения из-за небезопасной и неопределенной среды, влияющей на результаты эксперимента.

4. Разделение крыс на контрольную и лечебную группы

  1. На второй день после моделирования (P5) проверьте модель с помощью теста на корректирующий рефлекс и случайным образом разделите крыс-детенышей на контрольную и лечебную группы. Проводить селективные манипуляции с позвоночником на крысах-детенышах группы Лечения.
  2. Поместите крысы-детеныша в положение лежа. Следите за тем, чтобы позвоночник всегда держался на прямом уровне (рисунок 2A).
  3. Массируйте позвоночник и обе стороны позвоночника в течение 1 минуты методом растирания, а затем используйте метод надавливания и разминания на позвоночник и мышцы с обеих сторон позвоночника в течение 5 минут.
    1. Массируйте позвоночник и кожу с обеих сторон, используя метод растирания, чтобы расслабить детеныша крысы и полностью снять его напряжение. Следите за тем, чтобы частота растирания составляла 100-120 раз/мин в течение 1 минуты после того, как детеныш крысы будет спокойным и без волнения.
      1. Используйте указательный, средний и безымянный пальцы правой руки в качестве контактной поверхности и совершайте круговые растирающие движения по поверхностной коже шейного отдела позвоночника, грудного отдела позвоночника и поясничного отдела позвоночника от головы до хвоста, не нарушая подкожную клетчатку.
      2. С указательным, средним и безымянным пальцами правой руки в качестве контактных поверхностей выполнять круговые движения по поверхности кожи трапециевидной мышцы, поверхностной ягодичной мышцы, шейной ромбовидной мышцы, грудной ромбовидной мышцы, широчайшей мышцы спины и наружной косой мышцы по порядку от головы к хвосту согласно анатомическому стандарту животного23, не нарушая подкожную клетчатку.
    2. Сначала обрабатывайте позвоночный столб надавливанием и разминанием в течение 5 минут, затем надавливайте и разминайте мышцы с обеих сторон позвоночника в течение 5 минут.
      1. Применяйте метод разминания к позвоночнику с частотой 120 раз/мин в течение 5 мин. В качестве контактной поверхности используйте указательный или средний пальцы правой руки. От головы к хвосту выполнять круговое разминание по поверхностной коже шейного, грудного и поясничного позвонков в сочетании с нажатием вниз (1,77 ± 0,54 Н). Убедитесь, что сила достигает шейных позвонков, грудных позвонков, поясничных позвонков и надостных связок.
      2. Применяйте метод нажатия и разминания на мышцы с обеих сторон позвоночника с частотой 120 раз/мин в течение 5 минут. В качестве контактной поверхности используйте указательный или средний палец правой руки. Согласно животному анатомическому стандарту23 надавить на поверхность кожи трапеции, поверхностной ягодичной мышцы, ромбовидной шейки, ромбовидной грудной мышцы, широчайших мышц спины и наружных косых мышц живота круговым разминающим движением от головы к хвосту, с силой 1,77 ± 0,54 Н, так, чтобы сила достигла трапеции, поверхностной ягодичной мышцы, ромбовидной шейки, ромбовидной грудной мышцы, широчайшие мышцы спины и наружные косые мышцы живота (Рисунок 2B)23.
  4. Надавите и разминайте чувствительные спинномозговые акупунктурные точки (такие как Ганьшу, Синьшу, Пишу, Шэньшу и Фэйшу24) с частотой 100-120 раз/мин в течение 2 мин. Используя указательный или средний палец правой руки в качестве контактной поверхности, выполните круговое разминание и надавливание вниз (1,77 ± 0,54 Н) на поверхность кожи локальных акупунктурных точек (таких как Ганьшу, Синьшу, Пишу, Шэньшу и Фэйшу) у крыс с детским церебральным параличом.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Акупунктурные точки были выбраны в соответствии с «Картой точек акупунктуры животных», сформулированной Исследовательским отделением экспериментальной акупунктуры Китайского общества акупунктуры) (Рисунок 3)25.
  5. Местно стимулируйте пораженную конечность методом скручивания с частотой 25 раз/мин в течение 1 мин.
    1. Большим и указательным пальцами правой руки ущипните пораженную конечность детеныша крысы с ДЦП, оказывая симметричное усилие на два пальца. Убедитесь, что усилие мягкое, а действие легкое и мягкое. Растирайте правый разгибатель лучевой мышцы, разгибатель пальца обыкновенный, разгибатель локтевой кости, фалангу, межфаланговый сустав, икроножную мышцу, полусухожильную мышцу, плюсневую кость и межплюсневой сустав детеныша крысы вперед и назад.
  6. Применяйте метод растирания от средней линии лба до задней части мозга с частотой 100-120 раз/мин в течение 1 минуты. Используйте указательный палец правой руки в качестве контактной поверхности и используйте метод растирания по воображаемой линии от лба до середины заднего отдела мозга детеныша крысы (а именно, по одной линии Байхуэй, Фэнфу и Дачжуй) (Рисунок 3).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Массаж в основном наносится на кожу. Представляет собой круговое движение по поверхности кожи головы детеныша крысы с ДЦП. Ему не нужно управлять движением подкожных мышц детеныша крысы с церебральным параличом.
  7. В конце процедуры оставьте крысы-детеныша в покое на 30 минут, прежде чем вернуть его в клетку для крыс-матери.
    ПРИМЕЧАНИЕ: С возрастом шерсть крыс у крыс становится густой, поэтому во время операции массажа необходимо удалять заднюю шерсть всех групп крыс, чтобы не повлиять на экспериментальный эффект.

5. Определение температуры локальных акупунктурных точек

  1. Используйте инфракрасный тепловизор для определения температуры локальной акупунктурной области до и после операции.
    1. Перед селективным массажем позвоночника подключите интерфейс Type-C мобильного телефона к USB-интерфейсу инфракрасного устройства обработки изображений с помощью кабеля передачи данных, и включите кнопку питания.
    2. Нажмите «Анализ», чтобы войти в терминал мобильного телефона программного обеспечения, выберите «Фото», чтобы войти в режим фотосъемки, и нажмите «Изображение в режиме изображения» в правом нижнем углу.
    3. Сфокусируйте камеру на акупунктурных точках акупунктурных точек Дачжуй, Синьшу и Шэньшу (рис. 3) на спине детеныша крысы, чтобы сделать температурные снимки. Нажмите «Фото », чтобы завершить съемку изображения, и сохраните его в формате JPG.
    4. Подключите компьютер к кабелю для передачи данных и загрузите сохраненное изображение на компьютер, на котором установлено программное обеспечение Fotric для анализа.
      1. Откройте программное обеспечение Fotric на ПК, откройте локальный файл и найдите местоположение изображения.
      2. Выберите рабочую область Термограмма, выберите изображение для анализа и войдите в интерфейс анализа.
      3. На экране «Анализ » выберите изображение в поле «Тепловизионное изображение » справа и откройте замок.
      4. Выберите функцию масштабирования, отрегулируйте размер теплового изображения и фонового изображения левого поля, чтобы они совпадали, и выключите блокировку справа.
      5. Найдите « Задать прямоугольник измерения » на панели инструментов в верхней части экрана и отметьте акупунктурную точку, которая должна быть обнаружена на рисунке.
      6. Нажмите « Отчет» справа, чтобы записать значение температуры.

6. Выявление функции двигательного равновесия у крыс с детским церебральным параличом

  1. Используйте поведенческий тест Ротарод19 для выявления двигательной функции крыс в группах Симуляции, Контроля и Лечения на61-й день после рождения.
    1. Настройки параметров: Запустите выключатель питания, выберите Выполнить эксперимент , чтобы перейти к следующему шагу, выберите Положительный, Крысы, Время 5 минут , чтобы перейти к следующему шагу, и выберите Время счета: 10 с, Скорость: 10 об/мин.
    2. Затем поместите крыс на беговую дорожку и начните тест, нажав кнопку «Бежать» после того, как они встанут на ноги. Установите состояние выполнения каждого запуска в положение ВКЛ. Тренируйте каждую крысу один раз в течение 5 минут, а затем начните выполнять тест трижды.
    3. После тренировки поместите крысят на дорожку для бега с ротародом. После того как он стабилизируется, нажмите «Выполнить» и установите состояние выполнения в положение «ВКЛ». По истечении 5 минут выберите Дата , чтобы записать время и скорость каждой крысы, впервые падающей с беговой дорожки, т. е. данные о времени бега.
  2. Используйте тест Foot-fault20,21 для оценки моторной функции равновесия правой передней конечности в группах Sham, Control и Treatment на61-й день после рождения.
    1. Поместите детенышей крыс в начало конца горизонтальной лестницы и запишите на видео, как они переходят ее на другой конец (длина 100 см, расстояние между каждой лестницей составляет 2 см). После одной тренировки проведите формальный тест трижды для каждой крысы с интервалом в 5 минут.
    2. Наблюдайте за правой передней конечностью, когда животное пересекает лестницу, используя низкоскоростное воспроизведение, чтобы набрать очки, как показано в стандарте подсчета очков (Таблица 2).

7. Вестерн-блоттинг

  1. Проведите вестерн-блоттинг образцов тканей, как описано ранее26.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Количество лизата определяли в зависимости от размера тканевого блока. Использовались следующие антитела: первичные антитела против гормона роста (0,5 мкг [0,5 нг/полоса]); антитела к рецептору гормона роста (1/1000); внутреннее референтное антитело к бета-актину (1/2000) для первичных антител; Goat anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) для вторичных антител.

8. Определение силы руки

  1. Носите устройство, используемое для определения силы манипуляции на руке, используемой для массажа. Наденьте палец, используемый для массажа крысы, на сенсорный чип устройства и включите кнопку питания .
  2. Подключите интерфейс жесткого диска, на котором хранится программное обеспечение ручного тестера, к компьютеру и введите выделенный IP-адрес ручного тестера в поле ввода URL .
  3. Установите клиент SpringVR на компьютер, нажмите для входа в интерфейс коллекции и выберите Finger Pattern в правом нижнем углу, чтобы проверить силу манипуляции.
  4. Выберите опцию Давление и нажмите кнопку Пуск , чтобы начать запись ручного усилия оператора во время работы. Программное обеспечение автоматически запишет интенсивность манипуляций и сгенерирует таблицу данных на локальном диске, где будут найдены данные в файле с именем PressureSensor .

9. Статистика данных

ПРИМЕЧАНИЕ: Программное обеспечение SPSS26.0 использовалось для статистического анализа, Graphpad Prism9.0.0 — для создания гистограмм, а Image J — для анализа значений серого белковых полос.

  1. Анализируйте и представляйте все данные в виде среднего ± стандартного отклонения (Mean ± SD).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Стандарт теста составлял α = 0,05, а P ≤ 0,05 считался статистически значимым. Критерий Фишера был использован, потому что данные были проанализированы путем анализа дисперсии и нормальности и соответствовали характеристикам нормального распределения и однородности дисперсии.

Результаты

Селективные манипуляции с позвоночником могут способствовать увеличению массы тела у крыс с церебральным параличом.
Во время лечения масса тела измерялась на 3, 14, 28, 42 и 61 день после родов (Рисунок 4, Таблица 3). На третий день после ро...

Обсуждение

Поскольку ишемия и гипоксия являются важными патогенетическими факторами детского церебрального паралича, международно признанный метод создания модели детского церебрального паралича сочетается с гипоксией для подготовки модели церебрального паралича 16,28,29,30.

Раскрытие информации

Авторы не имеют конкурирующих финансовых или иных конфликтов интересов в рамках данной работы.

Благодарности

Эта работа была поддержана Общей программой Национального фонда естественных наук Китая (82374614), Крупным биомедицинским проектом Департамента науки и технологий провинции Юньнань (202102AA100016), Совместным крупным проектом прикладных фундаментальных исследований Департамента науки и технологий провинции Юньнань -- Юньнаньским университетом традиционной китайской медицины (201901AI070004), При поддержке Ключевой лаборатории иглоукалывания, прижигания и массажа для профилактики и лечения энцефалопатии в колледжах и университетах провинции Юньнань (2019YGZ04), Департамента науки и технологий провинции Юньнань -- Молодежный проект Программы фундаментальных исследований провинции Юньнань (202101AU070002), Программа аспирантуры Фонда научных исследований Департамента образования провинции Юньнань, (2023Y0433); Научно-исследовательский фонд Департамента образования провинции Юньнань, (2023Y0462).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
96-well platesBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determination of protein concentration
Anti-beta Actin antibodyAbacmAb8227Dilution: 1/2000
Anti-Growth Hormone antibodyAbacmAb1268820.5 µg (0.5 ng/lane)
Anti-Growth Hormone receptor antibodyAbacmAb202964Dilution: 1/1000
Basic operating microscopeShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101The common carotid artery was isolated under microscope during modeling
BCA developerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determination of protein concentration
Chemiluminescence imaging systemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein banding imaging
Direct-load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatic snow ice makerHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023Ice-making
ECL luminescent substrate kitBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvert latent images in exposed film into visible images
Electric-heated thermostatic water bathTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIThe young rats were resuscitated after modeling
Electronic scalesKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002The body weight of the young rats was measured
German small white electric coagulation pen hemostatHaohangL55×W125×H37It was used to coagulate the left common carotid artery
GloveJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017For massage operation
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Electrophoretic solution, Configure the transfer fluid
Goat Anti-RabbitIgG H&L (HRP) AbacmAb6721Dilution: 1/10000
Intelligent laboratory ultra-pure water machineChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTDN/AFiltration (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198Anesthesia was maintained by induction in young rats
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Infrared image analysis software
Low temperature high speed tissue grinderWuhan Servicebio technology CO.,LTDSKZ3F20200191Tissue grinding
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configure the transfer fluid
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Electrophoresis
Multiskan Spectrum Microplate SpectrophotometerTECANSparkThe absorbance and concentration of tissue protein were detected
Pressure-sensing smart glovesJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveIt is used to measure the manipulative strength of the operator
PVDF membraneMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Refrigerated centrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuge
Research three-in-one thermal imagerFOTIRC226S (384 x 288)Temperature measurement
RIPA lysateBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytic tissue
SHA-CA digital display water bath thermostatic oscillatorChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CAYoung rats were used in hypoxia
Six-rat fatigue rotarod apparatusShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703CP motor function was detected
Skim milk powderGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Confining liquid
SPF breeding feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285266Lactating female rats were fed
SPF maintenance feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285267The pups were fed after weaning
Surgical plateShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002The model operating table was established in young rats
TS-200 Orbital shakerHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SGel fixation
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configure TBST 
ZS-MV Portable anesthesia machineZHONGSHI SCIENCE &TECHNOLOGYZS-MV-IAnesthesia was induced and maintained in experimental animals

Ссылки

  1. Paul, S., Nahar, A., Bhagawati, M., Kunwar, A. J. A review on recent advances of cerebral palsy. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. , 2622310 (2022).
  2. Şimşek, T. T., Tuç, G. Examination of the relation between body mass index, functional level and health-related quality of life in children with cerebral palsy. Turk Pediatri Arsivi. 49 (2), 130-137 (2014).
  3. Dahlseng, M. O., et al. Feeding problems, growth and nutritional status in children with cerebral palsy. Acta Paediatrica. 101 (1), 92-98 (2012).
  4. Fogarasi, A., et al. The purple n study: Objective and perceived nutritional status in children and adolescents with cerebral palsy. Disability and Rehabilitation. 44 (22), 6668-6675 (2022).
  5. Xiaojie, L., et al. Epidemiological characteristics of cerebral palsy in twelve province in China. Chinese Journal of Practical Pediatrics Clinical. 33 (5), 378-383 (2018).
  6. Kakooza-Mwesige, A., et al. Prevalence of cerebral palsy in Uganda: A population-based study. The Lancet. Global Health. 5 (12), e1275-1282 (2017).
  7. Korzeniewski, S. J., Slaughter, J., Lenski, M., Haak, P., Paneth, N. The complex aetiology of cerebral palsy. Nature Reviews. Neurology. 14 (9), 528-543 (2018).
  8. Vargus-Adams, J. N., Martin, L. K. Domains of importance for parents, medical professionals and youth with cerebral palsy considering treatment outcomes. Child: Care, Health and Development. 37 (2), 276-281 (2011).
  9. Koy, A., et al. Quality of life after deep brain stimulation of pediatric patients with dyskinetic cerebral palsy: A prospective, single-arm, multicenter study with a subsequent randomized double-blind crossover (stim-cp). Movement Disorders. 37 (4), 799-811 (2022).
  10. Pool, D., Valentine, J., Taylor, N. F., Bear, N., Elliott, C. Locomotor and robotic assistive gait training for children with cerebral palsy. Developmental Medicine and Child Neurology. 63 (3), 328-335 (2021).
  11. Li, J., et al. Evaluating the effects of 5-hz repetitive transcranial magnetic stimulation with and without wrist-ankle acupuncture on improving spasticity and motor function in children with cerebral palsy: A randomized controlled trial. Frontiers In Neuroscience. 15, 771064 (2021).
  12. Chen, K., Shu, S., Yang, M., Zhong, S., Xu, F. Meridian acupuncture plus massage for children with spastic cerebral palsy. American Journal of Translational Research. 13 (6), 6415-6422 (2021).
  13. Gao, J., et al. Rehabilitation with a combination of scalp acupuncture and exercise therapy in spastic cerebral palsy. Complementary Therapies in Clinical Practice. 35, 296-300 (2019).
  14. Chen, Z., et al. Effects of traditional Chinese medicine combined with modern rehabilitation therapies on motor function in children with cerebral palsy: A systematic review and meta-analysis. Frontiers In Neuroscience. 17, 1097477 (2023).
  15. Zhang, Y., et al. Tuina massage improves cognitive functions of hypoxic-ischemic neonatal rats by regulating genome-wide DNA hydroxymethylation levels. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2019, 1282085 (2019).
  16. Zhang, P., et al. Chinese tuina protects against neonatal hypoxia-ischemia through inhibiting the neuroinflammatory reaction. Neural Plasticity. 2020, 8828826 (2020).
  17. Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by nlrp3 and caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2021, 1028909 (2021).
  18. Bowen, Z., Guangyi, X., Qian, Z., Xueping, H., Xiantao, T. Time-dose effect of spinal manipulation on growth and motor function in infant rat with cerebral palsy. Shi Zhen National Medicine and National Medicine. 28 (09), 2274-2277 (2017).
  19. Yang, L. J., Cui, H. Olig2 knockdown alleviates hypoxic-ischemic brain damage in newborn rats. Histology and Histopathology. 36 (6), 675-684 (2021).
  20. Martins, L. A., Schiavo, A., Xavier, L. L., Mestriner, R. G. The foot fault scoring system to assess skilled walking in rodents: A reliability study. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 16, 892010 (2022).
  21. Li, S., et al. Plxna2 knockdown promotes m2 microglia polarization through mtor/stat3 signaling to improve functional recovery in rats after cerebral ischemia/reperfusion injury. Experimental Neurology. 346, 113854 (2021).
  22. Wei, W., et al. Neuroprotective effect of verbascoside on hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rat. Neuroscience Letters. 711, 134415 (2019).
  23. Taiyi, W., Ziyu, H. . Anatomical Atlas of Experimental Animals in Chinese and English. , (2000).
  24. Na, X. . Study on the sensitization rule of dorsal acupoints in children with spastic cerebral palsy based on infrared thermal imaging technology and the effect of massage intervention. , (2021).
  25. China Association for Acupuncture and Moxibustion. Names and localization of commonly used acupoints in laboratory animals Part 2: Rats. Acupuncture Research. 46 (04), 351-352 (2021).
  26. Yinghua, S., Xiantao, T. Effect of spinal manipulation on the expression of growth hormone and its receptor protein in hypothalamus of infant rat with cerebral palsy. Sichuan Traditional Chinese Medicine. 39 (02), 55-59 (2021).
  27. Qi, H., et al. Effect of spinal manipulation on learning and memory in infant rat with cerebral palsy and its mechanism. Guide to Traditional Chinese Medicine. 24 (11), 36-39 (2018).
  28. Tai, W. -. C., Burke, K. A., Dominguez, J. F., Gundamraj, L., Turman, J. E. Growth deficits in a postnatal day 3 rat model of hypoxic-ischemic brain injury. Behavioural Brain Research. 202 (1), 40-49 (2009).
  29. Huang, L., et al. Animal models of hypoxic-ischemic encephalopathy: Optimal choices for the best outcomes. Reviews In the Neurosciences. 28 (1), 31-43 (2017).
  30. Lyu, H., et al. A new hypoxic-ischemic encephalopathy model in neonatal rats. Heliyon. 7 (12), e08646 (2021).
  31. Hegazi, M. A., et al. Growth hormone/insulin-like growth factor-1 axis: A possible non-nutritional factor for growth retardation in children with cerebral palsy. Jornal de Pediatria. 88 (3), 267-274 (2012).
  32. Boboc, I. K. S., et al. A preclinical systematic review and meta-analysis of behavior testing in rat models of ischemic stroke. Life. 13 (2), 567 (2023).
  33. Lubrich, C., Giesler, P., Kipp, M. Motor behavioral deficits in the cuprizone model: Validity of the rotarod test paradigm. International Journal of Molecular Sciences. 23 (19), 11342 (2022).
  34. Tan, Y., et al. Vof-16 knockout improves the recovery from hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats. Brain Research. 1748, 147070 (2020).
  35. Xiantao, T., Pengyue, Z., Xinghe, Z. Construction and application of selective spinal manipulation in the treatment of children with cerebral palsy. China's Scientific and Technological Achievements. 23 (9), 1-2 (2022).
  36. Matos, L. C., Machado, J., Greten, H. J., Monteiro, F. J. Changes of skin electrical potential in acupoints from ren mai and du mai conduits during qigong practice: Documentation of a clinical phenomenon. Journal of Bodywork and Movement Therapies. 23 (4), 713-720 (2019).
  37. Levkovets, I. L., Kiryanova, V. V. Systemic and pathogenetic approach: A new look at traditional Chinese medicine. Voprosy Kurortologii, Fizioterapii, I Lechebnoi Fizicheskoi Kultury. 99 (1), 80-88 (2022).
  38. Efferth, T., Xu, A. -. L., Lee, D. Y. W. Combining the wisdoms of traditional medicine with cutting-edge science and technology at the forefront of medical sciences. Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology. 64, 153078 (2019).
  39. Zhang, Z., et al. Correlated sensory and sympathetic innervation between the acupoint bl23 and kidney in the rat. Frontiers In Integrative Neuroscience. 14, 616778 (2020).
  40. Zhu, X., et al. Effects of electroacupuncture at st25 and bl25 in a sennae-induced rat model of diarrhoea-predominant irritable bowel syndrome. Acupuncture In Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 35 (3), 216-223 (2017).
  41. Gimarc, K., Yandow, S., Browd, S., Leibow, C., Pham, K. Combined selective dorsal rhizotomy and single-event multilevel surgery in a child with spastic diplegic cerebral palsy: A case report. Pediatric Neurosurgery. 56 (6), 578-583 (2021).
  42. Zhang, W. -. B., Wang, Y. -. P., Li, H. -. Y. Analysis on correlation between meridians and viscera in book the yellow emperor's internal classic. Acupuncture Research. 43 (7), 424-429 (2018).
  43. Wang, Y. -. P., Hou, X. -. S. Discussion on the classification of acupoints. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (10), 1069-1072 (2019).
  44. Chen, R. -. X., Kang, M. -. F. Clinical application of acupoint heat-sensitization. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 27 (3), 199-202 (2007).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены