تلقيح الأوراق في الجسم الحي: طريقة بديلة لتقييم مقاومة الأمراض للمستنسخات الهجينة في تربية الحور لمرض تقرح الساق

Summary

نحن نقدم بروتوكولا خطوة بخطوة لتقييم مقاومة الحور لمسببات الأمراض الجذعية باستخدام طريقة تلقيح الأوراق في الجسم الحي . هذه الطريقة مناسبة بشكل خاص للتقييم واسع النطاق لمقاومة مرض التقرح الخلوي و Botryosphaeria dothidea في ذرية تربية الحور في الصين.

Abstract

أمراض التقرح الجذعية التي يسببها العامل الممرض Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) و Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. & de Not. هما مرضان رئيسيان للغابات في مزارع الحور في الصين ، وأحيانا يمكن أن يدمروا جميع شتلات الحور أو يلحقون أضرارا بالغة بغابات الحور الناضجة. التربية الهجينة هي الطريقة الأكثر مباشرة وفعالية للسيطرة على أمراض الأشجار وإدارتها. ومع ذلك ، فإن تقييم مقاومة الأمراض أو اختيار المستنسخة المقاومة للأمراض بناء على تلقيح الساق في المختبر غير فعال ويستغرق وقتا طويلا ومكلفا ، مما يحد من تطور التكاثر الهجين لمرض تقرح جذع الحور. في هذه الدراسة ، اقترحنا طريقة بديلة لتقييم مقاومة الأمراض لمسببات الأمراض الجذعية من خلال تلقيح الأوراق في الجسم الحي. يمكن أن تكون مواد الاختبار المستخدمة في هذه الطريقة على شتلات الحور البالغة من العمر 1 عاما أو الفروع السنوية لأشجار الحور المعمرة في الدفيئة أو الحقل. الخطوة الحاسمة لهذه الطريقة البديلة هي اختيار أوراق التلقيح: قد تكون الأوراق الناضجة حديثا 5-7 هي الأنسب. الخطوة الثانية الحاسمة لطريقة تلقيح الأوراق هي إحداث جروح على أوراق النبات من خلال ثقوب الإبر ، مما يوفر آفات كافية لقياس شدة المرض. بالنسبة للعدد الكافي من الأوراق المنتجة في المرحلة المبكرة من تربية الحور ، يساهم تلقيح الأوراق في الجسم الحي في الفحص السريع والدقيق والواسع النطاق لاستنساخ الحور المقاوم للأمراض لوقف مسببات الأمراض في التقرح. علاوة على ذلك ، ستعمل طريقة تلقيح الأوراق هذه أيضا كطريقة فعالة لفحص الأنماط المرضية لمسببات مرض تقرح الساق C. chrysosperma أو B.dothidea أو غيرها من مسببات أمراض آفة جذع الحور.

Introduction

أمراض تقرح جذع الحور ، التي تسببها بشكل رئيسي اثنين من مسببات الأمراض الميتة ، Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. و Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. & de Not. ، تهدد بشدة تطوير وبقاء مزارع الحور في الشمال الشرقي والشمال والشمال الغربي (ثلاثة شمال) من الصين. التربية المهجنة هي الطريقة الأكثر مباشرة وفعالية للسيطرة على أمراض الأشجار وإدارتها. ومع ذلك ، بالمقارنة مع التقدم المحرز في تربية المستنسخة عالية الغلة أو سريعة النمو أو غيرها من المستنسخة الهجينة من الحور ، فإن الأبحاث حول تربية المقاومة لمرض آفة الحور نادرة. تم الإبلاغ عن دراسات محدودة فقط للتكاثر الهجين المقاوم للأمراض^1،....

Protocol

1. ثقافة فطرية لمسببات الأمراض آفة

1. تحضير أجار سكر العنب للبطاطس (PDA ؛ استخراج البطاطس 6.0 جم ، سكر العنب 20.0 جم ، أجار 20.0 جم) وسط استزراع للسلالات الفطرية ؛ قم بإذابة المواد المذكورة أعلاه في ماء يصل إلى 1000 مل ، وقم بإذابة الوسط تماما عند 100 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
2. صب وسط المساعد الرقمي الشخصي في أنابيب 25 مل (يحتوي كل منها على 15.0 مل) ؛ تعقيم جميع الأنابيب عند 121.1 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. صب الوسط في ألواح الاستزراع (قطرها 9.0 سم) وقم بتبريد الألواح في درجة حرارة الغرفة (RT).
3. قطع أفطورة العامل الممرض الفطري ، الذي يتم استزراعه في وسط PDA عند 28 درجة مئوية لمدة 7 أيام ، إلى ~....

النتائج

في هذا البروتوكول ، تم إجراء سير العمل التخطيطي في 48 نسخة هجينة من الحور مصابة بمسببات الأمراض الجذعية C. chrysosperma (الشكل 1). المستنسخة الهجينة من الحور هي جزء من ذرية التهجين من P. deltoides ، المزروعة في الحضانة في الأكاديمية الصينية للغابات (CAF) ، بكين.

Discussion

يوفر هذا البروتوكول طريقة تلقيح سريعة وفعالة لمسببات الأمراض المقاومة لآفة الحور ، وهي مناسبة لمجالات البحث التي تتطلب فحصا واسع النطاق لمقاومة الأمراض ، مثل التربية الهجينة لمقاومة آفة الحور وفحص الإمراضية لمسببات الأمراض في تقرح الساق.

النقطة الرئيس?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves