In vivo Blattinokulation: Eine alternative Methode zur Beurteilung der Krankheitsresistenz von Hybridklonen in der Pappelzucht der Stammkrebskrankheit

Zusammenfassung

Wir stellen ein Schritt-für-Schritt-Protokoll zur Bewertung der Pappelresistenz gegen Stammkrebserreger unter Verwendung einer In-vivo-Blattinokulationsmethode zur Verfügung. Diese Methode eignet sich besonders für die großflächige Beurteilung der Resistenz von Cytospora chrysosperma und Botryosphaeria dothidea bei Nachkommen aus der Pappelzucht in China.

Zusammenfassung

Stammkrebserkrankungen, die durch den Erreger Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) und Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) verursacht werden, Ces. sind die beiden größten Waldkrankheiten auf den Pappelplantagen in China, die mitunter alle Pappelsetzlinge vernichten oder ausgewachsene Pappelwälder schwer schädigen können. Die Hybridzüchtung ist die direkteste und effizienteste Methode zur Bekämpfung und zum Management von Baumkrankheiten. Die Bewertung der Krankheitsresistenz oder die Auswahl von Klonen mit Krankheitsresistenz auf der Grundlage der In-vitro-Stamminokulation ist jedoch ineffizient, zeitaufwändig und teuer, was die Entwicklung der Hybridzüchtung der Pappelstammkrebskrankheit einschränkt. In dieser Studie haben wir eine alternative Methode vorgeschlagen, um die Krankheitsresistenz gegen Stammkrebserreger durch in vivo Blattinokulation zu bewerten. Die bei dieser Methode verwendeten Testmaterialien können an 1-jährigen Pappelsetzlingen oder den einjährigen Zweigen mehrjähriger Pappeln im Gewächshaus oder auf dem Feld verwendet werden. Der entscheidende Schritt dieser alternativen Methode ist die Auswahl der inokulierenden Blätter: Die 5-7^frisch gereiften Blätter könnten am besten geeignet sein. Der zweite kritische Schritt der Blattinokulationsmethode besteht darin, Wunden an den Pflanzenblättern durch Nadelstiche zu machen, um genügend Läsionen zu erzeugen, um die Schwere der Erkrankung zu messen. Für die ausreichende Anzahl von Blättern, die in der frühen Phase der Pappelzucht produziert werden, trägt diese In-vivo-Blattinokulation zu einem schnellen, genauen und groß angelegten Screening der krankheitsresistenten Pappelklone auf Krebspathogene bei. Darüber hinaus wird diese Blattinokulationsmethode auch als effiziente Methode zum Screening von Pathotypen von Erregern der Stammkrebskrankheit C. chrysosperma, B. dothidea oder anderen Erregern der Pappelstammkrebse dienen.

Einleitung

Erkrankungen des Pappelstammkrebses, die hauptsächlich durch zwei nekrotrophe Erreger, Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. und Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. & de Not., bedrohen ernsthaft die Entwicklung und das Überleben von Pappelplantagen im Nordosten, Norden und Nordwesten (Drei-Norden) Chinas. Die Hybridzüchtung ist die direkteste und effizienteste Methode zur Bekämpfung und Bekämpfung von Baumkrankheiten. Verglichen mit den Fortschritten in der Züchtung von ertragreichen, schnellwüchsigen oder anderen Pappelhybridklone ist die Forschung zur Resistenzzüchtung bei Pappelkrebs jedoch spärlich. Es wurde....

Protokoll

1. Pilzkultur für Krebserreger

1. Bereiten Sie das Nährmedium aus Kartoffel-Dextrose-Agar (PDA; Kartoffelextraktion 6,0 g, Dextrose 20,0 g, Agar 20,0 g) für Pilzstämme vor; lösen Sie die oben genannten Materialien in Wasser bis zu 1000 mL auf, lösen Sie das Medium bei 100 °C für 10 min vollständig auf.
2. Gießen Sie PDA-Medium in 25-ml-Röhrchen (jedes enthält 15,0 ml); Alle Röhrchen bei 121,1 °C für 30 min sterilisieren. Gießen Sie das Medium in Kulturplatten (9,0 cm Durchmesser) und kühlen Sie die Platten bei Raumtemperatur (RT) ab.
3. Schneiden Sie das Myzel des Pilzerregers, das 7 Tage lang in ....

Diskussion

Dieses Protokoll bietet eine schnelle und effiziente Inokulationsmethode für Erreger der Pappelkrebsresistenz, die sich für Forschungsbereiche eignet, die ein groß angelegtes Screening auf Krankheitsresistenz erfordern, wie z. B. die Hybridzüchtung von Pappelkrebsresistenzen und das Pathogenitätsscreening von Stammkrebserregern.

Der erste wichtige Punkt der Methode ist die Bewertung der Krankheitsresistenz durch die Inokulation von neu gereiften Blätter.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves