A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
نحن نقدم وصفا شاملا لطريقة بوابات القلب بأثر رجعي الجوهرية ل CrumpCAT ، وهو نموذج أولي للتصوير المقطعي المحوسب بالأشعة السينية للحيوانات الصغيرة (CT) تم تصميمه وإنشاؤه في مؤسستنا البحثية.
CrumpCAT هو نموذج أولي للتصوير المقطعي المحوسب بالأشعة السينية للحيوانات الصغيرة (CT) تم تطويره في مؤسستنا البحثية. يستخدم كاشف CMOS بمعدل إطارات أقصى يبلغ 29 هرتز ومصادر الأشعة السينية التنغستن المماثلة ذات الطاقات التي تتراوح من 50 كيلو فولت إلى 80 كيلو فولت على نطاق واسع عبر أدوات التصوير المقطعي المحوسب قبل السريرية المتاحة تجاريا. هذا يجعل العمل الموصوف وثيق الصلة بالمؤسسات الأخرى ، على الرغم من الحكمة المتصورة عموما بأن هذه الكاشفات ليست مناسبة لبوابات معدلات ضربات القلب العالية للفئران (~ 600 نبضة / دقيقة). يتميز الماسح الضوئي بتصوير متوسط (200 ميكرومتر) وعالي الدقة (125 ميكرومتر) ، والتنظير الفلوري ، وبوابات التنفس بأثر رجعي ، وبوابات القلب بأثر رجعي ، مع إعادة بناء صورة الإسقاط المتكررة أو المرشحة. من بين هذه الميزات ، تعد بوابة القلب الميزة الأكثر فائدة لدراسة وظائف القلب في الجسم الحي ، لأنها تقضي بشكل فعال على ضبابية الصورة الناتجة عن حركة الجهاز التنفسي والقلب.
هنا ، نصف طريقتنا للتصوير المقطعي المحوسب بأثر رجعي بأثر رجعي قبل السريري ، والتي تهدف إلى تطوير البحث حول وظيفة القلب في الجسم الحي وتحليل الهيكل. تكتسب طريقة بوابات القلب عددا كبيرا من الإسقاطات في أقصر وقت تعرض عملي (~ 20 مللي ثانية) ثم تستخرج بأثر رجعي إشارات الجهاز التنفسي والقلب من التغيرات الزمنية في تسلسل الإسقاط الخام. تستخدم هذه الإشارات لرفض الإسقاطات التي تنتمي إلى مرحلة إلهام معدل الحركة العالي للدورة التنفسية ولتقسيم الإسقاطات المتبقية إلى 12 مجموعة ، كل منها يتوافق مع مرحلة واحدة من الدورة القلبية. يتم إعادة بناء كل مجموعة بشكل مستقل باستخدام طريقة تكرارية لإنتاج صورة حجمية لكل مرحلة قلبية ، مما ينتج عنه مجموعة بيانات رباعية الأبعاد (4D).
يمكن تحليل صور المرحلة هذه إما بشكل جماعي أو فردي ، مما يسمح بتقييم مفصل لوظائف القلب. لقد أظهرنا فعالية كلا النهجين لميزة بوابات القلب في الماسح الضوئي النموذجي من خلال نتائج التصوير التمثيلية في الجسم الحي .
غالبا ما تستخدم أبحاث الصغيرة مزيجا من طرق التصوير غير الغازية ، مع كون التصوير المقطعي المحوسب بالأشعة السينية (CT) خيارا بارزا نظرا لنضجه وفعاليته من حيث التكلفة وسرعته1،2 وقدرته على توفير معلومات تكميلية جنبا إلى جنب مع طرائق أخرى مثل التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET) 2،3 والتصوير المقطعي المحوسب بإصدار فوتون واحد (SPECT)2،4. ومع ذلك ، مثل تقنيات التصوير الأخرى ، فإن التصوير المقطعي المحوسب عرضة للقطع الأثرية للحركة الفسيولوجية التي يسببها القلب النابض أو التنفس ، مما يؤدي إلى عدم وضوح وتحد من دقة البحث.
لمعالجة هذا القيد ، يمكن التخفيف من عدم وضوح حركة الجهاز التنفسي والقلب من خلال تقنية تعرف باسم البوابات5،6،7،8 ، حيث تتم مزامنة الحصول على البيانات مع مراحل محددة من الدورة القلبية أو التنفسية (أو البوابات). تتضمن إحدى الطرق لتحقيق ذلك ، والمعروفة باسم البوابات المحتملة3،6 ، توصيل أجهزة استشعار بالحيوان لتوفير إشارات بوابة في الوقت الفعلي لماسح ضوئي متوافق. على الرغم من فعاليتها ، إلا أن هذه الطريقة تتطلب عمالة كثيفة وتستغرق وقتا طويلا ، خاصة عند توصيل أجهزة الاستشعار بصدر وأقدام الصغيرة مثل الفئران ، مما يحد من حجم الدراسات. بدلا من ذلك ، تتضمن البوابات الجوهرية بأثر رجعي7،9،10،11 الحصول على بيانات السلاسل الزمنية دون استخدام أجهزة الاستشعار ولكن من خلال تحديد الميزات في البيانات التي تسمح بالفرز بأثر رجعي للنتائج بناء على مرحلتها في الدورة القلبية أو التنفسية. يقدم هذا النهج نتائج مماثلة للبوابات المحتملة ولكن دون الحاجة إلى أجهزة إضافية أو الجهد المبذول في توصيل مستشعر النبض ، وبالتالي يبسط البروتوكولات التجريبية إلى حد كبير.
في طريقتنا للتصوير المقطعي المحوسب للقلب قبل السريري ، نستخدم البوابات الجوهرية بأثر رجعي لاستخراج دورات الجهاز التنفسي والقلب من اختلافات السعة في المناطق في إسقاطات الأشعة السينية التي تظهر أهم التغييرات بين الإطارات المتتالية. لتسهيل هذه العملية ، يتم تسجيل قالب صدر الفأر بشكل مشترك في الإسقاط الخلفي الأمامي الأول باستخدام المعلومات المتبادلة12. بمجرد وضع القالب في مكانه ، يتم تلخيص شدة البكسل في نافذة بالقرب من الحجاب الحاجز لتوليد إشارة تنفسية بديلة ، بينما يتم تلخيص تلك القريبة من عضلة القلب لاشتقاق إشارة القلب البديلة. ثم يتم تصفية هذه الإشارات بتمرير النطاق في المجال الزمني ، ويتم تعيين رقم طور كسري لكل إطار في مجموعة البيانات (بين 0 و 1) بناء على مرحلته التنفسية والقلبية. هذا يسمح باختيار أو رفض الإسقاطات وفقا لقيم الطور الخاصة بها. عادة ، يتم الاحتفاظ بالإطارات المقابلة لمرحلة انتهاء الصلاحية النهائية للدورة التنفسية (0.15 ≤ المرحلة < 0.85) ، بينما يتم التخلص من الإطارات من مرحلة الإلهام ، حيث تكون الحركة أكثر وضوحا. يتم تجميع الإطارات المتبقية في 12 مرحلة قلبية ، يمثل كل منها 1/12 (0.083) من الدورة القلبية ويتم إعادة بنائها في صور ثلاثية الأبعاد باستخدام طريقة تكرارية (تعظيم توقعات المجموعة الفرعية المرتبة [OSEM])13،14. يتم تلخيص العملية برمتها في الشكل 1.
تمت مراجعة البروتوكولات التجريبية للحيوانات والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه بجامعة كاليفورنيا ، لوس أنجلوس (UCLA). تم استخدام الفئران C57BL / 6J (8 أسابيع ، ذكور ، 24-26 جم) في هذا البروتوكول. الماسح الضوئي المقطعي المحوسب المستخدم في هذه الدراسة هو CrumpCAT (الشكل 2) ، وهو نموذج أولي تم تطويره في مؤسستنا البحثية للأبحاث قبل السريرية ، مما يوفر لنا التحكم والمرونة اللازمة لتحسين بروتوكولات الاستحواذ وإعادة البناء. تفترض الطريقة أن معدل ضربات القلب للفئران المخدرة لن يزيد معدل ضربات القلب عن 600 نبضة / دقيقة ومعدل تنفس يتراوح بين 20 و 180 نفسا /دقيقة 15.
1. إعدادات المعدات
2. تحضير
3. الحصول على البيانات
4. المعالجة المسبقة للبيانات
ملاحظة: خطوات المعالجة المسبقة مطلوبة فقط لعمليات الاستحواذ ذات البوابات. يتم تنفيذ كل هذه الخطوات تلقائيا بواسطة برنامج إعادة الإعمار ولا يلزم تدخل المشغل.
5. إعادة بناء الصورة
6. تقييم الصورة وقياس حجم البطين الأيسر (LV)
قمنا أولا بمقارنة صور التصوير المقطعي المحوسب غير المسورة والمسورة لتصور تكلس القلب في الفئران (ذكور ، 30-32 جم). تم إنشاء نموذج الفئران لتكلس القلب عن طريق إحداث إصابة قلبية عن طريق التجميد السريع والذوبان في أنسجة القلب (إصابة التبريد) ، كما هو موضح سابقا23. با...
تطبيق الأجهزة المحدد الموضح هنا هو نظام التصوير المقطعي المحوسب بالأشعة السينية المصنوع خصيصا ومعهدنا ، ولكن الكاشف المحدد يستخدم على نطاق واسع عبر أدوات التصوير المقطعي المحوسب قبل السريرية المتاحة تجاريا ، مما يجعل العمل الموصوف وثيق الصلة بالمؤسسات الأخرى. هذا الن?...
الدكتور ريتشارد تاشيرو هو مستشار في Sofie Biosciences و Xodus Imaging. الدكتور آريون ف. شاتزيوانو هو مؤسس Sofie Biosciences.
نشكر جميع أعضاء مركز تكنولوجيا التصوير قبل السريري بجامعة كاليفورنيا في لوس أنجلوس كرامب على مساعدتهم ودعمهم. على وجه الخصوص ، نشكر ميكايلا تامبولين وإيزابيل داي على إعداد للتصوير المقطعي المحوسب للقلب ونشكر صوفي شوميلوف على توليد بعض عائد الاستثمار للبطين الأيسر أثناء الدراسة. نشكر أيضا الدكتورين أرجون ديب وييجي وانغ (جامعة كاليفورنيا في لوس أنجلوس) على تقديم نماذج الفئران لإصابات القلب الإقفارية الحادة للتصوير المصغر بالتصوير المضغوط لتكلس القلب. يتم دعم هذا العمل من قبل منحة دعم مركز المعاهد الوطنية للصحة للسرطان (2 P30 CA016042-44).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
C57BL/6J mice | Jackson Laboratory | 664 | Male, 8 weeks old, 24-26 g |
Dexela camera | Varex | 1512 | Detector, 20 ms exposure, 74.8/149.6 µm pixel |
VivoVist | Nanoprobes | 1301-5X0.25ML | CT Contrast agent |
X-ray source | Moxtek | TUB00082 | 50 kV peak, 200 µA, 1.0 mm-thick Al filter |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved