1. صيانة مستعمرة الذبابة البيضاء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الظروف البيئية: ينبغي الحفاظ على المستعمرات الذبابة البيضاء في غرفة النمو للرقابة. السيطرة على الرطوبة النسبية، ودرجة الحرارة، والإضاءة، وشدة الضوء ضرورية للنمو الأمثل مستعمرة (الشكل 1). A درجة الحرارة من 28 درجة مئوية والرطوبة النسبية 30-50٪، و14 ساعة الضوئية سوف تسفر مستعمرة الذي يتطور من بيضة إلى ظهور الكبار في 18 يوما (هذه المرة يختلف مع النبات المستضيف). يجب أن تبقى الرطوبة النسبية أقل من 70٪ إلى تثبيط نمو الحشرات ومسببات الأمراض النباتية الفطرية. يجب تخفيض أسعار الأسمدة والري للحد من مسببات الأمراض الفطرية وتراكم الملح. شدة الضوء لمستعمرة ينبغي أن تكون عالية إلى حد ما. لمبات الفلورسنت VHO المستخدمة في بأعداد كافية لتوليد ما يقرب من 800-1،000 الشموع قدم في ذروة المظلة كافية لمعظم النباتات (أي. القطن، الفول المشتركة، ليما الفاصوليا، والطماطم). النظافة أمر ضروري فيمستعمرة الذبابة البيضاء للحفاظ على ظروف تربية الأمثل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أقفاص مستعمرة: ينبغي الحفاظ على الذباب الأبيض على النباتات في أقفاص، بدلا من الحر في غرفة النمو. ويمكن بناء أقفاص من مواد مختلفة ولكن يجب أن تسمح ل: التهوية، وسهولة الوصول، والقدرة على منع هروب الذبابة البيضاء أو تسلل، وذات حجم كاف للحفاظ على محطات كافية لتوليد السكان الذبابة البيضاء الحاجة. وقد تم الحصول على نتائج جيدة مع الأورجانزا بالإضافة إلى فحص الالومنيوم (قوة) وكذلك فحص الذبابة البيضاء واقية (انظر الجدول المعدات واللوازم محددة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مستعمرة إعداد النبات: إن نوعا من النباتات المحدد هو أحد الاعتبارات الهامة عند بدء مستعمرة الذبابة البيضاء. وينبغي أن تكون قادرة على دعم السكان الحشرات عالية دون انهيار المصنع. ينبغي للمصنع الذي تم اختياره لمستعمرة nonviruliferous يكون nonhost للفيروس أو الفيروسات التي تهدف إلى أن تنتقل إلى تجنب التلوث في المستعمرة وإذا الحفاظ على viruliمستعمرة ferous، يجب أن يكون المضيف للفيروس. ينبغي أن النباتات تنمو بسرعة كبيرة لدعم ظهور أشخاص جديدة في غضون 18 يوما من تقديمها للمستعمرة ولكن ليس بهذه السرعة كما أن تتفوق في أقفاص في غضون أربعة أسابيع. ينصح قزم، بوش، أو الفناء من نوع الأصناف النباتية لأنها غالبا ما تنتج مساحة الورقة مماثلة لأصناف أطول ولكن من دون استطالة الجذعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من المهم جدا للنباتات الخلفية للمستعمرة في البيوت المحمية في الأقفاص التي تستبعد الذباب الأبيض والحشرات الأخرى. استخدام النباتات التي تنتشر فيها مع الذباب الأبيض، التربس، أو العث قبل دخولها إلى مستعمرة يمكن أن تتسبب في مستعمرة للانهيار. لديك النباتات المصابة أيضا على إمكانية أن تكون مصابة بفيروسات التي تنقلها الحشرات التي سوف تتداخل مع دراسات انتقال الفيروس. </li></ol> 2. مؤسسة مستعمرة الذبابة البيضاء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء مستعمرة للمرة الأولى باستخدام الذباب الأبيض نظيفة - تلك الخطوط من الفيروسات النباتية، والحشرات الأخرى، ومسببات الأمراض الحشرية. ويمكن الحصول على هذهمن المتعاونين أو من الميدان. إذا الميدان التي تم جمعها، وينبغي أن تربى الذباب الأبيض لمدة 8 أسابيع على الأقل على النباتات nonhost من الفيروس مصنع، والتحقق من عدم وجود أعراض مصنع للتأكد من خلوها من الفيروسات النباتية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأسبوع 1: أعرض الذباب الأبيض نظيفة إلى القفص أول من النباتات. ويمكن إدخال الذباب الأبيض التي تطلع أرقام معروفة أو عن طريق هز بلطف الذباب الأبيض من مصنع آخر مصدر اعتمادا على الطلب على مستعمرة. خلال الأسبوع 1، الذباب الأبيض ووضع البيض على الجانب السفلي من أسطح أوراق النباتات. يمكن التنبؤ على حجم السكان تقريبي لكل ظهور على أساس عدد البالغين تستخدم لوضع البيض ومتوسط ​​عدد البيض الذي تضعه الأنثى في الذبابة البيضاء على النبات المضيف في السؤال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاسبوع 2: بدء قفص آخر عن طريق إدخال الذباب الأبيض للنباتات مضيف جديد لوضع البيض. مشيرا إلى أن المصانع في القفص بدأت في الأسبوع 1 يكون البيض، وبعض الذباب الأبيض غير ناضج يغطي السفلى من الأوراق (الشكل 2). بعضسوف الذباب الأبيض الكبار قدم خلال الأسبوع 1 يكون لا يزال على قيد الحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأسبوع 3: بدء قفص ثالث عن طريق إدخال الذباب الأبيض إلى محطات جديدة لوضع البيض. مشيرا إلى أن المصانع في القفص بدأت في الأسبوع 1 يكون غير ناضج وكذلك العديد من الذباب الأبيض الكبار الجديدة الناشئة وينبغي أن تكون هناك زيادة ملحوظة جدا في البالغين السكان الذبابة البيضاء. مشيرا إلى أن المصانع في القفص بدأت في الأسبوع 2 لديها العديد من بيض الذباب الأبيض وغير ناضج يغطي السفلى من الأوراق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأسبوع 4: بدء قفص الرابع عن طريق إدخال الذباب الأبيض إلى محطات جديدة لوضع البيض. مشيرا إلى أن المصانع في القفص بدأت في الأسبوع 1 لديها العديد من الذباب الأبيض الكبار أن ما يقرب من أسبوع واحد آخر ظهور. مشيرا إلى أن المصانع في القفص بدأت في الأسبوع 2 لديها العديد من الذباب الأبيض الكبار الجديدة الناشئة وينبغي أن تكون هناك زيادة ملحوظة جدا في عدد السكان الذبابة البيضاء. مشيرا إلى أن المصانع في القفص بدأت خلال الأسبوع 3 دينا العديد من بيض الذباب الأبيض وغير ناضج يغطي السفلى من الأوراق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأسبوعية بعد وي 4 الأولىKS: كل أسبوع، تبدأ قفص جديد من خلال إدخال الذباب الأبيض الكبار من رابع أقدم قفص (التي القفص في الأسبوع 1) على محطات جديدة في، قفص نظيفة جديدة. يجب إزالة القفص القديم ومصانعها التخلص منها. هذه الذباب الأبيض ما يقرب من 1 في الاسبوع بعد ظهور. في حالة مستعمرة ناقل الفيروس، وهذه الذباب الأبيض نقل الفيروس إلى محطات جديدة وكذلك وضع البيض للجيل القادم من الذباب الأبيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجارب انتقال تخطط لاستخدام الذباب الأبيض التي ستنشأ في قفص الأسبوع الثالث. إذا كانت هناك حاجة أكثر الذباب الأبيض، أرقام النبات ويمكن زيادة وأكثر الذباب الأبيض يمكن أن تضاف إلى الأسبوع 1 القفص لزيادة السكان الذبابة البيضاء. </li></ol> 3. طريقة لتلقيح النباتات من اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لضمان ارتفاع معدلات انتقال العدوى: 1) يجب أن يتم التعامل معها كما الذباب الأبيض بلطف ممكن لمنع الأضرار التي لحقت الحشرات الأمر الذي سيقلل من معدلات انتقال العدوى؛ 2) يجب أن يكون هناك مساحة الورقة كافية للالذباب الأبيض لتمر اقتصاداتها بمرحلة انتقاليةمسبار لها أو الأعلاف. زيادة في اكتساب الوقت أو زيادة في عدد من النباتات المضيفة الاستحواذ قد يزيد انخفاض معدلات العدوى في محطات الاختبار بسبب الازدحام سواء في الشراء أو فترة الوصول التلقيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع من الذباب الأبيض. وفيما يلي هو إجراء لجمع وحركة أرقام دقيقة من الذباب الأبيض المطلوبة لأغراض تجريبية. لنقل أعداد كبيرة من الذباب الأبيض، كما هو مطلوب للفحص المقاومة على سبيل المثال، فمن الضروري فقط أن يهز بلطف النباتات التي تنتشر فيها الذبابة البيضاء على النباتات اختبار أو المضيفين اكتساب المصابة بالفيروسات (ولاحقا لمحطات اختبار). ومن المؤكد أن يهز النباتات على العديد من المواقع للحد من آثار التجميع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ظهرت حديثا الذباب الأبيض الكبار (1-3 أيام آخر ظهور) هي نشطة للغاية وغالبا ما تميل إطعام ذلك لإعطاء أعلى معدلات نقل 4. لا يزال الذباب الأبيض أقدم يحيل لكن في أدنى تردد. الذباب الأبيض متعددة لكل محطة اختبار (15-40 في جيش التحرير الشعبى الصينىNT) ينبغي أن تستخدم لارتفاع معدلات انتقال منذ نسبة 1 الذبابة البيضاء للنبات يؤدي في أحيان كثيرة بشكل غير مقبول انخفاض معدلات انتقال 3،4. العدد المطلوب يتوقف على الفيروس ونوع من اقتناء ومحطات الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع الأجهزة الطموح وقارورة جمع. (الشكل 3) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيد واحدة، وعقد بطاقة بلاستيكية صفراء داخل القفص مستعمرة الذي يحتوي على الذباب الأبيض التي يتعين جمعها. اضغط بلطف النباتات لتشجيع الكبار الذباب الأبيض أن يطير. سوف ينجذب الذباب الأبيض على البطاقة الصفراء للوسوف يطير من محطة إلى بطاقة حيث يمكن جمعها باستخدام الشافطة ونفسا لطيف جدا. أبدا نضح الذباب الأبيض التي تتغذى على النباتات. هي جزء لا يتجزأ stylets في المحطة في حين تغذية حتى انزالهم فإن النباتات كسر stylets وجعلها غير قادرة على إما اكتساب أو نقل فيروس (الشكل 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع حوالي 20 الذباب الأبيض الكبار إلى كولي واحدقارورة كشن للحد من الأضرار المادية إلى الحشرات من تطلعات المتكررة (الشكل 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتغيير قارورة جمع، اضغط بلطف القارورة على سطح صلب وكاب مع parafilm بينما مشوشا والذباب الأبيض من التنصت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جمع قارورة جديدة على الشافطة وتكرار حتى يتم جمع عدد من الذباب الأبيض الحاجة. يمكن أن يبقى الذباب الأبيض في قارورة جمع في درجة حرارة الغرفة لعدة ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع الاستحواذ. الذباب الأبيض على النبات المصاب بالفيروس، وسمح لتتغذى على النباتات المصابة لمدة 48-72 ساعة. فترات أطول من اقتناء 72 ساعة عادة لا زيادة معدلات انتقال العدوى. لتلك الفيروسات التي تنتقل بطريقة غير المستديم أو semipersistent، 1 ساعة وعدة ساعات، على التوالي، هي فترات الوصول اكتساب كافية (الجدول 1). ويتم الحصول على أفضل النتائج عندما يتم إعطاء الذباب الأبيض حرية الوصول إلى محطات في أقفاص أن حصر الحشرات لمصنع واحد أو إلىمحطات متعددة. لكن بعض التجارب تتطلب اكتساب من أوراق محددة في هذه الحالة مقطع أقفاص يمكن استخدامها. عند استخدام مقطع أقفاص من المهم لاستيعاب تفضيل التغذية الذبابة البيضاء لالسفلى من الأوراق. أيضا، الازدحام من الذباب الأبيض في مقطع أقفاص يمكن أن تقلل من معدلات انتقال العدوى - وقد تم تحقيق معدلات مقبولة من نقل الذباب الأبيض باستخدام 10 أنثى لكل مقطع قفص من 2.5 سم القطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التلقيح. إعداد قفص المناسب لحجم التلقيح ووضع النباتات داخل الاختبار. إذا مصنع واحد فقط هو أن تلقيح النظر في قفص مصنع واحد. إذا النبات أكثر من واحد هو أن تلقيح النظر في الإطار الصغيرة PVC / الأورجانزا كيس قفص أو قفص الألومنيوم (الشكل 6). يجب أن يكون حجم القفص تستخدم لتلقيح أكبر قليلا من حجم المصنع (ق) ليتم تلقيح. ويتم الحصول على معدلات نقل أعلى عندما يتم الاحتفاظ الذباب الأبيض على مقربة من محطة المظلة وليس إعطاء الكثير من المساحة الحرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع من الذباب الأبيض من المضيفين اكتساب يعتمد على احتياجات التجربة. إذا كانت هناك حاجة أعداد صغيرة، نضح الذباب الأبيض كما هو موضح أعلاه. ضع قارورة جمع من الذباب الأبيض داخل القفص بالقرب من النباتات وإزالة الغطاء (الشكل 7). فتح القارورة والافراج عن الذباب الأبيض أو عكس والاستفادة بلطف القارورة للافراج عن الذباب الأبيض. إذا كانت هناك حاجة أعداد كبيرة ببساطة تحريك النباتات استحواذ مع الذباب الأبيض في أقفاص حيث توجد محطات الاختبار ويهز برفق الذباب الأبيض قبالة النبات العائل الاستحواذ. لكلا النوعين من مقدمة، تأكد من توزيع الذباب الأبيض عبر محطات لتقليل تجميع وضمان أن تلقحها موحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمح الذباب الأبيض للتحقيق أو إطعام لكمية مناسبة من الوقت، تعتمد مرة أخرى على الفيروس وإلى حد ما النبات المضيف (الجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من الذباب الأبيض مرة واحدة على الأقل خلال فترة التلقيح لضمان وصول الذباب الأبيض التي هيالتحقيق أو إطعام من خلال فتح القفص وتسليم بعض الأوراق على كل مصنع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لفترات أطول وصول التطعيم، وتعكر النباتات بلطف (باستخدام عصا الخيزران أو ما يعادلها) لتنظيف قمم النباتات وتشجيع الذباب الأبيض لإعادة توزيع على النباتات. إعادة توزيع الذباب الأبيض يساعد على ضمان تحقيق معدل نقل أعلى بنسبة مواجهة الميل الطبيعي من الذباب الأبيض لتجميع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنهاء. وانتهت فترة الوصول التلقيح عن طريق قتل الذباب الأبيض مع المواد الكيميائية المعتمدة. تطبيق اثنين من المبيدات الحشرية واحدة تلو الأخرى: مبيد حشري الاتصال لإنهاء بسرعة الذباب الأبيض الكبار والحشرات النظامية لإنهاء أي الذباب الأبيض التي تتطور في الأسابيع التالية وتلك غاب عنها الحشرات الاتصال (الشكل 8). وقد استخدمت مجموعة الاتصال الحشرات مثل الصابون الحشرات والمبيدات الحشرية الجهازية مثل إميداكلوبريد أو pymetrozine مع نجاح جيدة. </li></ol>

<ol>
	<li>Antignus, Y., Mor, N., Ben Joseph, R., Lapidot, M., Cohen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UV+absorbing+plastic+sheets+protect+crops+from+insect+pests+and+from+virus+diseases+vectored+by+insects.">UV absorbing plastic sheets protect crops from insect pests and from virus diseases vectored by insects.</a> Environ. Entomol. 25, 919-924 (1996).</li><li>Cohen, S., Gerling, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+whitefly-transmitted+viruses.">Epidemiology of whitefly-transmitted viruses.</a> Whiteflies: Their Bionomics, Pest Status and Management. , 211-225 (1990).</li><li>Cohen, S., Antignus, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomato+yellow+leaf+curl+virus,+a+whitefly-borne+geminivirus+of+tomatoes.">Tomato yellow leaf curl virus, a whitefly-borne geminivirus of tomatoes.</a> Adv. Dis. Vector Res. 10, 259-288 (1994).</li><li>Csizinszky, A., Schuster, D. J., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+UV-reflective+mulches+on+tomato+yields+and+on+the+silverleaf+whitefly.">Effect of UV-reflective mulches on tomato yields and on the silverleaf whitefly.</a> HortSci. 34, 911-914 (1999).</li><li>De Barro, P. J., Liu, S. -. S., Boykin, L. M., Dinsdale, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bemisia+tabaci:+A+statement+of+species+status.">Bemisia tabaci: A statement of species status.</a> Annu. Rev. Entomol. 56, 1-19 (2011).</li><li>Duffus, J. E., Gerling, D., Mayer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whitefly-borne+viruses.">Whitefly-borne viruses.</a> Bemisia: 1995 Taxonomy, Biology, Damage, Control and Management. , 255-288 (1996).</li><li>Lapidot, M., Czosnek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+TYLCV-resistant+plants+using+whitefly-mediated+inoculation.">Screening for TYLCV-resistant plants using whitefly-mediated inoculation.</a> Tomato Yellow Leaf Curl Virus Disease. , 329-342 (2007).</li><li>Lapidot, M., Friedmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+for+resistance+to+whitefly-transmitted+geminviruses.">Breeding for resistance to whitefly-transmitted geminviruses.</a> Ann. Appl. Biol. 140, 109-117 (2002).</li><li>Lapidot, M., Polston, J. E., Stansly, P. A., Naranjo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+epidemiology+of+Bemisia-vectored+viruses.">Biology and epidemiology of Bemisia-vectored viruses.</a> Bemisia: Bionomics and Management of a Global Pest. , 227-231 (2010).</li><li>Navas-Castillo, J., Fiallo-Olive, E., Sanchez-Campos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+virus+diseases+transmitted+by+whiteflies.">Emerging virus diseases transmitted by whiteflies.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 49, 219-248 (2011).</li><li>Ng, J. C. K., Falk, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-vector+interactions+mediating+nonpersistent+and+semipersistent+transmission+of+plant+viruses.">Virus-vector interactions mediating nonpersistent and semipersistent transmission of plant viruses.</a> Ann. Rev. Phytopathol. 44, 212-21 (2006).</li><li>Polston, J. E., Cohen, L., Sherwood, T. A., Ben-Joseph, R., Lapidot, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsicum+species:+Symptomless+hosts+and+reservoirs+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+(TYLCV).">Capsicum species: Symptomless hosts and reservoirs of Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV).</a> Phytopathology. 96, 447-452 (2006).</li><li>Polston, J. E., Hiebert, E., McGovern, R. J., Stansly, P. A., Schuster, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+range+of+Tomato+mottle+virus,+a+new+geminivirus+infecting+tomato+in+Florida.">Host range of Tomato mottle virus, a new geminivirus infecting tomato in Florida.</a> Plant Dis. 77, 1181-1184 (1993).</li><li>Polston, J. E., Sherwood, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pymetrozine+interferes+with+transmission+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+by+the+whitefly+Bemisia+tabaci+(Hemiptera:+Aleyrodidae.">Pymetrozine interferes with transmission of Tomato yellow leaf curl virus by the whitefly Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae.</a> Phytoparasitica. 31, 490-498 (2003).</li><li>Schuster, D. J., Thompson, S., Ortega, L. D., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+evaluation+of+products+to+reduce+settling+of+sweetpotato+whitefly+adults.">Laboratory evaluation of products to reduce settling of sweetpotato whitefly adults.</a> J. Econ. Ento. 102, 1482-1489 (2009).</li><li>King, A. M. Q., Adams, M. J., Carstons, E. B., Lefkowitz, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Virus Taxonomy, Ninth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. , (2012).</li><li>Wintermantel, W. M., Stansly, P. A., Naranjo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+efficiency+and+epidemiology+of+Criniviruses.">Transmission efficiency and epidemiology of Criniviruses.</a> Bemisia: Bionomics and Management of a Global Pest. , 319-332 (2010).</li><li>Yang, Y., Sherwood, T. A., Patte, C. P., Hiebert, E., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+(TYLCV)+Rep+gene+sequences+to+engineer+TYLCV+resistance+in+tomato.">Use of Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) Rep gene sequences to engineer TYLCV resistance in tomato.</a> Phytopathology. 94, 490-496 (2004).</li><li>Zehnder, G. W., Yao, C., Murphy, J. F., Sikora, E. R., Kloepper, J. W., Schuster, D. J., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbe-Induced+Resistance+Against+Pathogens+and+Herbivores:+Evidence+of+Effectiveness+in+Agriculture.">Microbe-Induced Resistance Against Pathogens and Herbivores: Evidence of Effectiveness in Agriculture.</a> Induced Plant Defenses Against Pathogens. , 335-355 (1999).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تم تطوير الأساليب المذكورة هنا على مدى فترة من عقدين من الزمن، واستنادا إلى المعلومات الأساسية المقدمة من قبل العديد من الدراسات من انتقال الذبابة البيضاء، والسلوك، وعلم الأحياء. وبما أن هناك العديد من المنشورات، هذه المخطوطة يشير أساسا إلى التعليقات وبعض المنشورات محددة مختارة لتوضيح نوع البيانات المستخدمة في تطوير هذه التقنية. ومن المهم جدا في هذا الإجراء أن يتم التعامل مع الذباب الأبيض بلطف منذ كسر الساقين والهوائيات يمكن أن يؤدي إلى السلوكيات غير طبيعي وانخفاض معدلات انتقال العدوى. جمع مع الفراغات وغيرها من أجهزة شفط الميكانيكية لم تنتج نتائج جيدة. وهناك اعتبار آخر للنجاح هو أن عدد من الذباب الأبيض المستخدمة للحصول على نقل 100٪ للنباتات اختبار، يجب أن تحدد لكل تركيبة من النبات المستضيف والفيروسات. يحتاج هذه النسبة المثلى إلا أن بعد إنشائها. وقد تم الحصول على أفضل النتائج باستخدام الذباب الأبيض الشباب البالغين (1-3 أيام ظهور الماضية) لأنها زإيف أعلى معدلات انتقال العدوى. كبار السن يمكن استخدامها ولكن ستكون هناك حاجة إلى أعداد أكبر من الذباب الأبيض للتعويض عن انخفاض معدلات انتقال العدوى. ومن المعروف الإناث لنقل بمعدلات أعلى من الذكور، لأنها في كثير من الأحيان إطعام أكثر من الذكور. ومع ذلك فإنه عادة ما لا يستحق الوقت للفصل بين الجنسين لانتقال العدوى. هذا الإجراء يمكن تعديله في طرق عديدة لتتناسب مع موارد واحتياجات الباحث. عند العمل مع فيروسات متعددة فمن الأفضل للحفاظ على مستعمرة واحدة من الذباب الأبيض تربى على النباتات nonhost من الفيروس. ويمكن جمع هذه الذباب الأبيض وضعت على النباتات المصابة بالفيروسات لاقتناء وثم بعد الاستحواذ على الذباب الأبيض يمكن نقلها مرة أخرى إلى محطات الاختبار. ينبغي أن تتم زراعة نباتات مخصصة للمستعمرة في البيوت المحمية في أقفاص لمنع دخول الذباب الأبيض التي قد تصيب منهم مع فيروس آخر. الإصابة من هذه النباتات مع العث، التربس، والآفات النباتية الأخرى يمكن أن تؤثر سلبا على حالمعونة المؤقتة للمستعمرة وذلك لسبب الانهيار. أخيرا سقي النباتات مستعمرة الذي ينبغي القيام به مع الرعاية. هذه النباتات تخضع لضغط شديد من قبل الرضاعة من هذا العدد الكبير من الذباب الأبيض وظروف الإضاءة العادية أقل من. الجذر تعفن الفطريات التي يتم تقديمها على الجفت في يمزج بدون تربة يمكن أن تصبح مشكلة إذا تم overwatered النباتات ولو مرة واحدة. يمكن المعالجة من محطات مع جرعة فطريات القضاء على بعض المشاكل. بينما انتقال الذبابة البيضاء من الفيروسات النباتية يمكن أن يكون مضيعة للوقت وتتطلب موارد قيمة (مثل غرف النمو) فمن الضروري لنقل بعض الفيروسات التي ليست لدينا وسائل أخرى للنقل. بل هو أيضا وسيلة قيمة لمحطات الفحص لمقاومة الفيروسات، كما أنه يستخدم نفس النوع من البث التي سيتم المتوقع أن تقاوم النباتات في الميدان. واستخدام أكثر وسائل اصطناعية لانتقال لا تسفر دائما على أفضل النتائج في تقييم الأصول الوراثية لفيروS-المقاومة.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the Item</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue No.</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly proof screening</td>
			<td>Klayman Meteor Ltd. Petah Tikva 49130, Israel</td>
			<td>---</td>
			<td>BioNet 50 mesh screen Antivirus Insect Screen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly proof screening</td>
			<td>Hummert International (www.hummert.com)</td>
			<td>27-4050-1 - 27-4062-1</td>
			<td>BioNet 50 mesh screen Antivirus Insect Screen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly Collection Devices</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>1135A</td>
			<td>Can also be made using eye droppers, flexible plastic tubing, plastic vacuum adaptors, and cheesecloth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection vials</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>8909</td>
			<td>Vials used depend on which aspirator is used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yellow plastic cards</td>
			<td>any company</td>
			<td>---</td>
			<td>Any bright yellow plastic card will work, can be purchased in many places.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly Cages</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>These are not commercially available and must be constructed. 60 cm x 60 cm x 60 cm cages work well for us. Our preference is for those constructed of aluminum window screening, nylon organdy, vinyl plastic, with a structure created using aluminum window frames. Doors are attached using piano hinges and sealed with weather stripping; tops of the cages are vinyl plastic. Cages can also be made of 1) plexiglass glued together on the edges with ventilation provided by screened openings cut on the side pieces; 2) large bags of nylon organdy, organza, or 50 mesh whitefly screening with internal supports provided by PVC pipes and fittings cut to desired lengths and assembled inside the bags, 3) wood frames and nylon organdy, organza, or 50 mesh whitefly screening.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transmitting plant viruses using whiteflies

الذباب الأبيض، نصفيات الجناح: Aleyrodidae، الذبابة البيضاء Bemisia، وهو مجمع من شكليا الأنواع indistinquishable 5، هي نواقل من العديد من الفيروسات النباتية. وتشمل عدة أجناس من هذه الفيروسات النباتية التي تنقلها الذبابة البيضاء (Begomovirus، Carlavirus، Crinivirus، Ipomovirus، Torradovirus) عدة مئات من الأنواع من الناشئة ومسببات الأمراض الهامة اقتصاديا من المواد الغذائية الهامة ومحاصيل الألياف (التي استعرضها 9،10،16). هذه الفيروسات لا تكرار في ناقلات ولكن على الرغم من ذلك يتم نقل بسهولة من مصنع إلى مصنع من قبل الذبابة البيضاء الكبار بمختلف الوسائل (التي استعرضها 2،6،7،9،10،11،17). وبالنسبة لمعظم هذه الفيروسات تغذية الذبابة البيضاء مطلوب من أجل اقتناء والتلقيح، في حين أن البعض الآخر مطلوب التحقيق فقط. العديد من هذه الفيروسات غير قادرة أو لا يمكن أن تنتقل بسهولة عن طريق وسائل أخرى. ولذلك صيانة من الثقافات فيروس والبيولوجية والتوصيف الجزيئي (تحديد نطاق المضيف والأعراض) 3،13والبيئة 2،12، تتطلب أن تنتقل الفيروسات إلى مضيفي التجريبية باستخدام ناقلات الذبابة البيضاء. وبالإضافة إلى ذلك يتطلب تطوير أساليب جديدة للإدارة، مثل تقييم مواد كيميائية جديدة 14 أو 15 مركبات، والنهج الثقافي الجديد 1،4،19، أو اختيار وتطوير أصناف مقاومة 7،8،18، واستخدام الذباب الأبيض لل انتقال الفيروس. استخدام انتقال الذبابة البيضاء من الفيروسات النباتية لاختيار وتطوير أصناف مقاومة في برامج التربية وتحديا من نوع خاص 7. اختيار فعال والكشف عن مقاومة توظف أعدادا كبيرة من النباتات وهناك حاجة ل 100٪ من النباتات ليتم تلقيح من أجل العثور على عدد قليل من المورثات التي تمتلك جينات المقاومة. هذه الدراسات استخدام أعداد كبيرة جدا من الذباب الأبيض ناقل الفيروس، في كثير من الأحيان عدة مرات في السنة. صيانة الذبابة البيضاء وصفها هنا يمكن أن تولد مئات أو آلافمن الذباب الأبيض الكبار على النباتات كل أسبوع، على مدار السنة، دون تلوث الفيروسات النباتية الأخرى. نباتات خالية من كل الذباب الأبيض وفيروس يجب أن يتم إنتاجها لندخل في مستعمرة الذبابة البيضاء كل أسبوع. الذبابة البيضاء يجب أن تبقى خالية من مسببات الأمراض الثقافات الذبابة البيضاء، والطفيليات، والطفيليات التي يمكن أن تقلل السكان الذبابة البيضاء و / أو تقليل كفاءة انتقال الفيروس. المستعمرات المنتجة بالطريقة الموصوفة يمكن زيادتها بسرعة لزيادة أو إنقاص أعداد السكان حسب الحاجة، ويمكن تعديلها لاستيعاب أفضليات تغذية من مقرها الذبابة البيضاء على المضيف مصنع للفيروس. هناك نوعان أساسيان من المستعمرات الذبابة البيضاء التي يمكن الحفاظ على: أ nonviruliferous وناقل الفيروس الذبابة البيضاء مستعمرة. وتتكون مستعمرة nonviruliferous من الذباب الأبيض تربى على النباتات خالية من الفيروسات ويسمح توافر الأسبوعية من الذباب الأبيض التي يمكن أن تستخدم لنقل الفيروسات من مختلف الثقافات. وناقل الفيروس الذبابة البيضاء مستعمرة،يتألف من الذباب الأبيض تربى على النباتات المصابة بالفيروسات، ويسمح توافر الأسبوعية من الذباب الأبيض التي حصلت على الفيروس وبالتالي الاستغناء عن خطوة واحدة في عملية انتقال الفيروس.

وقد استخدمت هذه الأساليب لإنشاء مستعمرة الذبابة البيضاء والصيانة، فضلا عن التلاعب لنقل الفيروسات النباتية بنجاح في عدد من الدراسات 4،11،12،14 فضلا عن العديد من الآخرين لا المذكورة. باستخدام هذه الأساليب مع الفيروسات التي تنتقل باستمرار، لقد حصلنا على روتيني معدلات المرجوة من نقل 100٪ للاختيار للمقاومة، وفحص المبيدات الحشرية لقدرتها على تتداخل مع انتقال (وتقييم مركبات يحفز مقاومة) 13،14،17،18 ( الشكل 9). يمكن وتم تكييفها للإجراءات الموصوفة هنا إلى العديد من المواقع في مرافق البحوث في القطاعين العام والخاص. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> نوع ناقل الحركة </td><td> اقتناء فترة الوصول (ساعة) </td><td> التلقيح فترة الوصول (ساعة) </td><td> المرجع. </td></tr><tr><td> غير المستديم </td><td> 1 </tد&gt; <td> 2-24 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Semipersistent </td><td> 6-24 </td><td> 8-24 </td><td> 10، 16 </td></tr><tr><td> مستمر </td><td> 48-72 </td><td> 48-72 </td><td> 3، 6، 8، 9 </td></tr></tbody></table> والجدول 1. مرات المقدرة التي يمكن استخدامها لإنتاج معدلات عالية من انتقال الفيروسات مع أنواع مختلفة من العلاقات مع ناقلات الأنواع الذبابة البيضاء Bemisia المعقدة. مرات المقدرة على أساس أضعاف الحد الأدنى المطلوب للنشر انتقال 80-100٪ وتعديلها في بعض الحالات لحساب فترات كامنة والخلافات بين السكان الذبابة البيضاء، فيروس، والنباتات المضيفة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig1.jpg" /> الشكل 1. مثال على ناقل الفيروس الذبابة البيضاء مستعمرة. هذه الغرفة تحتوي على أقفاص نمو النباتات المصابة مع begomovirus وinfeSTED مع الذباب الأبيض ناقل الفيروس. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig2.jpg" /> الشكل 2. اليسار: Immatures مراحل الذبابة البيضاء، الذبابة البيضاء Bemisia MEAM كليد الضيق دي بارو 6 حوالي 1 أسبوع بعد ظهور الحق و: الكبار الذبابة البيضاء، متجه فعالة من العديد من الفيروسات النباتية. <img alt="الشكل (3)" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3.jpg" /> الشكل (3). أنواع أجهزة جمع التي يمكن استخدامها لجمع الذباب الأبيض لانتقال الفيروس النبات. <img alt="الشكل 4" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig4.jpg" /> الشكل 4. اليسار: بطاقة بلاستيكية صفراء المستخدمة في جمع البالغين الذبابة البيضاء تظهر الذباب الأبيض على استعداد لجمع<html> . اليمين: جمع الذباب الأبيض من بطاقة بلاستيكية صفراء. ويمكن رؤية الذباب الأبيض على بطاقة على شكل بقع بيضاء / رمادية صغيرة. <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig5.jpg" /> الشكل 5. الذباب الأبيض التي تم جمعها بواسطة الشفط (20 في قارورة) من مستعمرة جاهزة للتلقيح إما اكتساب أو. <img alt="الشكل (6)" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6.jpg" /> الشكل (6). الجزء العلوي جهة اليسار: أقفاص مصنع واحد يستخدم إما لاقتناء أو التلقيح اليمنى العليا: أقفاص أكبر قدم من الأنابيب البلاستيكية والأورجانزا. انخفاض الومنيوم / الشاشة وأقفاص الأورجانزا في النباتات التي تحتوي الدفيئة المخصصة للمستعمرة الذبابة البيضاء. 32fig7.jpg &quot;/&gt; الرقم 7. الذباب الأبيض نقله إلى مصنع واحد لتلقيح (أو الاستحواذ). <img alt="الرقم 8" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig8.jpg" /> الرقم 8. إضافة النظامية الحشرات جرعة لإنهاء فترة التلقيح وصول الذبابة البيضاء. <img alt="الرقم 9" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig9.jpg" /> الشكل 9. تم تلقيح النباتات الميدان تحت التقييم لمقاومة الطماطم الصفراء فيروس تجعد أوراق. جميع النباتات والشتلات من العمر 5 أسبوع ومن ثم زرعها في حقل للتقييم. النباتات في المقدمة هي خط الأصول الوراثية المقاومة، والنباتات في الخلفية هي خط الوراثية عرضة للإصابة.

Watch this Scientific Journal Video about Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies at JoVE.com

Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies

تحسين فهمنا للوقدرتنا على إدارة العديد من الفيروسات النباتية التي تنقلها الحشرات يتطلب استخدام ناقلات. انتقال الحشرة من الفيروسات النباتية هو التفاعل tritrophic، وعلى هذا النحو يتطلب التلاعب من الحشرات والفيروسات والنبات. يجب أن تربى ناقلات بأعداد كبيرة والتلاعب في مثل هذه الطريقة لضمان ارتفاع معدلات انتقال العدوى إلى محطات الاختبار. أساسيات تربية والتلاعب الذبابة البيضاء،<em&gt; Bemisa الذبابة البيضاء</em&gt; (<em&gt; نصفيات الجناح: Aleyrodidae</em&gt;)، ويرد متجه من الفيروسات النباتية ينتمون إلى عدة أجناس فيروس الناشئة النبات، وهو ما يمثل عدد كبير من الفيروسات الهامة اقتصاديا.

يحيل الفيروسات النباتية عن طريق الذباب الأبيض

Whiteflies, Hemiptera: Aleyrodidae, Bemisia tabaci, a complex of morphologically indistinquishable species5, are vectors of many plant viruses. Several ...

transmitting-plant-viruses-using-whiteflies

Research

JoVE Journal

Biology

28.6K Views.  University of Florida. تحسين فهمنا للوقدرتنا على إدارة العديد من الفيروسات النباتية التي تنقلها الحشرات يتطلب استخدام ناقلات. انتقال الحشرة من الفيروسات النباتية هو التفاعل tritrophic، وعلى هذا النحو يتطلب التلاعب من الحشرات والفيروسات والنبات. يجب أن تربى ناقلات بأعداد كبيرة والتلاعب ?...

Video: Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When an uninfected aphid feeds on an infected plant it contracts the virus through the plant phloem. Once ingested, the virus must pass from the insect gut to the hemolymph (the insect  blood ) and then must pass through the salivary gland, in order to be transmitted back to a new plant. An aphid may take up different viruses when munching on a plant, however only a small fraction will pass through the gut and salivary gland, the two main barriers for transmission to infect more plants. In the lab, we use physalis plants to study PLRV transmission. In this host, symptoms are characterized by stunting and interveinal chlorosis (yellowing of the leaves between the veins with the veins remaining green). The video that we present demonstrates a method for performing aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut is preventing viral transmission.
The video that we present demonstrates a method for performing Aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut or salivary gland is preventing viral transmission.

Aphids are effective transmitters of plant viruses. Aphid microinjection of virus, the procedure we will show you today, is a technique allowing researchers to inject virus directly into the hemocoel of the aphid, bypassing the gut, one of the 2 major barriers for virus transmission in a circulative manner. The same technique is also used to inject dsRNA for RNAi.

اختبار الحواجز الفسيولوجية لانتقال الفيروس عن طريق Microinjection في المن

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When ...

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well know to have insecticidal properties. One response of tobacco plants to herbivory, or being gnawed upon by insects, is to increase the production of this neurotoxic alkaloid. Here, we will demonstrate how to set up an experiment to address this question of whether a tobacco-adapted strain of the green peach aphid, Myzus persicae, can tolerate higher levels of nicotine than the a strain of this insect that does not infest tobacco in the field.

In this video and assay is demonstrated that tests the tolerance of nicotine to two types of aphids one that infests tobacco plants in the field and one that does not.

اختبار تسامح النيكوتين في المن باستخدام تجربة حمية الاصطناعي

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well ...

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA regulators: microRNAs, which are produced from non-protein coding genes and short interfering RNAs (siRNAs). Plants use RNAi to control transposons and to exert tight control over developmental processes such as flower organ formation and leaf development2,3,4. Plants also use RNAi to defend themselves against infection by viruses. Consequently, many viruses have evolved suppressors of gene silencing to allow their successful colonization of their host5.
Virus-induced gene silencing (VIGS) is a method that takes advantage of the plant RNAi-mediated antiviral defense mechanism. In plants infected with unmodified viruses the mechanism is specifically targeted against the viral genome. However, with virus vectors carrying sequences derived from host genes, the process can be additionally targeted against the corresponding host mRNAs. VIGS has been adapted for high-throughput functional genomics in plants by using the plant pathogen Agrobacterium tumefaciens to deliver, via its Ti plasmid, a recombinant virus carrying the entire or part of the gene sequence targeted for silencing. Systemic virus spread and the endogenous plant RNAi machinery take care of the rest. dsRNAs corresponding to the target gene are produced and then cleaved by the ribonuclease Dicer into siRNAs of 21 to 24 nucleotides in length. These siRNAs ultimately guide the RNA-induced silencing complex (RISC) to degrade the target transcript2.
Different vectors have been employed in VIGS and one of the most frequently used is based on tobacco rattle virus (TRV). TRV is a bipartite virus and, as such, two different A. tumefaciens strains are used for VIGS. One carries pTRV1, which encodes the replication and movement viral functions while the other, pTRV2, harbors the coat protein and the sequence used for VIGS6,7. Inoculation of Nicotiana benthamiana and tomato seedlings with a mixture of both strains results in gene silencing. Silencing of the endogenous phytoene desaturase (PDS) gene, which causes photobleaching, is used as a control for VIGS efficiency. It should be noted, however, that silencing in tomato is usually less efficient than in N. benthamiana. RNA transcript abundance of the gene of interest should always be measured to ensure that the target gene has efficiently been down-regulated. Nevertheless, heterologous gene sequences from N. benthamiana can be used to silence their respective orthologs in tomato and vice versa8.

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

Description of a virus-induced gene silencing (VIGS) method for knock-down of gene expression in Nicotiana benthamiana and tomato.

فيروس من صنع جين إسكات (VIGS) في نيكوتيانا benthamiana والطماطم

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Fruit Volatile Analysis Using an Electronic Nose

Numerous and diverse physiological changes occur during fruit ripening, including the development of a specific volatile blend that characterizes fruit aroma. Maturity at harvest is one of the key factors influencing the flavor quality of fruits and vegetables1. The validation of robust methods that rapidly assess fruit maturity and aroma quality would allow improved management of advanced breeding programs, production practices and postharvest handling. 
Over the last three decades, much research has been conducted to develop so-called electronic noses, which are devices able to rapidly detect odors and flavors2-4. Currently there are several commercially available electronic noses able to perform volatile analysis, based on different technologies. The electronic nose used in our work (zNose, EST, Newbury Park, CA, USA), consists of ultra-fast gas chromatography coupled with a surface acoustic wave sensor (UFGC-SAW). This technology has already been tested for its ability to monitor quality of various commodities, including detection of deterioration in apple5; ripeness and rot evaluation in mango6; aroma profiling of thymus species7; C6 volatile compounds in grape berries8; characterization of vegetable oil9 and detection of adulterants in virgin coconut oil10. 
This system can perform the three major steps of aroma analysis: headspace sampling, separation of volatile compounds, and detection. In about one minute, the output, a chromatogram, is produced and, after a purging cycle, the instrument is ready for further analysis. The results obtained with the zNose can be compared to those of other gas-chromatographic systems by calculation of Kovats Indices (KI). Once the instrument has been tuned with an alkane standard solution, the retention times are automatically converted into KIs. However, slight changes in temperature and flow rate are expected to occur over time, causing retention times to drift. Also, depending on the polarity of the column stationary phase, the reproducibility of KI calculations can vary by several index units11. A series of programs and graphical interfaces were therefore developed to compare calculated KIs among samples in a semi-automated fashion. These programs reduce the time required for chromatogram analysis of large data sets and minimize the potential for misinterpretation of the data when chromatograms are not perfectly aligned.
We present a method for rapid volatile compound analysis in fruit. Sample preparation, data acquisition and handling procedures are also discussed.

A rapid method for volatile compound analysis in fruit is described. The volatile compounds present in the headspace of a homogenate of the sample are rapidly separated and detected with ultra-fast gas chromatography (GC) coupled with a surface acoustic wave (SAW) sensor. A procedure for data handling and analysis is also discussed.

تحليل الفاكهة المتطايرة باستخدام الأنف الالكتروني

Numerous and diverse physiological changes occur during fruit ripening, including the development of a specific volatile blend that characterizes fruit ...

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers using Microarrays

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the raw materials for human societies (e.g. wood, paper, textile and biofuel industries)1,2. However, understanding the biosynthesis and function of these components remains challenging.
Cell wall glycans are chemically and conformationally diverse due to the complexity of their building blocks, the glycosyl residues. These form linkages at multiple positions and differ in ring structure, isomeric or anomeric configuration, and in addition, are substituted with an array of non-sugar residues. Glycan composition varies in different cell and/or tissue types or even sub-domains of a single cell wall3. Furthermore, their composition is also modified during development1, or in response to environmental cues4.
In excess of 2,000 genes have Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans been predicted to be involved in cell wall glycan biosynthesis and modification in Arabidopsis5. However, relatively few of the biosynthetic genes have been functionally characterized 4,5. Reverse genetics approaches are difficult because the genes are often differentially expressed, often at low levels, between cell types6. Also, mutant studies are often hindered by gene redundancy or compensatory mechanisms to ensure appropriate cell wall function is maintained7. Thus novel approaches are needed to rapidly characterise the diverse range of glycan structures and to facilitate functional genomics approaches to understanding cell wall biosynthesis and modification.
Monoclonal antibodies (mAbs)8,9 have emerged as an important tool for determining glycan structure and distribution in plants. These recognise distinct epitopes present within major classes of plant cell wall glycans, including pectins, xyloglucans, xylans, mannans, glucans and arabinogalactans. Recently their use has been extended to large-scale screening experiments to determine the relative abundance of glycans in a broad range of plant and tissue types simultaneously9,10,11.
Here we present a microarray-based glycan screening method called Comprehensive Microarray Polymer Profiling (CoMPP) (Figures 1 &amp; 2)10,11 that enables multiple samples (100 sec) to be screened using a miniaturised microarray platform with reduced reagent and sample volumes. The spot signals on the microarray can be formally quantified to give semi-quantitative data about glycan epitope occurrence. This approach is well suited to tracking glycan changes in complex biological systems12 and providing a global overview of cell wall composition particularly when prior knowledge of this is unavailable.

A technique called Comprehensive Microarray Polymer Profiling (CoMPP) for the characterisation of plant cell wall glycans is described. This method combines the specificity of monoclonal antibodies directed to defined glycan-epitopes with a miniature microarray analytical platform allowing screening of glycan occurrence in a broad range of biological contexts.

غليكان التنميط من البوليمرات جدار الخلية النباتية باستخدام [ميكروأرس]

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the ...

High-throughput Titration of Luciferase-expressing Recombinant Viruses

Standard plaque assays to determine infectious viral titers can be time consuming, are not amenable to a high volume of samples, and cannot be done with viruses that do not form plaques. As an alternative to plaque assays, we have developed a high-throughput titration method that allows for the simultaneous titration of a high volume of samples in a single day. This approach involves infection of the samples with a Firefly luciferase tagged virus, transfer of the infected samples onto an appropriate permissive cell line, subsequent addition of luciferin, reading of plates in order to obtain luminescence readings, and finally the conversion from luminescence to viral titers. The assessment of cytotoxicity using a metabolic viability dye can be easily incorporated in the workflow in parallel and provide valuable information in the context of a drug screen. This technique provides a reliable, high-throughput method to determine viral titers as an alternative to a standard plaque assay.

This article presents a high-throughput luciferase expression-based method of titrating various RNA and DNA viruses using automated and manual liquid handlers.

عالية الإنتاجية المعايرة من luciferase المراسل، معربا عن الفيروسات المؤتلف

Standard plaque assays to determine infectious viral titers can be time consuming, are not amenable to a high volume of samples, and cannot be done with ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, several traits are typically characterized using molecular assays to aid in epidemiological studies. These traits include species identification, insecticide resistance, parasite infection status, and host preference. Since populations of the Anopheles gambiae complex are morphologically indistinguishable, a polymerase chain reaction (PCR) is traditionally used to identify species. Once the species is known, several downstream assays are routinely performed to elucidate further characteristics. For instance, mutations known as KDR in a para gene confer resistance against DDT and pyrethroid insecticides. Additionally, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) or Plasmodium parasite DNA detection PCR assays are used to detect parasites present in mosquito tissues. Lastly, a combination of PCR and restriction enzyme digests can be used to elucidate host preference (e.g., human vs. animal blood) by screening the mosquito bloodmeal for host-specific DNA. We have developed a multi-detection assay (MDA) that combines all of the aforementioned assays into a single multiplex reaction genotyping 33SNPs for 96 or 384 samples at a time. Because the MDA includes multiple markers for species, Plasmodium detection, and host blood identification, the likelihood of generating false positives or negatives is greatly reduced from previous assays that include only one marker per trait. This robust and simple assay can detect these key mosquito traits cost-effectively and in a fraction of the time of existing assays.

Malaria transmitting mosquitoes have a number of epidemiologically important characteristics that can only be detected using molecular techniques. Utilizing a MALDI-TOF based SNP genotyping platform, we developed an assay for simultaneously detecting multiple key traits (species, insecticide resistance, parasite infection and host choice) of malaria vectors.

مقايسة متعدد الكشف عن الملاريا بث البعوض

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for functional genomics studies. While most cloning strategies are simple to perform, they generally use multiple steps and can require several days to generate the ultimate constructs. The method presented here is based on DNA assembly and can produce fully functional CRISPR vectors in a single cloning reaction. Vector construction can also be pooled, further increasing the efficiency and utility of the process. A modification of the method is used to create CRISPR vectors with multiple gene targets. CRISPR vectors are then transformed into tomato hairy roots to generate transgenic materials with targeted DNA modifications. Hairy roots are a useful system for testing vector functionality as they are technically simple to generate and amenable to large-scale production. The methods presented here will have wide application as they can be used to generate a variety of CRISPR vectors and be used in a wide range of plant species.

Using DNA assembly, multiple CRISPR vectors can be constructed in parallel in a single cloning reaction, making the construction of large numbers of CRISPR vectors a simple task. Tomato hairy roots are an excellent model system to validate CRISPR vectors and generate mutant materials.

الإنتاجية العالية كريسبر ناقل البناء وتوصيف التعديلات الحمض النووي عن طريق توليد جذور الطماطم مشعر

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for ...

Forward Genetic Screen Using Transgenic Calcium Reporter Aequorin to Identify Novel Targets in Calcium Signaling

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis of the screen is to generate a mutant population that can be screened with a phenotype of interest. EMS (ethyl methane sulfonate) is a commonly used alkylating agent for inducing random mutation in a classical forward genetic screen to identify multiple genes involved in any given process. Cytosolic calcium (Ca2+) elevation is a key early signaling pathway that is activated upon stress perception. However the identity of receptors, channels, pumps and transporters of Ca2+ is still elusive in many study systems. Aequorin is a cellular calcium reporter protein isolated from Aequorea victoria and stably expressed in Arabidopsis. Exploiting this, we designed a forward genetic screen in which we EMS-mutagenized the aequorin transgenic. The seeds from the mutant plants were collected (M1) and screening for the phenotype of interest was carried out in the segregating (M2) population. Using a 96-well high-throughput Ca2+ measurement protocol, several novel mutants can be identified that have a varying calcium response and are measured in real time. The mutants with the phenotype of interest are rescued and propagated till a homozygous mutant plant population is obtained. This protocol provides a method for forward genetic screens in Ca2+ reporter background and identify novel Ca2+ regulated targets.

A forward genetic screen based on Ca2+ elevation as a read-out leads to identification of genetic components involved in calcium dependent signaling pathways in plants.

إلى الأمام الشاشة الجينية باستخدام المعدلة وراثيا مراسل الكالسيوم أيكورين لتحديد أهداف جديدة في إشارات الكالسيوم

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis ...

High-Throughput Analysis of Non-Photochemical Quenching in Crops Using Pulse Amplitude Modulated Chlorophyll Fluorometry

Photosynthesis is not optimized in modern crop varieties, and therefore provides an opportunity for improvement. Speeding up the relaxation of non-photochemical quenching (NPQ) has proven to be an effective strategy to increase photosynthetic performance. However, the potential to breed for improved NPQ and a complete understanding of the genetic basis of NPQ relaxation is lacking due to limitations of oversampling and data collection from field-grown crop plants. Building on previous reports, we present a high-throughput assay for analysis of NPQ relaxation rates in Glycine max (soybean) using pulse amplitude modulated (PAM) chlorophyll fluorometry. Leaf disks are sampled from field-grown soybeans before transportation to a laboratory where NPQ relaxation is measured in a closed PAM-fluorometer. NPQ relaxation parameters are calculated by fitting a bi-exponential function to the measured NPQ values following a transition from high to low light. Using this method, it is possible to test hundreds of genotypes within a day. The procedure has the potential to screen mutant and diversity panels for variation in NPQ relaxation, and can therefore be applied to both fundamental and applied research questions.

The protocol introduces a high-throughput method for measuring the relaxation of non-photochemical quenching by pulse amplitude modulated chlorophyll fluorometry. The method is applied to field-grown Glycine max and can be adapted to other species to screen for genetic diversity or breeding populations.