1. 가루이 콜로니 유지 보수 <ol><li> 환경 조건 : 가루이의 식민지가 통제 성장 방에서 유지되어야한다. 상대 습도, ​​온도, 광주, 빛의 강도 조절 최적의 식민지의 성장 (그림 1)를 위해 필수적입니다. 28의 온도는 ° C, 30 % ~ 50 % 상대 습도, 그리고 14 시간 광주 계란 18 일 성인 출현 (이번에는 식물의 호스트에 따라 다름)을 개발 식민지를 얻을 것입니다. 상대 습도는 곤충과 식물 곰팡이 병원균의 성장을 억제하기 위해 70 % 이하로 유지해야한다. 비료 요금과 급수 곰팡이 병원균과 소금 축적을 억제하기 위해 감소되어야합니다. 식민지의 빛의 강도가 매우 높아야한다. 캐노피 높이에서 약 800-1,000 피트 촛불을 생성하기에 충분한 숫자에 사용 VHO 형광 전구는 대부분의 식물에 적합합니다 (예.면, 일반적인 콩, 리마 콩, 토마토). 청결에 필수적입니다가루이 식민지 최적의 양육 상태를 유지합니다. </li><li> 식민지 케이지 : 가루이가 오히려 성장 방에있는 자유로운보다 새장에 식물에서 유지되어야한다. 케이지는 다양한 재료로 제작 될 수 있지만 수 있도록해야합니다 : 환기 접근의 용이성, 필요한 가루이 인구를 생성하는 충분한 식물을 유지하기 위해 가루이 탈출이나 침투, 충분한 크기를 방지하는 기능. 좋은 결과는 organza는 플러스 알루미늄 심사 (강도)뿐만 아니라 가루이 방지 검사 (특정 장비와 공급 표 참조)를 얻을 수있다. </li><li> 식민지 공장 준비 : 가루이 식민지를 시작할 때 선택한 식물의 종은 중요한 고려 사항이다. 공장은 붕괴하지 않고 높은 곤충 인구를 지원할 수 있어야한다. nonviruliferous 식민지에 대한 선택 공장 viruli을 유지하는 바이러스 나 식민지의 오염을 방지하기 위해 전송 될 것입니다 바이러스에 대한 그리고 만약 nonhost해야한다ferous 식민지, 그것은 바이러스의 호스트해야합니다. 식물은 식민지에 도입되고 18 일 이내에 새로운 성인의 출현을 지원하기 위해 상당히 빨리 성장해야하지만 너무 빨리보다 4 주 이내에 새장을 자라다 수 있습니다. 그들은 종종 크고 품종과 유사한 잎 영역을 생성하지만, 줄기 신장 않고 같은 난쟁이, 부시, 또는 테라스 형 식물 품종을 권장합니다. </li><li> 그것은 가루이 및 다른 곤충을 제외 새장에있는 온실에있는 식민지를위한 후면 식물에 매우 중요합니다. 그들은 식민지 식민지 붕괴가 발생할 수 있습니다 들어가기 전에 가루이, 총채 벌레, 또는 진드기에 감염되어 식물의 사용. 감염 식물은 바이러스 전송의 연구를 방해 곤충을 매개로 바이러스에 감염 될 가능성이있다. </li></ol> 2. 가루이 콜로니 설립 <ol><li> 깨끗한 가루이를 사용하여 처음으로 식민지를 시작 - 식물 바이러스, 기타 곤충 및 곤충 병원균의 무료 것입니다. 이를 얻을 수 있습니다공동 작업자 또는 필드. 필드가 수집 된 경우, 가루이은 식물 바이러스의 nonhost 식물에 최소한 8 주 동안 사육, 그들은 식물 바이러스 무료입니다 확인하기 위해 공장 증상의 유무를 확인해야한다. </li><li> 주 1 : 식물의 첫 번째 케이지 청소 가루이을 소개합니다. 가루이는 알려진 숫자의 흡인하거나 조심스럽게 식민지에 대한 요구에 따라 다른 소스 공장에서 가루이을 흔들어 도입 할 수 있습니다. 1 주 동안, 가루이 식물 잎 표면의 아래쪽에 알을 낳고 있습니다. 대략 인구의 크기가 계란과 해당 호스트 공장에 여성 가루이가 낳은 알의 평균 수를 배치하는 데 사용되는 성인의 수에 따라 각 출현 예상 할 수 있습니다. </li><li> 주 2 : 알을 낳기 위해 새로운 기주 식물로 가루이을 도입하여 다른 케이지를 시작합니다. 1 주에 시작 케이지 식물은 계란, 그리고 잎의 밑바닥 (그림 2)를 포함하는 몇 가지 미숙 가루이을해야합니다. 다소1 주 동안 소개 된 성인 가루이가 아직 살아있을 것입니다. </li><li> 주 3 : 알을 낳기 위해 새로운 식물 가루이을 도입하여 제 케이지를 시작합니다. 1 주에 시작 케이지 식물은 성숙뿐만 아니라 신흥 많은 새로운 성인 가루이가되고 성인 가루이 인구의 매우 눈에 띄는 증가가 있어야한다. 2 주에 시작 케이지 식물은 많은 계란과 잎의 밑바닥을 포함 미숙 가루이을해야합니다. </li><li> 주 4 : 알을 낳기 위해 새로운 식물 가루이을 도입하여 네 번째 케이지를 시작합니다. 1 주에 시작 케이지 식물은 약 ​​일주일 후 출현 많은 성인 가루이을해야합니다. 2 주에 시작 케이지 식물은 새로운 많은 새로운 성인 가루이을하고 가루이 인구에서 매우 눈에 띄는 증가가 있어야한다. 3 주 동안 시작 케이지 식물 잎의 밑바닥을 다루는 많은 계란과 미숙 가루이을해야합니다. </li><li> 처음 4 연소 후 주간KS : 각 주, 새로운, 깨끗한 새장에 새 공장에 제 오래된 케이지 (케이지는 1 주에 시작)에서 성인 가루이을 도입하여 새로운 케이지를 시작합니다. 이전 케이지를 제거하고 그 식물은 폐기해야합니다. 이 가루이은 약 일주 포스트 출현이다. viruliferous 식민지의 경우, 이러한 가루이는 새로운 식물뿐만 아니라 가루이의 다음 세대를 위해 알을 낳기 위해 바이러스를 전송합니다. </li><li> 계획 전송 실험은 세 번째 주의 새장에 등장 할 가루이을 사용합니다. 더 가루이이 필요한 경우, 식물의 숫자가 증가 할 수 있으며, 더 많은 가루이가 가루이 인구 증가 1 주 케이지에 추가 할 수 있습니다. </li></ol> 3. 시험 식물의 접종 방법 <ol><li> 높은 전송 속도를 보장하기 위해 : 1) 가루이가 전송 속도를 줄일 곤충 손상을 방지하기 위해 조심스럽게 최대한 처리해야합니다; 2) EIT하는 가루이 가능한 충분한 엽면적이 있어야합니다그녀의 프로브 사료. 수집 시간 또는 취득 기주 식물의 수가 증가 증가는 취득 또는 접종 액세스 기간 하나에서 크롤 링에 의한 시험 공장에서 감염의 낮은 비율을 증가시킬 수 있습니다. </li><li> 가루이의 수집. 다음은 실험 목적에 필요한 가루이의 정확한 숫자의 수집 및 이동을위한 절차입니다. 가루이의 큰 숫자를 이동하는 등의 예를 들면 저항 검사에 필요한, ​​그것은 부드럽게 테스트 식물이나 바이러스에 감염된 수집 호스트 (나중에 시험 설비)을 통해 가루이이 사는 식물을 흔들에만 필요합니다. 집계 영향을 최소화하기 위해 여러 위치에 식물을 흔들해야합니다. </li><li> 새로 성인 가루이가 (1-3 일 포스트 출현) 매우 활성화되어 종종 그렇게 높은 전송 속도는 4 줄 경향이 공급 나타났다. 이전 가루이은 여전히​​ 전송하지만 낮은 주파수에서. 시험 공장 당 여러 가루이 (PLA 당 15-40NT가) 공장 당 가루이 1의 비율로부터 전송의 높은 비율을 위해 사용되어야한다는 종종 지나치게 낮은 전송 속도 3,4의 결과. 번호를 수집하고 테스트 식물의 바이러스 종에 의존했습니다. </li><li> 흡인 장치 및 수집 튜브를 조립합니다. (그림 3) </li><li> 한 손으로, 가루이를 수집를 포함하는 식민지 케이지 안에 노란색 플라스틱 카드를 잡습니다. 부드럽게 성인 가루이 비행하도록 유도하는 식물을 누릅니다. 가루이가 노란색 카드에 매료되고 공장에서 흡인기와 매우 부드러운 숨을 사용하여 그들이 수집 할 수있는 카드로 비행합니다. 식물에 먹이 가루이을 대기음하지 마십시오. 먹이 때문에 식물이 자신의 stylets을 깰 것입니다 그들을 당기고하거나 취득하거나 (그림 4) 바이러스를 전송하기가없는 렌더링하면서 stylets은 식물에 포함됩니다. </li><li> 하나의 콜레으로 20 성인 가루이를 수집반복 포부 (그림 5)에서 곤충에 물리적 손상을 최소화하기 위해 ction의 유리 병. </li><li> 가루이가 누르는 방향을 잃게하는 동안 수집 병을 변경하려면, 부드럽게 파라 필름과 하드 표면과 뚜껑에 유리 병을 누릅니다. </li><li> 흡입기에 새 수집 병을 넣어 필요한 가루이의 숫자가 수집 될 때까지 반복합니다. 가루이가 몇 시간 동안 실온에서 수집 병에 남아있을 수 있습니다. </li><li> 취득. 가루이가 바이러스에 감염된 식물에 배치하고 48 ~ 72 시간 동안 감염된 식물을 먹이로 할 수 있습니다. 72 시간 이상 취득 기간은 일반적으로 전송 속도를 증가하지 않습니다. 각각 비 영구 또는 semipersistent 방식으로, 1 시간 몇 시간에 전송하는 바이러스에 대한 충분한 인수 액세스 기간 (표 1)입니다. 가루이가 단일 공장으로하거나 곤충을 제한 새장 식물에 무료로 액세스 권한을 부여 할 때 최상의 결과를 얻을 수 있습니다여러 식물. 그러나 몇 가지 실험 사례 클립 케이지를 사용할 수있는 특정 잎에서 인수가 필요합니다. 클립 새장을 사용할 때 잎의 밑바닥에 대한 가루이 공급 환경을 수용하는 것이 중요합니다. 또한, 클립 케이지에 가루이의 군집은 전송 속도를 줄일 수 있습니다 - 전송의 허용 속도는 2.5 cm 직경의 클립 케이지 당 10 여성 가루이을 사용하여 달성되었습니다. </li><li> 접종. 접종의 크기에 적합한 케이지를 준비하고 내부 테스트 식물을 배치. 하나의 공장 접종해야하는 경우 단일 식물 케이지를 고려하십시오. 하나 이상의 공장은 작은 PVC 프레임 / organza는 자루 케이지 또는 알루미늄 케이지 (그림 6)을 고려해 접종해야하는 경우. 예방 접종에 사용되는 케이지의 크기는 접종 할 공장 (들)의 크기를 약간 크게해야한다. 가루이 있으며 식물의 캐노피에 보관하고 공간을 많이 제공하지 않을 때 더 높은 전송 속도를 얻을 수 있습니다. </li><li> 수집 호스트에서 가루이의 컬렉션은 실험의 필요에 따라 달라집니다. 작은 숫자가 필요한 경우, 위에서 설명한대로 가루이를 대기음. 식물 근처의 케이지 안에 가루이의 수집 튜브를 넣고 뚜껑 (그림 7)를 제거합니다. 병을 열고 가루이을 해제하거나 반전 부드럽게 가루이을 해제 병을 누릅니다. 큰 숫자가 필요한 경우 단순히 시험 공장이있는 케이지에 가루이으로 수집 식물을 이동하고 부드럽게 수집 기주 식물 떨어져 가루이를 흔들. 소개의 두 유형의 집계를 최소화하고 균일 접종을 보장하기 위해 식물을 통해 가루이를 배포해야합니다. </li><li> 가루이가 기주 식물 (표 1)을 조사하거나, 시간의 적절한 금액에 대한 피드 바이러스에 다시 의존하고 어느 정도 할 수 있습니다. </li><li> 그 가루이은 보장하기 접종 액세스 기간 동안 적어도 한 번 가루이를 확인케이지를 열고 각 공장에 일부 나뭇잎을 통해 돌려 프로빙 또는 먹이. </li><li> 더 이상 접종 액세스 기간 동안, 식물의 정상을 솔질하고 식물에 재배포 할 가루이을 장려하기 위해 (대나무 막대기 또는 이와 동등한 사용) 가볍게 식물을 방해. 가루이 재배포 집계 가루이의 자연적인 경향에 대응하여 높은 전송 속도를 보장합니다. </li><li> 종료는. 접종 액세스 기간은 승인 된 화학 물질 가루이을 죽이는 종료됩니다. 연락처 살충제 신속하게 다음 주와 접촉 살충제 (그림 8)에 의해 놓친 사람들에서 발전하는 가루이을 종료하는 성인 가루이 및 조직 살충제를 종료하는 두 가지 살충제 다른 후 하나를 적용합니다. 이러한 살충 비누와 같은 이미다클로 프리드 또는 pymetrozine 같은 조직 살충제로 접촉 살충제는 좋은 성공과 함께 사용되었다. </li></ol>

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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

여기에 설명 된 방법은 수십 년에 걸쳐 개발되었고, 가루이 전송, 동작 및 생물학의 많은 연구에 의해 제공되는 기본 정보를 기반으로합니다. 많은 출판물이 있기 때문에,이 원고는이 기술을 개발하는 데 사용되는 데이터의 유형을 설명하기 리뷰와 몇 가지 선택된 특정 출판물을 주로 의미한다. 그것은 가루이가 다리와 안테나의 파괴 때문에 가볍게 처리하는이 절차에서 매우 중요한 것은 비정상적인 행동 및 전송의 낮은 속도로 이어질 수 있습니다. 진공 및 다른 기계 흡입 장치와 컬렉션 좋은 결과를 생산하지 않았다. 성공을위한 또 다른 고려 사항은 시험 공장을 100 % 전송을 얻기 위해 사용 가루이의 수, 식물 호스트 및 바이러스의 각 조합에 대해 결정해야한다는 것입니다. 이 최적의 비율은 한 번만 설정해야합니다. 그들은 G 이후 최상의 결과 젊은 성인 가루이을 (1~3일 지난 출현)를 사용하여 얻어졌다전송의 높은 비율을 살아야. 노인은 사용할 수 있지만 가루이의 큰 숫자는 전송의 자신의 할인 된 가격을 보상하기 위해 필요합니다. 여성은 그들이 더 자주 남성보다 먹이 때문에 남성보다 높은 속도로 전송하는 것으로 알려져있다. 그러나 그것은 전송 남녀를 구분하는 시간 가치가 일반적으로하지 않습니다. 이 절차는 연구원의 자원과 요구에 맞게 여러 가지 방법으로 수정할 수 있습니다. 여러 바이러스로 작업 할 경우에는 바이러스의 nonhost 식물에 길러 가루이의 단일 식민지를 유지하는 것이 가장 좋습니다. 이 가루이의 취득을위한 바이러스에 감염된 식물에 배치 수집 할 수 후 취득 후 가루이는 시험 공장으로 다시 이동할 수 있습니다. 식민지위한 식물은 다른 바이러스를 감염 될 가루이의 도입을 방지하기 위해 새장에있는 온실에서 재배되어야한다. 진드기, 총채 벌레, 기타 식물 해충이 식물의 감염은 시간이 손상 될 수 있습니다식민지의 ealth하고 붕괴의 원인이됩니다. 마지막으로 식민지 식물의 물은 신중하게해야합니다. 이 식물은 많은 가루이의 공급과보다 낮은 일반 조명 조건에 의해 극단적 인 스트레스 될 수 있습니다. 식물은 한 번도 overwatered하는 경우 흙을 믹스에 이탄에 도입 곰팡이 썩어 루트 문제가 될 수 있습니다. 살균제 물약과 식물의 전처리는 문제의 일부를 제거 할 수 있습니다. 식물 바이러스의 가루이 전송 시간이 소요될 수 있으며 귀중한 자원 (예 : 성장 실 등)이 필요할 수 있습니다 동안 우리가 전송하는 다른 방법이 없다하는 일부 바이러스의 전송을 위해 필수적이다. 이 필드에서 식물이 저항 할 것으로 예상됩니다 전송의 동일한 유형을 사용하기 때문에 그것은 또한 바이러스 저항성에 대한 심사 식물의 중요한 수단입니다. 전송보다 인공적인 수단의 사용은 항상 비루 대한 생식의 평가에서 좋은 결과를 얻을 수 없습니다의 저항.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the Item</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue No.</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly proof screening</td>
			<td>Klayman Meteor Ltd. Petah Tikva 49130, Israel</td>
			<td>---</td>
			<td>BioNet 50 mesh screen Antivirus Insect Screen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly proof screening</td>
			<td>Hummert International (www.hummert.com)</td>
			<td>27-4050-1 - 27-4062-1</td>
			<td>BioNet 50 mesh screen Antivirus Insect Screen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly Collection Devices</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>1135A</td>
			<td>Can also be made using eye droppers, flexible plastic tubing, plastic vacuum adaptors, and cheesecloth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection vials</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>8909</td>
			<td>Vials used depend on which aspirator is used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yellow plastic cards</td>
			<td>any company</td>
			<td>---</td>
			<td>Any bright yellow plastic card will work, can be purchased in many places.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly Cages</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>These are not commercially available and must be constructed. 60 cm x 60 cm x 60 cm cages work well for us. Our preference is for those constructed of aluminum window screening, nylon organdy, vinyl plastic, with a structure created using aluminum window frames. Doors are attached using piano hinges and sealed with weather stripping; tops of the cages are vinyl plastic. Cages can also be made of 1) plexiglass glued together on the edges with ventilation provided by screened openings cut on the side pieces; 2) large bags of nylon organdy, organza, or 50 mesh whitefly screening with internal supports provided by PVC pipes and fittings cut to desired lengths and assembled inside the bags, 3) wood frames and nylon organdy, organza, or 50 mesh whitefly screening.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transmitting plant viruses using whiteflies

가루이, 매미목 : Aleyrodidae, Bemisia tabaci, 형태 학적 indistinquishable 종 5 단지는 많은 식물 바이러스 벡터이다. 이 가루이 송신 된 식물 바이러스 (Begomovirus, Carlavirus, Crinivirus, Ipomovirus, Torradovirus)의 여러 장군 신흥 중요한 식품과 섬유 작물 (9,10,16 검토) 경제적으로 중요한 병원균의 수백 종 있습니다. 이 바이러스는 벡터에 복제되지 않지만 그럼에도 불구하고 다양한 방법 (2,6,7,9,10,11,17 검토)에 의해 성인 가루이에 의해 공장에서 공장으로 즉시 이동됩니다. 다른 사람을 위해 전용 프로브가 필요합니다 동안 가루이 공급이 바이러스의 대부분은, 수집 및 접종이 필요합니다. 이 바이러스의 대부분은 없거나 쉽게 다른 방법으로 전송할 수 없습니다. 바이러스 배양, 생물 및 분자 특성 (호스트 범위와 증상의 확인) 3,13의 따라서 유지 보수, 생태 2,12는 바이러스 가루이 벡터를 사용하여 실험 호스트에 전송해야합니다. 또한 이러한 새로운 화학 14 또는 화합물 15, 새로운 문화 접근 1,4,19, 또는 선택과 내성 품종 7,8,18 개발의 평가와 같은 관리에 새로운 접근법의 개발에 대한 가루이의 사용을 필요로 바이러스 전송. 선택과 육종 프로그램에 저항성 품종 개발을위한 식물 바이러스의 가루이 전송의 사용은 특히 7 도전합니다. 저항 효과적인 선택과 검진 식물의 많은 수의 직원을 고용하고 저항성 유전자를 가지고 몇 가지 유전자형을 찾기 위해 접종 할 식물의 100 % 필요가있다. 이러한 연구들은 viruliferous의 가루이, 연간 몇 차례의 매우 큰 숫자를 사용합니다. 가루이 유지 보수 여기에 설명 된 수백 또는 수천을 생성 할 수 있습니다다른 식물 바이러스의 오염이없는 식물 매주 연중에 성인 가루이. 가루이 및 바이러스 모두 무료 식물은 매주 가루이 식민지에 도입하기 위해 생산해야합니다. 가루이 문화는 가루이 병원균, 기생충 및 가루이 인구 및 / 줄이거 나 바이러스의 전송 효율을 감소시킬 수 기생을 무료로 보관해야합니다. 설명 방식으로 생산 된 식민지 신속하게 필요한 인구 숫자를 증감하거나 축소 할 수 있으며, 바이러스의 식물 호스트 가루이 기반의 먹이 환경을 수용하기 위해 조정할 수 있습니다. nonviruliferous 및 viruliferous 가루이 식민지 : 유지 될 수 가루이 식민지의 두 가지 기본 유형이 있습니다. nonviruliferous의 식민지 바이러스 무료 식물에서 사육 가루이의 구성과 다른 문화에서 바이러스를 전송하는 데 사용할 수있는 가루이의 주간 가용성을 할 수 있습니다. viruliferous 가루이 식민지,바이러스에 감염된 식물에서 사육 가루이의 구성, 따라서 바이러스 전송 프로세스의 한 단계를 생략 바이러스를 획득 한 가루이 매주 가용성 수 있습니다.

가루이 식민지 구축 및 유지 보수뿐만 아니라, 식물 바이러스를 전송하는 조작이 방법은 언급되지 연구 4,11,12,14뿐만 아니라 많은 사람들의 숫자에 성공적으로 사용되어왔다. 지속적으로 전송되는 바이러스로 이러한 방법을 사용하여, 우리는 정기적으로 전송을 방해 할 수있는 능력 (저항 유도 화합물의 평가) 13,14,17,18 (위해 살충제를 선별, 저항 선택에 100 %의 전송의 원하는 속도를 얻을 수있다 그림 9). 여기에 설명 된 절차는 공공 및 민간 연구 기관에서 여러 위치에 적용 할 수있다 할 수있다. <table border="1"><tbody><tr><td> 전송 유형 </td><td> 인수 액세스 기간 (시간) </td><td> 접종 액세스 기간 (시간) </td><td> 참조. </td></tr><tr><td> 비 지속 </td><td> 1 </tD&gt; <td> 2-24 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Semipersistent </td><td> 6-24 </td><td> 8-24 </td><td> 10, 16 </td></tr><tr><td> 영구 </td><td> 48-72 </td><td> 48-72 </td><td> 3, 6, 8, 9, </td></tr></tbody></table> 표 1. 자신의 벡터 Bemisia tabaci 종 복합. 예상 시간과 관계되는 다양한 종류의 바이러스 전송의 높은 비율을 생산하는 데 사용될 수있는 예상 시간은 80~100% 전송을 위해 필요하며 경우에 따라 수정 게시 된 최소 시간에 근거 잠재 기간과 가루이 개체군, 바이러스, 및 호스트 식물 사이의 차이를 설명합니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig1.jpg" /> 그림 1. viruliferous 가루이 식민지의 예.이 성장 객실 begomovirus 및 infe에 감염된 식물의 새장을 포함viruliferous의 가루이에 STED. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig2.jpg" /> 그림 2. 왼쪽 : 가루이, Bemisia tabaci MEAM 분류군 sensu 드 Barro의 6 대략 1 주일 포스트 출현과 오른쪽의 단계 Immatures : 가루이 성인, 많은 식물 바이러스의 효과적인 벡터입니다. <img alt="그림 3" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3.jpg" /> 그림 3. 식물 바이러스 전송을위한 가루이를 수집하는 데 사용할 수있는 수집 장치의 유형. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig4.jpg" /> 그림 4. 왼쪽 : 수집을위한 준비 가루이을 보여주는 가루이하는 성인, 어린이, 유아를 수집하는 데 사용되는 노란색 플라스틱 카드<html> . 오른쪽 : 노란색 플라스틱 카드에서 가루이 수집. 가루이가 작은 회색 / 흰색 반점으로 카드에 볼 수 있습니다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig5.jpg" /> 그림 5. 가루이가 인수 또는 접종도 준비 식민지에서 (병 20) 흡인에 의해 수집. <img alt="그림 6" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6.jpg" /> 그림 6. 왼쪽 상단 :. 인수 또는 접종 중 하나에 사용되는 단일 식물 케이지 상단 오른쪽 : PVC 관 및 organza 만든 큰 새장. 하단 : 알루미늄 / 화면 가루이 식민지를 대상으로 온실 함유 식물에서 오 건디 케이지. 32fig7.jpg &quot;/&gt; 그림 7. 가루이가 접종에 대한 단일 공장 (또는 취득)로 전송되고있다. <img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig8.jpg" /> 그림 8. 조직 살충제 물약의 추가는 가루이 접종 액세스 기간을 종료합니다. <img alt="그림 9" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig9.jpg" /> 그림 9. 토마토 노란 잎 말림 바이러스에 저항성에 대한 평가에 따라 필드 식물입니다. 모든 식물은 5 점 주 된 모종으로 접종 한 다음 평가를위한 필드로 이식되었다. 전경에 식물 저항 유전자 원 선이며, 백그라운드에서 식물 감수성 유전자 원 선이다.

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Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies

우리의 이해와 곤충 전송 된 식물 바이러스의 많은을 관리 할 수​​있는 우리의 능력을 향상하는 것은 벡터의 사용을 필요로합니다. 식물 바이러스의 곤충 전송 tritrophic 상호 작용과 같은 곤충, 바이러스, 그리고 식물의 조작이 필요합니다. 벡터는 많은 수의 사육 및 테스트 설비에 대한 전송의 높은 속도를 보장하는 등의 방법으로 조작해야합니다. 가루이를 양육하고 조작의 기초,<em&gt; Bemisa tabaci</em&gt; (<em&gt; 매미목 : Aleyrodidae</em&gt;), 경제적으로 중요한 바이러스의 큰 수를 나타내는 몇 가지 새로운 식물 바이러스 장군에 속하는 식물 바이러스의 벡터 표시됩니다.

가루이을 사용하여 전송하는 식물 바이러스

Whiteflies, Hemiptera: Aleyrodidae, Bemisia tabaci, a complex of morphologically indistinquishable species5, are vectors of many plant viruses. Several ...

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Research

JoVE Journal

Biology

28.7K 조회수.  University of Florida. 우리의 이해와 곤충 전송 된 식물 바이러스의 많은을 관리 할 수​​있는 우리의 능력을 향상하는 것은 벡터의 사용을 필요로합니다. 식물 바이러스의 곤충 전송 tritrophic 상호 작용과 같은 곤충, 바이러스, 그리고 식물의 조작이 필요합니다. 벡터는 많은 수의 사육 및 테스트 설비에 대한 전송의 높은 속도를 보장하는 등의 방법으로 조작해야합니다. 가루이를...

비디오: Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When an uninfected aphid feeds on an infected plant it contracts the virus through the plant phloem. Once ingested, the virus must pass from the insect gut to the hemolymph (the insect  blood ) and then must pass through the salivary gland, in order to be transmitted back to a new plant. An aphid may take up different viruses when munching on a plant, however only a small fraction will pass through the gut and salivary gland, the two main barriers for transmission to infect more plants. In the lab, we use physalis plants to study PLRV transmission. In this host, symptoms are characterized by stunting and interveinal chlorosis (yellowing of the leaves between the veins with the veins remaining green). The video that we present demonstrates a method for performing aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut is preventing viral transmission.
The video that we present demonstrates a method for performing Aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut or salivary gland is preventing viral transmission.

Aphids are effective transmitters of plant viruses. Aphid microinjection of virus, the procedure we will show you today, is a technique allowing researchers to inject virus directly into the hemocoel of the aphid, bypassing the gut, one of the 2 major barriers for virus transmission in a circulative manner. The same technique is also used to inject dsRNA for RNAi.

Microinjection을 사용 Aphids에 바이러스성 전송 생리 장벽을 테스트

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When ...

연구

생물학

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well know to have insecticidal properties. One response of tobacco plants to herbivory, or being gnawed upon by insects, is to increase the production of this neurotoxic alkaloid. Here, we will demonstrate how to set up an experiment to address this question of whether a tobacco-adapted strain of the green peach aphid, Myzus persicae, can tolerate higher levels of nicotine than the a strain of this insect that does not infest tobacco in the field.

In this video and assay is demonstrated that tests the tolerance of nicotine to two types of aphids one that infests tobacco plants in the field and one that does not.

인공 다이어트 실험을 사용하여 Aphids에 니코틴 공차 테스트

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well ...

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA regulators: microRNAs, which are produced from non-protein coding genes and short interfering RNAs (siRNAs). Plants use RNAi to control transposons and to exert tight control over developmental processes such as flower organ formation and leaf development2,3,4. Plants also use RNAi to defend themselves against infection by viruses. Consequently, many viruses have evolved suppressors of gene silencing to allow their successful colonization of their host5.
Virus-induced gene silencing (VIGS) is a method that takes advantage of the plant RNAi-mediated antiviral defense mechanism. In plants infected with unmodified viruses the mechanism is specifically targeted against the viral genome. However, with virus vectors carrying sequences derived from host genes, the process can be additionally targeted against the corresponding host mRNAs. VIGS has been adapted for high-throughput functional genomics in plants by using the plant pathogen Agrobacterium tumefaciens to deliver, via its Ti plasmid, a recombinant virus carrying the entire or part of the gene sequence targeted for silencing. Systemic virus spread and the endogenous plant RNAi machinery take care of the rest. dsRNAs corresponding to the target gene are produced and then cleaved by the ribonuclease Dicer into siRNAs of 21 to 24 nucleotides in length. These siRNAs ultimately guide the RNA-induced silencing complex (RISC) to degrade the target transcript2.
Different vectors have been employed in VIGS and one of the most frequently used is based on tobacco rattle virus (TRV). TRV is a bipartite virus and, as such, two different A. tumefaciens strains are used for VIGS. One carries pTRV1, which encodes the replication and movement viral functions while the other, pTRV2, harbors the coat protein and the sequence used for VIGS6,7. Inoculation of Nicotiana benthamiana and tomato seedlings with a mixture of both strains results in gene silencing. Silencing of the endogenous phytoene desaturase (PDS) gene, which causes photobleaching, is used as a control for VIGS efficiency. It should be noted, however, that silencing in tomato is usually less efficient than in N. benthamiana. RNA transcript abundance of the gene of interest should always be measured to ensure that the target gene has efficiently been down-regulated. Nevertheless, heterologous gene sequences from N. benthamiana can be used to silence their respective orthologs in tomato and vice versa8.

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

Description of a virus-induced gene silencing (VIGS) method for knock-down of gene expression in Nicotiana benthamiana and tomato.

바이러스 유도 진 입을 (VIGS)에 Nicotiana benthamiana 토마토

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers using Microarrays

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the raw materials for human societies (e.g. wood, paper, textile and biofuel industries)1,2. However, understanding the biosynthesis and function of these components remains challenging.
Cell wall glycans are chemically and conformationally diverse due to the complexity of their building blocks, the glycosyl residues. These form linkages at multiple positions and differ in ring structure, isomeric or anomeric configuration, and in addition, are substituted with an array of non-sugar residues. Glycan composition varies in different cell and/or tissue types or even sub-domains of a single cell wall3. Furthermore, their composition is also modified during development1, or in response to environmental cues4.
In excess of 2,000 genes have Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans been predicted to be involved in cell wall glycan biosynthesis and modification in Arabidopsis5. However, relatively few of the biosynthetic genes have been functionally characterized 4,5. Reverse genetics approaches are difficult because the genes are often differentially expressed, often at low levels, between cell types6. Also, mutant studies are often hindered by gene redundancy or compensatory mechanisms to ensure appropriate cell wall function is maintained7. Thus novel approaches are needed to rapidly characterise the diverse range of glycan structures and to facilitate functional genomics approaches to understanding cell wall biosynthesis and modification.
Monoclonal antibodies (mAbs)8,9 have emerged as an important tool for determining glycan structure and distribution in plants. These recognise distinct epitopes present within major classes of plant cell wall glycans, including pectins, xyloglucans, xylans, mannans, glucans and arabinogalactans. Recently their use has been extended to large-scale screening experiments to determine the relative abundance of glycans in a broad range of plant and tissue types simultaneously9,10,11.
Here we present a microarray-based glycan screening method called Comprehensive Microarray Polymer Profiling (CoMPP) (Figures 1 &amp; 2)10,11 that enables multiple samples (100 sec) to be screened using a miniaturised microarray platform with reduced reagent and sample volumes. The spot signals on the microarray can be formally quantified to give semi-quantitative data about glycan epitope occurrence. This approach is well suited to tracking glycan changes in complex biological systems12 and providing a global overview of cell wall composition particularly when prior knowledge of this is unavailable.

A technique called Comprehensive Microarray Polymer Profiling (CoMPP) for the characterisation of plant cell wall glycans is described. This method combines the specificity of monoclonal antibodies directed to defined glycan-epitopes with a miniature microarray analytical platform allowing screening of glycan occurrence in a broad range of biological contexts.

Microarrays를 사용하여 식물 세포의 벽 폴리머의 Glycan 프로파일

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the ...

High-throughput Titration of Luciferase-expressing Recombinant Viruses

Standard plaque assays to determine infectious viral titers can be time consuming, are not amenable to a high volume of samples, and cannot be done with viruses that do not form plaques. As an alternative to plaque assays, we have developed a high-throughput titration method that allows for the simultaneous titration of a high volume of samples in a single day. This approach involves infection of the samples with a Firefly luciferase tagged virus, transfer of the infected samples onto an appropriate permissive cell line, subsequent addition of luciferin, reading of plates in order to obtain luminescence readings, and finally the conversion from luminescence to viral titers. The assessment of cytotoxicity using a metabolic viability dye can be easily incorporated in the workflow in parallel and provide valuable information in the context of a drug screen. This technique provides a reliable, high-throughput method to determine viral titers as an alternative to a standard plaque assay.

This article presents a high-throughput luciferase expression-based method of titrating various RNA and DNA viruses using automated and manual liquid handlers.

루시 페라 제 발현 재조합 바이러스의 높은 처리량의 적정

Standard plaque assays to determine infectious viral titers can be time consuming, are not amenable to a high volume of samples, and cannot be done with ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, several traits are typically characterized using molecular assays to aid in epidemiological studies. These traits include species identification, insecticide resistance, parasite infection status, and host preference. Since populations of the Anopheles gambiae complex are morphologically indistinguishable, a polymerase chain reaction (PCR) is traditionally used to identify species. Once the species is known, several downstream assays are routinely performed to elucidate further characteristics. For instance, mutations known as KDR in a para gene confer resistance against DDT and pyrethroid insecticides. Additionally, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) or Plasmodium parasite DNA detection PCR assays are used to detect parasites present in mosquito tissues. Lastly, a combination of PCR and restriction enzyme digests can be used to elucidate host preference (e.g., human vs. animal blood) by screening the mosquito bloodmeal for host-specific DNA. We have developed a multi-detection assay (MDA) that combines all of the aforementioned assays into a single multiplex reaction genotyping 33SNPs for 96 or 384 samples at a time. Because the MDA includes multiple markers for species, Plasmodium detection, and host blood identification, the likelihood of generating false positives or negatives is greatly reduced from previous assays that include only one marker per trait. This robust and simple assay can detect these key mosquito traits cost-effectively and in a fraction of the time of existing assays.

Malaria transmitting mosquitoes have a number of epidemiologically important characteristics that can only be detected using molecular techniques. Utilizing a MALDI-TOF based SNP genotyping platform, we developed an assay for simultaneously detecting multiple key traits (species, insecticide resistance, parasite infection and host choice) of malaria vectors.

말라리아 모기 전송하기위한 다중 탐지 분석

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for functional genomics studies. While most cloning strategies are simple to perform, they generally use multiple steps and can require several days to generate the ultimate constructs. The method presented here is based on DNA assembly and can produce fully functional CRISPR vectors in a single cloning reaction. Vector construction can also be pooled, further increasing the efficiency and utility of the process. A modification of the method is used to create CRISPR vectors with multiple gene targets. CRISPR vectors are then transformed into tomato hairy roots to generate transgenic materials with targeted DNA modifications. Hairy roots are a useful system for testing vector functionality as they are technically simple to generate and amenable to large-scale production. The methods presented here will have wide application as they can be used to generate a variety of CRISPR vectors and be used in a wide range of plant species.

Using DNA assembly, multiple CRISPR vectors can be constructed in parallel in a single cloning reaction, making the construction of large numbers of CRISPR vectors a simple task. Tomato hairy roots are an excellent model system to validate CRISPR vectors and generate mutant materials.

토마토 털이 뿌리의 생성에 의한 높은 처리량 CRISPR 벡터 건설 및 DNA 수정의 특성

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for ...

Forward Genetic Screen Using Transgenic Calcium Reporter Aequorin to Identify Novel Targets in Calcium Signaling

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis of the screen is to generate a mutant population that can be screened with a phenotype of interest. EMS (ethyl methane sulfonate) is a commonly used alkylating agent for inducing random mutation in a classical forward genetic screen to identify multiple genes involved in any given process. Cytosolic calcium (Ca2+) elevation is a key early signaling pathway that is activated upon stress perception. However the identity of receptors, channels, pumps and transporters of Ca2+ is still elusive in many study systems. Aequorin is a cellular calcium reporter protein isolated from Aequorea victoria and stably expressed in Arabidopsis. Exploiting this, we designed a forward genetic screen in which we EMS-mutagenized the aequorin transgenic. The seeds from the mutant plants were collected (M1) and screening for the phenotype of interest was carried out in the segregating (M2) population. Using a 96-well high-throughput Ca2+ measurement protocol, several novel mutants can be identified that have a varying calcium response and are measured in real time. The mutants with the phenotype of interest are rescued and propagated till a homozygous mutant plant population is obtained. This protocol provides a method for forward genetic screens in Ca2+ reporter background and identify novel Ca2+ regulated targets.

A forward genetic screen based on Ca2+ elevation as a read-out leads to identification of genetic components involved in calcium dependent signaling pathways in plants.

칼슘 신호의 새로운 표적을 확인하기 위해 트랜스제닉 칼슘 리포터 Aequorin을 사용하여 유전자 화면을 전달

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis ...

High-Throughput Analysis of Non-Photochemical Quenching in Crops Using Pulse Amplitude Modulated Chlorophyll Fluorometry

Photosynthesis is not optimized in modern crop varieties, and therefore provides an opportunity for improvement. Speeding up the relaxation of non-photochemical quenching (NPQ) has proven to be an effective strategy to increase photosynthetic performance. However, the potential to breed for improved NPQ and a complete understanding of the genetic basis of NPQ relaxation is lacking due to limitations of oversampling and data collection from field-grown crop plants. Building on previous reports, we present a high-throughput assay for analysis of NPQ relaxation rates in Glycine max (soybean) using pulse amplitude modulated (PAM) chlorophyll fluorometry. Leaf disks are sampled from field-grown soybeans before transportation to a laboratory where NPQ relaxation is measured in a closed PAM-fluorometer. NPQ relaxation parameters are calculated by fitting a bi-exponential function to the measured NPQ values following a transition from high to low light. Using this method, it is possible to test hundreds of genotypes within a day. The procedure has the potential to screen mutant and diversity panels for variation in NPQ relaxation, and can therefore be applied to both fundamental and applied research questions.

The protocol introduces a high-throughput method for measuring the relaxation of non-photochemical quenching by pulse amplitude modulated chlorophyll fluorometry. The method is applied to field-grown Glycine max and can be adapted to other species to screen for genetic diversity or breeding populations.

펄스 진폭 변조된 엽록소 형광계를 이용한 작물에서의 비광화학적 담금질의 고처리량 분석

Photosynthesis is not optimized in modern crop varieties, and therefore provides an opportunity for improvement. Speeding up the relaxation of ...

Characterizing Mechanical Properties of Primary Cell Wall in Living Plant Organs Using Atomic Force Microscopy

The mechanical properties of the primary cell walls determine the direction and rate of plant cell growth and, therefore, the future size and shape of the plant. Many sophisticated techniques have been developed to measure these properties; however, atomic force microscopy (AFM) remains the most convenient for studying cell wall elasticity at the cellular level. One of the most important limitations of this technique has been that only superficial or isolated living cells can be studied. Here, the use of atomic force microscopy to investigate the mechanical properties of primary cell walls belonging to the internal tissues of a plant body is presented. This protocol describes measurements of the apparent Young&#39;s modulus of cell walls in roots, but the method can also be applied to other plant organs. The measurements are performed on vibratome-derived sections of plant material in a liquid cell, which allows (i) avoiding the use of plasmolyzing solutions or sample impregnation with wax or resin, (ii) making the experiments fast, and (iii) preventing dehydration of the sample. Both anticlinal and periclinal cell walls can be studied, depending on how the specimen was sectioned. Differences in the mechanical properties of different tissues can be investigated in a single section. The protocol describes the principles of study planning, issues with specimen preparation and measurements, as well as the method of selecting force-deformation curves to avoid the influence of topography on the obtained values of elastic modulus. The method is not limited by sample size but is sensitive to cell size (i.e., cells with a large lumen are difficult to examine).

Studies of cell wall biomechanics are essential for understanding plant growth and morphogenesis. The following protocol is proposed to investigate thin primary cell walls in the internal tissues of young plant organs using atomic force microscopy.

원자력 현미경을 사용한 살아있는 식물 장기의 일차 세포벽의 기계적 특성 특성 분석

The mechanical properties of the primary cell walls determine the direction and rate of plant cell growth and, therefore, the future size and shape of the ...

Methods Article

가루이을 사용하여 전송하는 식물 바이러스