1. Beyaz sinek Colony Bakım <ol><li> Çevresel koşullar: Sinek koloniler kontrollü bir büyüme odada muhafaza edilmelidir. Bağıl nem, sıcaklık, fotoperiod ve ışık yoğunluğu kontrol optimum büyüme kolonisi (Şekil 1) için gereklidir. 28 ° C&#39;lik bir sıcaklık,% 30-50 bağıl nem ve 14 saat fotoperiyodun yumurtadan 18 günde yetişkin ortaya çıkması (bu kez bitki ev sahibi ile değişir) geliştiren bir koloni verecektir. Bağıl nem böcek ve bitki mantar patojenlerin büyüme vazgeçirmek için% 70 altında tutulmalıdır. Gübre oranları ve sulama mantar patojenleri ve tuz birikimi vazgeçirmek için azaltılmalıdır. Koloni için ışık yoğunluğu oldukça yüksek olmalıdır. Gölgelik yükseklikte yaklaşık 800-1,000 ft mum oluşturmak için yeterli sayıda kullanılan VHO floresan ampuller birçok bitki için yeterlidir (yani. Pamuk, ortak fasulye, lima fasulyesi, domates). Temizlik esastırBir sinek kolonisi en uygun yetiştirme koşulları korumak için. </li><li> Colony Kafesler: Whiteflies yerine büyüme odasında ücretsiz daha, kafeslerde bitkiler üzerinde muhafaza edilmelidir. Kafesler çeşitli malzemelerden yapılmış olabilir ama için izin vermelidir:, havalandırma erişim kolaylığı, gerekli beyaz sinek nüfus oluşturmak için yeterli bitkileri korumak için beyaz sinek kaçış ya da sızma ve yeterli büyüklükte önlemek için yeteneği. İyi sonuçlar organze artı alüminyum tarama (güç için) yanı sıra beyaz sinek geçirmez tarama (özel ekipman ve malzeme tabloya bakınız) ile elde edilmiştir. </li><li> Colony Bitki Hazırlanışı: beyaz sinek kolonisi başlatırken seçilen bitki türlerinin önemli bir husustur. Bitki çöken olmadan yüksek bir böcek nüfusu desteklemek gerekir. Bir nonviruliferous koloni için seçilen bitki viruli muhafaza virüs veya koloni kirlenmesini önlemek için iletilen amaçlanan virüsler için ve eğer bir konakçı olmayan olmalıdırferous koloni, bu virüsün ev sahibi olması gerekir. Bitkiler koloni tanıtılıyor 18 gün içinde yeni yetişkin ortaya çıkması desteklemek için oldukça hızlı bir şekilde büyümek gerekir ama o kadar hızlı bir şekilde dört hafta içinde kafesleri büyümek için. Genellikle uzun boylu çeşitler için benzer bir yaprak alanı üretmek ancak kök uzama olmadan gibi cüce, çalı, veya teras tipi bitki çeşitlerinin tavsiye edilir. </li><li> Bu limonluk ve diğer böcekler hariç kafeslerde seralarda koloni için arka bitkiler için çok önemlidir. Onlar koloni koloni çökmesine neden olabilir girmeden önce limonluk, thrips, veya kene ile enfekte olan bitkilerin kullanın. Musallat bitkiler de virüs iletim çalışmaları ile engel olacak böcek yoluyla bulaşan virüs ile enfekte potansiyeline sahiptir. </li></ol> 2. Beyaz sinek Colony Kuruluş <ol><li> Temiz limonluk kullanarak ilk kez bir koloni Başlat - bitki virüsleri, diğer böcekler ve böcek patojenlerin ücretsiz olanları. Bu elde edilebilirortak veya sahadan. Alanında toplanan Eğer, limonluk bitki virüsün konakçı olmayan bitkilerde en az 8 hafta boyunca yetiştirilen, ve bitki virüslerinin ücretsizdir emin olmak için bitki semptomların olmaması için kontrol edilmelidir. </li><li> 1. Hafta: bitkilerin ilk kafesine temiz limonluk tanıtın. Limonluk bilinen sayı aspirasyon veya hafifçe koloni üzerindeki talepleri bağlı olarak başka bir kaynaktan bitki limonluk sallayarak sokulabilir. 1. hafta boyunca, limonluk bitki yaprak yüzeylerinin alt yumurta atıyoruz. Yaklaşık bir nüfus büyüklüğü yumurta ve söz konusu ana bitki üzerinde dişi sinek tarafından atılmıştır yumurta ortalama sayısı koymak için kullanılan, yetişkin sayısına göre her ortaya çıkması için tahmin edilebilir. </li><li> Hafta 2: yumurtalarını bırakmak için yeni ev sahibi bitkilere limonluk tanıtarak bir kafes başlayın. 1. hafta başlayan kafeste bitkiler yumurta ve yaprakların alt (Şekil 2) kapsayan bazı olgunlaşmamış limonluk olacaktır. Bazı1. hafta içinde tanıtılan yetişkin limonluk hala hayatta olacak. </li><li> Hafta 3: yumurtalarını bırakmak için yeni tesisler için limonluk getirerek üçüncü bir kafes başlayın. 1. hafta başlayan kafeste bitkiler olgunlaşmamış yanı sıra ortaya çıkan birçok yeni yetişkin limonluk olacak ve yetişkin beyaz sinek nüfusun çok gözle görülür bir artış olmalıdır. 2 haftada başlayan kafeste bitkiler birçok yumurta ve yaprakların alt kapsayan olgunlaşmamış limonluk olacaktır. </li><li> Hafta 4: yumurtalarını bırakmak için yeni tesisler için limonluk getirerek dördüncü bir kafes başlayın. 1. hafta başlayan kafeste bitkiler yaklaşık bir hafta sonrası ortaya çıkması birçok yetişkin limonluk olacaktır. 2 haftada başlayan kafeste bitkiler ortaya çıkan birçok yeni yetişkin limonluk olacak ve beyaz sinek nüfus çok gözle görülür bir artış olmalıdır. Hafta 3 sırasında başlayan kafeste bitkilerin yaprakların alt kapsayan birçok yumurta ve olgunlaşmamış limonluk olacaktır. </li><li> İlk 4 haftadan sonra haftalıkks: Her hafta, yeni, temiz bir kafes yeni bitkiler üzerine dördüncü en eski kafesi (kafes hafta 1 başlayan) gelen yetişkin limonluk getirerek yeni bir kafes başlar. Eski kafes kaldırılır ve bitkiler atılmalıdır. Bu beyaz sinekler, yaklaşık 1 hafta sonra-ortaya çıkan bulunmaktadır. Viruliferous koloni durumunda, bu limonluk yeni tesislerin yanı sıra beyaz sinek yeni nesil için yumurtalarını bırakmak için virüs iletir. </li><li> Planı iletim deneyler üçüncü hafta kafeste ortaya çıkacak limonluk kullanmak. Daha fazla limonluk gerekirse, bitki numaraları arttırılabilir ve daha limonluk beyaz sinek nüfusu artırmak için hafta 1 kafes eklenebilir. </li></ol> 3. Test bitkileri aşılanması için yöntem <ol><li> Yüksek iletimi sağlamak için: 1) Whiteflies iletim hızları azaltacaktır böcek zarar görmesini önlemek için yavaşça mümkün olduğunca ele alınması gerekir, 2) eit için limonluk kullanılabilir yeterli yaprak alanı olmalıdıronu probu veya besleme. Alma süresi ya da satın alma ana bitkilerin sayısında artış artış satın alma veya aşılama erişim dönemde birinde kalabalık nedeniyle testi bitkilerde enfeksiyon düşük oranları artabilir. </li><li> Whiteflies toplanması. Aşağıdaki deneysel amaçlar için gerekli olan beyaz sinek tam sayı toplanması ve hareketi için bir işlemdir. Beyaz sinek çok sayıda taşımak için, gibi örneğin direnç tarama için gerekli olan, hafifçe test bitkiler veya virüs bulaşmış satın alma ana (ve daha sonra test bitkiler) üzerinde beyaz sinek musallat bitkiler sallamak için gereklidir. Toplama etkilerini en aza indirmek için birçok yerle bitkiler sallamak emin olun. </li><li> Yeni yetişkin limonluk (1-3 gün sonrası ortaya çıkması) son derece aktif ve sık sık en yüksek iletim hızları 4 vermek eğilimindedir beslemek ortaya çıktı. Büyük beyaz sinekler hala iletimi ancak daha düşük bir frekansta. Test bitki başına birden fazla limonluk (pla başına 15-40nt) bitkide beyaz sinek 1 oranında yana iletim yüksek oranda için kullanılmalıdır genellikle kabul edilemez ölçüde düşük iletim hızı 3,4 ile sonuçlanır. Numarası elde etme ve test bitkilerinin virüsü ve türlere bağlı gerekli. </li><li> Aspirasyon cihazları ve toplama şişeleri birleştirin. (Şekil 3) </li><li> Bir elinizle, limonluk toplanacak içeren koloni kafes içinde bir sarı plastik kart tutun. Yavaşça yetişkin limonluk uçmak için teşvik etmek için bitkiler dokunun. Whiteflies sarı kart için çekici olacaktır ve bitki bir aspiratör ve çok nazik bir nefes kullanarak onlar toplanabilir kartına uçacak. Bitkiler üzerinde besleyen limonluk aspire asla. Besleme böylece bitkilerin stileleri kıracak onları çekerek ve ya elde ya da (Şekil 4) virüsü iletmek için onları mümkün kılan ise onların stileleri bitki gömülür. </li><li> Tek colle yaklaşık 20 yetişkin limonluk toplayıntekrar özlemleri (Şekil 5) böceklere fiziksel zarar en aza indirmek için ction flakon. </li><li> Limonluk dokunarak gelen şaşırmış ise toplama flakon değiştirmek için, hafifçe Parafilm ile sert bir yüzeye ve kapağın üzerindeki flakon dokunun. </li><li> Aspiratör yeni bir toplama şişesine koyun ve gerekli beyaz sinekler sayısı toplanana kadar tekrar edin. Beyaz sinekler birkaç saat boyunca oda sıcaklığında toplama şişeleri içinde kalabilir. </li><li> Toplama. Whiteflies bir virüs bulaşmış bitki yerleştirilir ve 48-72 saat için enfekte bitkiler üzerinde beslemek için izin verilir. 72 saat daha uzun Toplama süre genellikle iletim oranlarını artırmak yok. Sırasıyla kalıcı olmayan veya semipersistent şekilde, 1 saat ve birkaç saat, iletilen bu virüs, yeterli satın alma erişim süreleri (Tablo 1). Limonluk tek bir bitki ya da böcekler sınırlandırmak kafeslerde bitkiler ücretsiz erişim verildiğinde en iyi sonuçlar elde edilirbirden çok bitki. Ancak, bazı deneyler durumda klip kafes kullanılabilecek belirli yapraklarından elde gerektirir. Klip kafes kullanırken, yaprakların alt için beyaz sinek besleme tercih karşılamak için önemlidir. Ayrıca, klip kafeslerde beyaz sinek kalabalık iletim hızları azaltabilir - iletim kabul edilebilir oranları 2.5 cm çapında küçük kafes başına 10 kadın limonluk kullanılarak elde edilmiştir. </li><li> Aşılama. Aşılama büyüklüğüne uygun bir kafes hazırlayın ve içinde test bitkiler yerleştirin. Sadece bir bitki inoküle edilecek ise tek bir bitki kafes düşünün. Birden fazla bitki küçük bir PVC kare / organze çanta kafes ya da alüminyum kafes (Şekil 6) dikkate inoküle edilecekse. Aşılama için kullanılan kafes büyüklüğü inoküle edilmesi için tesis (ler) biraz daha büyük olması gerekir. Limonluk yakın bitki gölgelik tutulur ve boş alan çok verilmez zaman daha yüksek aktarım hızları elde edilir. </li><li> Satın konaklardan limonluk toplanması deney ihtiyaçlarına bağlıdır. Az sayıda gerekli ise, yukarıda tarif edildiği gibi beyaz sinekler aspire. Bitkilerin yakın kafes içinde beyaz sinek toplanması şişeleri yerleştirin ve kapağı (Şekil 7) kaldırın. Şişe açın ve limonluk bırakın ya da ters ve yavaşça limonluk serbest bırakmak için flakon dokunun. Çok sayıda ihtiyaç varsa sadece test bitkiler bulunduğu kafesler içine limonluk ilgili satın alma bitkiler hareket ve yavaşça satın alma ev sahibi bitki kapalı limonluk sallayın. Giriş her iki tip için, toplama en aza indirmek ve tek tip aşı sağlamak için bitkiler arasında limonluk dağıtmak için emin olun. </li><li> Limonluk ev sahibi bitki (Tablo 1) soruşturma veya, zaman uygun miktarda beslemek virüs tekrar bağımlı ve bir dereceye kadar izin verin. </li><li> Bu limonluk olan sigorta için aşılama erişim döneminde en az bir kez limonluk kontrol edinkafes açma ve her bitkinin bazı yaprakları çevirerek sondalama veya besleme. </li><li> Uzun aşılama erişim dönemlerinde, bitkilerin üstleri fırça ve bitkiler üzerinde yeniden dağıtmak için limonluk teşvik etmek (bir bambu çubuk veya eşdeğeri kullanarak) yavaşça bitkiler rahatsız. Beyaz sinek yeniden dağıtım agrega beyaz sinek doğal eğilim karşı daha yüksek bir iletim hızı sağlamaya yardımcı olur. </li><li> Fesih. Aşılama erişim süresi onaylı kimyasallar ile limonluk öldürerek sonlandırılır. Bir kişi insektisit hızla ilerleyen haftalarda ve temas insektisit (Şekil 8) tarafından cevapsız olanlarda geliştirmek herhangi bir limonluk sonlandırmak için yetişkin limonluk ve sistemik bir insektisit sonlandırmak için: iki böcek birbiri ardına uygulayın. Bu böcek sabun ve bu imidacloprid veya pymetrozine gibi sistemik böcek gibi bir temas insektisit iyi bir başarı ile kullanılmaktadır. </li></ol>

<ol>
	<li>Antignus, Y., Mor, N., Ben Joseph, R., Lapidot, M., Cohen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UV+absorbing+plastic+sheets+protect+crops+from+insect+pests+and+from+virus+diseases+vectored+by+insects.">UV absorbing plastic sheets protect crops from insect pests and from virus diseases vectored by insects.</a> Environ. Entomol. 25, 919-924 (1996).</li><li>Cohen, S., Gerling, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+whitefly-transmitted+viruses.">Epidemiology of whitefly-transmitted viruses.</a> Whiteflies: Their Bionomics, Pest Status and Management. , 211-225 (1990).</li><li>Cohen, S., Antignus, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomato+yellow+leaf+curl+virus,+a+whitefly-borne+geminivirus+of+tomatoes.">Tomato yellow leaf curl virus, a whitefly-borne geminivirus of tomatoes.</a> Adv. Dis. Vector Res. 10, 259-288 (1994).</li><li>Csizinszky, A., Schuster, D. J., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+UV-reflective+mulches+on+tomato+yields+and+on+the+silverleaf+whitefly.">Effect of UV-reflective mulches on tomato yields and on the silverleaf whitefly.</a> HortSci. 34, 911-914 (1999).</li><li>De Barro, P. J., Liu, S. -. S., Boykin, L. M., Dinsdale, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bemisia+tabaci:+A+statement+of+species+status.">Bemisia tabaci: A statement of species status.</a> Annu. Rev. Entomol. 56, 1-19 (2011).</li><li>Duffus, J. E., Gerling, D., Mayer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whitefly-borne+viruses.">Whitefly-borne viruses.</a> Bemisia: 1995 Taxonomy, Biology, Damage, Control and Management. , 255-288 (1996).</li><li>Lapidot, M., Czosnek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+TYLCV-resistant+plants+using+whitefly-mediated+inoculation.">Screening for TYLCV-resistant plants using whitefly-mediated inoculation.</a> Tomato Yellow Leaf Curl Virus Disease. , 329-342 (2007).</li><li>Lapidot, M., Friedmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+for+resistance+to+whitefly-transmitted+geminviruses.">Breeding for resistance to whitefly-transmitted geminviruses.</a> Ann. Appl. Biol. 140, 109-117 (2002).</li><li>Lapidot, M., Polston, J. E., Stansly, P. A., Naranjo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+epidemiology+of+Bemisia-vectored+viruses.">Biology and epidemiology of Bemisia-vectored viruses.</a> Bemisia: Bionomics and Management of a Global Pest. , 227-231 (2010).</li><li>Navas-Castillo, J., Fiallo-Olive, E., Sanchez-Campos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+virus+diseases+transmitted+by+whiteflies.">Emerging virus diseases transmitted by whiteflies.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 49, 219-248 (2011).</li><li>Ng, J. C. K., Falk, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-vector+interactions+mediating+nonpersistent+and+semipersistent+transmission+of+plant+viruses.">Virus-vector interactions mediating nonpersistent and semipersistent transmission of plant viruses.</a> Ann. Rev. Phytopathol. 44, 212-21 (2006).</li><li>Polston, J. E., Cohen, L., Sherwood, T. A., Ben-Joseph, R., Lapidot, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsicum+species:+Symptomless+hosts+and+reservoirs+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+(TYLCV).">Capsicum species: Symptomless hosts and reservoirs of Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV).</a> Phytopathology. 96, 447-452 (2006).</li><li>Polston, J. E., Hiebert, E., McGovern, R. J., Stansly, P. A., Schuster, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+range+of+Tomato+mottle+virus,+a+new+geminivirus+infecting+tomato+in+Florida.">Host range of Tomato mottle virus, a new geminivirus infecting tomato in Florida.</a> Plant Dis. 77, 1181-1184 (1993).</li><li>Polston, J. E., Sherwood, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pymetrozine+interferes+with+transmission+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+by+the+whitefly+Bemisia+tabaci+(Hemiptera:+Aleyrodidae.">Pymetrozine interferes with transmission of Tomato yellow leaf curl virus by the whitefly Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae.</a> Phytoparasitica. 31, 490-498 (2003).</li><li>Schuster, D. J., Thompson, S., Ortega, L. D., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+evaluation+of+products+to+reduce+settling+of+sweetpotato+whitefly+adults.">Laboratory evaluation of products to reduce settling of sweetpotato whitefly adults.</a> J. Econ. Ento. 102, 1482-1489 (2009).</li><li>King, A. M. Q., Adams, M. J., Carstons, E. B., Lefkowitz, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Virus Taxonomy, Ninth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. , (2012).</li><li>Wintermantel, W. M., Stansly, P. A., Naranjo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+efficiency+and+epidemiology+of+Criniviruses.">Transmission efficiency and epidemiology of Criniviruses.</a> Bemisia: Bionomics and Management of a Global Pest. , 319-332 (2010).</li><li>Yang, Y., Sherwood, T. A., Patte, C. P., Hiebert, E., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+(TYLCV)+Rep+gene+sequences+to+engineer+TYLCV+resistance+in+tomato.">Use of Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) Rep gene sequences to engineer TYLCV resistance in tomato.</a> Phytopathology. 94, 490-496 (2004).</li><li>Zehnder, G. W., Yao, C., Murphy, J. F., Sikora, E. R., Kloepper, J. W., Schuster, D. J., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbe-Induced+Resistance+Against+Pathogens+and+Herbivores:+Evidence+of+Effectiveness+in+Agriculture.">Microbe-Induced Resistance Against Pathogens and Herbivores: Evidence of Effectiveness in Agriculture.</a> Induced Plant Defenses Against Pathogens. , 335-355 (1999).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada açıklanan yöntemler yirmi bir süre içinde geliştirilmiştir ve beyaz sinek iletim, davranış ve biyoloji birçok çalışma tarafından sağlanan temel bilgilere dayanmaktadır. Birçok yayın olduğundan, bu yazının bu tekniği geliştirmek için kullanılan veri türünü göstermek için yorumları ve birkaç seçilen belirli bir yayın öncelikle ifade eder. Bu limonluk bacak ve antenleri kırdıktan sonra hafifçe işlenir bu işlem çok önemlidir anormal davranışlar ve iletim daha düşük fiyatla yol açabilir. Vakum ve diğer mekanik emme cihazlarla Koleksiyon iyi sonuçlar olmamıştı. Başarısı için bir başka dikkate test bitkileri% 100 iletim elde etmek için kullanılan beyaz sinek sayısıdır, bitki konakçıya ve virüs her bir kombinasyon için belirlenebilir olmasıdır. Bu optimal oranı sadece bir kez kurulması gerekmektedir. Onlar g beri iyi sonuçlar genç erişkin limonluk (1-3 gün geçmiş ortaya çıkması) kullanılarak elde edilmiştiriletim en yüksek oranlar ive. Büyük yetişkin kullanılabilir ancak beyaz sinek daha fazla sayıda iletim kendi düşük fiyatla telafi etmek için gerekli olacaktır. Dişiler daha sık erkeklerden daha beslemek yana, erkeklerden daha yüksek oranlarda iletmek için bilinmektedir. Ancak iletimi için cinsiyetler ayırmak için zaman değer genellikle değildir. Bu prosedür araştırmacı kaynakları ve ihtiyaçlarını karşılamak için çeşitli şekillerde değiştirilebilir. Birden fazla virüs ile çalışırken bu virüsün konakçı olmayan bitkilerde yetiştirilen beyaz sinek tek bir koloni tutmak en iyisidir. Bu beyaz sinekler elde edilmesi için, virüsle enfekte bitkiler yerleştirilir toplanabilir ve daha sonra kazanılmasından sonra beyaz sinekler test bitkileri tekrar hareket ettirilebilir. Koloni amaçlı bitkiler başka bir virüs ile enfekte olabilir beyaz sinek girmesini önlemek için kafeslerde seralarda yetiştirilmelidir. Akarları, thrips ve diğer bitki zararlıları ile bu bitkilerin istilası saat bozabilirkoloninin Sağlık ve bunu daraltmak için neden. Son olarak koloni bitkilerin sulama özenle yapılmalıdır. Bu bitkiler çok beyaz sinek beslenme ve daha düşük normal ışık koşulları aşırı stres tabidir. Bitkiler bir kez bile overwatered ise topraksız karışımları turba üzerinde tanıtıldı mantarlar çürüyen kök bir sorun haline gelebilir. Bir mantar ilacı sırılsıklam ile bitkilerin Tedavi öncesi bazı sorunları ortadan kaldırabilir. Bitki virüslerinin beyaz sinek iletim zaman alıcı ve değerli kaynakları (örneğin büyüme odaları gibi) gerektirebilir iken biz iletim başka bir yolu sahip olduğunuz bazı virüslerin iletimi için gereklidir. Bu alanda bitkiler karşı beklenen olacağı iletim aynı tip kullanır gibi, aynı zamanda virüslere karşı direnç için eleme tesisleri değerli bir araçtır. Iletim daha yapay araçlarının kullanımı her zaman viru için gen değerlendirilmesi en iyi sonuçlar yoks-direnç.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the Item</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue No.</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly proof screening</td>
			<td>Klayman Meteor Ltd. Petah Tikva 49130, Israel</td>
			<td>---</td>
			<td>BioNet 50 mesh screen Antivirus Insect Screen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly proof screening</td>
			<td>Hummert International (www.hummert.com)</td>
			<td>27-4050-1 - 27-4062-1</td>
			<td>BioNet 50 mesh screen Antivirus Insect Screen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly Collection Devices</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>1135A</td>
			<td>Can also be made using eye droppers, flexible plastic tubing, plastic vacuum adaptors, and cheesecloth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection vials</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>8909</td>
			<td>Vials used depend on which aspirator is used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yellow plastic cards</td>
			<td>any company</td>
			<td>---</td>
			<td>Any bright yellow plastic card will work, can be purchased in many places.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitefly Cages</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>These are not commercially available and must be constructed. 60 cm x 60 cm x 60 cm cages work well for us. Our preference is for those constructed of aluminum window screening, nylon organdy, vinyl plastic, with a structure created using aluminum window frames. Doors are attached using piano hinges and sealed with weather stripping; tops of the cages are vinyl plastic. Cages can also be made of 1) plexiglass glued together on the edges with ventilation provided by screened openings cut on the side pieces; 2) large bags of nylon organdy, organza, or 50 mesh whitefly screening with internal supports provided by PVC pipes and fittings cut to desired lengths and assembled inside the bags, 3) wood frames and nylon organdy, organza, or 50 mesh whitefly screening.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transmitting plant viruses using whiteflies

Limonluk, Hemiptera: Aleyrodidae, B. tabaci, morfolojik indistinquishable türlerin 5 karmaşık, birçok bitki virüslerinin vektörleridir. Bu sinek-iletilen bitki virüsleri (begomovirus&#39;unun, carlavirus, Crinivirus, Ipomovirus, Torradovirus) çeşitli cins ortaya çıkan ve önemli gıda ve lifli bitkiler (9,10,16 tarafından yorumlanan) ekonomik olarak önemli patojenlerin birkaç yüz tür içerir. Bu virüsler kendi vektör çoğaltmak yok ama yine de çeşitli yollarla (2,6,7,9,10,11,17 tarafından gözden) tarafından yetişkin beyaz sinek tarafından bitki için kolayca taşınır. Diğerleri için yalnızca tarama gerekli süre için beyaz sinek besleme Bu virüslerin çoğu, satın alma ve aşılama için gereklidir. Bu virüslerin çoğu durumda olmayan, kolayca başka yollarla bulaşan olamaz. Virüs kültür, biyolojik ve moleküler karakterizasyonu (ana aralığı ve semptomların tanımlanması) 3,13 Bu nedenle bakım, Ekoloji 2,12, virüs sinek vektör kullanarak deneysel ana iletilir gerektirir. Buna ek olarak bu tür yeni kimyasal bileşikler, 14 ya da 15, yeni kültür yaklaşımlar 1,4,19 veya seçim ve dirençli çeşitlerinin 7,8,18 gelişimi değerlendirilmesi olarak yönetimi ile ilgili yeni yaklaşımlar, gelişimi için beyaz sinek kullanımını gerektirir, virüs iletim. Seçimi ve ıslah programlarında dayanıklı çeşitlerin geliştirilmesi için bitki virüslerinin beyaz sinek iletim kullanımı özellikle 7 zordur. Direnç için etkili seçimi ve tarama bitkilerin çok sayıda kullanır ve direnç genleri sahip birkaç genotipleri bulmak amacıyla, inoküle edilmesi, bitkilerin% 100 için bir ihtiyaç vardır. Bu çalışmalar genellikle viruliferous limonluk, yılda birkaç kez çok sayıda kullanın. Beyaz sinek bakım Burada anlatılan yüzlerce veya binlerce üretebilirdiğer bitki virüslerin bulaşma olmadan bitkiler her hafta, yıl boyunca, üzerinde yetişkin beyaz sinek. Limonluk ve virüs hem de ücretsiz Tesisleri her hafta beyaz sinek kolonisi içine tanıtmak üretilmelidir. Beyaz sinek kültürler beyaz sinek patojenler, parazitler ve beyaz sinek nüfus ve / azaltmak ya da virüsün iletim verimliliği azaltabilir parazitoit serbest tutulmalıdır. Tarif edilen şekilde üretilen koloniler hızlı gerektiği gibi nüfus sayısını artırmak ya da azaltmak için ölçeklendirilebilir ve virüsün bitki ana bilgisayarda beyaz sinek tabanlı besleme tercihlerini karşılamak için ayarlanabilir. Bir nonviruliferous ve viruliferous beyaz sinek kolonisi: korunabilir beyaz sinek kolonilerin iki temel tipi vardır. Nonviruliferous koloni virüs içermeyen bitkiler üzerinde yetiştirilen beyaz sinek oluşur ve farklı kültürlerden virüs iletmek için kullanılabilir beyaz sinek haftalık durumu izin verir. Viruliferous sinek kolonisi,Virüs ile enfekte bitkiler üzerinde yetiştirilen beyaz sinekler oluşan, böylece virüs iletim sürecinde bir adım atlanmıştır virüs elde etmiş beyaz sinek haftalık uygunluk sağlar.

Beyaz sinek kolonisi kurulması ve bakım, hem de bitki virüs iletmek için manipülasyon için bu yöntemleri atıf değil çalışmalar 4,11,12,14 gibi diğerleri bir dizi başarıyla kullanılmaktadır. Israrla iletilen virüs bu yöntemleri kullanarak, rutin iletim müdahale yeteneklerini (ve direnç uyaran bileşiklerin değerlendirilmesi) 13,14,17,18 (için böcek tarama, direnç için seçimi için% 100 iletim istenen oranları elde etmiş Şekil 9). Burada açıklanan usul ve kamu ve özel araştırma tesislerinde birçok yerlere uyarlanabilir edilmiştir olabilir. <table border="1"><tbody><tr><td> İletim tipi </td><td> Toplama Erişim Dönem (saat) </td><td> Aşılama Erişim Dönem (saat) </td><td> Ref. </td></tr><tr><td> Kalıcı olmayan </td><td> 1 </td&gt; <td> 2-24 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Semipersistent </td><td> 6-24 </td><td> 8-24 </td><td> 10, 16 </td></tr><tr><td> Kalıcı </td><td> 48-72 </td><td> 48-72 </td><td> 3, 6, 8, 9 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Onların vektör Bemisia tabaci tür bir kompleks. Tahmini süreleri ile ilişkileri farklı tipleri ile virüs aktarımı yüksek oranda üretmek için kullanılabilir Öngörülen kez% 80-100 iletimi için gerekli olan ve bazı durumlarda en az kez değiştirilmiş yayınlanan dayanmaktadır latent dönem ve beyaz sinek popülasyonu, virüs, ve ev sahibi bitkiler arasında farklılıklar için hesap. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig1.jpg" /> Şekil 1. Bir viruliferous beyaz sinek kolonisi bir örnek. Bu büyüme odada begomovirus&#39;unun ve infe ile enfekte bitkilerin kafesleri içerirviruliferous limonluk ile sted. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4332/4332fig2.jpg" /> Şekil 2. Sol: beyaz sinek, B. tabaci MEAM dalının sensu De Barro 6 yaklaşık 1 hafta sonrası ortaya çıkması ve Sağ aşamaları immatures: sinek bir yetişkin, birçok bitki virüs etkili bir vektör. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig3.jpg" /> Şekil 3,. Bitki virüs aktarımı için beyaz sinek toplamak için kullanılabilir toplama cihazlarının türleri. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/4332/4332fig4.jpg" /> Şekil 4. Sol: toplama için hazır limonluk gösteren beyaz sinek yetişkin toplamak için kullanılan Sarı plastik kart<html> . Sağ: Bir sarı plastik karttan limonluk Toplama. Whiteflies küçük gri / beyaz lekeler olarak kart görülebilir. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/4332/4332fig5.jpg" /> Şekil 5,. Whiteflies satın alma veya aşılama ya hazır koloni (a flakon 20) aspirasyon tarafından toplanan. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4332/4332fig6.jpg" /> 6 Şekil. Üst Sol:. Satın alma veya aşılama ya için kullanılan tek bitki kafesleri Üst Sağ: pvc boru ve organze yapılmış Büyük kafesleri. Alt: Alüminyum / ekran ve beyaz sinek koloni için tasarlanmış bir sera içeren bitkiler organze kafesleri. 32fig7.jpg &quot;/&gt; Şekil 7. Whiteflies aşılama için tek bir bitki (ya da satın alma) aktarılıyor. <img alt="Şekil 8," src="/files/ftp_upload/4332/4332fig8.jpg" /> Şekil 8. Sistemik bir insektisit sırılsıklam ilavesi beyaz sinek aşılama erişim süresi sona erdirmek için. <img alt="Şekil 9," src="/files/ftp_upload/4332/4332fig9.jpg" /> 9 Şekil. Tomato yellow leaf curl virüs direnç için değerlendirme aşamasındadır Alan bitkiler. Tüm bitkiler 5 haftalık fide olarak aşılanmış ve daha sonra değerlendirme için alana transplante edildi. Ön planda bitkiler dirençli gen çizgi vardır, arka planda bitkiler duyarlı gen hattı vardır.

Watch this Scientific Journal Video about Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies at JoVE.com

Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies

Bizim anlayış ve böcek ile yayılan bitki virüsleri birçok yönetmek üzere yeteneğini geliştirmek vektörünün kullanımını gerektirir. Bitki virüslerinin Böcek iletim tritrophic etkileşim olduğunu ve bu gibi böcekler, virüs ve bitkinin manipülasyonu gerektirir. Vektörler sayıda yetiştirilen ve test bitkilerinin iletim yüksek oranda temin etmek gibi bir şekilde manipüle edilebilir olmalıdır. Beyaz sinek yetiştirme ve manipüle temelleri,<em&gt; Bemisa tabaci</em&gt; (<em&gt; Hemiptera: Aleyrodidae</em&gt;), Ekonomik açıdan önemli virüs büyük bir sayısını temsil eden çok sayıda ortaya çıkan bitki virüs cinse ait bitki virüsleri, bir vektör sunulmuştur.

Whiteflies kullanarak Verici Bitki Virüsler

Whiteflies, Hemiptera: Aleyrodidae, Bemisia tabaci, a complex of morphologically indistinquishable species5, are vectors of many plant viruses. Several ...

transmitting-plant-viruses-using-whiteflies

Research

JoVE Journal

Biology

28.7K Görüntüleme.  University of Florida. Bizim anlayış ve böcek ile yayılan bitki virüsleri birçok yönetmek üzere yeteneğini geliştirmek vektörünün kullanımını gerektirir. Bitki virüslerinin Böcek iletim tritrophic etkileşim olduğunu ve bu gibi böcekler, virüs ve bitkinin manipülasyonu gerektirir. Vektörler sayıda yetiştirilen ve test bitkilerinin iletim yüksek oranda temin etmek gibi bir şekilde manipüle edilebilir olmalıdır. Beyaz sinek yetiştirme ve manipüle temelleri, ...

Video: Transmitting Plant Viruses Using Whiteflies

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When an uninfected aphid feeds on an infected plant it contracts the virus through the plant phloem. Once ingested, the virus must pass from the insect gut to the hemolymph (the insect  blood ) and then must pass through the salivary gland, in order to be transmitted back to a new plant. An aphid may take up different viruses when munching on a plant, however only a small fraction will pass through the gut and salivary gland, the two main barriers for transmission to infect more plants. In the lab, we use physalis plants to study PLRV transmission. In this host, symptoms are characterized by stunting and interveinal chlorosis (yellowing of the leaves between the veins with the veins remaining green). The video that we present demonstrates a method for performing aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut is preventing viral transmission.
The video that we present demonstrates a method for performing Aphid microinjection on insects that do not vector PLVR viruses and tests whether the gut or salivary gland is preventing viral transmission.

Aphids are effective transmitters of plant viruses. Aphid microinjection of virus, the procedure we will show you today, is a technique allowing researchers to inject virus directly into the hemocoel of the aphid, bypassing the gut, one of the 2 major barriers for virus transmission in a circulative manner. The same technique is also used to inject dsRNA for RNAi.

Mikroenjeksiyon kullanarak Yaprak bitleri Viral İletim Fizyolojik Engelleri Test

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When ...

Biyoloji

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well know to have insecticidal properties. One response of tobacco plants to herbivory, or being gnawed upon by insects, is to increase the production of this neurotoxic alkaloid. Here, we will demonstrate how to set up an experiment to address this question of whether a tobacco-adapted strain of the green peach aphid, Myzus persicae, can tolerate higher levels of nicotine than the a strain of this insect that does not infest tobacco in the field.

In this video and assay is demonstrated that tests the tolerance of nicotine to two types of aphids one that infests tobacco plants in the field and one that does not.

Yapay Diyet Deney kullanarak Yaprak bitleri Nikotin Tolerans Testi

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well ...

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA regulators: microRNAs, which are produced from non-protein coding genes and short interfering RNAs (siRNAs). Plants use RNAi to control transposons and to exert tight control over developmental processes such as flower organ formation and leaf development2,3,4. Plants also use RNAi to defend themselves against infection by viruses. Consequently, many viruses have evolved suppressors of gene silencing to allow their successful colonization of their host5.
Virus-induced gene silencing (VIGS) is a method that takes advantage of the plant RNAi-mediated antiviral defense mechanism. In plants infected with unmodified viruses the mechanism is specifically targeted against the viral genome. However, with virus vectors carrying sequences derived from host genes, the process can be additionally targeted against the corresponding host mRNAs. VIGS has been adapted for high-throughput functional genomics in plants by using the plant pathogen Agrobacterium tumefaciens to deliver, via its Ti plasmid, a recombinant virus carrying the entire or part of the gene sequence targeted for silencing. Systemic virus spread and the endogenous plant RNAi machinery take care of the rest. dsRNAs corresponding to the target gene are produced and then cleaved by the ribonuclease Dicer into siRNAs of 21 to 24 nucleotides in length. These siRNAs ultimately guide the RNA-induced silencing complex (RISC) to degrade the target transcript2.
Different vectors have been employed in VIGS and one of the most frequently used is based on tobacco rattle virus (TRV). TRV is a bipartite virus and, as such, two different A. tumefaciens strains are used for VIGS. One carries pTRV1, which encodes the replication and movement viral functions while the other, pTRV2, harbors the coat protein and the sequence used for VIGS6,7. Inoculation of Nicotiana benthamiana and tomato seedlings with a mixture of both strains results in gene silencing. Silencing of the endogenous phytoene desaturase (PDS) gene, which causes photobleaching, is used as a control for VIGS efficiency. It should be noted, however, that silencing in tomato is usually less efficient than in N. benthamiana. RNA transcript abundance of the gene of interest should always be measured to ensure that the target gene has efficiently been down-regulated. Nevertheless, heterologous gene sequences from N. benthamiana can be used to silence their respective orthologs in tomato and vice versa8.

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

Description of a virus-induced gene silencing (VIGS) method for knock-down of gene expression in Nicotiana benthamiana and tomato.

Virüs indüklenen gen susturma (VIGS) Nicotiana benthamiana Ve Domates

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers using Microarrays

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the raw materials for human societies (e.g. wood, paper, textile and biofuel industries)1,2. However, understanding the biosynthesis and function of these components remains challenging.
Cell wall glycans are chemically and conformationally diverse due to the complexity of their building blocks, the glycosyl residues. These form linkages at multiple positions and differ in ring structure, isomeric or anomeric configuration, and in addition, are substituted with an array of non-sugar residues. Glycan composition varies in different cell and/or tissue types or even sub-domains of a single cell wall3. Furthermore, their composition is also modified during development1, or in response to environmental cues4.
In excess of 2,000 genes have Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans been predicted to be involved in cell wall glycan biosynthesis and modification in Arabidopsis5. However, relatively few of the biosynthetic genes have been functionally characterized 4,5. Reverse genetics approaches are difficult because the genes are often differentially expressed, often at low levels, between cell types6. Also, mutant studies are often hindered by gene redundancy or compensatory mechanisms to ensure appropriate cell wall function is maintained7. Thus novel approaches are needed to rapidly characterise the diverse range of glycan structures and to facilitate functional genomics approaches to understanding cell wall biosynthesis and modification.
Monoclonal antibodies (mAbs)8,9 have emerged as an important tool for determining glycan structure and distribution in plants. These recognise distinct epitopes present within major classes of plant cell wall glycans, including pectins, xyloglucans, xylans, mannans, glucans and arabinogalactans. Recently their use has been extended to large-scale screening experiments to determine the relative abundance of glycans in a broad range of plant and tissue types simultaneously9,10,11.
Here we present a microarray-based glycan screening method called Comprehensive Microarray Polymer Profiling (CoMPP) (Figures 1 &amp; 2)10,11 that enables multiple samples (100 sec) to be screened using a miniaturised microarray platform with reduced reagent and sample volumes. The spot signals on the microarray can be formally quantified to give semi-quantitative data about glycan epitope occurrence. This approach is well suited to tracking glycan changes in complex biological systems12 and providing a global overview of cell wall composition particularly when prior knowledge of this is unavailable.

A technique called Comprehensive Microarray Polymer Profiling (CoMPP) for the characterisation of plant cell wall glycans is described. This method combines the specificity of monoclonal antibodies directed to defined glycan-epitopes with a miniature microarray analytical platform allowing screening of glycan occurrence in a broad range of biological contexts.

Mikroarray&#39;ler kullanarak Bitki Hücre Duvarı Polimerlerin glukanıdır Profilleme

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the ...

High-throughput Titration of Luciferase-expressing Recombinant Viruses

Standard plaque assays to determine infectious viral titers can be time consuming, are not amenable to a high volume of samples, and cannot be done with viruses that do not form plaques. As an alternative to plaque assays, we have developed a high-throughput titration method that allows for the simultaneous titration of a high volume of samples in a single day. This approach involves infection of the samples with a Firefly luciferase tagged virus, transfer of the infected samples onto an appropriate permissive cell line, subsequent addition of luciferin, reading of plates in order to obtain luminescence readings, and finally the conversion from luminescence to viral titers. The assessment of cytotoxicity using a metabolic viability dye can be easily incorporated in the workflow in parallel and provide valuable information in the context of a drug screen. This technique provides a reliable, high-throughput method to determine viral titers as an alternative to a standard plaque assay.

This article presents a high-throughput luciferase expression-based method of titrating various RNA and DNA viruses using automated and manual liquid handlers.

Lusiferaz ifade eden rekombinant virüsler yüksek verimlilik Titrasyon

Standard plaque assays to determine infectious viral titers can be time consuming, are not amenable to a high volume of samples, and cannot be done with ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, several traits are typically characterized using molecular assays to aid in epidemiological studies. These traits include species identification, insecticide resistance, parasite infection status, and host preference. Since populations of the Anopheles gambiae complex are morphologically indistinguishable, a polymerase chain reaction (PCR) is traditionally used to identify species. Once the species is known, several downstream assays are routinely performed to elucidate further characteristics. For instance, mutations known as KDR in a para gene confer resistance against DDT and pyrethroid insecticides. Additionally, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) or Plasmodium parasite DNA detection PCR assays are used to detect parasites present in mosquito tissues. Lastly, a combination of PCR and restriction enzyme digests can be used to elucidate host preference (e.g., human vs. animal blood) by screening the mosquito bloodmeal for host-specific DNA. We have developed a multi-detection assay (MDA) that combines all of the aforementioned assays into a single multiplex reaction genotyping 33SNPs for 96 or 384 samples at a time. Because the MDA includes multiple markers for species, Plasmodium detection, and host blood identification, the likelihood of generating false positives or negatives is greatly reduced from previous assays that include only one marker per trait. This robust and simple assay can detect these key mosquito traits cost-effectively and in a fraction of the time of existing assays.

Malaria transmitting mosquitoes have a number of epidemiologically important characteristics that can only be detected using molecular techniques. Utilizing a MALDI-TOF based SNP genotyping platform, we developed an assay for simultaneously detecting multiple key traits (species, insecticide resistance, parasite infection and host choice) of malaria vectors.

Sıtma verici Sivrisinekler için bir çok algılama Deneyi

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for functional genomics studies. While most cloning strategies are simple to perform, they generally use multiple steps and can require several days to generate the ultimate constructs. The method presented here is based on DNA assembly and can produce fully functional CRISPR vectors in a single cloning reaction. Vector construction can also be pooled, further increasing the efficiency and utility of the process. A modification of the method is used to create CRISPR vectors with multiple gene targets. CRISPR vectors are then transformed into tomato hairy roots to generate transgenic materials with targeted DNA modifications. Hairy roots are a useful system for testing vector functionality as they are technically simple to generate and amenable to large-scale production. The methods presented here will have wide application as they can be used to generate a variety of CRISPR vectors and be used in a wide range of plant species.

Using DNA assembly, multiple CRISPR vectors can be constructed in parallel in a single cloning reaction, making the construction of large numbers of CRISPR vectors a simple task. Tomato hairy roots are an excellent model system to validate CRISPR vectors and generate mutant materials.

Domates Tüylü Roots Üretimi ile yüksek verim CRISPR Vektör İnşaat ve DNA Değişiklikler Karakterizasyonu

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for ...

Forward Genetic Screen Using Transgenic Calcium Reporter Aequorin to Identify Novel Targets in Calcium Signaling

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis of the screen is to generate a mutant population that can be screened with a phenotype of interest. EMS (ethyl methane sulfonate) is a commonly used alkylating agent for inducing random mutation in a classical forward genetic screen to identify multiple genes involved in any given process. Cytosolic calcium (Ca2+) elevation is a key early signaling pathway that is activated upon stress perception. However the identity of receptors, channels, pumps and transporters of Ca2+ is still elusive in many study systems. Aequorin is a cellular calcium reporter protein isolated from Aequorea victoria and stably expressed in Arabidopsis. Exploiting this, we designed a forward genetic screen in which we EMS-mutagenized the aequorin transgenic. The seeds from the mutant plants were collected (M1) and screening for the phenotype of interest was carried out in the segregating (M2) population. Using a 96-well high-throughput Ca2+ measurement protocol, several novel mutants can be identified that have a varying calcium response and are measured in real time. The mutants with the phenotype of interest are rescued and propagated till a homozygous mutant plant population is obtained. This protocol provides a method for forward genetic screens in Ca2+ reporter background and identify novel Ca2+ regulated targets.

A forward genetic screen based on Ca2+ elevation as a read-out leads to identification of genetic components involved in calcium dependent signaling pathways in plants.

İleri Genetik Ekran Kullanarak Transgenik Kalsiyum Reporter Aequorin Kalsiyum Sinyalyeni Hedefleri Belirlemek için

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis ...

High-Throughput Analysis of Non-Photochemical Quenching in Crops Using Pulse Amplitude Modulated Chlorophyll Fluorometry

Photosynthesis is not optimized in modern crop varieties, and therefore provides an opportunity for improvement. Speeding up the relaxation of non-photochemical quenching (NPQ) has proven to be an effective strategy to increase photosynthetic performance. However, the potential to breed for improved NPQ and a complete understanding of the genetic basis of NPQ relaxation is lacking due to limitations of oversampling and data collection from field-grown crop plants. Building on previous reports, we present a high-throughput assay for analysis of NPQ relaxation rates in Glycine max (soybean) using pulse amplitude modulated (PAM) chlorophyll fluorometry. Leaf disks are sampled from field-grown soybeans before transportation to a laboratory where NPQ relaxation is measured in a closed PAM-fluorometer. NPQ relaxation parameters are calculated by fitting a bi-exponential function to the measured NPQ values following a transition from high to low light. Using this method, it is possible to test hundreds of genotypes within a day. The procedure has the potential to screen mutant and diversity panels for variation in NPQ relaxation, and can therefore be applied to both fundamental and applied research questions.

The protocol introduces a high-throughput method for measuring the relaxation of non-photochemical quenching by pulse amplitude modulated chlorophyll fluorometry. The method is applied to field-grown Glycine max and can be adapted to other species to screen for genetic diversity or breeding populations.

Darbe Genliği Modülasyonlu Klorofil Florometrisi Kullanılarak Mahsullerde Fotokimyasal Olmayan Söndürmenin Yüksek Verimli Analizi

Photosynthesis is not optimized in modern crop varieties, and therefore provides an opportunity for improvement. Speeding up the relaxation of ...

Characterizing Mechanical Properties of Primary Cell Wall in Living Plant Organs Using Atomic Force Microscopy

The mechanical properties of the primary cell walls determine the direction and rate of plant cell growth and, therefore, the future size and shape of the plant. Many sophisticated techniques have been developed to measure these properties; however, atomic force microscopy (AFM) remains the most convenient for studying cell wall elasticity at the cellular level. One of the most important limitations of this technique has been that only superficial or isolated living cells can be studied. Here, the use of atomic force microscopy to investigate the mechanical properties of primary cell walls belonging to the internal tissues of a plant body is presented. This protocol describes measurements of the apparent Young&#39;s modulus of cell walls in roots, but the method can also be applied to other plant organs. The measurements are performed on vibratome-derived sections of plant material in a liquid cell, which allows (i) avoiding the use of plasmolyzing solutions or sample impregnation with wax or resin, (ii) making the experiments fast, and (iii) preventing dehydration of the sample. Both anticlinal and periclinal cell walls can be studied, depending on how the specimen was sectioned. Differences in the mechanical properties of different tissues can be investigated in a single section. The protocol describes the principles of study planning, issues with specimen preparation and measurements, as well as the method of selecting force-deformation curves to avoid the influence of topography on the obtained values of elastic modulus. The method is not limited by sample size but is sensitive to cell size (i.e., cells with a large lumen are difficult to examine).

Studies of cell wall biomechanics are essential for understanding plant growth and morphogenesis. The following protocol is proposed to investigate thin primary cell walls in the internal tissues of young plant organs using atomic force microscopy.

Canlı Bitki Organlarında Primer Hücre Duvarının Mekanik Özelliklerinin Atomik Kuvvet Mikroskobu Kullanılarak Karakterize Edilmesi

The mechanical properties of the primary cell walls determine the direction and rate of plant cell growth and, therefore, the future size and shape of the ...