فإن الكتاب أود أن أشكر الدكاترة. ون جيون لى ودانيال Kreisel (مدرسة الطب بجامعة واشنطن في سانت لويس) لمساعدتها في تدريب الجراحة. ويدعم RYL من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 DK068057 وصندوق أبحاث الرئيس من جامعة سانت لويس.

1. إعداد الخلية ملاحظات: 1) كاملة المتوسط ​​1640 القائمة على الثقافة الإعلامية وصفة (500 مل) ويشمل 435 مل RPMI 1640، 50 مل FBS الحرارة المعطل، 5 مل الأحماض الأمينية غير الأساسية، 5 مل البيروفات الصوديوم، 5 مل مضاد حيوي مضاد فطري؛ 2) مكان matrigel في 4 درجات مئوية يوم واحد قبل الحصاد الخلية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإنسان ATC خط الخلية THJ-11T تزرع 8 في 6 لوحات ثقافة جيدا وتحصد مرة واحدة 80-90٪ متموجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 200 x ج لمدة 4 دقائق في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وسائل الإعلام والخلايا resuspend في المتوسط ​​1640 وسائل الإعلام [2 مل / 6 لوحة جيدا]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ كمية صغيرة من تعليق الخلية، إضافة إلى حجم واحد من 0.4٪ التريبان الأزرق صبغ وتحديد كثافة الخلية باستخدام TC10 الآلي عداد الخليوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب حجم التعليق الخلية اللازمة للحصول على 5 × 10 5 خلية / الماوس أضعاف عدد الفئران عن طريق الحقن. </li></ol> ملاحظة: لضمان إعلان<html> مساواة تعليق خلية للحقن، وإعداد الخلايا كما لو كنت بالحقن ضعف عدد الفئران (على سبيل المثال إذا حقن الفئران 5، ثم إعداد تعليق خلية كما لو كنت حقن الفئران 10). <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حجم الحاجة من تعليق الخلية في أنبوب مخروطي 15 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 200 x ج لمدة 4 دقائق في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وسائل الإعلام والخلايا resuspend في المتوسط ​​1640 كاملة وسائل الاعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخلايا إلى أنبوب مل 1.6، إضافة 1 حجم matrigel وتخلط بلطف بواسطة pipetting ببطء داخل وخارج. </li></ol> ملاحظة: سوف تتلقى كل الماوس 10 ميكرولتر من تعليق / matrigel خلية كوكتيل. منذ 5 × 10 5 خلايا معلقة في 10 ميكرولتر حجم عن طريق الحقن وقد استخدمت بنجاح في الدراسات ATC مثلي السابقة 9-10، استخدمنا تلك المعلمات في هذا التقرير. <ol start="10" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع تعليق خلية على الجليد حتى جاهزة للاستخدام. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. إعداد ماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف المنطقة الجراحية، والذي يتضمن نطاق تشريح والمنطقة المحيطة بها، من خلال مسح جميع الأسطح مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مصابيح التدفئة / منصات الحيوانات حيث سيتم يتعافى من عملية جراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة 0.1 مل الكيتامين / زيلازين (كوكتيل المخدرات تتألف من الكيتامين 9 ملغ / مل وزيلازين 1mg/ml) لكل 10 غرام من وزن الجسم الغشاء البريتونى باستخدام 1 مل، 27G ½ &quot;السلين المحقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإعدادية الماوس لإجراء عملية جراحية: 1) حلاقة منطقة الرقبة من الماوس (من خط الفك السفلي إلى العلوي من عظمة القص وإلى الأسلحة)، 2) فرك منطقة العمليات الجراحية ثلاث مرات مع chorhexadine الساحات الشاش غارقة، 3) فرك النهائي فعلت مع بتدين الشاش غارقة، 4 ) بلطف تطبيق مرهم العين لمنع العينين من التجفيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص دواسة المنعكس لضمان مخدرا الماوس على نحو كاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان في الاستلقاء على ظهري حاجز حقل معقمة القابل للتصرف ضمن نطاق تشريح وتأمين الحيوانية في مكان مع شريط من القماش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدعك اليدين وجمعةثم وضع ingernails على القفازات الجراحية المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بطريقة عقيمة، حزمة الجراحة المفتوحة وترتيب الصكوك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الستارة العقيمة على الحيوان، وترك موقع الجراحية فقط عرضة للخطر. </li></ol> 3. الدخول جراحية لالغدة الدرقية وحقن الخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام العقيمة، مشرط القابل للتصرف، وجعل شق طولي 1 إلى 1.5 سم على طول خط الوسط من الحلق. </li></ol> ملاحظة: الانحراف عن خط الوسط يعقد أعمق القطع للوصول إلى القصبة الهوائية. إلى حد ما دقيقة شق خط الوسط يسمح لك لندف وقطع طريق الأنسجة الغشائية عقد الغدد اللعابية اليسار واليمين معا، ويقلل من فرصة من الخدش أو قطع الشرايين الكبيرة. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق الثانية في العضلات المحيطة حزام القصبة الهوائية ثم سحب الجانب الأيمن من عضلة قطعي إلى الجانب لفضح حق الغدة الدرقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المرقأة يمكن استخدامها في هذه المرحلة لعقد طبقة العضلاتجزء لسهولة الوصول إلى الغدة الدرقية (الشكل 1). </li></ol> ملاحظة: بدلا من ذلك، إذا الإجراء يقوم بها اثنان من موظفي العمليات الجراحية، قد ببساطة سيعقد طبقة العضلات مرة أخرى مع ملقط في حين يتم تسليم حقنة تعطى عن طريق الحقن جاهزة للجراح من قبل مساعدة الموظفين. <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء 10 ميكرولتر من تعليق خلية في الغدة الدرقية باستخدام حق 31G 5/16 &quot;حقنة الانسولين ثم إزالة بلطف إبرة. </li></ol> 4. إغلاق موقع الجراحة والإنعاش ماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبقة العضلات خياطة مع 6.0 مواد خياطة باستخدام إما نمط خياطة مستمرة أو متقطعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غرزة الجلد في نفس الشكل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع طبقة من مرهم مضاد حيوي الثلاثي مباشرة عبر موقع شق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمح حيوان لاسترداد في الاستلقاء على ظهري وسادة التدفئة الحارة. مرة واحدة الحيوان يمكن تحقيق الاستلقاء القصية دون مساعدة، ويمكن وضعها مرة أخرى مع الفئران الأخرى. </li></ol> &lt;فئة P = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. الرصد اللاحقة للعمليات الجراحية ومجموعة الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من موقع شق والصحة العامة للحيوان يوميا لمدة أسبوع بعد الجراحة، ثم تحقق مرة واحدة في الأسبوع. إذا كانت الغرز لا تزال على حالها بعد 14 يوما، تتم إزالتها. </li></ol> ملاحظة: يجب أن الحيوانات اظهار علامات تدهور صحة (مثل فقدان الوزن كبيرة، والشعر ضيع، مع ضيق التنفس) يتم التخلص والأنسجة التي تم جمعها. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد وصلت الفئران بعد الجراحة نقطة زمنية محددة سلفا، إدارة الكيتامين / زيلازين كما وصف أعلاه لرزين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي الحيوان intracardially والحصاد الغدة الدرقية / القصبة الهوائية والأنسجة الأخرى ذات الاهتمام (وليس وصفها بالتفصيل هنا). </li></ol>

<ol>
	<li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation:+advantages+and+disadvantages.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice.">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice.">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma.">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li><li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells.">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li><li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer.">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li><li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target.">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li><li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+Intervention+with+anti-BRAF+(V600E)+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer.">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer.">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

<html> في نموذجنا، أظهرت الحيوانات الغدة الدرقية ورم خبيث ورم والأمراض المرتبطة الضائقة دنف والجهاز التنفسي بنسبة 4 أسابيع بعد الحقن. كما هو الحال مع معظم النماذج الأخرى مثلي الاستفادة التسليم عن طريق الحقن من تعليق خلية، الحقن في الأنسجة المحيطة بها وبعد الحقن تسرب أن ينتشر ما وراء الهدف ممكنة. مع أن يقال، واحد غير معروف المحتملة التعرف ينتجها هذا الإجراء هو تأثير التعرض الهدف قبالة لالانبثاث أو مضاعفات غير مرض. هذا هو مصدر قلق عام مع معظم عمليات زرع xenographic، بغض النظر عن يجري التحقيق المرض. ومع ذلك، عواقب غير مقصودة من ورم خبيث يمكن التقليل بشكل كبير من خلال ضمان شطبة كامل من طرف الإبرة قد اخترقت الغشاء تتراكب بشكل مريح الغدة الدرقية وطرد ببطء تعليق الخلوية. إذا لوحظ تسرب أثناء أو بعد الحقن، قد يتم حذف تلك الحيوانات من الدراسة. معشوقة = &quot;jove_content&quot;&gt; ومن الضروري أن الحيوانات و perfused قبل حصادها الغدة الدرقية / القصبة الهوائية والأنسجة الأخرى. يتم الاحتفاظ فوائد هي ذات شقين، 1) يتم إزالة خلايا الدم الحمراء ولن تحدث فوضى في العينات النسيجية و2) مورفولوجيا الأنسجة وسلامة. وعلاوة على ذلك، مستأصل الغدة الدرقية / القصبة الهوائية التي لديها إما كتلة رمي تعلق أو مدفون في داخلها يجب أن تقطع بطريقة المعالم التشريحية يمكن تحديدها قبل أن يتم جزءا لا يتجزأ من لإعداد النسيجية. وهذا سوف يقلل بشكل كبير الوقت اللازم لإعداد العينة. في هذا التقرير وصفنا النمو المحلي وغزو المتقدمة ورم الغدة الدرقية بعد حقن مثلي من الخلايا ATC. ATC ورم خبيث قد يتم التحقيق من خلال تحليل التحضيرات النسيجية من الأنسجة الأخرى باستخدام البقع النسيجية القياسية، مثل الهيماتوكسيلين ويوزين، أو عن طريق استخدام الخلايا المناعية أو علامات علم الأمراض ذات الصلة. هذا النظام يمكن تطويرها من قبل زتعديل enetically خلايا سرطان الغدة الدرقية مع الصحفيين مضان بحيث التصوير الحي يمكن أن تستخدم لرصد الانبثاث وفعالية من العلاجات العلاجية.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RPMI 1640 cell culture media</td>
 <td>Mediatech</td>
 <td>10-041-CV</td>
 <td>Media and additives used depend on cell line</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TC10 Automated Cell Counter</td>
 <td>Bio-Rad</td>
 <td>145-0001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Matrigel</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>354234</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graefe Forceps, Serrated; Slight Curve, 4"</td>
 <td>Roboz</td>
 <td>RS-5135</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Disposable scalpel, No. 15</td>
 <td>Feather</td>
 <td>2975#15</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Olsen Hegar Needle Holder - 4 &frac12;" delicate serrated</td>
 <td>gSource</td>
 <td>gS 21.5400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-0 nylon black monofilament suture</td>
 <td>Surgical Specialties Corporation</td>
 <td>1279B</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heating Pad, reusable, 8" x 12"</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cloth tape, 1" X 10 yds</td>
 <td>Medline</td>
 <td>MIINON260101</td>
 <td>For restraining anesthetized mouse</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peanut Clipper/Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>8655</td>
 <td>For removing hair from surgical site</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td>
 <td>Penn Veterinary Supply</td>
 <td>VED1222</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Betadine</td>
 <td>Henry Schein Company</td>
 <td>6906727</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum ophthalmic ointment</td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 x 2 gauze, 12-ply</td>
 <td>Butler Animal Health Supply</td>
 <td>6936</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Field, Barrier, 18" x 26"</td>
 <td>Busse</td>
 <td>696</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Drapes (CSR Wrap)</td>
 <td>Cardinal Health</td>
 <td>AT 21 412</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G &frac12;" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>309623</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>31G 5/16" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>328438</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) solution</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triple antibiotic ointment</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

an orthotopic mouse model of anaplastic thyroid carcinoma

وقد أنشئت عدة أنواع من نماذج حيوانية من سرطان الغدة الدرقية الإنسان، بما في ذلك تحت الجلد طعم أجنبي وزرع مثلي من الخلايا السرطانية في الفئران العوز المناعي. كانت تحت الجلد نماذج طعم أجنبي قيمة لفحص ما قبل السريرية وتقييم العلاجات علاجية جديدة. هناك عدد من المزايا لاستخدام نموذج تحت الجلد؛ 1) السريع، 2) قابلة للتكرار، و3) إنشاء الورم، والنمو، واستجابة لعوامل علاجية يمكن رصدها عن طريق التفتيش البصري. ومع ذلك، أدلة قوية وتسليط الضوء على مجيء قصيرة من تحت الجلد طعم أجنبي نماذج 1-3. على سبيل المثال، والعلاجات الطبية مما يدل الخصائص العلاجية في نماذج طعم أجنبي تحت الجلد غالبا ما يكون لها تأثير ملحوظ على الأمراض التي تصيب البشر. المكروية للموقع من زرع أو حقن xenographic يكمن في قلب هذا الاختلاف. مثلي نماذج طعم أجنبي الورم توفير المزيد من المواالسياق gically ذات الصلة التي لدراسة المرض. مزايا زرع الخلايا المريضة أو الأنسجة في ما يعادلها الأصل التشريحية داخل الحيوان المضيف يتضمن موقع مناسب للتفاعل ورم المضيف، وتطوير الانبثاث الأمراض ذات الصلة والقدرة على دراسة تأثير مواقع محددة على العلاجات العلاجية الفحص. ولذلك، نماذج طعم أجنبي مثلي تؤوي قيمة أكثر بكثير السريرية لأنها تتكاثر بشكل وثيق الأمراض التي تصيب البشر. لهذه الأسباب، قد اتخذت عددا من الجماعات الاستفادة من نموذج سرطان الغدة الدرقية مثلي كأداة بحث 4-7. هنا، نحن تصف النهج الذي يؤسس نموذج مثلي لدراسة سرطان الغدة الدرقية كشمي (ATC)، والذي هو الغازية للغاية، وتقاوم العلاج، ومميت تقريبا في جميع المرضى الذين شخصت. وتعد الخلايا ATC مثقف وتعليق الخلوية فصلها في محلول يحتوي على مصفوفة الغشاء القاعدي. حجم صغير ببطء وينجected في حق الغدة الدرقية. يتم مراقبة المظهر العام وصحة الفئران لضمان الحد الأدنى من مضاعفات ما بعد الجراحة وقياس انتفاذ المرضية للسرطان. يتم التضحية الفئران في 4 أسابيع، ويتم جمع الأنسجة للتحليل النسيجي. يمكن أن تؤخذ الحيوانات في وقت لاحق نقاط الوقت لدراسة أكثر تقدم مسبقا من المرض. إنتاج هذا نموذج الفأر مثلي يؤسس منبرا أن يحقق هدفين: 1) زيادة فهمنا لعلم الأمراض ATC، و 2) شاشة العوامل العلاجية الحالية والمستقبلية للفعالية في مكافحة ATC.

اكتشفنا 19 أورام الغدة الدرقية الغازية من ما مجموعه 20 حقن الفئران بخلايا ATC بعد 4 أسابيع. في المثال هو موضح في الشكل 2A، الفئران تلقي حقنة مثلي من 5X10 5 خلايا ATC نمت في ظل ظروف المرفقة، يحمل تسلل كبيرة من الخلايا السرطانية في الغدة الدرقية بنسبة 4 أسابيع بعد الحقن. تم التحقق من طبيعة غزو الخلايا ATC مع سمة من الخلايا spindled وخلايا متوسطة إلى الحجم العملاق مع الاتهاب السيتوبلازم والنواة كبيرة من قبل الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E) تلطيخ. وعلى سبيل المقارنة، يظهر الغدة الدرقية والقصبة الهوائية من مراقبة الحيوانات غير المحقونة في الشكل 2B. بصيلات الحيوان uninjected عرض وثيقة، حتى الآن فضفاض وتكوين الجمعيات ويكون أساسا التشكل الجولة. ونظرا لصغر حجم الغدة الدرقية، واستخدام أسلوب التسليم عن طريق الحقن، قد تنشأ نتائج غير مقصودة. الشكل 3A يوضحالأكثر شيوعا لاحظ، وهو وضع كتلة الورم خارج، ولكن ليس تشمل، الغدة الدرقية. هذا هو أكثر من المحتمل بسبب اختراق الإبرة من خلال وخارج الغدة الدرقية عندما يتم طرد الخلايا. أحيانا، والفئران مع تقديم أي نمو الورم، سواء بشكل صارخ وتشريحيا، يتم الكشف عنها كما هو مبين في الشكل 3B. يمكن أن يكون سبب غياب التنمية الورم كشفها بواسطة طرد تعليق الخلية من موقع الحقن ونشرها في الأنسجة وتجاويف المجاورة. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. تعريض الغدة الدرقية. تسميات تشير إلى اليمين واليسار الغدد الدرقية المحيطة القصبة الهوائية. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. الفحص النسيجي من نمو الورم وفيكانت vasion بعد نجاح حقن الغدة الدرقية. عينات الأنسجة مقطوع على طول الطائرة الاكليلية. A) الصورة التي اتخذت في 200x من الماوس واظهار نمو الورم كبير مع خلايا spindled مميزة وخلايا متوسطة إلى الحجم العملاق مع الاتهاب السيتوبلازم والنواة كبيرة في الهيماتوكسيلين ويوزين ( H &amp; E) وصمة عار تو يدل على الآفة الأولية التي الخلايا السرطانية غزو الغدة الدرقية B) القصبة الهوائية والغدة الدرقية من مراقبة الحيوانات (الصورة التي اتخذت في 100X) تو، والأورام؛. S، العضلات الملساء؛ TR، القصبة الهوائية؛ خاصتك، الغدة الدرقية. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="الشكل (3)"/> الشكل 3. وكانت النتائج غير المقصودة للحقن مثلي. عينات الأنسجة مقطوع على طول الطائرة الاكليلية. A) نمو الورم الطرفية مع عدم وجود نمو واضح في thyroiد (السهم الأسود، الصورة التي اتخذت في 100X). ب) عدم الكشف عن الورم على الإجمالي (لا يظهر) أو النسيجية الفحص (الصورة التي اتخذت في 50X). خاصتك، الغدة الدرقية.

Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma at JoVE.com

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

يوصف جيل من نموذج الفأر مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي هنا. هذه التقنية توظف التنسيب الجراحية للكشمي خلايا سرطان الغدة الدرقية الإنسان في الغدة الدرقية من الفئران العوز المناعي، وبالتالي خلق بيئة أكثر سريريا ذات الصلة لدراسة تطور المرض وكذلك شاشة التدخلات العلاجية المبتكرة.

ماوس نموذج مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

an-orthotopic-mouse-model-of-anaplastic-thyroid-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

20.9K Views.  Saint Louis University School of Medicine. يوصف جيل من نموذج الفأر مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي هنا. هذه التقنية توظف التنسيب الجراحية للكشمي خلايا سرطان الغدة الدرقية الإنسان في الغدة الدرقية من الفئران العوز المناعي، وبالتالي خلق بيئة أكثر سريريا ذات الصلة لدراسة تطور المرض وكذلك شاشة التدخلات ال...

Video: An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

نموذج مثلي من سرطان المثانة الفئران

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the understanding of the mechanics of tumor invasion, and direct intracerebral inoculation of tumor provides the opportunity of observing the invasive process in a physiologically appropriate environment2. As far as human brain tumors are concerned, the orthotopic models currently available are established either by stereotaxic injection of cell suspensions or implantation of a solid piece of tumor through a complicated craniotomy procedure3. In our technique we harvest cells from tissue culture to create a cell suspension used to implant directly into the brain. The duration of the surgery is approximately 30 minutes, and as the mouse needs to be in a constant surgical plane, an injectable anesthetic is used. The mouse is placed in a stereotaxic jig made by Stoetling (figure 1). After the surgical area is cleaned and prepared, an incision is made; and the bregma is located to determine the location of the craniotomy. The location of the craniotomy is 2 mm to the right and 1 mm rostral to the bregma. The depth is 3 mm from the surface of the skull, and cells are injected at a rate of 2 &mu;l every 2 minutes. The skin is sutured with 5-0 PDS, and the mouse is allowed to wake up on a heating pad. From our experience, depending on the cell line, treatment can take place from 7-10 days after surgery. Drug delivery is dependent on the drug composition. For radiation treatment the mice are anesthetized, and put into a custom made jig. Lead covers the mouse's body and exposes only the brain of the mouse. The study of tumorigenesis and the evaluation of new therapies for GBM require accurate and reproducible brain tumor animal models. Thus we use this orthotopic brain model to study the interaction of the microenvironment of the brain and the tumor, to test the effectiveness of different therapeutic agents with and without radiation.

The purpose of this article is to describe the use of an orthotopic glioblastoma model for chemoradiation studies. This article will go though cell processing, implanting, and radiotherapy of the mouse using an intracranial model.

العلاج الإشعاعي مجموعة في نموذج الفأر Orthotopic استئصال ورم من الدماغ

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

نموذج مثلي إضاءة الحيوية من سرطان البنكرياس التقدم

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

على الفئران نموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية الانبثاث

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

ومثلي الأشكال ورم أرومي نموذج الفأر القيود الحفاظ على الدماغ متني البدنية ومناسبة لحيوي داخلي ثنائي الفوتون المجهري

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; الفرخ مشيمائي غشاء (CAM) الفحص بمثابة طعم أجنبي نموذج فعال لسرطان الكبد

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.