저자는 박사 부부에게 감사의 말씀을 전합니다. 수술 교육에서의 도움 Wenjun 리와 다니엘 Kreisel (세인트 루이스의 워싱턴 대학 의과 대학). RYL은 건강 보조금 R01 DK068057 국립 연구소와 세인트 루이스 대학의 대통령의 연구 기금에 의해 지원됩니다.

1. 세포의 준비 주 : 2) 장소 리겔 1) 전체 RPMI 1640 기반 문화 미디어 레시피 (500 ML) 435 ML RPMI 1640, 50 ML 열 비활성화 된 FBS 5 ML 비 필수 아미노산, 5 ML 나트륨 피루 베이트, 5 ML 항생제 항진균를 포함 4 ° C에서 세포 수확 하루 전에. <ol><li> 인간 ATC 세포주 THJ-11T 8 6 잘 배양 접시에서 자란 80 ~ 90 %의 합류 후 수확하고 있습니다. </li><li> 실온에서 4 분 200 XG에서 원심 분리하여 펠렛 세포. </li><li> RPMI 1640 미디어 [2 ㎖ / 6 잘 플레이트]에서 미디어를 Resuspend 세포를 대기음. </li><li> 0.4 % 판 블루 염색 하나의 볼륨에 추가하고 TC10 자동 셀 카운터를 사용하여 세포 밀도를 결정, 세포 현탁액의 작은 양을 가지고. </li><li> 주입 5 × 10 5 세포 / 마우스 횟수에 마우스를 얻기 위해 필요한 세포 현탁액의 볼륨을 계산합니다. </li></ol> 참고 : 광고를 보장하기 위해<html> 당신이 마우스의 더블 번호 (예 : 5 마우스를 주입하는 경우 10 쥐를 주입하는 것처럼, 그 세포 현탁액을 준비) 주입하는 것처럼 주입 세포 현탁액을 동일시 세포를 준비합니다. <ol start="6"><li> 15 ML 원뿔 튜브에 세포 현탁액의 필요한 양을 전송합니다. </li><li> 실온에서 4 분 200 XG에서 원심 분리하여 펠렛 세포. </li><li> 전체 RPMI 1640 미디어 매체를 Resuspend 세포를 대기음. </li><li> 1.6 ML 튜브에 세포를 전송, 마트 리젤의 1 볼륨을 추가하고 천천히에 피펫 스에 의해 부드럽게 섞는다. </li></ol> 참고 : 각 마우스 세포 현탁액 / 마트 리젤 칵테일의 10 μl를 받게됩니다. 10 μL 주사 양에 떠있는 5 × 10 5 세포가 성공적으로 이전 ATC 동소 연구 9-10에서 사용하고 있기 때문에, 우리는이 보고서에서 이러한 매개 변수를 사용했습니다. <ol start="10"><li> 사용할 준비가 될 때까지 얼음에 세포 현탁액을 놓습니다. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. 마우스 제조 <ol><li> 70 % 에탄올로 모든 표면을 닦아 해부 범위와 주변 지역을 포함하는 외과 영역을 청소합니다. </li><li> 동물이 수술에서 회복 될 가열 램프 / 패드의 전원을 켭니다. </li><li> 1 ML, 27G ½ &quot;투베르쿨린 주사기를 사용하여 10g의 체중 복강 당 0.1 ML 케타민을 / xylazine (케타민 9 MG / ML 및 xylazine 1mg/ml의 구성된 약물 칵테일)를 관리합니다. </li><li> 수술 준비 마우스 : 1) 베타 딘 적신 거즈, 4를 수행 최종 스크럽) chorhexadine 젖은 거즈 사각형, 3으로 수술 영역을 세 번 문질러 마우스의 목 영역 (턱 선에서 흉골과 팔을 밖으로의 상단까지), 2) 면도 ) 부드럽게 건조 눈을 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 마우스가 적절하게 침착되어 있는지 확인하기 위해 반사 페달을 확인합니다. </li><li> 해부 범위에 처분 할 수있는 메마른 필드 장벽 지느러미 드러 누움에 동물을 배치하고 피복 테이프와 장소에서 동물을 고정합니다. </li><li> 스크럽 손과 Fingernails는 불임 수술 장갑에 넣어. </li><li> 멸균 방식으로, 개복 수술을 포장하고 악기를 정렬합니다. </li><li> 단지 수술 부위가 노출 떠나, 동물에 무균 드레이프를 놓습니다. </li></ol> 3. 갑상선 세포 주입 수술 액세스 <ol><li> 멸균 일회용 메스를 사용하여 목의 정중선을 따라 1에 1.5 cm 세로 절개를합니다. </li></ol> 참고 : 정중선에서 편차가 기관에 액세스 할 깊은 절단 복잡. 매우 정확한 중간 선 절개는 당신이 함께 왼쪽과 오른쪽 침샘을 들고 막 조직을 애타게 절단 할 수 있으며 큰 동맥을 새김 눈 또는 단절의 가능성을 줄일 수 있습니다. <ol start="2"><li> 기관을 둘러싼 스트랩 근육에 두 번째 절개를 다음 오른쪽 갑상선을 노출 옆에 절개 근육의 오른쪽을 당깁니다. </li><li> Hemostats는 근육 층을 보유하는이 시점에서 사용할 수 있습니다갑상선에 쉽게 접근 할 수있다 (그림 1)에 대한 부분입니다. </li></ol> 참고 : 절차는 두 가지 수술 직원에 의해 수행하는 경우 준비 주사 주사기 지원 직원 외과 의사 전달되는 동안 또는, 근육 층이 단순히 집게로 다시 개최 할 수있다. <ol start="4"><li> 천천히 조심스럽게 바늘을 제거 31G 5 / 16 &quot;인슐린 주사기를 사용하여 오른쪽 갑상선에 세포 현탁액의 10 μl를 주입. </li></ol> 4. 외과 사이트 및 마우스 복구 폐쇄 <ol><li> 하나를 연속 또는 단속 봉합 스타일을 사용하여 6.0 봉합 재료와 봉합 근육 층. </li><li> 같은 방식으로 스티치 피부. </li><li> 직접 절개 사이트를 통해 트리플 항생제 연고의 레이어를 적용합니다. </li><li> 따뜻한 가열 패드에 지느러미 드러 누움에 복구하는 동물을 허용합니다. 동물의 도움없이 흉골 드러 누움를 얻을 수 있습니다되면, 다른 마우스와 함께 다시 배치 할 수 있습니다. </li></ol> &lt;P 클래스 = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. 수술 후 모니터링 및 조직 컬렉션 <ol><li> 수술 후 일주일 동안 매일 절개 사이트와 동물의 전반적인 건강을 확인 후, 일주일에 한 번 확인합니다. 봉합이 14 일 후에 그대로 있다면, 그들은 제거됩니다. </li></ol> 참고 : 감소 상태 (예를 들어, 상당한 체중 감소, 초라한 머리, 숨소리)의 흔적을 전시 동물은 안락사해야하며, 조직을 수집. <ol start="2"><li> 일단 마우스는 xylazine / 케타민 진정으로 위의 설명과 같이 관리, 소정의 수술 시간이 지점에 도달했습니다. </li><li> intracardially 동물을 붓는다 수확 갑상선 / 기관과 관심의 다른 조직 (여기에서는 자세히 설명하지 않음). </li></ol>

<ol>
	<li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation:+advantages+and+disadvantages.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice.">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice.">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma.">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li><li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells.">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li><li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer.">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li><li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target.">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li><li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+Intervention+with+anti-BRAF+(V600E)+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer.">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer.">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li></ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

우리의 모델에서, 동물 4 주 후 주입 도덕의 타락과 호흡 곤란 관련 갑상선 종양의 전이 및 질병을 보여 주었다. 대부분의 다른 동소 모델은 대상을 넘어 퍼져 주위 조직 및 사후 분사 누설에 세포 현탁액 주사 배송, 주사를 이용한 경우와 마찬가지로이 가능합니다. 그 말했다되는,이 절차에 의해 생성 한 인식 할 가능성이 알려지지 않은이 아닌 질병 관련 전이 또는 합병증 파워 노출의 효과입니다. 이 관계없이 질병이 조사되는 대부분의 xenographic 이식과 일반적인 관심사입니다. 그럼에도 불구하고, 전이의 의도하지 않은 결과는 상당히 아늑 갑상선를 오버레이 막 침투 바늘 끝의 전체 베벨을 보장하고 천천히 세포 현탁액을 추방함으로써 최소화 할 수있다. 누설이 주입 도중 또는 이후 관찰되는 경우, 해당 동물 연구에서 생략 할 수있다. <p c아가씨 = &quot;jove_content&quot;&gt; 그것은 동물이 갑상선 / 기관 및 기타 조직을 수확하기 전에 관류하는 것이 필수적이다. 혜택은) 두 배, 1아르 적혈구)가 제거되고 조직 학적 표본과 2를 혼란하지 않습니다 조직 형태와 무결성은 유지됩니다. 또한, 절제된 갑상선 / 기관 연결된 두 종 양성 질량을 가지고 있거나 그것을 해부학 적 랜드 마크는 조직 학적 준비에 포함되기 전에 식별 할 수있는 방식으로 절단해야 내에 안치되는. 이 극적으로 시료 준비 시간을 줄일 수 있습니다. 이 보고서에서 우리는 ATC 세포의 동소 주입 다음과 같은 고급 갑상선 종양 지역의 성장과 침략을 설명합니다. ATC 전이는 같은 헤 마톡 실린과 에오신 표준 조직 학적 얼룩을 사용하여 다른 조직의 조직 학적 제제를 분석하여, 또는 면역 세포 또는 병리 관련 마커를 이용하여 조사 할 수 있습니다. 이 시스템은 또한 G에 의해 개발 될 수있다라이브 영상이 전이 치료 치료의 효과를 모니터링하는 데 사용할 수 있도록 enetically 형광 기자와 갑상선 암 세포를 수정.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RPMI 1640 cell culture media</td>
 <td>Mediatech</td>
 <td>10-041-CV</td>
 <td>Media and additives used depend on cell line</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TC10 Automated Cell Counter</td>
 <td>Bio-Rad</td>
 <td>145-0001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Matrigel</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>354234</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graefe Forceps, Serrated; Slight Curve, 4"</td>
 <td>Roboz</td>
 <td>RS-5135</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Disposable scalpel, No. 15</td>
 <td>Feather</td>
 <td>2975#15</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Olsen Hegar Needle Holder - 4 &frac12;" delicate serrated</td>
 <td>gSource</td>
 <td>gS 21.5400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-0 nylon black monofilament suture</td>
 <td>Surgical Specialties Corporation</td>
 <td>1279B</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heating Pad, reusable, 8" x 12"</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cloth tape, 1" X 10 yds</td>
 <td>Medline</td>
 <td>MIINON260101</td>
 <td>For restraining anesthetized mouse</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peanut Clipper/Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>8655</td>
 <td>For removing hair from surgical site</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td>
 <td>Penn Veterinary Supply</td>
 <td>VED1222</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Betadine</td>
 <td>Henry Schein Company</td>
 <td>6906727</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum ophthalmic ointment</td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 x 2 gauze, 12-ply</td>
 <td>Butler Animal Health Supply</td>
 <td>6936</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Field, Barrier, 18" x 26"</td>
 <td>Busse</td>
 <td>696</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Drapes (CSR Wrap)</td>
 <td>Cardinal Health</td>
 <td>AT 21 412</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G &frac12;" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>309623</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>31G 5/16" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>328438</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) solution</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triple antibiotic ointment</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

an orthotopic mouse model of anaplastic thyroid carcinoma

인간의 갑상선 암 동물 모델의 여러 종류의 피하 이종 이식과 면역 결핍 생쥐에 암세포의 동소 이식 등 설립되었다. 피하 이종 이식 모델은 임상 검사 및 새로운 치료 치료의 평가에 가치가 있었다. 피하 모델을 사용하면 많은 장점이 있습니다, 1) 신속, 2) 재현성, 3) 종양의 설립, 성장, 요원 및 방사선 치료에 대한 응답은 육안 검사로 모니터링 할 수 있습니다. 그러나 실질적인 증거가 1-3 피하 이종 이식 모델의 짧은 오심에 빛을 발산하고있다. 예를 들어, 피하 이종 이식 모델에서 치료 속성을 보여 의약 치료는 종종 인간의 질병에 주목할만한 영향을주지 않습니다. xenographic 이식하거나 주사 부위의 미세이 차이점의 중심에 자리 잡고 있습니다. 동소 종양 이종 이식 모델은 더 biolo을 제공합니다질병을 연구하기에 gically 관련 상황. 호스트 동물 내에서 해부학 원 상당에 병에 걸린 세포 나 조직을 이식의 장점은 적절한 종양 호스트 상호 작용 사이트, 질병 관련 전이의 개발과 임상 치료 요법에 대한 사이트 별 영향을 조사하는 기능이 포함되어 있습니다. 그들은 밀접하게 인간의 질병을 재현하기 때문에 따라서, 동소 이종 이식 모델은 훨씬 더 임상 적 가치를 항구. 이러한 이유로, 그룹의 수는 연구 도구 4-7로 동소 갑상선 암 모델의 장점을 가지고있다. 여기, 우리는 매우 침략 퇴행성 갑상선 암 (ATC)의 연구 동소 모델을 수립 치료를 저항하고, 모든 진단 환자의 거의 치명적인 방법을 설명합니다. 배양 ATC 세포 기저막 행렬을 포함하는 용액에 해리 세포 현탁액으로 준비가되어 있습니다. 작은 볼륨이 천천히 주사입니다오른쪽 갑상선에 ected. 마우스의 전체적인 모양과 건강은 최소한의 수술 후 합병증을 보장하고 암의 병리학 투과도를 측정하기 위해 모니터링됩니다. 생쥐을 4 주에 희생되고, 조직은 조직 학적 분석을 위해 수집됩니다. 동물 질병의 더 많은 사전의 진행을 검토하기 위해 나중에 시간이 지점에서 수행 할 수 있습니다. 우리 ATC 병리의 이해와 효능 2) 화면의 현재와 미래의 치료제 ATC 퇴치에 추가 1)이 동소 마우스 모델의 생산은 두 가지 목적을 수행하는 플랫폼을 설정합니다.

우리는 4 주 후에 ATC 세포로 주입 20 생쥐의 총 19 침습 갑상선 종양을 발견했습니다. 그림 2A에 표시된 예에서, 첨부 된 조건 하에서 재배 5X10 5 ATC 세포의 동소 주입받은 쥐는 4 주 후 주입하여 갑상선에 암 세포의 중요한 침투를 나타냅니다. 산성 세포질과 큰 핵을 가진 특성 spindled 세포와 중간에 거대한 크기의 세포 침입 ATC 세포의 본질은 헤 마톡 실린과 에오신 (H &amp; E) 염색에 의해 확인되었다. 비교를 위해, 비 주입 제어 동물에서 갑상선과 기관이 그림 2B에 표시됩니다. uninjected 동물의 모낭은 가까운, 그러나 느슨한 연결을 표시하고 기본적으로 둥근 형태가있다. 주사 배달 갑상선과 사용의 작은 크기로 인해, 의도하지 않은 결과가 발생할 수 있습니다. 그림 3A는 보여줍니다가장 일반적으로 관찰, 이는 외부의 종양 질량의 개발이다, 그러나 갑상선을 포괄하지. 세포가 추방되는 때까지 및 갑상선 이외의 바늘 침투 가능성보다 더 때문입니다. 그림 3b에서와 같이 가끔, 아니 종양의 성장을 제시 생쥐는 모두 조잡한 및 조직 학적으로 감지됩니다. 감지 종양 개발의 부재는 주변 조직과 공동으로 주사 부위 및 보급의 세포 현탁액의 추방으로 인해 발생할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="그림 1"/> 그림 1. 갑상선을 노출. 레이블은기도를 측면에서는 왼쪽과 오른쪽 갑상선을 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="그림 2"/> 그림 2. 종양의 성장과 조직 학적 검사성공적으로 갑상선 주사 후 vasion. 조직 표본은 관상면을 따라 단면이었다. 산성 세포질 헤 마톡 실린과 에오신 큰 핵 (와 특성 spindled 세포와 중간에 거대한 크기의 세포와 상당한 종양의 성장을 전시 마우스 200X에서 찍은) 이미지 H &amp; E)는 얼룩 화는 종양 세포가 갑상선을 침범되는 기본 병변을 나타냅니다 B) 기관지 및 제어 동물에서 갑상선 (100X에서 찍은 이미지) 화, 종양,... S, 평활근, 그럴 필요,기도, 아버지의, 갑상선. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="그림 3"/> 그림 3. 동소 주입 의도하지 않은 결과. 조직 표본은 관상면을 따라 단면이었다.) 주변 종양의 성장 thyroi에 분명없는 성장D (검은 화살표, 100X에서 찍은 이미지). B) 총시 종양 검출의 부족 (표시되지 않음) 또는 조직 학적 검사 (50X에서 찍은 이미지). 아버지의, 갑상선.

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An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

퇴행성 갑상선 암의 동소 마우스 모델의 생성은 여기에 설명되어 있습니다. 이 기술은 따라서 질병의 진행뿐만 아니라 화면 혁신적인 치료 개입을 연구하는 많은 임상 관련 설정을 생성, 면역 결핍 쥐의 갑상선에 인간의 퇴행성 갑상선 암 세포의 수술 위치를 사용합니다.

역 형성 갑상선 암의 동소 마우스 모델

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

an-orthotopic-mouse-model-of-anaplastic-thyroid-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

20.9K 조회수.  Saint Louis University School of Medicine. 퇴행성 갑상선 암의 동소 마우스 모델의 생성은 여기에 설명되어 있습니다. 이 기술은 따라서 질병의 진행뿐만 아니라 화면 혁신적인 치료 개입을 연구하는 많은 임상 관련 설정을 생성, 면역 결핍 쥐의 갑상선에 인간의 퇴행성 갑상선 암 세포의 수술 위치를 사용합니다.

비디오: An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Murine 방광 암의 Orthotopic 모델

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

연구

의학

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

구강 편평 세포 암종의 Orthotopic 마우스 모델에서 종양 세포 침략의 다중 광자 이미징

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the understanding of the mechanics of tumor invasion, and direct intracerebral inoculation of tumor provides the opportunity of observing the invasive process in a physiologically appropriate environment2. As far as human brain tumors are concerned, the orthotopic models currently available are established either by stereotaxic injection of cell suspensions or implantation of a solid piece of tumor through a complicated craniotomy procedure3. In our technique we harvest cells from tissue culture to create a cell suspension used to implant directly into the brain. The duration of the surgery is approximately 30 minutes, and as the mouse needs to be in a constant surgical plane, an injectable anesthetic is used. The mouse is placed in a stereotaxic jig made by Stoetling (figure 1). After the surgical area is cleaned and prepared, an incision is made; and the bregma is located to determine the location of the craniotomy. The location of the craniotomy is 2 mm to the right and 1 mm rostral to the bregma. The depth is 3 mm from the surface of the skull, and cells are injected at a rate of 2 &mu;l every 2 minutes. The skin is sutured with 5-0 PDS, and the mouse is allowed to wake up on a heating pad. From our experience, depending on the cell line, treatment can take place from 7-10 days after surgery. Drug delivery is dependent on the drug composition. For radiation treatment the mice are anesthetized, and put into a custom made jig. Lead covers the mouse's body and exposes only the brain of the mouse. The study of tumorigenesis and the evaluation of new therapies for GBM require accurate and reproducible brain tumor animal models. Thus we use this orthotopic brain model to study the interaction of the microenvironment of the brain and the tumor, to test the effectiveness of different therapeutic agents with and without radiation.

The purpose of this article is to describe the use of an orthotopic glioblastoma model for chemoradiation studies. This article will go though cell processing, implanting, and radiotherapy of the mouse using an intracranial model.

Orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

Orthotopic 방광 종양 모델 및 Intravesical saRNA 트리 트먼트의 평가

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

유전자 전달 연구 동소 방광암 모델

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

췌장암의 진행 발광 동소 모델

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

인간의 전립선 암 전이의 동소 쥐과 모델

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

<em&gt; 비켜에서</em간세포 암의 효율적인 이종 이식 모델로&gt; 병아리 융모 막 (CAM) 분석

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.