Gli autori desiderano ringraziare Drs. Wenjun Li e Daniel Kreisel (Washington University School of Medicine di St. Louis) per la loro assistenza nella formazione chirurgia. RYL è supportato dal National Institutes of Health di Grant R01 DK068057 e Fondo di ricerca del Presidente della Saint Louis University.

1. Preparazione delle cellule Note: 1) completo RPMI 1640 basata ricetta supporti cultura (500 ml) comprende 435 ml di RPMI 1640, 50 ml di FBS inattivato al calore, 5 ml aminoacidi non essenziali, 5 ml di piruvato di sodio, 5 ml di antibiotico-antimicotico; 2) posto matrigel a 4 ° C un giorno prima della raccolta delle cellule. <ol><li> Linea cellulare umana THJ ATC-11T 8 sono coltivati ​​in 6 piastre di coltura e una volta raccolte e 80-90% confluenti. </li><li> Cellule pellet per centrifugazione a 200 xg per 4 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Aspirare media e risospendere le cellule in RPMI 1640 supporti [2 ml / 6 pozzetti]. </li><li> Prendete un piccolo volume di sospensione cellulare, aggiungerlo a un volume di 0,4% tripano colorante blu e determinare la densità delle cellule utilizzando TC10 Automated Cella contatore. </li><li> Calcolare il volume di sospensione cellulare necessaria per ottenere 5 x 10 5 cellule / topo volte il numero topi iniezione. </li></ol> Nota: Per garantire annuncio<html> equiparare sospensione cellulare iniettabile, preparare le cellule come se si inietta il doppio del numero di topi (ad esempio, se l&#39;iniezione di 5 topi, quindi preparare sospensione cellulare come se si stesse iniettando 10 topi). <ol start="6"><li> Trasferire volume necessario di sospensione cellulare in un tubo da 15 ml. </li><li> Cellule pellet per centrifugazione a 200 xg per 4 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Aspirare media e risospendere le cellule in RPMI 1640 supporti completi. </li><li> Trasferire le cellule in una provetta da 1,6 ml, aggiungere 1 volume di matrigel e mescolare delicatamente con pipetta lentamente dentro e fuori. </li></ol> Nota: ogni topo riceverà 10 ml di sospensione / matrigel cocktail cella. Dal 5 x 10 5 cellule sospese in un ml di volume iniettabile 10 sono stati utilizzati con successo in precedenti studi ATC ortotopici 9-10, abbiamo utilizzato i parametri in questo rapporto. <ol start="10"><li> Posizionare sospensione cellulare in ghiaccio fino al momento dell&#39;uso. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. Preparazione del mouse <ol><li> Pulire la zona chirurgica, che include l&#39;ambito dissezione e dintorni, strofinando tutte le superfici con il 70% di etanolo. </li><li> Accendere lampade di riscaldamento / pad in cui gli animali saranno sottoposti a chirurgia. </li><li> Somministrare 0,1 ml di ketamina / xylazina (cocktail di farmaci, comprendente ketamina 9 mg / ml e xylazina 1mg/ml) per 10 g di peso corporeo per via intraperitoneale con un 1 ml, 27G ½ &quot;tubercolina siringa. </li><li> Prep del mouse per la chirurgia: 1) la barba regione del collo del topo (dalla linea della mascella per cima dello sterno e fuori a braccia), 2) scrub area chirurgica tre volte con chorhexadine imbevuti quadrati di garza, 3) scrub finale fatto con betadine garza imbevuta, 4 ) applicare delicatamente pomate oftalmiche per evitare idratazione degli occhi. </li><li> Controllare pedale riflesso per garantire il mouse sia adeguatamente sedato. </li><li> Mettere animale in decubito dorsale su una barriera monouso campo sterile nell&#39;ambito di applicazione dissezione e fissare l&#39;animale in posizione con nastro di stoffa. </li><li> Scrubs mani ed fingernails poi mettere su guanti chirurgici sterili. </li><li> In modo sterile, chirurgia aperta imballare e organizzare strumenti. </li><li> Posizionare telino sterile su animali, lasciando solo sito chirurgico esposto. </li></ol> 3. Chirurgico accesso al Tiroide e Cell iniezione <ol><li> Usando una sterile, monouso bisturi, fare un 1 a 1,5 centimetri incisione longitudinale lungo la linea mediana della gola. </li></ol> Nota: La deviazione dalla linea mediana complica profondo taglio per accedere alla trachea. Abbastanza precisa incisione mediana permette di prendere in giro e tagliare il tessuto membranoso tenendo ghiandole salivari sinistro e destro insieme e riduce il rischio di intaccare o troncare grandi arterie. <ol start="2"><li> Eseguire una seconda incisione in muscoli cinghia circondano la trachea poi tirare il lato destro del muscolo incisa a lato per esporre destra ghiandola tiroidea. </li><li> Hemostats possono essere usati a questo punto per trattenere lo strato muscolare unaparte per un facile accesso alla ghiandola tiroidea (Figura 1). </li></ol> Nota: In alternativa, se procedura eseguita da due staff chirurgico, lo strato muscolare può essere semplicemente trattenuto con una pinza mentre una siringa iniettabile pronta viene consegnato al chirurgo da parte del personale di assistenza. <ol start="4"><li> Iniettare lentamente 10 ml di sospensione cellulare in destra ghiandola tiroidea utilizzando un 31G 5/16 &quot;siringa insulina quindi rimuovere delicatamente ago. </li></ol> 4. Chiusura del sito chirurgico e di recupero del mouse <ol><li> Strato muscolare sutura con 6.0 materiale di sutura utilizzando uno stile di sutura continuo o interrotto. </li><li> Stitch la pelle nello stesso modo. </li><li> Applicare uno strato di triplo pomata antibiotica direttamente sul sito di incisione. </li><li> Consentire all&#39;animale di riprendersi in decubito dorsale sul caldo piastra elettrica. Una volta che animale può raggiungere decubito sternale senza assistenza, può essere riposto con altri topi. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Monitoraggio post-operatorio e Collezione Tissue <ol><li> Controllare il sito di incisione e la salute generale dell&#39;animale al giorno per una settimana dopo l&#39;intervento, quindi controllare una volta alla settimana. Se i punti di sutura sono ancora intatti dopo 14 giorni, vengono rimossi. </li></ol> Nota: Gli animali che presentano segni di declino della salute (ad esempio, la perdita di peso notevole, capelli arruffati, respiro affannoso) devono essere eutanasia e tessuti raccolti. <ol start="2"><li> Una volta che i topi hanno raggiunto un predeterminato post-operatorio time-point, amministrare ketamina / xylazina come descritto sopra per sedare. </li><li> Perfusione intracardiaca animali e il raccolto della tiroide / trachea e altri tessuti di interesse (non descritto in dettaglio qui). </li></ol>

<ol>
	<li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation:+advantages+and+disadvantages.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice.">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice.">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma.">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li><li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells.">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li><li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer.">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li><li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target.">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li><li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+Intervention+with+anti-BRAF+(V600E)+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer.">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer.">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Nel nostro modello, gli animali hanno dimostrato tiroide metastasi tumorali e malattia legate distress respiratorio cachessia e dopo 4 settimane dopo l&#39;iniezione. Come con la maggior parte degli altri modelli ortotopici utilizzando consegna iniettabile di una sospensione cellulare, l&#39;iniezione nei tessuti circostanti e di dispersione post-iniezione che si diffonde al di là del bersaglio sono possibili. Con questo detto, uno sconosciuto potenziale riconoscibile prodotto da questa procedura è l&#39;effetto di fuori esposizione obiettivo di metastasi non relative malattie o complicazioni. Questo è un problema generale con la maggior parte trapianti xenographic, indipendentemente dalla malattia indagato. Tuttavia, le conseguenze non intenzionali di metastasi possono essere minimizzati in modo significativo, garantendo l&#39;intero smussatura del ago è penetrato la membrana perfettamente sovrapponendo la ghiandola tiroide e lentamente espellendo la sospensione cellulare. Se si osservano perdite durante o dopo l&#39;iniezione, gli animali possono essere omesse dallo studio. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; È essenziale che gli animali sono perfusi precedenti il ​​raccolto della tiroide / trachea e altri tessuti. I vantaggi sono duplici: 1) i globuli rossi vengono eliminati e non ingombrare campioni istologici e 2) la morfologia dei tessuti e l&#39;integrità sono conservati. Inoltre, resezione della tiroide / trachea che hanno o una massa tumorale collegato o sono sepolti all&#39;interno di esso deve essere tagliato in modo che punti di riferimento anatomici possono essere identificati prima di essere incorporato per la preparazione istologica. Ciò consentirà di ridurre drasticamente il tempo di preparazione dei campioni. In questo rapporto descriviamo crescita locale e l&#39;invasione di tumore della tiroide avanzato dopo iniezione ortotopico di cellule ATC. ATC metastasi può essere studiato analizzando preparati istologici di altri tessuti utilizzando macchie istologiche standard, come ematossilina ed eosina, o mediante immunoistochimica utilizzando marcatori cellula o patologia pertinenti. Questo sistema può essere ulteriormente sviluppato genetically modificando le cellule del cancro della tiroide con i giornalisti di fluorescenza in modo che l&#39;imaging dal vivo può essere utilizzato per monitorare le metastasi e l&#39;efficacia dei trattamenti terapeutici.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RPMI 1640 cell culture media</td>
 <td>Mediatech</td>
 <td>10-041-CV</td>
 <td>Media and additives used depend on cell line</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TC10 Automated Cell Counter</td>
 <td>Bio-Rad</td>
 <td>145-0001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Matrigel</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>354234</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graefe Forceps, Serrated; Slight Curve, 4"</td>
 <td>Roboz</td>
 <td>RS-5135</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Disposable scalpel, No. 15</td>
 <td>Feather</td>
 <td>2975#15</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Olsen Hegar Needle Holder - 4 &frac12;" delicate serrated</td>
 <td>gSource</td>
 <td>gS 21.5400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-0 nylon black monofilament suture</td>
 <td>Surgical Specialties Corporation</td>
 <td>1279B</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heating Pad, reusable, 8" x 12"</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cloth tape, 1" X 10 yds</td>
 <td>Medline</td>
 <td>MIINON260101</td>
 <td>For restraining anesthetized mouse</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peanut Clipper/Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>8655</td>
 <td>For removing hair from surgical site</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td>
 <td>Penn Veterinary Supply</td>
 <td>VED1222</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Betadine</td>
 <td>Henry Schein Company</td>
 <td>6906727</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum ophthalmic ointment</td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 x 2 gauze, 12-ply</td>
 <td>Butler Animal Health Supply</td>
 <td>6936</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Field, Barrier, 18" x 26"</td>
 <td>Busse</td>
 <td>696</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Drapes (CSR Wrap)</td>
 <td>Cardinal Health</td>
 <td>AT 21 412</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G &frac12;" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>309623</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>31G 5/16" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>328438</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) solution</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triple antibiotic ointment</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

an orthotopic mouse model of anaplastic thyroid carcinoma

Sono stati creati vari tipi di modelli animali di tumori tiroidei umani, anche per via sottocutanea xenotrapianto e l&#39;impianto ortotopico di cellule di cancro in topi immunodeficienti. Modelli sottocutaneo xenotrapianto è stato prezioso per lo screening e la valutazione di nuovi trattamenti terapeutici preclinico. Ci sono una serie di vantaggi di utilizzare un modello sottocutanea; 1) rapido, 2) riproducibile, e 3) stabilimento tumore, la crescita, e la risposta ad agenti terapeutici possono essere monitorate mediante ispezione visiva. Tuttavia, la prova consistente ha messo in luce le carenze del sottocutaneo modelli di xenotrapianto 1-3. Per esempio, i trattamenti medicinali che dimostrano proprietà curative in modelli di xenotrapianto sottocutaneo spesso non hanno alcun impatto notevole sulla malattia umana. Il microambiente del sito del trapianto xenographic o iniezione è al centro di questa dissomiglianza. Ortotopici modelli di xenotrapianto di tumore forniscono una più Biolosicologicamente contesto rilevante in cui studiare la malattia. I vantaggi di impiantare le cellule malate o tessuti nel loro origine anatomica equivalente all&#39;interno di un animale ospite comprende un sito adatto per le interazioni tumore-ospite, lo sviluppo di metastasi correlati alla malattia e la capacità di esaminare l&#39;influenza site-specific sui rimedi terapeutici in fase di sperimentazione. Pertanto, modelli di xenotrapianto ortotopici harbor valore molto più clinico, perché strettamente riproducono la malattia umana. Per questi motivi, alcuni gruppi hanno sfruttato un modello di cancro della tiroide ortotopico come strumento di ricerca 4-7. Qui, descriviamo un approccio che stabilisce un modello ortotopico per lo studio di carcinoma tiroideo anaplastico (ATC), che è altamente invasiva, resiste trattamento, ed è praticamente fatale in tutti i pazienti diagnosticati. ATC cellule in coltura sono preparati come sospensione cellulare dissociato in una soluzione contenente una matrice membrana basale. Un piccolo volume è lentamente injette in destra ghiandola tiroidea. Aspetto generale e la salute dei topi sono monitorati per assicurare minime complicanze post-operatorie e per valutare penetranza patologico del cancro. I topi vengono sacrificati a 4 settimane, ed il tessuto sono raccolti per l&#39;analisi istologica. Gli animali possono essere prese al più tardi punti temporali di esaminare più da progressione avanzata della malattia. La produzione di questo modello ortotopico del mouse stabilisce una piattaforma che realizza due obiettivi: 1) ulteriormente la nostra comprensione di ATC patologia, e 2) dello schermo attuali e futuri agenti terapeutici per l&#39;efficacia nella lotta contro l&#39;ATC.

Abbiamo rilevato 19 tumori della tiroide invasivi da un totale di 20 topi iniettati con le cellule ATC dopo 4 settimane. Nell&#39;esempio mostrato in Figura 2A, i topi ricevono una iniezione ortotopico di 5X10 5 celle ATC cresciute in condizioni allegate, mostrano significativa infiltrazione di cellule tumorali nella tiroide dopo 4 settimane dopo l&#39;iniezione. La natura degli invasori cellule ATC con un caratteristico cellule affusolato e cellule medio-gigante-dimensioni con citoplasma eosinofilo e grandi nuclei è stata verificata mediante ematossilina ed eosina (H &amp; E) colorazione. Per confronto, la tiroide e trachea da un animale di controllo non per iniezione è mostrata in Figura 2B. I follicoli dell&#39;animale uninjected visualizzare un vicino, eppure sciolto, di associazione e hanno essenzialmente una morfologia rotonda. A causa delle piccole dimensioni della tiroide e utilizzo di consegna iniettabili, possono sorgere esiti non intenzionali. Figura 3A illustra lapiù comunemente osservata, che è lo sviluppo di una massa tumorale al di fuori di, ma non comprende, la tiroide. Questo è più che probabile causa di penetrazione dell&#39;ago attraverso e oltre la tiroide quando le cellule vengono espulsi. Occasionalmente, i topi presentavano alcuna crescita tumorale, sia grossolanamente e istologicamente, vengono rilevati come mostrato in figura 3B. Assenza di sviluppo del tumore rilevabile può essere causato da espulsione della sospensione cellulare dal sito di iniezione e la diffusione nei tessuti circostanti e cavità. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Esponendo la tiroide. Etichette indicano destra e sinistra tiroide fiancheggianti la trachea. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. Esame istologico di crescita tumorale e nellaI campioni di tessuto vasion dopo l&#39;iniezione della tiroide successo. stati sezionati lungo il piano coronale. A) Immagine scattata a 200X di topo esibendo la crescita tumorale sostanziale con le cellule caratteristici affusolato e cellule medio-gigante-dimensioni con citoplasma eosinofilo e grandi nuclei in ematossilina ed eosina ( H &amp; E) macchiano Tu indica la lesione primaria da cui le cellule tumorali invadono la tiroide B) trachea e tiroide da animali di controllo (immagine presa a 100X) Tu, tumori,... S, muscolo liscio, Tr, trachea, venga il tuo, la ghiandola tiroidea. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="Figura 3"/> Figura 3. Esiti non intenzionali di iniezione ortotopico. Campioni di tessuto sono stati sezionati lungo il piano coronale. A) la crescita del tumore periferico senza crescita evidente nel thyroid. B) Mancanza di individuazione del tumore al momento lordo (non mostrato) o istologici esame (freccia nera, immagine scattata a 100X) (immagine presa a 50X). Thy, ghiandola tiroidea.

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An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Generazione di un modello ortotopico murino di carcinoma anaplastico della tiroide è descritto qui. Questa tecnica impiega posizionamento chirurgico di cellule di cancro della tiroide anaplastico umani nella tiroide di topi immunodeficienti, creando così un ambiente più clinicamente rilevante per studiare la progressione della malattia, così come schermo interventi terapeutici innovativi.

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21.0K Views.  Saint Louis University School of Medicine. Generazione di un modello ortotopico murino di carcinoma anaplastico della tiroide è descritto qui. Questa tecnica impiega posizionamento chirurgico di cellule di cancro della tiroide anaplastico umani nella tiroide di topi immunodeficienti, creando così un ambiente più clinicamente rilevante per studiare la progressione della malattia, così come schermo interventi terapeutici innovativi.

Video: An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

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We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

Un ortotopico cancro della vescica Modello di Gene Studi di consegna

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

Bioluminescente modello ortotopico di cancro al pancreas Progressione

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

Un ortotopico Modello murino di Human Prostate Cancer Metastasi

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

Un ortotopico Glioblastoma modello di mouse mantenimento di vincoli Cervello parenchimale fisiche e adatto per intravitale due fotoni Microscopia

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

Il<em&gt; In Ovo</em&gt; Chick corioallantoidea membrana (CAM) Saggio come un efficiente dello xenotrapianto Modello di carcinoma epatocellulare

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.