فإن الكتاب أود أن أشكر شيشيا لوه لتربية الأسماك الممتازة والدعم التقني. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R21EY019401 (RT) وP30EY04068 (RT)، وبدء الأموال لRT، بما في ذلك منحة غير مقيد من البحوث للوقاية من العمى في جامعة واين ستيت، قسم طب وجراحة العيون. كان مدعوما من قبل JT توماس C. الدمدمة الزمالة التي تقدمها مدرسة جامعة واين ستيت العليا.

وقد وافق جميع الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول من قبل لجنة استخدام الحيوانات في مدرسة جامعة واين ستيت في كلية الطب. 1. التكيف مع الظلام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل ~ 10 الكبار الأسماك البيضاء أو المصطبغة من نظام الإسكان العادي في العلبة المظلمة. إذا كانت متوفرة، استخدام العلبة المظلمة التي بنيت في وحدة سكنية الزرد، والذي يسمح لتدفق المياه الطبيعية من خلال الخزان. (إذا كان مثل هذا النظام غير متوفر، ووضع حوض للأسماك في الضميمة مظلمة تماما، والتأكد من أن يهوي السمك مع الأكسجين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الأسماك في الظلام لمدة 10 يوما. عند تغذية الحيوانات أو إضافة أسماك جديدة إلى مربع مظلم، للتأكد من التحرك بأسرع وقت ممكن لتجنب تعريض الأسماك لفترة طويلة من ضوء. </li></ol> 2. الأشعة فوق البنفسجية التعرض للضوء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من قوة إلى مصدر للأشعة فوق البنفسجية هو OFF. إزالة خيوط ضوء الأشعة فوق البنفسجية من stereomicroscope الفلورسنت. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقلوب15 سم القطر الزجاج طبق بتري (أو شيء من مماثلة 2 سم ارتفاع) باعتبارها تقف لخيوط الأشعة فوق البنفسجية. الشريط طبق بيتري على مقاعد البدلاء المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشريط خيوط ضوء الأشعة فوق البنفسجية إلى أعلى طبق بتري المقلوب. ترتيب بحيث ~ 2 ملم من نهاية يتدلى خيوط طبق بيتري. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على 250 مل دورق زجاجي. تغطية ½ من القاع، والجانبين، والجزء الخلفي من الدورق مع رقائق الألومنيوم، والتأكد من الجانب &quot;لامعة&quot; من احباط يواجه الداخلية من الدورق. إذا تخرج الكأس، وتغطي النصف اللهجة من الدورق مع احباط، وترك نصف اضحة من الدورق عرضة للخطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء كوب 250 مل مع 100 مل من الماء من نظام مرفق الأسماك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الدورق 250 مل في دورق L 4. ملء كوب L 4 مع الماء حتى مستوى الماء حتى مع خط المياه 100 مل في دورق 250 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة بحد أقصى 10 معاملة الحيوانات غامق إلى الدورق 250 مل. تغطية الدورق 250 مل مع قطعة صغيرة من الألمنيوماحباط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جهاز دورق كامل متاخم لخيوط الأشعة فوق البنفسجية. خيوط ينبغي أن لمس السطح الخارجي للدورق L 4 والتي تواجه جزء مكشوف من الدورق 250 مل. تأكد من أن الدورق 250 مل يتركز في الجزء السفلي من الكأس L 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع كبيرة، وشاشة مبهمة وراء الدورق 4L، مما يسمح للحيوانات أن تتعرض، ولكن منع أي أفراد المختبر من رؤية غيض من خيوط الأشعة فوق البنفسجية. تحذير: تأكد من هذا الحاجز هو في المكان قبل تشغيل الطاقة إلى مصدر للأشعة فوق البنفسجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مصدر الطاقة للأشعة فوق البنفسجية. تعيين مؤقت لمدة 30 دقيقة. وضع علامات تحذير كل ما يلزم للتأكد من أن أفراد المختبر المطمئنين لا تعرض نفسها بطريق الخطأ للأشعة فوق البنفسجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة، اغلاق مصدر الطاقة للأشعة فوق البنفسجية. إزالة الدورق 250 مل مع السمك. ملاحظة: إذا كانت هناك حاجة جولات متعددة من التعرض للأشعة فوق البنفسجية، والسماح للمصدر الطاقة يبرد (~ 20 دقيقة) قبل تكرار التعرض البروتوكول. تأكد من استبدال رانه 100 مل من الماء بالماء نظام جديد للحصول على كل تعرض. لا يحتاج الماء في دورق L 4 لتحل محلها. </li></ol> 3. الهالوجين مصباح التعرض للضوء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأسماك من 250 مل دورق إلى 1.8 L الاكريليك واضحة خزان الأسماك. ملء خزان إلى علامة تجاوز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مصباح ضوء الهالوجين منطقة العلاج. الحصول على أربعة 250 W مصابيح الهالوجين فائدة من متجر لاجهزة الكمبيوتر المحلي. تواجه اثنين من مصابيح في نفس الاتجاه، وترتيب 29 سم بعيدا عن المركز. ترتيب غيرها من المصابيح اثنين بطريقة مماثلة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المجموعة الثانية من المصابيح بحيث أنهم يواجهون أول مجموعة من المصابيح، وترك ~ 73 سم في بين مجموعتين من المصابيح. وهذا يخلق منطقة المعالجة ضوء على شكل مستطيل من 29 × 73 سم. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على مروحة صغيرة من متجر لاجهزة الكمبيوتر المحلي. وضع مروحة على مسافة واحدة بين مجموعتين من المصابيح، خارج للتو من منطقة المعالجة الخفيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع اثنين من الدبابات 1.8 L كامل من الماء في وسطمنطقة المعالجة الخفيفة، وعلى مسافة واحدة بين مجموعتين من المصابيح. المسافة بين المصابيح والجدار الخارجي لخزان الوقود يجب أن يكون ~ 29 سم. ملاحظة: حتى لو كان فقط 10 علاج الأسماك في خزان واحد 1.8 L، استخدم هذا الترتيب. وهناك حاجة إلى كل من الدبابات للحفاظ على درجة حرارة الماء من كل خزان ضمن النطاق المناسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جهاز للإشباع بالهواء الأكسجين في كل خزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية كل خزان مع الأغطية الاكريليك واضحة، وترك ~ 2 سم الفجوة في نهاية الأقرب إلى مروحة. ترتيب مروحة بحيث سوف تهب الهواء إلى هذه الفجوة. وضع ميزان الحرارة في واحد أو كلا من الدبابات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على السلطة إلى الأضواء، مروحة، وأجهزة التهوية. الحفاظ على ضوء العلاج لمدة تصل إلى 4 أيام. لا ينبغي أن يتم تغذية الأسماك خلال العلاج ضوء، لأن هذا سوف تؤثر على نوعية المياه ويؤدي إلى مزيد من الضغط على الحيوانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد درجة الحرارة ومنسوب المياه على أساس يومي. المحافظة على درجة حرارة 30-33 درجة مئوية. إذا لزم الأمر، وضبط سرعة المروحة و / أو المسافة بين الدبابات ولىghts. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعلى قبالة كل خزان المياه مع نظام حسب الحاجة، عادة يومية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دائما استخدام الزرد البالغين الأصحاء (عادة 6-9 أشهر من العمر) للحفاظ على معدل البقاء على قيد الحياة من قرب 100٪. ومع ذلك، إذا تم العثور على الأسماك النافقة في الخزان، وإزالته فورا واستبدال المياه في الخزان بأكمله. </li></ol></li></ol> 4. مجموعة الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 48 ساعة بعد بداية العلاج ضوء الهالوجين إزالة الأسماك من منطقة العلاج. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الطازجة تثبيتي الايثانول الفورمالديهايد (1 جزء الفورمالديهايد بنسبة 37٪، 9 أجزاء الإيثانول بنسبة 100٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الزرد مع جرعة زائدة من مخدر 2-فينوكسييثانول (0.4 ملغم / لتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الزرد الموت الرحيم إلى منشفة ورقية. استأصل العين باستخدام ملقط المنحني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع عيون منزوعة النواة في تثبيتي، ومخزن O / N عند 4 درجة مئوية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cryoprotect العينين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العينين في 5٪ سكروز برنامج تلفزيوني 1X لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، ثم استبدل معالطازجة 5٪ سكروز برنامج تلفزيوني 1X لمدة 2 ساعة. المقبل، وغسل العيون في 30٪ سكروز 1X PBS O / N عند 4 درجة مئوية. غسل العينين في 01:01 (أجزاء متساوية) من الأنسجة تجميد المتوسطة و 30٪ سكروز 1X PBS O / N عند 4 درجة مئوية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضمين عيون في 100٪ نسيج تجميد المتوسطة وتخزينها في -80 درجة مئوية. توجيه نظر بحيث يتم تنفيذ cryosectioning من النسيج على المحور الظهري / بطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cryosection الأنسجة ومكان على الشرائح الزجاجية. الشرائح دافئ لمدة 2 ساعة على 55 درجة مئوية. الشرائح مخزن في -80 درجة مئوية أو تنفيذ فورا المناعية القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء المناعية القياسية على الأنسجة مقطوع والصورة مع المجهر الفلورسنت 40،51. </li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

هنا تبين لنا أن الجمع بين التعرض للأشعة فوق البنفسجية قصيرة مع استمرار التعرض للضوء الساطع النتائج في فقدان مبصرة على نطاق واسع واستجابة التجدد قوية. مقارنة مع الأساليب LIRD الفردية، وهذه الطريقة مجتمعة هو أيضا على البروتوكول الأكثر فعالية لإتلاف كلا قضبان ومخاريط في...

يستخدم تنكس الشبكية الناجم عن الضوء (LIRD) عادة في كل من القوارض والزرد إلى قضيب الضرر ومبصرات مخروط. في الزرد الكبار، تنكس مبصرة يؤدي الخلايا الدبقية مولر إلى إعادة إدخال دورة الخلية وإنتاج الأسلاف عابر تضخيم. تستمر هذه الأسلاف لتتكاثر كما تهاجر إلى المنطقة المتضررة، حيث أنها تعطي في نهاية المطاف إلى نشوء خلايا مستقبلة للضوء جديد. حاليا، هناك نوعان من النماذج المستخدمة على نطاق واسع LIRD، كل منها يؤدي إلى درجات متفاوتة من فقدان مبصرة والاختلافات المناظرة في استجابة التجدد. كما هي أدوات أكثر الوراثية والدوائية المتاحة لاختبار دور الجينات الفردية من الفائدة خلال التجديد، هناك حاجة إلى تطوير نموذج LIRD قوية. نحن هنا وصف بروتوكول LIRD أن يؤدي إلى خسارة على نطاق واسع وثابت من كل قضيب ومخروط خلايا مستقبلة للضوء الذي جمعنا بين استخدام اثنين من التقنيات LIRD المحددة سابقا. علاوة على ذلك، ويمكن تمديد هذا البروتوكول للاستخدام في الحيوانات المصطبغة، مما يلغي الحاجة للحفاظ على خطوط المعدلة وراثيا من الفائدة على خلفية البيضاء للدراسات LIRD.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="586">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV light source</td>
			<td style="width:215px;">Leica</td>
			<td style="width:155px;">EL600</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass Petri dish (150 x 20 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS3160152BO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 ml glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS1000250</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4 L glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS10004L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aluminum foil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01-213-105</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 W halogen lamps</td>
			<td>Workforce</td>
			<td>265-669</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tanks</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tank lids</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180LCL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fan</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>HT-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aerator</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>77853-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermometer</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>YO-08008-58</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bent forceps (5/45)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504155</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel light damage paradigm for use in retinal regeneration studies in adult zebrafish

يستخدم تنكس الشبكية الناجم عن الضوء (LIRD) عادة في كل من القوارض والزرد إلى قضيب الضرر ومبصرات مخروط. في الزرد الكبار، تنكس مبصرة يؤدي الخلايا الدبقية مولر إلى إعادة إدخال دورة الخلية وإنتاج الأسلاف عابر تضخيم. تستمر هذه الأسلاف لتتكاثر كما تهاجر إلى المنطقة المتضررة، حيث أنها تعطي في نهاية المطاف إلى نشوء خلايا مستقبلة للضوء جديد. حاليا، هناك نوعان من النماذج المستخدمة على نطاق واسع LIRD، كل منها يؤدي إلى درجات متفاوتة من فقدان مبصرة والاختلافات المناظرة في استجابة التجدد. كما هي أدوات أكثر الوراثية والدوائية المتاحة لاختبار دور الجينات الفردية من الفائدة خلال التجديد، هناك حاجة إلى تطوير نموذج LIRD قوية. نحن هنا وصف بروتوكول LIRD أن يؤدي إلى خسارة على نطاق واسع وثابت من كل قضيب ومخروط خلايا مستقبلة للضوء الذي جمعنا بين استخدام اثنين من التقنيات LIRD المحددة سابقا. علاوة على ذلك، ويمكن تمديد هذا البروتوكول للاستخدام في الحيوانات المصطبغة، مما يلغي الحاجة للحفاظ على خطوط المعدلة وراثيا من الفائدة على خلفية البيضاء للدراسات LIRD.

تمت مقارنة نظام العلاج ضوء المذكورة حتى الآن إلى كل أسلوب الفردية من LIRD. في الحيوانات البيضاء الكبار المعالجة غامق (الشكلان 3-5)، أدى ضوء العلاجات الفردية في خسارة كبيرة من قضيب (الشكل 3) ومخروط (الشكل 4) خلايا مستقبلة للضوء. ومع ذلك، كل ال...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish at JoVE.com

A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish

وقد وصفت متعددة البروتوكولات وقوع اضرار طفيفة للتلف خلايا مستقبلة للضوء وبالتالي تحفز على استجابة التجدد الشبكية في الزرد الكبار. يصف هذا البروتوكول وسيلة المحسنة التي يمكن استخدامها في الحيوانات المصطبغة وهذا يدمر الغالبية العظمى من قضيب مبصرات مخروط وعبر شبكية العين بأكملها.

رواية ضوء بارادايم ضرر للاستخدام في دراسات التجديد الشبكية في اسماك الزرد الكبار

Light-induced retinal degeneration (LIRD) is commonly used in both rodents and zebrafish to damage rod and cone photoreceptors. In adult zebrafish, ...

a-novel-light-damage-paradigm-for-use-retinal-regeneration-studies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.1K Views.  Wayne State University School of Medicine.  وقد وصفت متعددة البروتوكولات وقوع اضرار طفيفة للتلف خلايا مستقبلة للضوء وبالتالي تحفز على استجابة التجدد الشبكية في الزرد الكبار. يصف هذا البروتوكول وسيلة المحسنة التي يمكن استخدامها في الحيوانات المصطبغة وهذا يدمر الغالبية العظمى من قضيب مبصرات م?...

Video: A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish

Recording and Analysis of Circadian Rhythms in Running-wheel Activity in Rodents

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, including rats, hamsters, and mice, are active during the night and relatively inactive during the day. Many other behavioral and physiological measures also exhibit daily rhythms, but in rodents, running-wheel activity serves as a particularly reliable and convenient measure of the output of the master circadian clock, the suprachiasmatic nucleus (SCN) of the hypothalamus. In general, through a process called entrainment, the daily pattern of running-wheel activity will naturally align with the environmental light-dark cycle (LD cycle; e.g. 12 hr-light:12 hr-dark). However circadian rhythms are endogenously generated patterns in behavior that exhibit a ~24 hr period, and persist in constant darkness. Thus, in the absence of an LD cycle, the recording and analysis of running-wheel activity can be used to determine the subjective time-of-day. Because these rhythms are directed by the circadian clock the subjective time-of-day is referred to as the circadian time (CT). In contrast, when an LD cycle is present, the time-of-day that is determined by the environmental LD cycle is called the zeitgeber time (ZT).
Although circadian rhythms in running-wheel activity are typically linked to the SCN clock6-8, circadian oscillators in many other regions of the brain and body9-14 could also be involved in the regulation of daily activity rhythms. For instance, daily rhythms in food-anticipatory activity do not require the SCN15,16 and instead, are correlated with changes in the activity of extra-SCN oscillators17-20. Thus, running-wheel activity recordings can provide important behavioral information not only about the output of the master SCN clock, but also on the activity of extra-SCN oscillators. Below we describe the equipment and methods used to record, analyze and display circadian locomotor activity rhythms in laboratory rodents.

Circadian rhythms in voluntary wheel-running activity in mammals are tightly coupled to the molecular oscillations of a master clock in the brain. As such, these daily rhythms in behavior can be used to study the influence of genetic, pharmacological, and environmental factors on the functioning of this circadian clock.

تسجيل وتحليل إيقاعات الساعة البيولوجية في تشغيل عجلة النشاط في القوارض

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs survival and regeneration experiments. Many studies have been performed in mammalian animals to research RGCs survival after optic nerve injury. However, retrograde labeling of RGCs in adult zebrafish has not yet been reported, though some alternative methods can count cell numbers in retinal ganglion cell layers (RGCL). Considering the small size of the adult zebrafish skull and the high risk of death after drilling on the skull, we open the skull with the help of acid-etching and seal the hole with a light curing bond, which could significantly improve the survival rate. After absorbing the dyes for 5 days, almost all the RGCs are labeled. As this method does not need to transect the optic nerve, it is irreplaceable in the research of RGCs survival after optic nerve crush in adult zebrafish. Here, we introduce this method step by step and provide representative results.

We introduce an efficient method to retrograde label retinal ganglion cells (RGCs) in adult zebrafish.

وصفها الوراء من خلايا الشبكية العقدة في اسماك الزرد الكبار مع الأصباغ نيون

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular mechanisms involved in zebrafish adult central nervous system (CNS) regeneration and repair, we developed a zebrafish model of adult telencephalic injury.
In this approach, we manually generate an injury by pushing an insulin syringe needle into the zebrafish adult telencephalon. At different post injury days, fish are sacrificed, their brains are dissected out and stained by immunohistochemistry and/or in situ hybridization (ISH) with appropriate markers to observe cell proliferation, gliogenesis, and neurogenesis. The contralateral unlesioned hemisphere serves as an internal control. This method combined for example with RNA deep sequencing can help to screen for new genes with a role in zebrafish adult telencephalon neurogenesis, regeneration, and repair.

To shed light on the cellular and molecular mechanisms of zebrafish adult neurogenesis and regeneration, we developed a protocol for invasive surgery causing mechanical injuries in the zebrafish adult telencephalon and subsequent monitoring of changes in the stabbed hemisphere by immunohistochemistry or in situ hybridization.

طعنة الإصابة بالجروح من اسماك الزرد الكبار الدماغ الانتهائي: طريقة المعنية بالتحقيق في تكوين الخلايا العصبية والدماغ الفقارية التجديد

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain undergoes rapid organizational change and is similar to accelerated brain changes that occur during the third trimester in humans. This model of fetal alcohol spectrum disorders (FASDs) produces severe brain damage, mimicking the amount and pattern of binge-drinking that occurs in some pregnant alcoholic mothers. We describe the use of trace eyeblink classical conditioning (ECC), a higher-order variant of associative learning, to assess long-term hippocampal dysfunction that is typically seen in alcohol-exposed adult offspring. At 90 days of age, rodents were surgically prepared with recording and stimulating electrodes, which measured electromyographic (EMG) blink activity from the left eyelid muscle and delivered mild shock posterior to the left eye, respectively. After a 5 day recovery period, they underwent 6 sessions of trace ECC to determine associative learning differences between alcohol-exposed and control rats. Trace ECC is one of many possible ECC procedures that can be easily modified using the same equipment and software, so that different neural systems can be assessed. ECC procedures in general, can be used as diagnostic tools for detecting neural pathology in different brain systems and different conditions that insult the brain.

Trace eyeblink classical conditioning (ECC) was used to assess hippocampal-dependent associative learning in adult rats that were administered a high concentration (11.9% v/v) of alcohol during early neonatal brain development. In general, ECC procedures are sound diagnostic tools for detecting brain dysfunction across many psychological and biomedical settings.

استخدام الاشراط الكلاسيكي اييبلينك تتبع لتقييم هيبوكامبال الخلل في نموذج الفئران من اضطرابات طيف الكحول الجنيني

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to synaptic degeneration, inflammation, neuronal death, and learning deficits. Humans cannot regenerate lost neurons in the case of AD in part due to impaired proliferative capacity of the neural stem/progenitor cells (NSPCs) and reduced neurogenesis. Therefore, efficient regenerative therapies should also enhance the proliferation and neurogenic capacity of NSPCs. Zebrafish (Danio rerio) is a regenerative organism, and we can learn the basic molecular programs with which we could design therapeutic approaches to tackle AD. For this reason, the generation of an AD-like model in zebrafish was necessary. Using our methodology, we can introduce synthetic derivatives of A&#946;42 peptide with tissue penetrating capability into the adult zebrafish brain, and analyze the disease pathology and the regenerative response. The advantage over the existing methods or animal models is that zebrafish can teach us how a vertebrate brain can naturally regenerate, and thus help us to treat human neurodegenerative diseases better by targeting endogenous NSPCs. Therefore, the amyloid-toxicity model established in the adult zebrafish brain may open new avenues for research in the field of neuroscience and clinical medicine. Additionally, the simple execution of this method allows for cost-effective and efficient experimental assessment. This manuscript describes the synthesis and injection of A&#946;42 peptides into zebrafish brain.

Modeling Amyloid-&amp;#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

This protocol describes the synthesis, characterization, and injection of monomeric amyloid-&#946;42 peptides for generating amyloid toxicity in adult zebrafish to establish an Alzheimer&#39;s disease model, followed by histological analyses and detection of aggregations.

النمذجة سمية اميلويد-β42 ونيوروديجينيريشن في المخ الزرد الكبار

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after severe damage. Investigating the regeneration pathways in zebrafish might bring new insights to develop innovative strategies for the treatment of retinal degenerative diseases in mammals. Herein, we focused on the induction of a focal lesion to the outer retina in adult zebrafish by means of a 532 nm diode laser. A localized injury allows investigating biological processes that take place during retinal degeneration and regeneration directly at the area of damage. Using non-invasive optical coherence tomography (OCT), we were able to define the location of the damaged area and monitor subsequent regeneration in vivo. Indeed, OCT imaging produces high-resolution, cross-sectional images of the zebrafish retina, providing information which was previously only available with histological analyses. In order to confirm the data from real-time OCT, histological sections were performed and regenerative response after the induction of the retinal injury was investigated by immunohistochemistry.

M&amp;#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

The zebrafish is a popular animal model to study mechanisms of retinal degeneration/regeneration in vertebrates. This protocol describes a method to induce localized injury disrupting the outer retina with minimal damage to the inner retina. Subsequently, we monitor in vivo the retinal morphology and the M&#252;ller glia response throughout retinal regeneration.

إطلاق مولر خلية التنشيط في تنكس الشبكية المستحثة بالليزر ونموذج التجديد في الزرد

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding diseases, and future therapies hinge on fundamental understandings about how different retinal cells function normally. Gaining such information with biochemical methods has proven difficult because contributions of particular cell types are diminished in the retinal cell milieu. Live retinal imaging can provide a view of numerous biological processes on a subcellular level, thanks to a growing number of genetically encoded fluorescent biosensors. However, this technique has thus far been limited to tadpoles and zebrafish larvae, the outermost retinal layers of isolated retinas, or lower resolution imaging of retinas in live animals. Here we present a method for generating live ex vivo retinal slices from adult zebrafish for live imaging via confocal microscopy. This preparation yields transverse slices with all retinal layers and most cell types visible for performing confocal imaging experiments using perfusion. Transgenic zebrafish expressing fluorescent proteins or biosensors in specific retinal cell types or organelles are used to extract single-cell information from an intact retina. Additionally, retinal slices can be loaded with fluorescent indicator dyes, adding to the method&#39;s versatility. This protocol was developed for imaging Ca2+ within zebrafish cone photoreceptors, but with proper markers it could be adapted to measure Ca2+ or metabolites in M&#252;ller cells, bipolar and horizontal cells, microglia, amacrine cells, or retinal ganglion cells. The retinal pigment epithelium is removed from slices so this method is not suitable for studying that cell type. With practice, it is possible to generate serial slices from one animal for multiple experiments. This adaptable technique provides a powerful tool for answering many questions about retinal cell biology, Ca2+, and energy homeostasis.

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Imaging retinal tissue can provide single-cell information that cannot be gathered from traditional biochemical methods. This protocol describes preparation of retinal slices from zebrafish for confocal imaging. Fluorescent genetically encoded sensors or indicator dyes allow visualization of numerous biological processes in distinct retinal cell types.

إعداد شرائح الشبكية الطازجة من الزرد الكبار السابقين فيفو التصوير تجارب

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding ...

Ablation of a Neuronal Population Using a Two-photon Laser and Its Assessment Using Calcium Imaging and Behavioral Recording in Zebrafish Larvae

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ablation of neurons is an effective method for this purpose when neurons are selectively labeled with fluorescent probes. In the present study, protocols for laser ablating a subpopulation of neurons using a two-photon microscope and testing of its functional and behavioral consequences are described. In this study, prey capture behavior in zebrafish larvae is used as a study model. The pretecto-hypothalamic circuit is known to underlie this visually-driven prey catching behavior. Zebrafish pretectum were laser-ablated, and neuronal activity in the inferior lobe of the hypothalamus (ILH; the target of the pretectal projection) was examined. Prey capture behavior after pretectal ablation was also tested.

Here, we present a protocol to ablate a genetically labeled subpopulation of neurons by a two-photon laser from Zebrafish larvae.

الاجتثاث سكان الخلايا العصبية باستخدام ليزر اثنين-فوتون وتقييمها باستخدام الكالسيوم تصوير وتسجيل السلوكية في اليرقات الزرد

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the detonation of explosive devices, however, the mechanisms that underlie the brain damage resulting from blast overpressure exposure are not entirely understood and are believed to be unique to this type of brain injury. Preclinical models are crucial tools that contribute to better understand blast-induced brain injury. A novel in vitro blast TBI model was developed using an open-ended shock tube to simulate real-life open-field blast waves modelled by the Friedlander waveform. C57BL/6N mouse organotypic hippocampal slice cultures were exposed to single shock waves and the development of injury was characterized up to 72 h using propidium iodide, a well-established fluorescent marker of cell damage that only penetrates cells with compromised cellular membranes. Propidium iodide fluorescence was significantly higher in the slices exposed to a blast wave when compared with sham slices throughout the duration of the protocol. The brain tissue injury is very reproducible and proportional to the peak overpressure of the shock wave applied.

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

This paper describes a novel model of primary blast traumatic brain injury. A compressed-air driven shock tube is used to expose in vitro mouse hippocampal slice cultures to a single shock wave. This is a simple and rapid protocol generating a reproducible brain tissue injury with a high throughput.

نموذج رواية في المختبر للانفجار إصابات الدماغ الرضية

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

An Emerging Target Paradigm to Evoke Fast Visuomotor Responses on Human Upper Limb Muscles

To reach towards a seen object, visual information has to be transformed into motor commands. Visual information such as the object&#8217;s color, shape, and size are processed and integrated within numerous brain areas, then ultimately relayed to the motor periphery. In some instances, a reaction is needed as fast as possible. These fast visuomotor transformations, and their underlying neurological substrates, are poorly understood in humans as they have lacked a reliable biomarker. Stimulus-locked responses (SLRs) are short latency (&#60;100 ms) bursts of electromyographic (EMG) activity representing the first wave of muscle recruitment influenced by visual stimulus presentation. SLRs provide a quantifiable output of rapid visuomotor transformations, but SLRs have not been consistently observed in all subjects in past studies. Here we describe a new, behavioral paradigm featuring the sudden emergence of a moving target below an obstacle that consistently evokes robust SLRs. Human participants generated visually guided reaches toward or away from the emerging target using a robotic manipulandum while surface electrodes recorded EMG activity from the pectoralis major muscle. In comparison to previous studies that investigated SLRs using static stimuli, the SLRs evoked with this emerging target paradigm were larger, evolved earlier, and were present in all participants. Reach reaction times (RTs) were also expedited in the emerging target paradigm. This paradigm affords numerous opportunities for modification that could permit systematic study of the impact of various sensory, cognitive, and motor manipulations on fast visuomotor responses. Overall, our results demonstrate that an emerging target paradigm is capable of consistently and robustly evoking activity within a fast visuomotor system.

Presented here is a behavioral paradigm that elicits robust fast visuomotor responses on human upper limb muscles during visually guided reaches.

نموذج الهدف الناشئ لاستحضار استجابات Visuomotor السريع على عضلات الأطراف العليا البشرية

To reach towards a seen object, visual information has to be transformed into motor commands. Visual information such as the object&#8217;s color, shape, ...