فإن الكتاب أود أن أشكر مكتب البحوث من مدرسة المشيخية كلية الصيدلة للحصول على الدعم المالي لهذا المشروع خلال حفل توزيع جوائز الصيدلة الصغيرة للبحوث والتعاون (SPARC) جائزة. الكتاب أشكر السيد جون Smink، مدير مختبر أبحاث الحيوانات المائية، جامعة كليمسون، كليمسون، SC لبلده الفني مراجعة مخطوطة المساعدة.

ملاحظة: هذه البروتوكولات اتباع المبادئ التوجيهية للIACUC من المشيخية كلية. 1. المواد اكتساب المدرج في الجدول 1. 2. تجميع 5 الجرف كروم وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. وسوف تستخدم هذه لإيواء مرفق. 3. بناء خزان للمياه ونظام الترشيح (أرقام 1A و 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الشكل 1A كدليل، تخطيط ال 18 غالون دلو، ومضخة والفلاتر ومصباح الأشعة فوق البنفسجية لتحديد موقع التثبيت النهائي والحجم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وضعت أجزاء من وقياس وقطع ¾ &quot;الأنابيب البلاستيكية لطول اللازمة للتجميع. تختلف أطوال جميع الأنابيب وفقا لاحتياجات مساحة محددة والقيود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع الأنابيب والتجهيزات على النحو المنصوص عليه في السابق باستخدام التمهيدي والاسمنت PVC، انظر أدناه (3.3.2 و3.3.3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرمال قطع حواف الأنابيب مع الصنفرة حتى أنهم سلس إلى لمسةد لا يوجد الحطام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رئيس وخارج الأنابيب وداخل المناسب مع التمهيدي PVC شراؤها مع مسحة المضمنة من التمهيدي PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدعيم الأنابيب وتركيب معا من خلال تطبيق الأسمنت PVC إلى خارج الأنبوب باستخدام مسحة المدرجة. أكرر لجميع الخطوات التي تحتاج إلى التدعيم PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع دلو 18 غالون إلى جانب واحد من البناء الرف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيت موصل الحاجز في جانب خزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق ¾ &quot;أنابيب PVC إلى الحاجز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق الطرف الآخر من ¾ &quot;الأنابيب إلى مدخل المضخة باستخدام ¾&quot; الخيوط جعل المناسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط مرشحات إلى المضخة باستخدام اثنين من 90 درجة المرفقين و¾ &quot;الأنابيب PVC. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مرشح واحد ورقة تليها واحدة تنشيط مرشحات الكربون من أجل تصفية الحطام وخفض مستويات الكلور والمواد الكيميائية في الماء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قم بتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى accordi المرشحاتنانوغرام لتعليمات الشركة الصانعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق مضخة ونظام التصفية إلى الجانب العلوي من الرف الأول من رف باستخدام العلاقات السلك. تختلف ترتيب التجمع والمرفق وفقا لحجم وتخطيط الرف / الرف الذي تم اختياره. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 bioball لكل جالون من الماء إلى خزان المياه مرة واحدة يتم تجميع المضخة ونظام التصفية وتعلق على الرف. </li></ol> 4. بناء الخط الرئيسي العرض (أرقام 1B و 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس وقطع قطعة من ¾ &quot;الأنابيب البلاستيكية لتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى العرض الرئيسي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ¾ &quot;نقطة الإنطلاق PVC لبدء خط الإمداد الرئيسي من خلال ربط نقطة الإنطلاق إلى ¾&quot; العادم PVC القادمة من فلتر الأشعة فوق البنفسجية. . <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة صمام على الخروج إلى أسفل نقطة الإنطلاق PVC لتكون بمثابة استنزاف لاحمرار صيانة النظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تشغيل خط الإمداد الرئيسي من الجزء العلوي من ¾ &quot;نقطة الإنطلاق PVC عن طريق قياس وقطع ¾&quot; PVCالأنابيب إلى الطول المطلوب لتوفير أنابيب تغذية لكل من الرفوف على الرف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيت ¾ &quot;المحملات PVC للخطوط الأفقية التي ستدخل كل رف من رفوف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياريا (والمقترح)، إضافة ¾ &quot;على الخروج صمام لكل الرف خط إمداد للسماح لعزل كل رف وتصميم وحدات من هذا النظام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ¾ &quot;أنابيب PVC كورقة ضغط الحد من خط على الرف العلوي. في حالة تشغيل هذا الخط في الجزء الخلفي من الرف، واستخدام هذا الجرف للتخزين. إنهاء تخفيض الضغط سطر في خط العادم الرئيسي (الشكل 1B) مع ¾ &quot;صمام على الخروج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد تم الانتهاء من الخطوات المذكورة أعلاه، رئيس وتدعيم الأنابيب البلاستيكية معا كما فعلت سابقا عند بناء نظام خزان والترشيح. </li></ol> 5. بناء الخط الرئيسي العادم (أرقام 1C و 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل طول العمودي للخط العادم الرئيسي إلى الجانب الآخر من و رفROM خط الإمداد الرئيسي. استخدام أنابيب 2 &quot;PVC لهذا الخط الرأسي لاستقبال خط الإمداد الرئيسي في أعلى واستنزاف خطوط من الدبابات الأسماك من كل رف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قطعة من 2 &quot;الأنابيب البلاستيكية لالرأسي خط العادم الرئيسي واستخدام 2&quot; المحملات PVC لاستقبال حوض للأسماك خطوط هجرة من كل الرف. إنهاء خط العادم الرئيسي في خزان الأسهم لطرد المياه المعاد تدويرها أكثر من فلتر الاسفنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع بوصة واحدة فتح كامل طول 2 &quot;PVC القطع الأنابيب ونعلق على رأسي خط العادم الرئيسي مع PVC المحملات لخطوط الصرف الأفقية من الدبابات الأسماك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتويج 2 &quot;خطوط هجرة أفقية مع 2&quot; غطاء PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رئيس وتدعيم القطع باستخدام التجهيزات الضرورية (وصلات، الحلمات أو المرفقين). </li></ol> 6. بناء خزانات الأسماك (الشكل 3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع الحفر، وقطع 1 1/8 &quot;ثقب في الجزء الخلفي من حوض للأسماك 1&quot; تحت الحافة العليا مع رأى حفرة. </li><lط&gt; حرك ¾ &quot;محول PVC الذكور الخيوط (مع # 18 يا خاتم المرفقة) من خلال ثقب (من داخل الخزان إلى الخارج). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق وتشديد 90 درجة 3/4 &quot;الخيوط PVC الكوع إلى محول الذكور لإنشاء أنبوب العادم حوض للأسماك. إضافة قطعة من شبكة غرامة قبل الشد الجوز عقد لمنع الزرد يمر نظام العادم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع خزان الأسماك مع نهاية أنبوب العادم في فضاء مفتوح من خط تصريف وراء الدبابات </li></ol> 7. بدء نظام المياه <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في عدة حاويات، مثل تلك المستخدمة للخزان، وقياس ثلاثة أضعاف كمية المياه الواردة في هذا النظام. اسمحوا الوقوف هذا الماء في درجة حرارة الغرفة لتكييف لمدة 48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الماء إلى النظام والسماح لها تعمم مدة لا تقل عن 3 أيام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير الماء في النظام بقوة طوال 3 أيام الأولى من الدورة الدموية من أجل تخليص النظام من الملوثات ثار يقيمون داخل الأنابيب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الزرد المبتدئين والسماح للدورة النيتروجين إلى الحصول على المنشأة. تطبيع الرقم الهيدروجيني إلى ثابت 7. حافظ على سبعة الزرد في 1.8 L، وإطعامهم مرتين يوميا خلال أيام الأسبوع، ومرة واحدة يوميا خلال عطلة نهاية الأسبوع على النحو الذي اقترحه ينبو 4 و 6 مكناب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة نترات (&lt;75 ملغ / L) تم الحفاظ عليها، النتريت (&lt;10 ملغ / لتر)، والأمونيوم (0 ملغم / لتر) يوميا خلال الأسبوع الأول بعد إضافة الأسماك، ومستويات مرتين أسبوعيا مرة واحدة المطلوب مع التغييرات المياه العادية . </li></ol>

<ol>
	<li>Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , (2010).</li><li>Grim, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogen+(hemgn),+a+transcription+factor+that+regulates+erythropoiesis+and+skeletogenesis+in+zebrafish.">Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish.</a> , (2013).</li><li>Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+easy-to-assemble,+low-cost+facility.">Modular, easy-to-assemble, low-cost facility.</a> Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).</li><li>Linbo, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+(Danio+rerio)+husbandry+and+colony+maintenance+at+the+Northwest+Fisheries+Science+Center.">Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center.</a> U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. 69, 4196 (2012).</li><li>McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+be+afraid+to+set+up+your+fish+facility.">Don't be afraid to set up your fish facility.</a> Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).</li><li>Garcia, R. L., Sanders, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cleaning+and+disinfection+procedures+in+a+zebrafish+rerio)+facility.">Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).</li><li>Rivas-Boyero, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+a+nociceptin+receptor+from+zebrafish+(Danio+rerio).">Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio).</a> J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).</li><li>Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+regulates+dopaminergic+neuron+differentiation+via+miR-133b.">Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b.</a> Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).</li><li>Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodr&#237;guez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mu+opioid+from+the+zebrafish+exhibits+functional+characteristics+as+those+of+mammalian+mu+opioid+receptor.">Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor.</a> Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).</li></ol>

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح لهذه الورقة.

والغرض الرئيسي من هذه المقالة هو لإثبات أن بناء منشأة الزرد وظيفية ليست معقدة ويمكن أن يبنى من قبل الباحثين المبتدئين الأسماك مع الحد الأدنى من المعرفة البناء. وعلاوة على ذلك، تعرض هذه المقالة أن المواد اللازمة لهذا المرفق الزرد وظيفية يمكن الحصول عليها بسهولة وكلف?...

في الجسم الحي نماذج ضرورية في إجراء البحوث الطبية الحيوية شامل لأنها تسمح للفي مجال البحوث المختبر إلى أن تترجم على مستوى النظام والعضوي. على سبيل المثال، قد أثبتت الأبحاث مع الثدييات الصغيرة، وهما القوارض، الضروري في تطوير عقاقير وتحسين العقاقير المتاحة. ومع ذلك، فإن التعقيد (ماليا ولوجستيا) قد يجعل من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض ليقترح التجريب في المؤسسات البحثية الصغيرة الأكاديمية. ومع ذلك، في الجسم الحي البحوث يمكن أن يؤديها باستخدام الأنواع الحيوانية الأخرى التي تتطلب اللوجستية أقل تفصيلا. الزرد (دانيو rerio) وقد استخدمت بنجاح لتكون نموذجا في الجسم الحي لدراسة علم الوراثة والتنمية والفيزيولوجيا المرضية، والصيدلة 1،2،10،11،12. التسهيلات اللازمة لإيواء الزرد لإجراء التجارب هي بسيطة نسبيا وأقل تكلفة بالمقارنة مع صمرافق odent. كيم وآخرون. 3 وقد وصفت مؤخرا بالتفصيل نظام السكن الزرد 80 دبابة التي يمكن أن يبنى على ما يقرب من 1،500 دولار، والذي يشمل كلا من قطع الغيار وتكاليف العمالة. هذا يقف في تناقض صارخ مع ما يقرب من 8500 $ التي من شأنها أن تكون هناك حاجة لشراء نظام 80 دبابة جاهزة من أي عدد من الموردين التجاريين. ومع ذلك، فإن الوصف الذي قدمه كيم وآخرون. قد تكون معقدة وصعبة لمتابعة بالنسبة للمستخدمين المبتدئين للبحوث الأسماك. ونحن نعتقد أن منشأة الزرد يمكن بناؤها بطريقة مبسطة للاستثمار من 1500 $. إنشاء منشأة في الجسم الحي في المؤسسات الأكاديمية صغيرة يوفر كلياتهم أداة إضافية التي لإنتاج الأبحاث أكثر قوة وشامل. في المختبر البيانات التي تدعمها في الجسم الحي النتائج إنتاج عام البحوث الطبية الحيوية أكثر شمولا من البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام فقط في النهج المختبر. ولذلك، فإنسوف تنفيذ منشأة الأبحاث في الجسم الحي يعزز إلى حد كبير نجاح مؤسسة في المساعي البحثية الشاملة (التعرض الطالب الأبحاث والمنشورات، والاتصالات، والسعي من التمويل الخارجي، الخ.). بناء منشأة الزرد مثل واحد الموصوفة في هذه الدراسة هو المثالي للمؤسسات الأكاديمية البحثية مع مرافق محدودة (أو المؤسسات في الجسم الحي دون مرافق البحوث) خلال تشنجا الأوقات المالية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Item</td>
			<td>Brand</td>
			<td>Quantity</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit</td>
			<td>Style Selections</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18-Gallon General Bucket/Tote</td>
			<td>Centrex Plastics: LLC&#160;Rugged Tote</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord</td>
			<td>Master Electrician</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp</td>
			<td>Smartpond&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole House Water Replacement Filter</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Seal Tape</td>
			<td>William H Harvey</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-fl oz LO-VOC PVC Cement</td>
			<td>Oatey&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-fl oz LO-VOC Primer</td>
			<td>Oatey&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing</td>
			<td>Mister Landscaper&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve</td>
			<td>Mister Landscaper</td>
			<td>33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter</td>
			<td>&#160;Mister Landscaper</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drop-In Filter with House&#160;</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia 90-Degree PVC Elbow</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia 90-Degree Tee</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Tee</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia PVC Cap</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve</td>
			<td>American Valve</td>
			<td>5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Cap</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-In x 5-Ft Pvc Pipe</td>
			<td>Charlotte Pipe</td>
			<td>4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;-In x 10-Ft Pvc pipe</td>
			<td>Charlotte Pipe</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11/16x1-7/80 PVC ring</td>
			<td>SXT</td>
			<td>10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189;&#8221; PVC male adapter</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;&#8221; PVC coupling&#160;</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189;&#8221; PVC female adapter&#160;</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>link</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.8 L Dual Beta Keeper</td>
			<td>Top Fin</td>
			<td>27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;&#8221; PVC male adapter (w/ #18 O-ring)</td>
			<td>SXT</td>
			<td>28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90-degree &#190;&#8221; threaded PVC elbow</td>
			<td>SXT</td>
			<td>27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Mesh</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 yard</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulkhead Connector</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hacksaw</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drill</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hole saw</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable Wrench</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pliers&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape Measure</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety Glasses</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Work Gloves</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility

في الجسم الحي البحوث الطبية الحيوية أمرا حيويا لترجمة في نتائج المختبر إلى التطورات السريرية. المؤسسات الأكاديمية صغيرة ذات موارد محدودة تجد من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض النموذجية للأبحاث. وقد أثبتت الأبحاث الزرد ليكون بديلا قيما لفي الجسم الحي البحوث في علم الصيدلة، علم وظائف الأعضاء، وتنمية والدراسات الوراثية. توضح هذه المقالة أن منشأة الزرد وظيفي يمكن أن يبنى بطريقة سهلة وميسرة. علينا أن نبرهن على مثل هذا المرفق يمكن أن يبنى في حوالي يوم عمل واحد مع الحد الأدنى من الأدوات والخبرات. وبلغت تكلفة حوض للأسماك الزرد 27 منشأة 1.8 L شيدت في هذه الدراسة حوالي 1500 $. ونحن نقدر أن المحافظة على عمل 150 مستعمرة الأسماك الأولية لمدة 3 أشهر هو 1،000 دولار. هذا الطلاب المعنيين في المشروع، تم تقديمها للaquaculturing من الزرد ليقترح البحث.

بناء نظام مضخة وFlters مرة واحدة يتم تجميعها الرف واقامة الخطوة الأولى هي لبناء مضخة وفلتر النظام. وترتبط عوامل التصفية لمضخة نظام وتقع فوق مستوى السفلي من الرف الأول، والذي يسمح لسهولة الصيانة واستبدال فلتر. وبالمثل، يتم توصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية مع ال...

Watch this Scientific Journal Video about Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility at JoVE.com

Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

بناء على بناء سهلة لمرفق الزرد بأسعار معقولة و

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

construction-of-an-affordable-and-easy-to-build-zebrafish-facility

Research

JoVE Journal

Biology

16.2K Views.  Presbyterian College School of Pharmacy. A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Video: Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

Proper Care and Cleaning of the Microscope

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a microscope causes reduction in contrast and resolution. DIC is especially sensitive to contamination and scratches on the lens surfaces. This protocol details the procedure for keeping the microscope clean.

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a microscope causes reduction in contrast and resolution. DIC is especially sensitive to contamination and scratches on the lens surfaces. This protocol details the procedure for keeping the microscope clean.

العناية والتنظيف السليم للمجهر

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents (Methanol, Ethanol or 2-Propanol) and acetic acid are used for fixation, staining and destaining of proteins in a gel after SDS-PAGE. To speed up the procedure, heating the staining solution in the microwave oven for a short time is frequently used. This usually results in evaporation of toxic or hazardous Methanol, Ethanol or 2-Propanol and a strong smell of acetic acid in the lab which should be avoided due to safety considerations. In a protocol originally published in two patent applications by E.M. Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)), an alternative composition of the staining solution is described in which no organic solvent or acid is used. The CBB is dissolved in bidistilled water (60-80mg of CBB G-250 per liter) and 35 mM HCl is added as the only other compound in the staining solution. The CBB staning of the gel is done after SDS-PAGE and thorough washing of the gel in bidistilled water. By heating the gel during the washing and staining steps, the process can be finished faster and no toxic or hazardous compunds are evaporating. The staining of proteins occurs already within 1 minute after heating the gel in staining solution and is fully developed after 15-30 min with a slightly blue background that is destained completely by prolonged washing of the stained gel in bidistilled water, without affecting the stained protein bands.

A short protocol for protein staining with Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 in polyacrylamide gels is described without using organic solvents or acetic acid as in the classical staining procedures with CBB.

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal neurons. In contrast, the adult zebrafish retina possesses the robust ability to spontaneously regenerate any neuronal class that is lost in a variety of different retinal damage models, including retinal puncture, chemical ablation, concentrated high temperature, and intense light treatment 1-8. Our lab extensively characterized regeneration of photoreceptors following constant intense light treatment and inner retinal neurons after intravitreal ouabain injection 2, 5, 9. In all cases, resident M&uuml;ller glia re-enter the cell cycle to produce neuronal progenitors, which continue to proliferate and migrate to the proper retinal layer, where they differentiate into the deficient neurons. 
	We characterized five different stages during regeneration of the light-damaged retina that were highlighted by specific cellular responses. We identified several differentially expressed genes at each stage of retinal regeneration by mRNA microarray analysis 10. Many of these genes are also critical for ocular development. To test the role of each candidate gene/protein during retinal regeneration, we needed to develop a method to conditionally limit the expression of a candidate protein only at times during regeneration of the adult retina. 
	Morpholino oligos are widely used to study loss of function of specific proteins during the development of zebrafish, Xenopus, chick, mouse, and tumors in human xenografts 11-14. These modified oligos basepair with complementary RNA sequence to either block the splicing or translation of the target RNA. Morpholinos are stable in the cell and can eliminate or "knockdown" protein expression for three to five days 12. 
	Here, we describe a method to efficiently knockdown target protein expression in the adult zebrafish retina. This method employs lissamine-tagged antisense morpholinos that are injected into the vitreous of the adult zebrafish eye. Using electrode forceps, the morpholino is then electroporated into all the cell types of the dorsal and central retina. Lissamine provides the charge on the morpholino for electroporation and can be visualized to assess the presence of the morpholino in the retinal cells. 
	Conditional knockdown in the retina can be used to examine the role of specific proteins at different times during regeneration. Additionally, this approach can be used to study the role of specific proteins in the undamaged retina, in such processes as visual transduction and visual processing in second order neurons.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

A method to conditionally knockdown a target protein&#x2019;s expression in the adult zebrafish retina is described, which involves intravitreally injecting antisense morpholinos and electroporating them into the retina. The resulting protein is knocked down for several days, which allows testing the protein&#x2019;s role in the regenerating or intact retina.

في الجسم الحي من Electroporation Morpholinos في شبكية العين اسماك الزرد الكبار

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration of adult tissues, such as the heart1, retina2, spinal cord3, optic nerve4, sensory hair cells5, and fins6.
The zebrafish fin is a relatively simple appendage that is easily manipulated to study multiple stages in epimorphic regeneration. Classically, fin regeneration was characterized by three distinct stages: wound healing, blastema formation, and fin outgrowth. After amputating part of the fin, the surrounding epithelium proliferates and migrates over the wound. At 33 &deg;C, this process occurs within six hours post-amputation (hpa, Figure 1B)6,7. Next, underlying cells from different lineages (ex. bone, blood, glia, fibroblast) re-enter the cell cycle to form a proliferative blastema, while the overlying epidermis continues to proliferate (Figure 1D)8. Outgrowth occurs as cells proximal to the blastema re-differentiate into their respective lineages to form new tissue (Figure 1E)8. Depending on the level of the amputation, full regeneration is completed in a week to a month.
The expression of a large number of gene families, including wnt, hox, fgf, msx, retinoic acid, shh, notch, bmp, and activin-betaA genes, is up-regulated during specific stages of fin regeneration9-16. However, the roles of these genes and their encoded proteins during regeneration have been difficult to assess, unless a specific inhibitor for the protein exists13, a temperature-sensitive mutant exists or a transgenic animal (either overexpressing the wild-type protein or a dominant-negative protein) was generated7,12. We developed a reverse genetic technique to quickly and easily test the function of any gene during fin regeneration.
Morpholino oligonucleotides are widely used to study loss of specific proteins during zebrafish, Xenopus, chick, and mouse development17-19. Morpholinos basepair with a complementary RNA sequence to either block pre-mRNA splicing or mRNA translation. We describe a method to efficiently introduce fluorescein-tagged antisense morpholinos into regenerating zebrafish fins to knockdown expression of the target protein. The morpholino is micro-injected into each blastema of the regenerating zebrafish tail fin and electroporated into the surrounding cells. Fluorescein provides the charge to electroporate the morpholino and to visualize the morpholino in the fin tissue.
This protocol permits conditional protein knockdown to examine the role of specific proteins during regenerative fin outgrowth. In the Discussion, we describe how this approach can be adapted to study the role of specific proteins during wound healing or blastema formation, as well as a potential marker of cell migration during blastema formation.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

We describe a method to conditionally knockdown the expression of a target protein during adult zebrafish fin regeneration. This technique involves micro-injecting and electroporating antisense oligonucleotide morpholinos into fin tissue, which allows testing the protein&#x2019;s role in various stages of fin regeneration, including wound healing, blastema formation, and regenerative outgrowth.

في Electroporation المجراة من Morpholinos في الكبار التجديد زعنفة الذيل الزرد

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and behavioural research. As a vertebrate, zebrafish share considerable genetic sequence similarity with humans and are being used as an animal model for various human disease conditions. The advantages of zebrafish in comparison to other common vertebrate models include high fecundity, low maintenance cost, transparent embryos, and rapid development. Due to the spur of interest in zebrafish research, the need to establish and maintain a productive zebrafish housing facility is also increasing. Although literature is available for the maintenance of a zebrafish laboratory, a concise video protocol is lacking. This video illustrates the protocol for regular housing, feeding, breeding and raising of zebrafish larvae. This process will help researchers to understand the natural behaviour and optimal conditions of zebrafish husbandry and hence troubleshoot experimental issues that originate from the fish husbandry conditions. This protocol will be of immense help to researchers planning to establish a zebrafish laboratory, and also to graduate students who are intending to use zebrafish as an animal model.

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

This protocol outlines regular maintenance and care to maintain optimal conditions for zebrafish husbandry. The video illustrates the protocol for system maintenance, regular housing, feeding, breeding, and raising of zebrafish larvae.

العناية والصيانة العادية من اسماك الزرد (<em&gt; دانيو rerio</em&gt;) المختبر: مقدمة

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Microgavage of Zebrafish Larvae

The zebrafish has emerged as a powerful model organism for studying intestinal development1-5, physiology6-11, disease12-16, and host-microbe interactions17-25. Experimental approaches for studying intestinal biology often require the in vivo introduction of selected materials into the lumen of the intestine. In the larval zebrafish model, this is typically accomplished by immersing fish in a solution of the selected material, or by injection through the abdominal wall. Using the immersion method, it is difficult to accurately monitor or control the route or timing of material delivery to the intestine. For this reason, immersion exposure can cause unintended toxicity and other effects on extraintestinal tissues, limiting the potential range of material amounts that can be delivered into the intestine. Also, the amount of material ingested during immersion exposure can vary significantly between individual larvae26. Although these problems are not encountered during direct injection through the abdominal wall, proper injection is difficult and causes tissue damage which could influence experimental results. We introduce a method for microgavage of zebrafish larvae. The goal of this method is to provide a safe, effective, and consistent way to deliver material directly to the lumen of the anterior intestine in larval zebrafish with controlled timing. Microgavage utilizes standard embryo microinjection and stereomicroscopy equipment common to most laboratories that perform zebrafish research. Once fish are properly positioned in methylcellulose, gavage can be performed quickly at a rate of approximately 7-10 fish/ min, and post-gavage survival approaches 100% depending on the gavaged material. We also show that microgavage can permit loading of the intestinal lumen with high concentrations of materials that are lethal to fish when exposed by immersion. To demonstrate the utility of this method, we present a fluorescent dextran microgavage assay that can be used to quantify transit from the intestinal lumen to extraintestinal spaces. This test can be used to verify proper execution of the microgavage procedure, and also provides a novel zebrafish assay to examine intestinal epithelial barrier integrity under different experimental conditions (e.g. genetic manipulation, drug treatment, or exposure to environmental factors). Furthermore, we show how gavage can be used to evaluate intestinal motility by gavaging fluorescent microspheres and monitoring their subsequent transit. Microgavage can be applied to deliver diverse materials such as live microorganisms, secreted microbial factors/toxins, pharmacological agents, and physiological probes. With these capabilities, the larval zebrafish microgavage method has the potential to enhance a broad range of research fields using the zebrafish model system.

We present a novel method for microgavage of larval zebrafish utilizing standard embryo microinjection and stereomicroscopy equipment. We demonstrate that microgavage is a safe and efficient technique useful for delivering controlled amounts of diverse materials specifically into the larval zebrafish intestinal lumen.

Microgavage من يرقات اسماك الزرد

The zebrafish has emerged as a powerful model organism for studying intestinal development1-5, physiology6-11, disease12-16, and host-microbe ...

Using an Automated 3D-tracking System to Record Individual and Shoals of Adult Zebrafish

Like many aquatic animals, zebrafish (Danio rerio) moves in a 3D space. It is thus preferable to use a 3D recording system to study its behavior. The presented automatic video tracking system accomplishes this by using a mirror system and a calibration procedure that corrects for the considerable error introduced by the transition of light from water to air. With this system it is possible to record both single and groups of adult zebrafish. Before use, the system has to be calibrated. The system consists of three modules: Recording, Path Reconstruction, and Data Processing. The step-by-step protocols for calibration and using the three modules are presented. Depending on the experimental setup, the system can be used for testing neophobia, white aversion, social cohesion, motor impairments, novel object exploration etc. It is especially promising as a first-step tool to study the effects of drugs or mutations on basic behavioral patterns. The system provides information about vertical and horizontal distribution of the zebrafish, about the xyz-components of kinematic parameters (such as locomotion, velocity, acceleration, and turning angle) and it provides the data necessary to calculate parameters for social cohesions when testing shoals.

The use of a 3D automatic video system that can track individual and groups of zebrafish is described. As application example we explore the effects of the NMDA-receptor antagonist MK-801 on shoals of zebrafish.

باستخدام نظام 3D تتبع الآلي لتسجيل الفردية وشولز من اسماك الزرد الكبار

Like many aquatic animals, zebrafish (Danio rerio) moves in a 3D space. It is thus preferable to use a 3D recording system to study its behavior. The ...

Rapid and Efficient Zebrafish Genotyping Using PCR with High-resolution Melt Analysis

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic tools have been introduced, including multiple strategies for inducing mutations and generating transgenic lines. However, large-scale screening is limited by traditional genotyping methods, which are time-consuming and labor-intensive. Here we describe a technique to analyze zebrafish genotypes by PCR combined with high-resolution melting analysis (HRMA).&#160;This approach is rapid, sensitive, and inexpensive, with lower risk of contamination artifacts.&#160;Genotyping by PCR with HRMA can be used for embryos or adult fish, including in high-throughput screening protocols.

PCR combined with high-resolution melt analysis (HRMA) is demonstrated as a rapid and efficient method to genotype zebrafish.

سريعة وفعالة الزرد التنميط الجيني باستخدام PCR عالية الدقة مع تحليل نذوب

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic ...

An Assay for Lateral Line Regeneration in Adult Zebrafish

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line development and regeneration. The zebrafish is particularly attractive for such studies because of its rapid development time and its high regenerative capacity. To date, zebrafish studies of lateral line regeneration have mainly utilized fish of the embryonic and larval stages because of the lower number of neuromasts at these stages. This has made quantitative analysis of lateral line regeneration/and or development easier in the earlier developmental stages. Because many zebrafish models of neurological and non-neurological diseases are studied in the adult fish and not in the embryo/larvae, we focused on developing a quantitative lateral line regenerative assay in adult zebrafish so that an assay was available that could be applied to current adult zebrafish disease models. Building on previous studies by Van Trump et al.17&#160;that described procedures for ablation of hair cells in adult Mexican blind cave fish and zebrafish (Danio rerio), our assay was designed to allow quantitative comparison between control and experimental groups. This was accomplished by developing a regenerative neuromast standard curve based on the percent of neuromast reappearance over a 24 hr time period following gentamicin-induced necrosis of hair cells in a defined region of the lateral line. The assay was also designed to allow extension of the analysis to the individual hair cell level when a higher level of resolution is required.

Because many zebrafish models of neurological and non-neurological diseases are studied in the adult fish rather than the embryo/larvae, we developed a quantitative lateral line regenerative assay that can be applied to adult zebrafish disease models. The assay involved resolution at the 1) neuromast and 2) individual hair cell levels.

على الفحص لتجديد الخط الجانبي في اسماك الزرد الكبار

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

استنساخ فرعي زائد الإدراج (SPI) - رواية الطريقة Recombineering عن البناء السريع للجين استهداف ناقلات

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...