המחברים מבקשים להודות למשרד המחקר של בית הספר לרוקחות במכללה Presbyterian לתמיכה כספית של פרויקט זה באמצעות בית מרקחת פרסים הקטן למחקר ולשיתוף פעולה בפרס (SPARC). המחברים מודים למר ג&#39;ון Smink, מנהל המעבדה לחקר Aquatic בעלי החיים, אוניברסיטת קלמסון, קלמסון, SC לתיקון כתב יד סיוע הטכני שלו.

הערה: פרוטוקולים אלה עוקבים אחר ההנחיות בIACUC של Presbyterian מכללה. 1. חומרים רוכשים מפורטים בטבלה 1. 2. להרכיב 5 המדף Chrome על פי הוראות היצרן. זה ישמש לבית המתקן. 3. לבנות מערכת סינון (איורים 1 א ו -2) המאגר והמים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש באיור 1 א כמדריך, פריסת דלי 18 ליטר, משאבה, המסננים ומנורת UV כדי לקבוע את מיקום התקנה סופית וגודל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהחלקים מונחים, למדוד ולחתוך &quot;צינור PVC ¾ לאורך הדרוש להרכבה. להשתנות האורכים של כל הצינורות בהתאם לצרכים ספציפיים ומגבלות שטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב צינורות ואביזרים כפי שהותווה בעבר תוך שימוש בפריימר PVC והמלט, ראה להלן (3.3.2 ו3.3.3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חול קצות החתך של הצינור עם נייר זכוכית עד שהם חלק למגעד אין פסולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראש מחוץ לצינור ואת החלק הפנימי של הולם עם פריימר PVC שנרכש עם הספוגית הכלולה מפריימר PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלט הצינור והולם יחד על ידי יישום מלט PVC לחלק החיצוני של הצינור באמצעות הספוגית הכלולה. חזור לכל הצעדים שצריכים מלט PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את דלי 18 ליטר לצד אחד של בניית המדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן מחבר מחיצה בצד של טנק המאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף &quot;צינור PVC ¾ למחיצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הקצה השני של &quot;צינור לכניסת המשאבה באמצעות ¾&quot; ¾ הליכי להפוך הולם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את המסננים למשאבה באמצעות שני מרפקים 90 מעלות ו¾ &quot;צינור PVC. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במסנן נייר אחד ואחריו מסנני פחם פעילים אחד כדי לסנן פסולת ולהפחית את רמות הכלור וכימיות במים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את מנורת UV לaccordi המסנניםng להוראות היצרן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את מערכת סינון המשאבה והצד העליון של המדף הראשון של המתלה באמצעות קשרי חוט. להשתנות סדר ההרכבה והמצורף בהתאם לגודל והפריסה של המדף / המדף שנבחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף bioball 1 לגלון מים למאגר המים ברגע שמערכת מסנן המשאבה והם התאספו ומחוברים למדף. </li></ol> 4. לבנות הקו הראשי האספקה ​​(1B דמויות ו -2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד ולחתוך חתיכה של ¾ &quot;צינור PVC כדי לחבר את מנורת UV לאספקה ​​העיקרית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש &quot;טי PVC להתחיל נתיב האספקה ​​העיקרית על ידי חיבור טי ל¾&quot; ¾ פליטת PVC מגיעה ממסנן UV. . <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף שסתום על-off לתחתית טי PVC לשמש ניקוז לשטיפת תחזוקה של המערכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל נתיב האספקה ​​העיקרית של מהחלק העליון של ¾ &quot;טי PVC על ידי מדידה וחיתוך ¾&quot; PVCצינור לאורך רצוי לספק צינורות הזנה לכל אחד מהמדפים על המדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן ¾ &quot;טיז PVC לקווים אופקיים שייכנסו כל מדף של המדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין (והציע), להוסיף ¾ &quot;על-off שסתום עבור כל קו אספקת מדף כדי לאפשר בידוד של כל מדף ועיצוב המודולרי של המערכת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש &quot;צינור PVC ¾ כלחץ צמצום קו על המדף העליון. אם הקו הזה פועל על חלקו האחורי של המדף, להשתמש מדף זה לאחסון. בסופו של לחץ צמצום קו בקו הפליטה העיקרי (איור 1) עם ¾ &quot;שסתום על-off. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהצעדים לעיל הושלמו, ראש ולחזק את צינור PVC יחד כפי שנעשו בעבר בעת בניית מערכת המאגר וסינון. </li></ol> 5. לבנות הקו הראשי הפליטה (1C דמויות ו -2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את האורך האנכי של קו הפליטה העיקרי לצד השני של f המדף האחררום נתיב האספקה ​​העיקרית. השתמש בצינור PVC 2 &quot;עבור קו אנכי זה כדי לקבל את נתיב האספקה ​​העיקרית בשורות העליונה וניקוז מהטנקים דגים מכל מדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את החתיכות של 2 &quot;צינור PVC לקו הפליטה העיקרי האנכי ולהשתמש 2&quot; טיז PVC לקבל קווי ניקוז האקווריום מכל מדף. בסופו של קו הפליטה העיקרי במניות הטנק לגרש את המים הממוחזרים על פילטר ספוג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך אינץ &#39;אחד פתיחה לכל אורך חלקי צינור 2 &quot;PVC ולצרף לקו פליטה העיקרי אנכי עם PVC T לקווי ניקוז אופקיים מהטנקים הדגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כובע 2 &quot;קווי ניקוז אופקיים עם 2&quot; כובע PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראש ולחזק את החלקים באמצעות אביזרים הדרושים (מחברים, פטמות או מרפקים). </li></ol> 6. לבנות טנקי דגים (איור 3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם המקדחה, לחתוך &quot;חור בחלק האחורי של האקווריום 1&quot; 1 1/8 מתחת לקצה העליון במסור חור. </li><li&gt; החלק &quot;מתאם הליכי ¾ זכר PVC (עם טבעת 18 # O המצורף) דרך החור (מהחלק הפנימי של המכל לבחוץ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף ולהדק 90 מעלות 3/4 &quot;הליכי מרפק PVC למתאם הזכר ליצירת צינור פליטת האקווריום. להוסיף חתיכת רשת בסדר לפני הברגת אגוז ההחזקה כדי למנוע דג הזברה עוברת מערכת הפליטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את האקווריום עם סיום צינור הפליטה שלו למרחב הפתוח של קו הניקוז מאחורי הטנקים </li></ol> 7. החל מערכת המים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכמה מכולות, כמו זו המשמשת למאגר, למדוד שלוש פעמים את כמות מים הכלול בתוך המערכת. בואו מים זה לעמוד בטמפרטורת חדר למשך אוויר במשך 48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף מים למערכת ולתת לו לזרום למינימום של 3 ימים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחליף את המים במערכת במרץ לאורך 3 הימים הראשונים של מחזור דם כדי להיפטר המערכת של tha מזהמיםt מתגורר בתוך הצינורות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף דג הזברה המתנע ולאפשר מחזור החנקן להתבסס. לנרמל pH ל7. עקביים שמור שבע דג הזברה ל1.8 L, ולהאכיל אותם פעמיים ביום במהלך ימי שבוע ופעם ביום במהלך סופי השבוע כפי שהוצע על ידי 4 Linbo וMcNabb 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג חנקתי (&lt;75 מ&quot;ג / ליטר), ניטריט (&lt;10 מ&quot;ג / ליטר), ואמוניום (0 מ&quot;ג / ליטר) ביום בשבוע הראשון לאחר הוספת דגים, ורמות פעמיים בשבוע רצויים פעם אחת נשמר עם שינויי מים סדירים . </li></ol>

<ol>
	<li>Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , (2010).</li><li>Grim, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogen+(hemgn),+a+transcription+factor+that+regulates+erythropoiesis+and+skeletogenesis+in+zebrafish.">Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish.</a> , (2013).</li><li>Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+easy-to-assemble,+low-cost+facility.">Modular, easy-to-assemble, low-cost facility.</a> Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).</li><li>Linbo, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+(Danio+rerio)+husbandry+and+colony+maintenance+at+the+Northwest+Fisheries+Science+Center.">Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center.</a> U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. 69, 4196 (2012).</li><li>McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+be+afraid+to+set+up+your+fish+facility.">Don't be afraid to set up your fish facility.</a> Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).</li><li>Garcia, R. L., Sanders, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cleaning+and+disinfection+procedures+in+a+zebrafish+rerio)+facility.">Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).</li><li>Rivas-Boyero, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+a+nociceptin+receptor+from+zebrafish+(Danio+rerio).">Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio).</a> J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).</li><li>Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+regulates+dopaminergic+neuron+differentiation+via+miR-133b.">Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b.</a> Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).</li><li>Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodr&#237;guez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mu+opioid+from+the+zebrafish+exhibits+functional+characteristics+as+those+of+mammalian+mu+opioid+receptor.">Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor.</a> Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).</li></ol>

המחברים מצהירים שום ניגוד עניינים למאמר זה.

מטרתו העיקרית של מאמר זה היא להוכיח כי הקמת מתקן דג הזברה פונקציונלי היא לא מסובכת ויכולה להיות שנבנתה על ידי חוקרי דגי טירון עם ידע מינימאלי בנייה. יתר על כן, מאמר זה מראה כי החומרים למתקן דג הזברה פונקציונלי זה ניתן לרכוש בקלות ובעלות סבירה מחנויות אספקת חיית מחמד מ?...

In vivo מודלים חיוניים במחקר ביו-רפואי מקיף שכן הם מאפשרים במחקר מבחנה להיות מתורגמים ברמת המערכת והאורגניזם. לדוגמא, מחקר עם יונקים קטנים, כלומר מכרסמים, הוכח צורך בפיתוח תרופות ובשיפור של תרופות זמינות. עם זאת, את המורכבות (כספי ולוגיסטי) עלולות להפוך אותו לכמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסם לניסויים במוסדות אקדמיים מציע מחקר קטנים. עם זאת, במחקר vivo יכול להתבצע באמצעות בעלי חיים אחרים הדורשים לוגיסטיקה פחות משוכללת. דג הזברה (Danio rerio) שימש בהצלחה כמודל in vivo ללמוד גנטיקה, התפתחות, הפתופיזיולוגיה, ו1,2,10,11,12 פרמקולוגיה. המתקנים הנדרשים לבית דג הזברה לניסויים הם יחסית פשוטים ומשמעותי פחות יקר בהשוואה לrמתקני אודנט. קים et al. 3 תארו לאחרונה בפירוט מערכת דיור דג הזברה 80 טנק שיכול להיות בנויה לכ -1,500 דולרים, שכולל שני חלקים ועלויות עבודה. זה עומד בניגוד מוחלט לכמעט 8500 $ שיידרשו לרכוש מערכת מוכנה, 80 טנקים ממספר כלשהו של ספקים מסחריים. עם זאת, התיאור שניתן על ידי אל קים et. יכול להיות מסובך וקשה לעקוב אחרי יותר עבור משתמשים חדשים של מחקר דגים. אנו מאמינים כי מתקן דג הזברה יכול להיות בנוי באופן פשוט להשקעה של 1,500 דולר. הקמת מתקן in vivo במוסדות אקדמיים קטנים מספקת הפקולטות שלהם כלי נוסף שבה לייצר מחקר יותר חזק ויסודי. במבחנה נתונים נתמכים על ידי in vivo תוצאות בדרך כלל לייצר מחקר ביו-רפואי מקיף יותר מאשר נתונים המתקבלים באמצעות רק בגישות חוץ גופית. לכן,יישום מתקן מחקר in vivo ישפר במידה ניכרת את הצלחת המוסד במאמצי המחקר הכולל שלה (חשיפת סטודנט למחקר, פרסומים, תקשורת, מרדף אחר מימון חיצוני, וכו &#39;.). הקמת מתקן דג הזברה כמו זה שתואר במחקר זה היא אידיאלית עבור מוסדות אקדמיים מחקריים עם מתקנים מוגבלים (או במוסדות ללא in vivo מתקני מחקר) בהצרת פעמים פיננסיות.

<table><tbody><tr><td>Item</td><td>Brand</td><td>Quantity</td><td></td></tr><tr><td>74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit</td><td>Style Selections</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>18-Gallon General Bucket/Tote</td><td>Centrex Plastics: LLC&amp;nbsp;Rugged Tote</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord</td><td>Master Electrician</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp</td><td>Smartpond&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Whole House Water Replacement Filter</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing</td><td>Whirlpool</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>Thread Seal Tape</td><td>William H Harvey</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC PVC Cement</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC Primer</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing</td><td>Mister Landscaper&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve</td><td>Mister Landscaper</td><td>33</td><td></td></tr><tr><td>9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter</td><td>&amp;nbsp;Mister Landscaper</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Drop-In Filter with House&amp;nbsp;</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree PVC Elbow</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree Tee</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow</td><td>LASCO</td><td>15</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>7</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Tee</td><td>LASCO</td><td>12</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia PVC Cap</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve</td><td>American Valve</td><td>5</td><td></td></tr><tr><td>1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>Lasco</td><td>8</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Cap</td><td>Lasco</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>2-In x 5-Ft Pvc Pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>4</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;-In x 10-Ft Pvc pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>11/16x1-7/80 PVC ring</td><td>SXT</td><td>10</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC male adapter</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC coupling&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC female adapter&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>link</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.8 L Dual Beta Keeper</td><td>Top Fin</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC male adapter (w/ #18 O-ring)</td><td>SXT</td><td>28</td><td></td></tr><tr><td>90-degree &amp;frac34;&amp;rdquo; threaded PVC elbow</td><td>SXT</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>Fine Mesh</td><td>N/A</td><td>1 yard</td><td></td></tr><tr><td>Bulkhead Connector</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hacksaw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Drill</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hole saw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Adjustable Wrench</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Pliers&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Tape Measure</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Safety Glasses</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Work Gloves</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr></tbody></table>

construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility

In vivo מחקר הביו-רפואי הוא ציר מרכזי לתרגם בממצאים חוץ גופית להתקדמות קלינית. מוסדות אקדמיים קטנים עם משאבים מוגבלים מוצאים את זה כמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסמים אופייניים למחקר. מחקר דג הזברה כבר הוכיח להיות חלופה רבת ערך למחקר in vivo בפרמקולוגיה, פיזיולוגיה, פיתוח ומחקרים גנטיים. מאמר זה מדגים כי מתקן דג הזברה פונקציונלי יכול להיות בנוי בצורה קלה ובמחיר סביר. אנו מראים כי מתקן כזה יכול להיות בנוי כביום עבודה עם כלים ומומחיות מינימאליים. עלות מתקן דג הזברה 27 1.8 L האקווריום נבנה במחקר זה הייתה כ 1500 $. אנו מעריכים כי התחזוקה של מושבה דגים ראשונית עבודה 150 במשך 3 חודשים היא 1,000 דולר. תלמידים זה פרויקט מעורב, שהוכנסו לaquaculturing של דג הזברה למחקר מציע.

בנייה של מערכת השאיבה וFlters ברגע שהמדף מורכב ולהגדיר את הצעד הראשון הוא לבנות את מערכת המשאבה ומסנן. המסננים מחוברים למשאבת המערכת ונמצאים מעל לרמה התחתונה של המדף הראשון, המאפשר לתחזוקת מסנן קלה והחלפה. באופן דומה, מנורת UV מחוברת עם צינור PVC למסנן ונערכה במקו...

Watch this Scientific Journal Video about Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility at JoVE.com

Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

הקמת מתקן דג הזברה בנייה קלה למשתלם ו

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

construction-of-an-affordable-and-easy-to-build-zebrafish-facility

Research

JoVE Journal

Biology

16.3K Views.  Presbyterian College School of Pharmacy. A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Video: Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related research fields. Thanks to its unique features, including large fecundity, embryo translucency, rapid and simultaneous development, etc., zebrafish embryos are often used for large scale toxicity assessment of chemicals and drug/compound screening. A typical screening procedure involves adult zebrafish spawning, embryos selection, and arraying the embryos into multi-well plates. From there, embryos are subjected to exposure and the toxicity of chemical, or the effectiveness of the drugs/compounds can be evaluated relatively quickly based on phenotypic observations. Among these processes, embryos arraying is one of the most time-consuming and labor-intensive steps that limits the throughput level. In this protocol, we present an innovative approach that makes use of a 3D-printed arraying template coupled with vacuum manipulation to speed up this laborious step. The protocol herein describes the overall design of the arraying template, a detailed experimental setup and step-by-step procedure, followed by representative results. When implemented, this approach should prove beneficial in a variety of research applications using zebrafish embryos as testing subjects.

A 3-dimensional 3D-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

Here, we present a protocol to design and fabricate a zebrafish embryo arraying template, followed by a detailed procedure on the use of such template for high throughput zebrafish embryo arraying into a 96-well plate.

תלת-ממדי (3D)-להדפיס תבנית עבור תפוקה גבוהה דג זברה העובר סידור במערך

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related ...

Environment

Microstructured Devices for Optimized Microinjection and Imaging of Zebrafish Larvae

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning fundamental developmental biology through to large-scale genetic and chemical screens. However, many experiments, especially those related to infection and xenograft models, rely on microinjection and imaging of embryos and larvae, which are laborious techniques that require skill and expertise. To improve the precision and throughput of current microinjection techniques, we developed a series of microstructured devices to orient and stabilize zebrafish embryos at 2 days post fertilization (dpf) in ventral, dorsal, or lateral orientation prior to the procedure. To aid in the imaging of embryos, we also designed a simple device with channels that orient 4 zebrafish laterally in parallel against a glass cover slip. Together, the tools that we present here demonstrate the effectiveness of photolithographic approaches to generate useful devices for the optimization of zebrafish techniques.

Microinjection of zebrafish embryos and larvae is a crucial but challenging technique used in many zebrafish models. Here, we present a range of microscale tools to aid in the stabilization and orientation of zebrafish for both microinjection and imaging.

Microstructured מכשירי Microinjection אופטימיזציה והדימות של הזחלים דג זברה

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning ...

Developmental Biology

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system measures spontaneous behaviors and the response to an aversive stimulus, which is shown to the larvae via a PowerPoint presentation. The recorded images are analyzed with an ImageJ macro, which automatically splits the color channels, subtracts the background, and applies a threshold to identify individual larvae placement in the lanes. We can then import the coordinates into an Excel sheet to quantify swim speed, preference for edge or side of the lane, resting behavior, thigmotaxis, distance between larvae, and avoidance behavior. Subtle changes in behavior are easily detected using our system, making it useful for behavioral analyses after exposure to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Our laboratory developed a novel high-throughput automated imaging system that is useful for the detection of several different behaviors in 7-day-old zebrafish larvae. The system can be used for detecting subtle changes in behavior after the larvae have been exposed to environmental toxicants or pharmaceuticals.

ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Neuroscience

The Zebrafish Tol2 System: A Modular and Flexible Gateway-Based Transgenesis Approach

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to prenatal ethanol exposure. Due to the complex pathology of FASD, animal models have proven critical to our current understanding of ethanol-induced developmental defects. Zebrafish have proven to be a powerful model to examine ethanol-induced developmental defects due to the high degree of conservation of both genetics and development between zebrafish and humans. As a model system, zebrafish possess many attributes that make them ideal for developmental studies, including large numbers of externally fertilized embryos that are genetically tractable and translucent. This allows researchers to precisely control the timing and dosage of ethanol exposure in multiple genetic contexts. One important genetic tool available in zebrafish is transgenesis. However, generating transgenic constructs and establishing transgenic lines can be complex and difficult. To address this issue, zebrafish researchers have established the transposon-based Tol2 transgenesis system. This modular system uses a multisite Gateway cloning approach for the quick assembly of complete Tol2 transposon-based transgenic constructs. Here, we describe the flexible Tol2 system toolbox and a protocol for generating transgenic constructs ready for zebrafish transgenesis and their use in ethanol studies.

This work describes a protocol for the modular Tol2 transgenesis system, a gateway-based cloning method to create and inject transgenic constructs into zebrafish embryos.

מערכת Tol2 של דג הזברה: גישת טרנסגנזה מודולרית וגמישה מבוססת שער

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to ...

חקירת פיתוח באמצעות מניפולציה של איתות אופטוגנטי בדגי זברה

Optogenetic Signaling Activation in Zebrafish Embryos

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally manipulate signaling are required to understand how signaling is interpreted in these wide-ranging contexts. Molecular optogenetic&#160;tools can provide reversible, tunable manipulations of signaling pathway activity with a high degree of spatiotemporal control and have been applied in vitro, ex vivo, and in vivo. These tools couple light-responsive protein domains, such as the blue light homodimerizing light-oxygen-voltage sensing (LOV) domain, with signaling effectors to confer light-dependent experimental control over signaling. This protocol provides practical guidelines for using the LOV-based bone morphogenetic protein (BMP) and Nodal signaling activators bOpto-BMP and bOpto-Nodal in the optically accessible early zebrafish embryo. It describes two control experiments: A quick phenotype assay to determine appropriate experimental conditions, and an immunofluorescence assay to directly assess signaling. Together, these control experiments can help establish a pipeline for using optogenetic tools in early zebrafish embryos. These strategies provide a powerful platform to investigate the roles of signaling in development, health, and physiology.

מחבר זרקור: מניפולציה איתות בעוברים של דגי זברה כדי לפענח החלטות גורל התא 

Optogenetic manipulation of signaling pathways can be a powerful strategy to investigate how signaling is decoded in development, regeneration, homeostasis, and disease. This protocol provides practical guidelines for using light-oxygen-voltage sensing domain-based Nodal and bone morphogenic protein (BMP) signaling activators in the early zebrafish embryo.

הפעלת איתות אופטוגנטי בעוברים של דגי זברה

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and behavioural research. As a vertebrate, zebrafish share considerable genetic sequence similarity with humans and are being used as an animal model for various human disease conditions. The advantages of zebrafish in comparison to other common vertebrate models include high fecundity, low maintenance cost, transparent embryos, and rapid development. Due to the spur of interest in zebrafish research, the need to establish and maintain a productive zebrafish housing facility is also increasing. Although literature is available for the maintenance of a zebrafish laboratory, a concise video protocol is lacking. This video illustrates the protocol for regular housing, feeding, breeding and raising of zebrafish larvae. This process will help researchers to understand the natural behaviour and optimal conditions of zebrafish husbandry and hence troubleshoot experimental issues that originate from the fish husbandry conditions. This protocol will be of immense help to researchers planning to establish a zebrafish laboratory, and also to graduate students who are intending to use zebrafish as an animal model.

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

This protocol outlines regular maintenance and care to maintain optimal conditions for zebrafish husbandry. The video illustrates the protocol for system maintenance, regular housing, feeding, breeding, and raising of zebrafish larvae.

טיפול קבוע ותחזוקה של דג זברה (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) מעבדה: מבוא

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model congenital abnormalities. During the first day of life, the zebrafish embryo progresses through many developmental stages including fertilization, cleavage, gastrulation, segmentation, and the organogenesis of structures such as the kidney, heart, and central nervous system. The anatomy of a young zebrafish embryo presents several challenges for the visualization and analysis of the tissues involved in many of these events because the embryo develops in association with a round yolk mass. Thus, for accurate analysis and imaging of experimental phenotypes in fixed embryonic specimens between the tailbud and 20 somite stage (10 and 19 hours post fertilization (hpf), respectively), such as those stained using whole mount in situ hybridization (WISH), it is often desirable to remove the embryo from the yolk ball and to position it flat on a glass slide. However, performing a flat mount procedure can be tedious. Therefore, successful and efficient flat mount preparation is greatly facilitated through the visual demonstration of the dissection technique, and also helped by using reagents that assist in optimal tissue handling. Here, we provide our WISH protocol for one or two-color detection of gene expression in the zebrafish embryo, and demonstrate how the flat mounting procedure can be performed on this example of a stained fixed specimen. This flat mounting protocol is broadly applicable to the study of many embryonic structures that emerge during early zebrafish development, and can be implemented in conjunction with other staining methods performed on fixed embryo samples.

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is an excellent model for developmental biology research. During embryogenesis, zebrafish develop with a yolk mass, which presents three-dimensional challenges for sample observation and analysis. This protocol describes how to create two-dimensional flat mount preparations of whole mount in situ (WISH) stained zebrafish embryo specimens.

הר הכנה שטוחה לתצפית וניתוח של עובר דג הזברה דוגמאות ויטראז בהר שלם<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model ...

A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology due to their considerable degree of genetic conservation with humans. Chemical genetics entails testing the effect that small molecules have on a biological process and is becoming a popular translational research method to identify therapeutic compounds. Zebrafish are specifically appealing to use for chemical genetics because of their ability to produce large clutches of transparent embryos, which are externally fertilized. Furthermore, zebrafish embryos can be easily drug treated by the simple addition of a compound to the embryo media. Using whole-mount in situ hybridization (WISH), mRNA expression can be clearly visualized within zebrafish embryos. Together, using chemical genetics and WISH, the zebrafish becomes a potent whole organism context in which to determine the cellular and physiological effects of small molecules. Innovative advances have been made in technologies that utilize machine-based screening procedures, however for many labs such options are not accessible or remain cost-prohibitive. The protocol described here explains how to execute a manual high-throughput chemical genetic screen that requires basic resources and can be accomplished by a single individual or small team in an efficient period of time. Thus, this protocol provides a feasible strategy that can be implemented by research groups to perform chemical genetics in zebrafish, which can be useful for gaining fundamental insights into developmental processes, disease mechanisms, and to identify novel compounds and signaling pathways that have medically relevant applications.

The zebrafish is an excellent experimental organism to study vertebrate developmental processes and model human disease. Here, we describe a protocol on how to perform a manual high-throughput chemical screen in zebrafish embryos with a whole-mount in situ hybridization (WISH) read-out.

מסך ידני מולקולה קטנה מתקרב תפוקה גבוהה באמצעות עוברי דג הזברה

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology ...

הקמת מתקן דג הזברה בנייה קלה למשתלם ו

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

תלת-ממדי (3D)-להדפיס תבנית עבור תפוקה גבוהה דג זברה העובר סידור במערך

Microstructured מכשירי Microinjection אופטימיזציה והדימות של הזחלים דג זברה

ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה

מערכת Tol2 של דג הזברה: גישת טרנסגנזה מודולרית וגמישה מבוססת שער

הפעלת איתות אופטוגנטי בעוברים של דגי זברה

הפעלת איתות אופטוגנטי בעוברים של דגי זברה

הפעלת איתות אופטוגנטי בעוברים של דגי זברה

טיפול קבוע ותחזוקה של דג זברה (

הר הכנה שטוחה לתצפית וניתוח של עובר דג הזברה דוגמאות ויטראז בהר שלם

מסך ידני מולקולה קטנה מתקרב תפוקה גבוהה באמצעות עוברי דג הזברה