המחברים מבקשים להודות למשרד המחקר של בית הספר לרוקחות במכללה Presbyterian לתמיכה כספית של פרויקט זה באמצעות בית מרקחת פרסים הקטן למחקר ולשיתוף פעולה בפרס (SPARC). המחברים מודים למר ג&#39;ון Smink, מנהל המעבדה לחקר Aquatic בעלי החיים, אוניברסיטת קלמסון, קלמסון, SC לתיקון כתב יד סיוע הטכני שלו.

הערה: פרוטוקולים אלה עוקבים אחר ההנחיות בIACUC של Presbyterian מכללה. 1. חומרים רוכשים מפורטים בטבלה 1. 2. להרכיב 5 המדף Chrome על פי הוראות היצרן. זה ישמש לבית המתקן. 3. לבנות מערכת סינון (איורים 1 א ו -2) המאגר והמים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש באיור 1 א כמדריך, פריסת דלי 18 ליטר, משאבה, המסננים ומנורת UV כדי לקבוע את מיקום התקנה סופית וגודל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהחלקים מונחים, למדוד ולחתוך &quot;צינור PVC ¾ לאורך הדרוש להרכבה. להשתנות האורכים של כל הצינורות בהתאם לצרכים ספציפיים ומגבלות שטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב צינורות ואביזרים כפי שהותווה בעבר תוך שימוש בפריימר PVC והמלט, ראה להלן (3.3.2 ו3.3.3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חול קצות החתך של הצינור עם נייר זכוכית עד שהם חלק למגעד אין פסולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראש מחוץ לצינור ואת החלק הפנימי של הולם עם פריימר PVC שנרכש עם הספוגית הכלולה מפריימר PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלט הצינור והולם יחד על ידי יישום מלט PVC לחלק החיצוני של הצינור באמצעות הספוגית הכלולה. חזור לכל הצעדים שצריכים מלט PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את דלי 18 ליטר לצד אחד של בניית המדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן מחבר מחיצה בצד של טנק המאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף &quot;צינור PVC ¾ למחיצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הקצה השני של &quot;צינור לכניסת המשאבה באמצעות ¾&quot; ¾ הליכי להפוך הולם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את המסננים למשאבה באמצעות שני מרפקים 90 מעלות ו¾ &quot;צינור PVC. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במסנן נייר אחד ואחריו מסנני פחם פעילים אחד כדי לסנן פסולת ולהפחית את רמות הכלור וכימיות במים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את מנורת UV לaccordi המסנניםng להוראות היצרן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את מערכת סינון המשאבה והצד העליון של המדף הראשון של המתלה באמצעות קשרי חוט. להשתנות סדר ההרכבה והמצורף בהתאם לגודל והפריסה של המדף / המדף שנבחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף bioball 1 לגלון מים למאגר המים ברגע שמערכת מסנן המשאבה והם התאספו ומחוברים למדף. </li></ol> 4. לבנות הקו הראשי האספקה ​​(1B דמויות ו -2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד ולחתוך חתיכה של ¾ &quot;צינור PVC כדי לחבר את מנורת UV לאספקה ​​העיקרית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש &quot;טי PVC להתחיל נתיב האספקה ​​העיקרית על ידי חיבור טי ל¾&quot; ¾ פליטת PVC מגיעה ממסנן UV. . <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף שסתום על-off לתחתית טי PVC לשמש ניקוז לשטיפת תחזוקה של המערכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל נתיב האספקה ​​העיקרית של מהחלק העליון של ¾ &quot;טי PVC על ידי מדידה וחיתוך ¾&quot; PVCצינור לאורך רצוי לספק צינורות הזנה לכל אחד מהמדפים על המדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקן ¾ &quot;טיז PVC לקווים אופקיים שייכנסו כל מדף של המדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין (והציע), להוסיף ¾ &quot;על-off שסתום עבור כל קו אספקת מדף כדי לאפשר בידוד של כל מדף ועיצוב המודולרי של המערכת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש &quot;צינור PVC ¾ כלחץ צמצום קו על המדף העליון. אם הקו הזה פועל על חלקו האחורי של המדף, להשתמש מדף זה לאחסון. בסופו של לחץ צמצום קו בקו הפליטה העיקרי (איור 1) עם ¾ &quot;שסתום על-off. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהצעדים לעיל הושלמו, ראש ולחזק את צינור PVC יחד כפי שנעשו בעבר בעת בניית מערכת המאגר וסינון. </li></ol> 5. לבנות הקו הראשי הפליטה (1C דמויות ו -2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את האורך האנכי של קו הפליטה העיקרי לצד השני של f המדף האחררום נתיב האספקה ​​העיקרית. השתמש בצינור PVC 2 &quot;עבור קו אנכי זה כדי לקבל את נתיב האספקה ​​העיקרית בשורות העליונה וניקוז מהטנקים דגים מכל מדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את החתיכות של 2 &quot;צינור PVC לקו הפליטה העיקרי האנכי ולהשתמש 2&quot; טיז PVC לקבל קווי ניקוז האקווריום מכל מדף. בסופו של קו הפליטה העיקרי במניות הטנק לגרש את המים הממוחזרים על פילטר ספוג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך אינץ &#39;אחד פתיחה לכל אורך חלקי צינור 2 &quot;PVC ולצרף לקו פליטה העיקרי אנכי עם PVC T לקווי ניקוז אופקיים מהטנקים הדגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כובע 2 &quot;קווי ניקוז אופקיים עם 2&quot; כובע PVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראש ולחזק את החלקים באמצעות אביזרים הדרושים (מחברים, פטמות או מרפקים). </li></ol> 6. לבנות טנקי דגים (איור 3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם המקדחה, לחתוך &quot;חור בחלק האחורי של האקווריום 1&quot; 1 1/8 מתחת לקצה העליון במסור חור. </li><li&gt; החלק &quot;מתאם הליכי ¾ זכר PVC (עם טבעת 18 # O המצורף) דרך החור (מהחלק הפנימי של המכל לבחוץ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף ולהדק 90 מעלות 3/4 &quot;הליכי מרפק PVC למתאם הזכר ליצירת צינור פליטת האקווריום. להוסיף חתיכת רשת בסדר לפני הברגת אגוז ההחזקה כדי למנוע דג הזברה עוברת מערכת הפליטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את האקווריום עם סיום צינור הפליטה שלו למרחב הפתוח של קו הניקוז מאחורי הטנקים </li></ol> 7. החל מערכת המים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכמה מכולות, כמו זו המשמשת למאגר, למדוד שלוש פעמים את כמות מים הכלול בתוך המערכת. בואו מים זה לעמוד בטמפרטורת חדר למשך אוויר במשך 48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף מים למערכת ולתת לו לזרום למינימום של 3 ימים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחליף את המים במערכת במרץ לאורך 3 הימים הראשונים של מחזור דם כדי להיפטר המערכת של tha מזהמיםt מתגורר בתוך הצינורות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף דג הזברה המתנע ולאפשר מחזור החנקן להתבסס. לנרמל pH ל7. עקביים שמור שבע דג הזברה ל1.8 L, ולהאכיל אותם פעמיים ביום במהלך ימי שבוע ופעם ביום במהלך סופי השבוע כפי שהוצע על ידי 4 Linbo וMcNabb 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג חנקתי (&lt;75 מ&quot;ג / ליטר), ניטריט (&lt;10 מ&quot;ג / ליטר), ואמוניום (0 מ&quot;ג / ליטר) ביום בשבוע הראשון לאחר הוספת דגים, ורמות פעמיים בשבוע רצויים פעם אחת נשמר עם שינויי מים סדירים . </li></ol>

<ol>
	<li>Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , (2010).</li><li>Grim, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogen+(hemgn),+a+transcription+factor+that+regulates+erythropoiesis+and+skeletogenesis+in+zebrafish.">Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish.</a> , (2013).</li><li>Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+easy-to-assemble,+low-cost+facility.">Modular, easy-to-assemble, low-cost facility.</a> Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).</li><li>Linbo, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+(Danio+rerio)+husbandry+and+colony+maintenance+at+the+Northwest+Fisheries+Science+Center.">Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center.</a> U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. 69, 4196 (2012).</li><li>McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+be+afraid+to+set+up+your+fish+facility.">Don't be afraid to set up your fish facility.</a> Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).</li><li>Garcia, R. L., Sanders, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cleaning+and+disinfection+procedures+in+a+zebrafish+rerio)+facility.">Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).</li><li>Rivas-Boyero, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+a+nociceptin+receptor+from+zebrafish+(Danio+rerio).">Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio).</a> J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).</li><li>Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+regulates+dopaminergic+neuron+differentiation+via+miR-133b.">Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b.</a> Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).</li><li>Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodr&#237;guez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mu+opioid+from+the+zebrafish+exhibits+functional+characteristics+as+those+of+mammalian+mu+opioid+receptor.">Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor.</a> Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).</li></ol>

המחברים מצהירים שום ניגוד עניינים למאמר זה.

מטרתו העיקרית של מאמר זה היא להוכיח כי הקמת מתקן דג הזברה פונקציונלי היא לא מסובכת ויכולה להיות שנבנתה על ידי חוקרי דגי טירון עם ידע מינימאלי בנייה. יתר על כן, מאמר זה מראה כי החומרים למתקן דג הזברה פונקציונלי זה ניתן לרכוש בקלות ובעלות סבירה מחנויות אספקת חיית מחמד מ?...

In vivo מודלים חיוניים במחקר ביו-רפואי מקיף שכן הם מאפשרים במחקר מבחנה להיות מתורגמים ברמת המערכת והאורגניזם. לדוגמא, מחקר עם יונקים קטנים, כלומר מכרסמים, הוכח צורך בפיתוח תרופות ובשיפור של תרופות זמינות. עם זאת, את המורכבות (כספי ולוגיסטי) עלולות להפוך אותו לכמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסם לניסויים במוסדות אקדמיים מציע מחקר קטנים. עם זאת, במחקר vivo יכול להתבצע באמצעות בעלי חיים אחרים הדורשים לוגיסטיקה פחות משוכללת. דג הזברה (Danio rerio) שימש בהצלחה כמודל in vivo ללמוד גנטיקה, התפתחות, הפתופיזיולוגיה, ו1,2,10,11,12 פרמקולוגיה. המתקנים הנדרשים לבית דג הזברה לניסויים הם יחסית פשוטים ומשמעותי פחות יקר בהשוואה לrמתקני אודנט. קים et al. 3 תארו לאחרונה בפירוט מערכת דיור דג הזברה 80 טנק שיכול להיות בנויה לכ -1,500 דולרים, שכולל שני חלקים ועלויות עבודה. זה עומד בניגוד מוחלט לכמעט 8500 $ שיידרשו לרכוש מערכת מוכנה, 80 טנקים ממספר כלשהו של ספקים מסחריים. עם זאת, התיאור שניתן על ידי אל קים et. יכול להיות מסובך וקשה לעקוב אחרי יותר עבור משתמשים חדשים של מחקר דגים. אנו מאמינים כי מתקן דג הזברה יכול להיות בנוי באופן פשוט להשקעה של 1,500 דולר. הקמת מתקן in vivo במוסדות אקדמיים קטנים מספקת הפקולטות שלהם כלי נוסף שבה לייצר מחקר יותר חזק ויסודי. במבחנה נתונים נתמכים על ידי in vivo תוצאות בדרך כלל לייצר מחקר ביו-רפואי מקיף יותר מאשר נתונים המתקבלים באמצעות רק בגישות חוץ גופית. לכן,יישום מתקן מחקר in vivo ישפר במידה ניכרת את הצלחת המוסד במאמצי המחקר הכולל שלה (חשיפת סטודנט למחקר, פרסומים, תקשורת, מרדף אחר מימון חיצוני, וכו &#39;.). הקמת מתקן דג הזברה כמו זה שתואר במחקר זה היא אידיאלית עבור מוסדות אקדמיים מחקריים עם מתקנים מוגבלים (או במוסדות ללא in vivo מתקני מחקר) בהצרת פעמים פיננסיות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Item</td>
			<td>Brand</td>
			<td>Quantity</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit</td>
			<td>Style Selections</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18-Gallon General Bucket/Tote</td>
			<td>Centrex Plastics: LLC&#160;Rugged Tote</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord</td>
			<td>Master Electrician</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp</td>
			<td>Smartpond&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole House Water Replacement Filter</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Seal Tape</td>
			<td>William H Harvey</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-fl oz LO-VOC PVC Cement</td>
			<td>Oatey&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-fl oz LO-VOC Primer</td>
			<td>Oatey&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing</td>
			<td>Mister Landscaper&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve</td>
			<td>Mister Landscaper</td>
			<td>33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter</td>
			<td>&#160;Mister Landscaper</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drop-In Filter with House&#160;</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia 90-Degree PVC Elbow</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia 90-Degree Tee</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Tee</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia PVC Cap</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve</td>
			<td>American Valve</td>
			<td>5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Cap</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-In x 5-Ft Pvc Pipe</td>
			<td>Charlotte Pipe</td>
			<td>4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;-In x 10-Ft Pvc pipe</td>
			<td>Charlotte Pipe</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11/16x1-7/80 PVC ring</td>
			<td>SXT</td>
			<td>10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189;&#8221; PVC male adapter</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;&#8221; PVC coupling&#160;</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189;&#8221; PVC female adapter&#160;</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>link</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.8 L Dual Beta Keeper</td>
			<td>Top Fin</td>
			<td>27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;&#8221; PVC male adapter (w/ #18 O-ring)</td>
			<td>SXT</td>
			<td>28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90-degree &#190;&#8221; threaded PVC elbow</td>
			<td>SXT</td>
			<td>27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Mesh</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 yard</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulkhead Connector</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hacksaw</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drill</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hole saw</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable Wrench</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pliers&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape Measure</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety Glasses</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Work Gloves</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility

In vivo מחקר הביו-רפואי הוא ציר מרכזי לתרגם בממצאים חוץ גופית להתקדמות קלינית. מוסדות אקדמיים קטנים עם משאבים מוגבלים מוצאים את זה כמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסמים אופייניים למחקר. מחקר דג הזברה כבר הוכיח להיות חלופה רבת ערך למחקר in vivo בפרמקולוגיה, פיזיולוגיה, פיתוח ומחקרים גנטיים. מאמר זה מדגים כי מתקן דג הזברה פונקציונלי יכול להיות בנוי בצורה קלה ובמחיר סביר. אנו מראים כי מתקן כזה יכול להיות בנוי כביום עבודה עם כלים ומומחיות מינימאליים. עלות מתקן דג הזברה 27 1.8 L האקווריום נבנה במחקר זה הייתה כ 1500 $. אנו מעריכים כי התחזוקה של מושבה דגים ראשונית עבודה 150 במשך 3 חודשים היא 1,000 דולר. תלמידים זה פרויקט מעורב, שהוכנסו לaquaculturing של דג הזברה למחקר מציע.

בנייה של מערכת השאיבה וFlters ברגע שהמדף מורכב ולהגדיר את הצעד הראשון הוא לבנות את מערכת המשאבה ומסנן. המסננים מחוברים למשאבת המערכת ונמצאים מעל לרמה התחתונה של המדף הראשון, המאפשר לתחזוקת מסנן קלה והחלפה. באופן דומה, מנורת UV מחוברת עם צינור PVC למסנן ונערכה במקו...

Watch this Scientific Journal Video about Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility at JoVE.com

Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

הקמת מתקן דג הזברה בנייה קלה למשתלם ו

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

construction-of-an-affordable-and-easy-to-build-zebrafish-facility

Research

JoVE Journal

Biology

16.2K Views.  Presbyterian College School of Pharmacy. A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Video: Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or alkyne-tagged monosaccharides1, 2. The modified monosaccharides, processed by the glycan biosynthetic machinery, are incorporated into cell surface glycoconjugates. The bioorthogonal azide or alkyne tags then allow covalent conjugation with fluorescent probes for visualization, or with affinity probes for enrichment and glycoproteomic analysis. This protocol describes the procedures typically used for noninvasive imaging of fucosylated glycans in zebrafish embryos, including: 1) microinjection of one-cell stage embryos with GDP-5-alkynylfucose (GDP-FucAl), 2) labeling fucosylated glycans in the enveloping layer of zebrafish embryos with azide-conjugated fluorophores via biocompatible Cu(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC), and 3) imaging by confocal microscopy3. The method described here can be readily extended to visualize other classes of glycans, e.g. glycans containing sialic acid4 and N-acetylgalactosamine5, 6, in developing zebrafish and in other living organisms.

A click-chemistry based method that allows for the rapid, noninvasive, and robust labeling of alkyne-tagged glycans in zebrafish embryos is described. Fucosylated glycans in the enveloping layer of zebrafish embryos in the late gastrulation stage were imaged in this study.

הדמיה Glycans בעוברים דג הזברה על ידי תיוג מטבולית וכימיה לחץ Bioorthogonal

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal neurons. In contrast, the adult zebrafish retina possesses the robust ability to spontaneously regenerate any neuronal class that is lost in a variety of different retinal damage models, including retinal puncture, chemical ablation, concentrated high temperature, and intense light treatment 1-8. Our lab extensively characterized regeneration of photoreceptors following constant intense light treatment and inner retinal neurons after intravitreal ouabain injection 2, 5, 9. In all cases, resident M&uuml;ller glia re-enter the cell cycle to produce neuronal progenitors, which continue to proliferate and migrate to the proper retinal layer, where they differentiate into the deficient neurons. 
	We characterized five different stages during regeneration of the light-damaged retina that were highlighted by specific cellular responses. We identified several differentially expressed genes at each stage of retinal regeneration by mRNA microarray analysis 10. Many of these genes are also critical for ocular development. To test the role of each candidate gene/protein during retinal regeneration, we needed to develop a method to conditionally limit the expression of a candidate protein only at times during regeneration of the adult retina. 
	Morpholino oligos are widely used to study loss of function of specific proteins during the development of zebrafish, Xenopus, chick, mouse, and tumors in human xenografts 11-14. These modified oligos basepair with complementary RNA sequence to either block the splicing or translation of the target RNA. Morpholinos are stable in the cell and can eliminate or "knockdown" protein expression for three to five days 12. 
	Here, we describe a method to efficiently knockdown target protein expression in the adult zebrafish retina. This method employs lissamine-tagged antisense morpholinos that are injected into the vitreous of the adult zebrafish eye. Using electrode forceps, the morpholino is then electroporated into all the cell types of the dorsal and central retina. Lissamine provides the charge on the morpholino for electroporation and can be visualized to assess the presence of the morpholino in the retinal cells. 
	Conditional knockdown in the retina can be used to examine the role of specific proteins at different times during regeneration. Additionally, this approach can be used to study the role of specific proteins in the undamaged retina, in such processes as visual transduction and visual processing in second order neurons.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

A method to conditionally knockdown a target protein&#x2019;s expression in the adult zebrafish retina is described, which involves intravitreally injecting antisense morpholinos and electroporating them into the retina. The resulting protein is knocked down for several days, which allows testing the protein&#x2019;s role in the regenerating or intact retina.

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך הרשתית דג הזברה למבוגרים

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration of adult tissues, such as the heart1, retina2, spinal cord3, optic nerve4, sensory hair cells5, and fins6.
The zebrafish fin is a relatively simple appendage that is easily manipulated to study multiple stages in epimorphic regeneration. Classically, fin regeneration was characterized by three distinct stages: wound healing, blastema formation, and fin outgrowth. After amputating part of the fin, the surrounding epithelium proliferates and migrates over the wound. At 33 &deg;C, this process occurs within six hours post-amputation (hpa, Figure 1B)6,7. Next, underlying cells from different lineages (ex. bone, blood, glia, fibroblast) re-enter the cell cycle to form a proliferative blastema, while the overlying epidermis continues to proliferate (Figure 1D)8. Outgrowth occurs as cells proximal to the blastema re-differentiate into their respective lineages to form new tissue (Figure 1E)8. Depending on the level of the amputation, full regeneration is completed in a week to a month.
The expression of a large number of gene families, including wnt, hox, fgf, msx, retinoic acid, shh, notch, bmp, and activin-betaA genes, is up-regulated during specific stages of fin regeneration9-16. However, the roles of these genes and their encoded proteins during regeneration have been difficult to assess, unless a specific inhibitor for the protein exists13, a temperature-sensitive mutant exists or a transgenic animal (either overexpressing the wild-type protein or a dominant-negative protein) was generated7,12. We developed a reverse genetic technique to quickly and easily test the function of any gene during fin regeneration.
Morpholino oligonucleotides are widely used to study loss of specific proteins during zebrafish, Xenopus, chick, and mouse development17-19. Morpholinos basepair with a complementary RNA sequence to either block pre-mRNA splicing or mRNA translation. We describe a method to efficiently introduce fluorescein-tagged antisense morpholinos into regenerating zebrafish fins to knockdown expression of the target protein. The morpholino is micro-injected into each blastema of the regenerating zebrafish tail fin and electroporated into the surrounding cells. Fluorescein provides the charge to electroporate the morpholino and to visualize the morpholino in the fin tissue.
This protocol permits conditional protein knockdown to examine the role of specific proteins during regenerative fin outgrowth. In the Discussion, we describe how this approach can be adapted to study the role of specific proteins during wound healing or blastema formation, as well as a potential marker of cell migration during blastema formation.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

We describe a method to conditionally knockdown the expression of a target protein during adult zebrafish fin regeneration. This technique involves micro-injecting and electroporating antisense oligonucleotide morpholinos into fin tissue, which allows testing the protein&#x2019;s role in various stages of fin regeneration, including wound healing, blastema formation, and regenerative outgrowth.

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך למבוגרים התחדשות זנב סנפיר דג הזברה

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and behavioural research. As a vertebrate, zebrafish share considerable genetic sequence similarity with humans and are being used as an animal model for various human disease conditions. The advantages of zebrafish in comparison to other common vertebrate models include high fecundity, low maintenance cost, transparent embryos, and rapid development. Due to the spur of interest in zebrafish research, the need to establish and maintain a productive zebrafish housing facility is also increasing. Although literature is available for the maintenance of a zebrafish laboratory, a concise video protocol is lacking. This video illustrates the protocol for regular housing, feeding, breeding and raising of zebrafish larvae. This process will help researchers to understand the natural behaviour and optimal conditions of zebrafish husbandry and hence troubleshoot experimental issues that originate from the fish husbandry conditions. This protocol will be of immense help to researchers planning to establish a zebrafish laboratory, and also to graduate students who are intending to use zebrafish as an animal model.

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

This protocol outlines regular maintenance and care to maintain optimal conditions for zebrafish husbandry. The video illustrates the protocol for system maintenance, regular housing, feeding, breeding, and raising of zebrafish larvae.

טיפול קבוע ותחזוקה של דג זברה (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) מעבדה: מבוא

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Using an Automated 3D-tracking System to Record Individual and Shoals of Adult Zebrafish

Like many aquatic animals, zebrafish (Danio rerio) moves in a 3D space. It is thus preferable to use a 3D recording system to study its behavior. The presented automatic video tracking system accomplishes this by using a mirror system and a calibration procedure that corrects for the considerable error introduced by the transition of light from water to air. With this system it is possible to record both single and groups of adult zebrafish. Before use, the system has to be calibrated. The system consists of three modules: Recording, Path Reconstruction, and Data Processing. The step-by-step protocols for calibration and using the three modules are presented. Depending on the experimental setup, the system can be used for testing neophobia, white aversion, social cohesion, motor impairments, novel object exploration etc. It is especially promising as a first-step tool to study the effects of drugs or mutations on basic behavioral patterns. The system provides information about vertical and horizontal distribution of the zebrafish, about the xyz-components of kinematic parameters (such as locomotion, velocity, acceleration, and turning angle) and it provides the data necessary to calculate parameters for social cohesions when testing shoals.

The use of a 3D automatic video system that can track individual and groups of zebrafish is described. As application example we explore the effects of the NMDA-receptor antagonist MK-801 on shoals of zebrafish.

Like many aquatic animals, zebrafish (Danio rerio) moves in a 3D space. It is thus preferable to use a 3D recording system to study its behavior. The ...

Rapid and Efficient Zebrafish Genotyping Using PCR with High-resolution Melt Analysis

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic tools have been introduced, including multiple strategies for inducing mutations and generating transgenic lines. However, large-scale screening is limited by traditional genotyping methods, which are time-consuming and labor-intensive. Here we describe a technique to analyze zebrafish genotypes by PCR combined with high-resolution melting analysis (HRMA).&#160;This approach is rapid, sensitive, and inexpensive, with lower risk of contamination artifacts.&#160;Genotyping by PCR with HRMA can be used for embryos or adult fish, including in high-throughput screening protocols.

PCR combined with high-resolution melt analysis (HRMA) is demonstrated as a rapid and efficient method to genotype zebrafish.

מהירה ויעילה דג הזברה Genotyping באמצעות PCR עם רזולוציה גבוהה ממיסים ניתוח

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic ...

An Assay for Lateral Line Regeneration in Adult Zebrafish

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line development and regeneration. The zebrafish is particularly attractive for such studies because of its rapid development time and its high regenerative capacity. To date, zebrafish studies of lateral line regeneration have mainly utilized fish of the embryonic and larval stages because of the lower number of neuromasts at these stages. This has made quantitative analysis of lateral line regeneration/and or development easier in the earlier developmental stages. Because many zebrafish models of neurological and non-neurological diseases are studied in the adult fish and not in the embryo/larvae, we focused on developing a quantitative lateral line regenerative assay in adult zebrafish so that an assay was available that could be applied to current adult zebrafish disease models. Building on previous studies by Van Trump et al.17&#160;that described procedures for ablation of hair cells in adult Mexican blind cave fish and zebrafish (Danio rerio), our assay was designed to allow quantitative comparison between control and experimental groups. This was accomplished by developing a regenerative neuromast standard curve based on the percent of neuromast reappearance over a 24 hr time period following gentamicin-induced necrosis of hair cells in a defined region of the lateral line. The assay was also designed to allow extension of the analysis to the individual hair cell level when a higher level of resolution is required.

Because many zebrafish models of neurological and non-neurological diseases are studied in the adult fish rather than the embryo/larvae, we developed a quantitative lateral line regenerative assay that can be applied to adult zebrafish disease models. The assay involved resolution at the 1) neuromast and 2) individual hair cell levels.

Assay עבור התחדשות קו לרוחב בדג הזברה למבוגר

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

Subcloning Plus ההכנסה (SPI) - Recombineering שיטה חדשה לבנייה המהירה של וקטורי גן המיקוד

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid decline in renal function and development of the clinical syndrome known as acute kidney injury (AKI). Pharmacological agents used to treat medical circumstances ranging from bacterial infection to cancer, when administered individually or in combination with other drugs, can initiate AKI. Zebrafish are a useful animal model to study the chemical effects on renal function in vivo, as they form an embryonic kidney comprised of nephron functional units that are conserved with higher vertebrates, including humans. Further, zebrafish can be utilized to perform genetic and chemical screens, which provide opportunities to elucidate the cellular and molecular facets of AKI and develop therapeutic strategies such as the identification of nephroprotective molecules. Here, we demonstrate how microinjection into the zebrafish embryo can be utilized as a paradigm for nephrotoxin studies.

Renal injuries incurred from nephrotoxins, which include drugs ranging from antibiotics to chemotherapeutics, can result in complex disorders whose pathogenesis remains incompletely understood. This protocol demonstrates how zebrafish can be used for disease modeling of these conditions, which can be applied to the identification of renoprotective measures.

Nephrotoxin Microinjection דג הזברה למודל אי-ספיקת כליות חריפה

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...