Name: construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility
Uploaded: 2014-11-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility at JoVE.com

Yazarlar Araştırma ve İşbirliği (SPARC) Ödülü Küçük Eczane Ödülleri aracılığıyla bu projenin mali destek Eczacılık Presbyterian Koleji Okulu Araştırma Ofisi teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar Bay John Smink, Su Hayvancılık Araştırma Laboratuvarı Müdürü, Clemson Üniversitesi, Clemson, onun teknik yardım yazması revizyonu için SC teşekkür ederiz.

NOT: Bu protokoller Presbyterian College IACUC yönergeleri izleyin. Tablo 1 Listelenen 1. Edinme Malzemeler. 2. Üreticinin Talimatına göre 5 Raf Chrome&#39;u birleştirin. Bu Tesisi evine kullanılacaktır. 3. Su haznesini ve filtrasyon sistemi (Şekil 1A ve 2) Construct. <ol><li> Bir kılavuz olarak Şekil 1A kullanarak, nihai montaj konumunu ve boyutunu belirlemek için 18 galon kova, pompa, filtre ve UV lambası düzeni. </li><li> Parçalar ortaya koydu sonra, ölçmek ve montaj için gerekli uzunluğu ¾ &quot;PVC boru kesti. Özel alan ihtiyaçları ve kısıtlamalara göre tüm boru uzunluklarını Vary. </li><li> PVC astar ve çimento kullanarak daha önce düzenlendiği şekilde boru ve ek parçaları birleştirin, aşağıda (3.3.2 ve 3.3.3) bkz. <ol><li> Kum zımpara ile boru kesme kenarları dokunmatik An pürüzsüz olana kadard hiçbir enkaz yoktur. </li><li> Başbakan boru dış ve PVC astar gelen dahil çubukla alınan PVC astar ile bağlantı içinde. </li><li> Dahil çubukla kullanarak borunun dışına PVC çimento uygulayarak birlikte boru ve uydurma çimento. PVC çimentolama gereken tüm adımları tekrarlayın. </li><li> Raf yapımında bir tarafına 18 galonluk kova yerleştirin. </li><li> Rezervuar tankının yan bir bölme konektörü takın. </li><li> Bölmeye ¾ &quot;PVC boru takın. </li><li> ¾ &quot;Bir ¾ kullanarak pompa girişine boru&quot; diğer ucunu takın uydurma yapmak dişli. </li><li> İki 90 derecelik dirsek ve ¾ &quot;PVC boru kullanılarak pompa için filtreleri bağlayın. <ol><li> Sudaki klor ve kimyasal seviyeleri enkaz süzmek ve azaltmak için bir aktif karbon filtreleri ardından bir kağıt filtre kullanın. </li></ol></li><li> Filtreler accordi UV lambası bağlayınüreticinin talimatlarına ng. </li></ol></li><li> Tel bağları kullanarak rafa ilk rafın üst tarafına pompa ve filtre sistemi takın. Seçilen raf / raf boyutu ve düzeni göre montaj ve bağlantı sırasını Vary. </li><li> Pompa ve filtre sistemi monte ve raf bağlı kez su deposuna su galon başına 1 BioBall ekleyin. </li></ol> 4. ana besleme hattı (Şekil 1B ve 2) Construct. <ol><li> Tedbir ve ana kaynağı UV lamba bağlamak için PVC boru &quot;¾ bir parça kesti </li><li> UV filtresi gelen PVC egzoz ¾ &quot;için tee bağlayarak ana besleme hattı başlatmak için PVC tee&quot; ¾ kullanın. . <ol><li> Sistemin bakımı yıkama için bir boşaltma olarak hizmet etmek üzere, PVC tee altına bir açma-kapama valfi ekleyin. </li><li> PVC ¾ &quot;ölçme ve kesme PVC tee&quot; ¾ üst ana besleme hattı başlayınİstenilen uzunlukta boru raf raf her besleme boruları sağlamak. </li><li> Install ¾ &quot;raf her raf girecek yatay çizgiler PVC tee. </li><li> İsteğe bağlı olarak (ve önerilen), bir ekleme ¾ &quot;açma-kapama valfı, her raf besleme hattı için her bir raf izolasyonu ve sistemin modüler tasarımı için izin verir. </li></ol></li><li> Üst rafta çizgi basınç düşürme gibi ¾ &quot;PVC boru kullanın. Bu hat raf arkasında çalışıyorsa, depolama için bu raf kullanın. Ana egzoz hattı, bir ¾ ile (Şekil 1B) &quot;açma-kapama vanası çizgiyi basınç azaltma End. </li><li> Yukarıdaki adımlar, başbakan tamamlanmış ve rezervuar ve filtrasyon sistemi inşa sırasında önceden yapıldığı gibi birlikte PVC boru çimento edildikten sonra. </li></ol> 5. Ana egzoz hattı (Şekil 1C ve 2) Construct. <ol><li> Raf f diğer tarafında ana egzoz hattının düşey uzunluğunu çalıştırınana besleme hattı rom. Her raftan balık tankları üst ve drenaj hatlarında ana besleme hattı almak için bu dikey hat için 2 &quot;PVC boru kullanın. </li><li> &quot;Dikey ana egzoz hattı için PVC boru ve 2 kullanın&quot; 2 parçaları Kes her raftan balık tankı boşaltma hatları almak için PVC tee. Bir sünger filtre üzerinde dönüştürülmüş su çıkarmak için stok tankı ana egzoz hattı End. </li><li> 2 &quot;PVC boru parçaları tüm uzunluğu açılış bir inç kesin ve PVC balık tankları yatay drenaj hatları için tee dikey ana egzoz hattına takın. </li><li> PVC kapağı 2 &quot;, 2 yatay drenaj hatları&quot; Cap. </li><li> Başbakan ve gerekli parçaları (konektörler, meme veya dirsekler) kullanarak parçaları çimento. </li></ol> 6. balık tankları (Şekil 3) Construct. <ol><li> Matkap ile bir delik testere ile üst kenarının altına &quot;balık tankı 1 arkasındaki delik&quot; 1 1/8 kesti. </li><li&gt; (dış tankın içinden) delikten (bağlı bir 18. O halkası ile) bir dişli ¾ &quot;PVC erkek adaptörü kaydırın. </li><li> Takın ve 90 derecesi 3/4 sıkın &#39;balık tankı egzoz borusunu oluşturmak için erkek adaptöre PVC dirsek dişli. Egzoz sistemi geçiyor zebrafish önlemek için tutma somunu vidalama önce ince örgü bir parça ekleyin. </li><li> Tanklar arkasındaki boşaltma hattı açık uzaya egzoz borusu biten balık tankı yerleştirin </li></ol> 7. suyu sistemi Başlangıç <ol><li> Bu hazne için kullanılan gibi çeşitli kaplar olarak, sistem içinde bulunan su için miktarın üç katı ölçer. Bu su 48 saat süre ile klima oda sıcaklığında bekletin. </li><li> Sisteme su ilave edin ve 3 gün, en az deveran etmesi. <ol><li> Kirletici tha sistemi kurtulmak için dolaşım ilk 3 gün boyunca şiddetle sistemde su değiştirint borular içinde bulunur. </li></ol></li><li> Marş zebrafish ekleyin ve azot döngüsü kurulan almak için izin verir. Tutarlı 7. pH Normale 1.8 L başına yedi zebrafish tutun ve Linbo 4 ve 6 McNabb tarafından önerilen sonları günde bir kez hafta içi günde iki kez onları beslemek ve. </li><li> Nitrat Monitör (&lt;75 mg / L), nitrit (&lt;10 mg / L), ve amonyum balık ekledikten sonra ilk hafta boyunca her gün (0 mg / L), ve iki haftada bir kez istenilen seviyeleri düzenli su değişimleri ile muhafaza edilmiştir . </li></ol>

<ol>
	<li>Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , (2010).</li><li>Grim, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogen+(hemgn),+a+transcription+factor+that+regulates+erythropoiesis+and+skeletogenesis+in+zebrafish.">Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish.</a> , (2013).</li><li>Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+easy-to-assemble,+low-cost+facility.">Modular, easy-to-assemble, low-cost facility.</a> Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).</li><li>Linbo, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+(Danio+rerio)+husbandry+and+colony+maintenance+at+the+Northwest+Fisheries+Science+Center.">Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center.</a> U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. 69, 4196 (2012).</li><li>McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+be+afraid+to+set+up+your+fish+facility.">Don't be afraid to set up your fish facility.</a> Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).</li><li>Garcia, R. L., Sanders, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cleaning+and+disinfection+procedures+in+a+zebrafish+rerio)+facility.">Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).</li><li>Rivas-Boyero, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+a+nociceptin+receptor+from+zebrafish+(Danio+rerio).">Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio).</a> J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).</li><li>Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+regulates+dopaminergic+neuron+differentiation+via+miR-133b.">Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b.</a> Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).</li><li>Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodr&#237;guez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mu+opioid+from+the+zebrafish+exhibits+functional+characteristics+as+those+of+mammalian+mu+opioid+receptor.">Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor.</a> Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).</li></ol>

Yazarlar bu kağıt için herhangi bir çıkar çatışmalarını beyan ederim.

Bu makalenin temel amacı fonksiyonel Zebra balığı tesisin yapımı karmaşık değildir ve minimal inşaat bilgisine sahip acemi balık araştırmacılar tarafından inşa edilebilir olduğunu göstermektir. Ayrıca, bu makalede, bu fonksiyonel Zebra balığı tesisi için malzemeler yerel evcil hayvan besleme mağazalarda veya donanım mağazalarından kolayca ve uygun maliyetle elde edilebilir olduğunu göstermektedir. Tüm malzemeler ve aletler sisteminin inşasını elde edilmiş ve balık tankları yaklaşık ...

İn vivo modeller bunlar sistem ve organizma düzeyinde tercüme edilecek in vitro araştırma izin beri kapsamlı biyomedikal araştırma esastır. Örneğin, küçük memeliler, yani kemirgenler, araştırma ilaçların geliştirilmesinde ve mevcut ilaçların geliştirilmesi için gerekli olduğu kanıtlanmıştır. Ancak, karmaşıklık (mali ve lojistik) neredeyse imkansız oluşturmak ve deneme küçük araştırma akademik kurumlarda teklif için kemirgen tesisleri korumak için yapmak olabilir. Bununla birlikte, in vivo araştırmalar daha az karmaşık, lojistik gerektiren diğer hayvan türlerini kullanarak gerçekleştirilebilir. Balığı (Danio rerio) başarılı bir şekilde genetik, geliştirme, patofizyolojisi ve farmakoloji 1,2,10,11,12 üzerinde çalışmak için in vivo bir modeli olarak kullanılmıştır. deney için zebrafish ev için gerekli imkanları r ile karşılaştırıldığında nispeten basit ve daha az pahalıOdent tesisler. Kim ve ark. 3 son zamanlarda detaylı parça ve işçilik maliyetlerini hem de içeren yaklaşık 1500 $ için inşa edilebilir 80 tankı Zebra balığı konut sistemi tarif var. Bu ticari tedarikçi herhangi bir sayıda bir hazır, 80 tankı sistemi satın almak için gerekli olacağını yaklaşık 8500 $ tezat duruyor. Ancak, Kim ve arkadaşları tarafından verilen açıklama. Balık araştırma acemiler için takip etmek karmaşık ve zor olabilir. Biz bir Zebra balığı tesis 1.500 $ bir yatırım için basitleştirilmiş bir şekilde inşa edilebilir inanıyoruz. küçük akademik kurumlarda in vivo tesisin kurulması okudukları fakülte daha güçlü ve kapsamlı araştırma üretmek için ek bir araç sağlar. in vivo sonuçları ile desteklenmektedir in vitro veriler, genellikle in vitro yaklaşımlar sadece kullanılarak elde edilen verilerin daha kapsamlı biyomedikal araştırmalar üretmek. Bu nedenle,in vivo araştırma tesisi uygulanması önemli ölçüde genel araştırma çalışmalarında kurum başarısını artıracaktır (dış finansman, vb araştırma, yayınlar, iletişim, peşinde öğrenci maruz kalma.). Bu çalışmada açıklanan gibi bir Zebra balığı tesisin yapımı finansal kez daraltıcı sırasında (in vivo araştırma tesisleri olmadan veya kurumlar) sınırlı imkanlarla araştırma, akademik kurumlar için idealdir.

<table><tbody><tr><td>Item</td><td>Brand</td><td>Quantity</td><td></td></tr><tr><td>74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit</td><td>Style Selections</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>18-Gallon General Bucket/Tote</td><td>Centrex Plastics: LLC&amp;nbsp;Rugged Tote</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord</td><td>Master Electrician</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp</td><td>Smartpond&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Whole House Water Replacement Filter</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing</td><td>Whirlpool</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>Thread Seal Tape</td><td>William H Harvey</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC PVC Cement</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC Primer</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing</td><td>Mister Landscaper&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve</td><td>Mister Landscaper</td><td>33</td><td></td></tr><tr><td>9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter</td><td>&amp;nbsp;Mister Landscaper</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Drop-In Filter with House&amp;nbsp;</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree PVC Elbow</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree Tee</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow</td><td>LASCO</td><td>15</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>7</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Tee</td><td>LASCO</td><td>12</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia PVC Cap</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve</td><td>American Valve</td><td>5</td><td></td></tr><tr><td>1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>Lasco</td><td>8</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Cap</td><td>Lasco</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>2-In x 5-Ft Pvc Pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>4</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;-In x 10-Ft Pvc pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>11/16x1-7/80 PVC ring</td><td>SXT</td><td>10</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC male adapter</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC coupling&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC female adapter&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>link</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.8 L Dual Beta Keeper</td><td>Top Fin</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC male adapter (w/ #18 O-ring)</td><td>SXT</td><td>28</td><td></td></tr><tr><td>90-degree &amp;frac34;&amp;rdquo; threaded PVC elbow</td><td>SXT</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>Fine Mesh</td><td>N/A</td><td>1 yard</td><td></td></tr><tr><td>Bulkhead Connector</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hacksaw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Drill</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hole saw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Adjustable Wrench</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Pliers&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Tape Measure</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Safety Glasses</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Work Gloves</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr></tbody></table>

construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility

İn vivo biyomedikal araştırma klinik ilerlemeler in vitro bulgular çevirmek için çok önemlidir. Sınırlı kaynaklarla Küçük akademik kurumlar neredeyse imkansız oluşturmak ve araştırma için tipik kemirgen tesisleri korumak için bulabilirsiniz. Balığı araştırma farmakoloji, fizyoloji, geliştirme ve genetik çalışmalarda in vivo araştırmalar için önemli bir alternatif olduğu kanıtlanmıştır. Bu makalede, fonksiyonel Zebra balığı tesis kolay ve uygun fiyatlı bir şekilde inşa edilebileceğini göstermektedir. Biz böyle bir tesis asgari araç ve uzmanlığı ile ilgili bir iş günü içinde inşa edilebileceğini göstermektedir. Bu çalışmada inşa 27 1.8 L akvaryum Zebra balığı tesisin maliyeti yaklaşık 1500 $ oldu. Biz 3 ay boyunca bir ilk çalışma 150 balık kolonisinin bakım 1.000 $ olduğunu tahmin. Araştırma önermektedir için getirilmiştir Bu proje katılan öğrenciler, zebrafish aquaculturing için.

Pompa ve Flters Sistemi İnşaatı Raf monte ve ilk adımı kurulduktan sonra pompa ve filtre sistemi inşa etmektir. Filtreler sistem pompasının bağlı ve kolay filtre bakım ve değişimi için izin veren ilk raf, alt seviyesinden bulunmaktadır. Benzer bir şekilde, UV lambası filtresi PVC boru ile bağlı olan ve gerektiğinde (Şekil 4A) ve UV lambası kolayca değiştirilmesine olanak tanımak amacıyla, plastik tel bağlar ile yerinde tutulur. Hemen bir kağıt filtre, aktif k...

Watch this Scientific Journal Video about Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility at JoVE.com

Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Bir Ekonomik ve Kolay oluşturun Zebra balığı Tesisi İnşaatı

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

construction-of-an-affordable-and-easy-to-build-zebrafish-facility

Research

JoVE Journal

Biology

16.3K Görüntüleme.  Presbyterian College School of Pharmacy. A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Video: Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related research fields. Thanks to its unique features, including large fecundity, embryo translucency, rapid and simultaneous development, etc., zebrafish embryos are often used for large scale toxicity assessment of chemicals and drug/compound screening. A typical screening procedure involves adult zebrafish spawning, embryos selection, and arraying the embryos into multi-well plates. From there, embryos are subjected to exposure and the toxicity of chemical, or the effectiveness of the drugs/compounds can be evaluated relatively quickly based on phenotypic observations. Among these processes, embryos arraying is one of the most time-consuming and labor-intensive steps that limits the throughput level. In this protocol, we present an innovative approach that makes use of a 3D-printed arraying template coupled with vacuum manipulation to speed up this laborious step. The protocol herein describes the overall design of the arraying template, a detailed experimental setup and step-by-step procedure, followed by representative results. When implemented, this approach should prove beneficial in a variety of research applications using zebrafish embryos as testing subjects.

A 3-dimensional 3D-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

Here, we present a protocol to design and fabricate a zebrafish embryo arraying template, followed by a detailed procedure on the use of such template for high throughput zebrafish embryo arraying into a 96-well plate.

3 boyutlu (3D)-yüksek işlem hacmi zebra balığı diziliyor embriyo için şablon basılı

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related ...

Çevre

Microstructured Devices for Optimized Microinjection and Imaging of Zebrafish Larvae

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning fundamental developmental biology through to large-scale genetic and chemical screens. However, many experiments, especially those related to infection and xenograft models, rely on microinjection and imaging of embryos and larvae, which are laborious techniques that require skill and expertise. To improve the precision and throughput of current microinjection techniques, we developed a series of microstructured devices to orient and stabilize zebrafish embryos at 2 days post fertilization (dpf) in ventral, dorsal, or lateral orientation prior to the procedure. To aid in the imaging of embryos, we also designed a simple device with channels that orient 4 zebrafish laterally in parallel against a glass cover slip. Together, the tools that we present here demonstrate the effectiveness of photolithographic approaches to generate useful devices for the optimization of zebrafish techniques.

Microinjection of zebrafish embryos and larvae is a crucial but challenging technique used in many zebrafish models. Here, we present a range of microscale tools to aid in the stabilization and orientation of zebrafish for both microinjection and imaging.

Microstructured cihazlar için en iyi duruma getirilmiş mikroenjeksiyon ve Zebra balığı larva görüntüleme

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning ...

Gelişim Biyolojisi

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system measures spontaneous behaviors and the response to an aversive stimulus, which is shown to the larvae via a PowerPoint presentation. The recorded images are analyzed with an ImageJ macro, which automatically splits the color channels, subtracts the background, and applies a threshold to identify individual larvae placement in the lanes. We can then import the coordinates into an Excel sheet to quantify swim speed, preference for edge or side of the lane, resting behavior, thigmotaxis, distance between larvae, and avoidance behavior. Subtle changes in behavior are easily detected using our system, making it useful for behavioral analyses after exposure to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Our laboratory developed a novel high-throughput automated imaging system that is useful for the detection of several different behaviors in 7-day-old zebrafish larvae. The system can be used for detecting subtle changes in behavior after the larvae have been exposed to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Zebra balığı Larva otomatik Yüksek verim Davranış Analizleri

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Nörobilim

The Zebrafish Tol2 System: A Modular and Flexible Gateway-Based Transgenesis Approach

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to prenatal ethanol exposure. Due to the complex pathology of FASD, animal models have proven critical to our current understanding of ethanol-induced developmental defects. Zebrafish have proven to be a powerful model to examine ethanol-induced developmental defects due to the high degree of conservation of both genetics and development between zebrafish and humans. As a model system, zebrafish possess many attributes that make them ideal for developmental studies, including large numbers of externally fertilized embryos that are genetically tractable and translucent. This allows researchers to precisely control the timing and dosage of ethanol exposure in multiple genetic contexts. One important genetic tool available in zebrafish is transgenesis. However, generating transgenic constructs and establishing transgenic lines can be complex and difficult. To address this issue, zebrafish researchers have established the transposon-based Tol2 transgenesis system. This modular system uses a multisite Gateway cloning approach for the quick assembly of complete Tol2 transposon-based transgenic constructs. Here, we describe the flexible Tol2 system toolbox and a protocol for generating transgenic constructs ready for zebrafish transgenesis and their use in ethanol studies.

This work describes a protocol for the modular Tol2 transgenesis system, a gateway-based cloning method to create and inject transgenic constructs into zebrafish embryos.

Zebra Balığı Tol2 Sistemi: Modüler ve Esnek Ağ Geçidi Tabanlı Transgenez Yaklaşımı

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to ...

Zebra Balıklarında Optogenetik Sinyal Manipülasyonu ile Gelişimin İncelenmesi

Optogenetic Signaling Activation in Zebrafish Embryos

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally manipulate signaling are required to understand how signaling is interpreted in these wide-ranging contexts. Molecular optogenetic&#160;tools can provide reversible, tunable manipulations of signaling pathway activity with a high degree of spatiotemporal control and have been applied in vitro, ex vivo, and in vivo. These tools couple light-responsive protein domains, such as the blue light homodimerizing light-oxygen-voltage sensing (LOV) domain, with signaling effectors to confer light-dependent experimental control over signaling. This protocol provides practical guidelines for using the LOV-based bone morphogenetic protein (BMP) and Nodal signaling activators bOpto-BMP and bOpto-Nodal in the optically accessible early zebrafish embryo. It describes two control experiments: A quick phenotype assay to determine appropriate experimental conditions, and an immunofluorescence assay to directly assess signaling. Together, these control experiments can help establish a pipeline for using optogenetic tools in early zebrafish embryos. These strategies provide a powerful platform to investigate the roles of signaling in development, health, and physiology.

Yazar Spotlight: Hücre Kaderi Kararlarını Çözmek için Zebra Balığı Embriyolarında Sinyalizasyonu Manipüle Etmek 

Optogenetic manipulation of signaling pathways can be a powerful strategy to investigate how signaling is decoded in development, regeneration, homeostasis, and disease. This protocol provides practical guidelines for using light-oxygen-voltage sensing domain-based Nodal and bone morphogenic protein (BMP) signaling activators in the early zebrafish embryo.

Zebra Balığı Embriyolarında Optogenetik Sinyal Aktivasyonu

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and behavioural research. As a vertebrate, zebrafish share considerable genetic sequence similarity with humans and are being used as an animal model for various human disease conditions. The advantages of zebrafish in comparison to other common vertebrate models include high fecundity, low maintenance cost, transparent embryos, and rapid development. Due to the spur of interest in zebrafish research, the need to establish and maintain a productive zebrafish housing facility is also increasing. Although literature is available for the maintenance of a zebrafish laboratory, a concise video protocol is lacking. This video illustrates the protocol for regular housing, feeding, breeding and raising of zebrafish larvae. This process will help researchers to understand the natural behaviour and optimal conditions of zebrafish husbandry and hence troubleshoot experimental issues that originate from the fish husbandry conditions. This protocol will be of immense help to researchers planning to establish a zebrafish laboratory, and also to graduate students who are intending to use zebrafish as an animal model.

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

This protocol outlines regular maintenance and care to maintain optimal conditions for zebrafish husbandry. The video illustrates the protocol for system maintenance, regular housing, feeding, breeding, and raising of zebrafish larvae.

Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (<em&gt; Br.rerio</em&gt;) Laboratuvar: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Biyoloji

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model congenital abnormalities. During the first day of life, the zebrafish embryo progresses through many developmental stages including fertilization, cleavage, gastrulation, segmentation, and the organogenesis of structures such as the kidney, heart, and central nervous system. The anatomy of a young zebrafish embryo presents several challenges for the visualization and analysis of the tissues involved in many of these events because the embryo develops in association with a round yolk mass. Thus, for accurate analysis and imaging of experimental phenotypes in fixed embryonic specimens between the tailbud and 20 somite stage (10 and 19 hours post fertilization (hpf), respectively), such as those stained using whole mount in situ hybridization (WISH), it is often desirable to remove the embryo from the yolk ball and to position it flat on a glass slide. However, performing a flat mount procedure can be tedious. Therefore, successful and efficient flat mount preparation is greatly facilitated through the visual demonstration of the dissection technique, and also helped by using reagents that assist in optimal tissue handling. Here, we provide our WISH protocol for one or two-color detection of gene expression in the zebrafish embryo, and demonstrate how the flat mounting procedure can be performed on this example of a stained fixed specimen. This flat mounting protocol is broadly applicable to the study of many embryonic structures that emerge during early zebrafish development, and can be implemented in conjunction with other staining methods performed on fixed embryo samples.

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is an excellent model for developmental biology research. During embryogenesis, zebrafish develop with a yolk mass, which presents three-dimensional challenges for sample observation and analysis. This protocol describes how to create two-dimensional flat mount preparations of whole mount in situ (WISH) stained zebrafish embryo specimens.

Tüm Dağı ile Zebra balığı Embriyo örnekler Vitray gözlenmesi ve Analiz Daire Dağı Hazırlık<em&gt; In situ</em&gt; Melezleme

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model ...

A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology due to their considerable degree of genetic conservation with humans. Chemical genetics entails testing the effect that small molecules have on a biological process and is becoming a popular translational research method to identify therapeutic compounds. Zebrafish are specifically appealing to use for chemical genetics because of their ability to produce large clutches of transparent embryos, which are externally fertilized. Furthermore, zebrafish embryos can be easily drug treated by the simple addition of a compound to the embryo media. Using whole-mount in situ hybridization (WISH), mRNA expression can be clearly visualized within zebrafish embryos. Together, using chemical genetics and WISH, the zebrafish becomes a potent whole organism context in which to determine the cellular and physiological effects of small molecules. Innovative advances have been made in technologies that utilize machine-based screening procedures, however for many labs such options are not accessible or remain cost-prohibitive. The protocol described here explains how to execute a manual high-throughput chemical genetic screen that requires basic resources and can be accomplished by a single individual or small team in an efficient period of time. Thus, this protocol provides a feasible strategy that can be implemented by research groups to perform chemical genetics in zebrafish, which can be useful for gaining fundamental insights into developmental processes, disease mechanisms, and to identify novel compounds and signaling pathways that have medically relevant applications.

The zebrafish is an excellent experimental organism to study vertebrate developmental processes and model human disease. Here, we describe a protocol on how to perform a manual high-throughput chemical screen in zebrafish embryos with a whole-mount in situ hybridization (WISH) read-out.

Zebra balığı Embriyolar kullanılarak Yüksek verim Yaklaşıyor A Manuel Küçük Molekül Ekran

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology ...

Bir Ekonomik ve Kolay oluşturun Zebra balığı Tesisi İnşaatı

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

3 boyutlu (3D)-yüksek işlem hacmi zebra balığı diziliyor embriyo için şablon basılı

Microstructured cihazlar için en iyi duruma getirilmiş mikroenjeksiyon ve Zebra balığı larva görüntüleme

Zebra balığı Larva otomatik Yüksek verim Davranış Analizleri

Zebra Balığı Tol2 Sistemi: Modüler ve Esnek Ağ Geçidi Tabanlı Transgenez Yaklaşımı

Zebra Balığı Embriyolarında Optogenetik Sinyal Aktivasyonu

Zebra Balığı Embriyolarında Optogenetik Sinyal Aktivasyonu

Zebra Balığı Embriyolarında Optogenetik Sinyal Aktivasyonu

Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (

Tüm Dağı ile Zebra balığı Embriyo örnekler Vitray gözlenmesi ve Analiz Daire Dağı Hazırlık

Zebra balığı Embriyolar kullanılarak Yüksek verim Yaklaşıyor A Manuel Küçük Molekül Ekran