The authors acknowledge all colleagues who made this work possible; Ann Demarr&#233;, Veerle Laurysens, Jan De Jonge and Erik Quartier for technical assistance. Financial support was from the VUB Research Council, the Institute for the Promotion of Innovation by Science and Technology in Flanders (IWT), the Beta Cell Biology Consortium (BCBC), the Fund for Scientific Research Flanders (FWO), Diabetes Onderzoek Nederland (DON) and Interuniversity Attraction Pole (IAP).

جميع التلاعب اتباع المبادئ التوجيهية الصادرة عن الاتفاقية الأوروبية لحماية الحيوانات الفقارية المستخدمة للأغراض العلمية والتجريبية الأخرى (ETS 123 وو 2010/63 / EU). 1. إعداد مساحة العمل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توفير منطقة مخصصة إعداد، ومنطقة العمليات الجراحية ومنطقة الانتعاش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عملية جراحية كامل في مجلس الوزراء تدفق الصفحي للحد من الملوثات البيئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع الإمدادات (كما هو موضح في المواد وطرق) اللازمة في مجال إعداد والجراحية والانتعاش، وذلك باستخدام تقنية العقيم المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التأكد من أن الأدوات الجراحية وتعقيمها قبل الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توفير وسادة تسخين المياه إعادة تدوير عند درجة حرارة 38 ° C لتحقيق الاستقرار في درجة الحرارة أثناء الجراحة. تغطية لوحة التدفئة مع وسادة للماء معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توفير المجهر التشغيل مع التكبير على الأقل 6.3X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام أداة ستيريكتبها Lizer، مثل حبة تعقيم الساخن، لتعقيم الأدوات بين العمليات الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد منطقة الانتعاش تتألف من قفص كبير، تصطف بجانب الفراش ورقة مسطحة </li></ol> 2. إعداد الحيوانات لجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لPDL وجراحة صورية، استخدم 8 الاسبوع الفئران الذكور القديمة، ويضم في أقفاص القياسية والحفاظ على 12 ساعة ضوء / 12 ساعة دورة الظلام وتغذية القياسية القوارض النظام الغذائي بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية. ملاحظة: يتم هنا استخدام الفئران BALB / cJrJ ولكن أيضا نحن قد استخدمت بنجاح سلالات أخرى ومختلف السلالات المعدلة وراثيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام Buprenophine كما تسكين وقائية (0،05 حتي 0،1 ملغ / كلغ) 30 دقيقة قبل الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 5-10 ملغم / كغم من زيلازين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم التخدير المناسبة من خلال مراقبة فقدان تدريجي للحركة الطوعية واسترخاء العضلات. اختبار فقدان ردود الفعل من قبل أخمص القدمين معسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم للعين لالسابقجفاف الأنف والحنجرة العينين في حين تحت التخدير. </li></ol> 3. الموقع الجراحي إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير الصدر والبطن بمحلول الكلورهيكسيدين مطهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحلق على مساحة 2.5 سم × 1.5 سم من البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير المنطقة حليق باستخدام الشاش غارقة مع حل الكلورهيكسيدين، ثم حل الكحول وتطبيق النهائي من حل الكلورهيكسيدين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان في منطقة العمليات الجراحية بحيث موقع الجراحية استعداد يواجه صعودا الجراح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثنى الماوس باستخدام ثنى الجراحية للماء مع الافتتاح ان يترك منطقة البطن تطهيرها يتعرض بينما تغطي باقي الجسم لإنشاء حقل العمل العقيمة. مراقبة الماوس قبل إجراء عمق التخدير. </li></ol> 4. البنكرياس وربط القناة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق خط الوسط العلوي في الجلد تمتد من عملية الخنجري الى السرة باستخدام العقيمةشفرة جراحية. فصل الكامنة ألبا والصفاق باستخدام مقص العقيمة من أجل فضح رباعي البطن العلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منع جفاف التدريجي من الأعضاء الداخلية التي كتبها الرش المنتظم مع معقم 0.9٪ كلوريد الصوديوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملاقط معقمة أو مسحة، سحب المعدة متفوق، وفضح الطحال والفص الطحال (منطقة الذيل) في البنكرياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب بلطف الاثني عشر وجزء من الصائم العلوي إلى رباعي البطن العلوي الأيمن لفضح الرأس والعنق ومنطقة الجسم من البنكرياس من الصفاق الحشوي تغطيتها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رباط <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد موقع تشريحي من القناة الرئيسية البنكرياس في منطقة الرقبة من البنكرياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شق الصفاق الحشوي والرباط المعدي، منح الوصول إلى خلف البريتوان، وتعريض المنطقة الجسم والذيل من البنكرياس. من أجل فضح منطقة الرقبة، نفذ مناورة كوشر. رفع الاثني عشر ورئيسالبنكرياس قبالة خلف البريتوان رفعهم من الوريد الأجوف السفلي والشريان الأورطي أدناه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع بعناية ملعقة تحت منطقة الرقبة. Ligate القناة البنكرياسية مع 6-0 البرولين موضوع في الجانب الأيسر من الوريد البابي الذي يفصل بين الفصين أمراض المعدة والاثني عشر والطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عملية ربط الثاني في مقربة من ربط الأول للتأكد من أن فصوص يتم فصل كاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ligate بعناية فائقة حتى لا تتلف الأوعية الدموية الكامنة، وهما الشريان البنكرياسي الإثناعشري متفوقة، والشريان البنكرياسي الإثناعشري السفلي والجزء البنكرياس من الشريان الطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الأجهزة مرة أخرى إلى تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق شق باستخدام 4-0 الجليوكول موضوع الخيطية في نمط خياطة المستمر لعضلة / طبقة البريتوني وفي نمط خياطة متقطع للبشرة. </li></ol></li></ol> 5. الشام جراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ كافة الخطوات ديمكتوب في الخطوات من 1 إلى 4.1.4. في حين يتعرض البنكرياس، لا يؤدون ربط من القناة البنكرياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية الخطوة 4.1.4، وضع الأعضاء الداخلية مرة أخرى إلى تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق شق كما هو موضح في 4.2.7. </li></ol> 6. العناية ما بعد العمليات والمراقبة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد العملية الجراحية كاملة، ضع الماوس في منطقة الانتعاش. هذا يتكون من القفص وضعها على وسادة التدفئة واصطف مع الفراش ورقة مسطحة من أجل الحفاظ على درجة حرارة الجسم العادية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توفير الدعم الغذائي لتجنب نقص السكر في الدم بعد العمليات الجراحية عن طريق الطعام مبلل وضعت في أسفل القفص. لهذا الغرض، استخدم القياسية الكريات القوارض حمية ينقع في الماء حتى تلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقديم الدعم السوائل عن طريق الغذاء مبلل وتوفير المياه الإعلانية libitum. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام Buprenophine كما تسكين (0،05 حتي 0،1 ملغ / كلغ) مرتين يوميا لمدة 2 أيام بعد الجراحة. خلال التجريبية بأكملها، متابعة، observالبريد الفئران لحدوث علامات محتملة للعدوى، بما في ذلك إفراز السائل أو الصديد من الجرح، أو التدهور المادي تتميز انخفاض في الاستمالة السلوك ومستوى النشاط، وانخفاض الشهية وفقدان وزن الجسم. </li></ol> 7. تقييم نجاح PDL وحصاد PDL الذيل والشام ذيل البنكرياس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران عن طريق التفكك عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة حلق منطقة البطن لتجنب المرحل من الفراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح البطن الجلد والعضلات طبقة وإزالة مساحة كبيرة من الجلد والعضلات للحصول على سهولة الوصول إلى البنكرياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملاقط معقمة أو مسحة، وتراجع المعدة متفوق، وفضح الطحال والفص الطحال (منطقة الذيل) في البنكرياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب للخارج برفق الاثني عشر وجزء من الصائم العلوي لفضح الفص المعدي الاثنى عشر (منطقة الرأس) في البنكرياس. ملاحظة: وقد خفضت جزء ligated البنكرياس PDL الآن في الحجم وأصبح تقريباشفافة بحيث الجزر مرئية كنقاط صغيرة بيضاء. جزء من رأس البنكرياس وردي غير واضحة وخارجية الإفراز متميزة للفصيص يمكن ملاحظتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص العقيمة، فصل الذيل جزء ligated البنكرياس من الطحال، عن طريق قطع على طول الطحال. قطع فضفاضة النسيج الضام الذي يربط بين منطقة الذيل من البنكرياس إلى الأعضاء الداخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع المنطقة ذيل PDL الحق في الجبهة من الربط، باستثناء ضمد والأنسجة المجاورة على الفور لأنه من النسيج المقطوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لعزل الأنسجة ذيل صورية، اتبع الخطوات 7.1 خلال 7.5. باستخدام مقص العقيمة منفصلة المنطقة ذيل البنكرياس صورية من الطحال عن طريق قطع على طول الطحال. عزل المنطقة عن طريق قطع الذيل في منطقة الرقبة من البنكرياس وقطع فضفاضة النسيج الضام الذي يربط بين البنكرياس الذيل إلى الأجهزة الداخلية ملاحظة: كل من الذيل ومنطقة رأس البنكرياس صورية والوردي مبهمة، لعزل كل من أجزاء منفصلة،قطع البنكرياس في منطقة الرقبة. </li></ol>

<ol>
	<li>Shaw, J. E., Sicree, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+the+prevalence+of+diabetes+for.">Global estimates of the prevalence of diabetes for.</a> Diabetes Res Clin Pract. 87, 4-14 (2010).</li><li>Danaei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National,+regional,+and+global+trends+in+fasting+plasma+glucose+and+diabetes+prevalence+since+1980:+systematic+analysis+of+health+examination+surveys+and+epidemiological+studies+with+370+country-years+and+2&#183;7+million+participants.">National, regional, and global trends in fasting plasma glucose and diabetes prevalence since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 370 country-years and 2&#183;7 million participants.</a> Lancet. 378, 31-40 (2011).</li><li>Borowiak, M., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+beta+cells.">How to make beta cells.</a> Current opinion in Cell Biology. 21, 727-732 (2009).</li><li>Gradwohl, G., Dierich, A., LeMeur, M., Guillemot, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=neurogenin3+is+required+for+the+development+of+the+four+endocrine+cell+lineages+of+the+pancreas.">neurogenin3 is required for the development of the four endocrine cell lineages of the pancreas.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 1607-1611 (2000).</li><li>Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+for+the+pancreatic+lineage:+NGN3++cells+are+islet+progenitors+and+are+distinct+from+duct+progenitors.">Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors.</a> Development. 129, 2447-2457 (2002).</li><li>Dor, Y., Brown, J., Martinez, O. I., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+pancreatic+beta-cells+are+formed+by+self-duplication+rather+than+stem-cell+differentiation.">Adult pancreatic beta-cells are formed by self-duplication rather than stem-cell differentiation.</a> Nature. 429, 41-46 (2004).</li><li>Teta, M., Rankin, M. M., Long, S. Y., Stein, G. M., Kushner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+regeneration+of+adult+beta+cells+does+not+involve+specialized+progenitors.">Growth and regeneration of adult beta cells does not involve specialized progenitors.</a> Dev Cell. 12, 817-826 (2007).</li><li>Bonner-Weir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspective:+Postnatal+pancreatic+beta+cell+growth.">Perspective: Postnatal pancreatic beta cell growth.</a> Endocrinology. 141, 1926-1929 (2000).</li><li>Brennand, K., Huangfu, D., Melton, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All+beta+cells+contribute+equally+to+islet+growth+and+maintenance.">All beta cells contribute equally to islet growth and maintenance.</a> PLoS Biol. 5, e163 (2007).</li><li>Salpeter, S. J., Klein, A. M., Huangfu, D., Grimsby, J., Dor, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+and+aging+control+the+quiescence+period+that+follows+pancreatic+beta+cell+replication.">Glucose and aging control the quiescence period that follows pancreatic beta cell replication.</a> Development. 137, 3205-3213 (2010).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta+cells+can+be+generated+from+endogenous+progenitors+in+injured+adult+mouse+pancreas.">Beta cells can be generated from endogenous progenitors in injured adult mouse pancreas.</a> Cell. 132, 197-207 (2008).</li><li>Wang, R. N., Kloppel, G., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duct-+to+islet-cell+differentiation+and+islet+growth+in+the+pancreas+of+duct-ligated+adult+rats.">Duct- to islet-cell differentiation and islet growth in the pancreas of duct-ligated adult rats.</a> Diabetologia. 38, 1405-1411 (1995).</li><li>Yasuda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+expression+and+induction+of+acinar+cell+apoptosis+after+pancreatic+duct+ligation+in+mice.">Cytokine expression and induction of acinar cell apoptosis after pancreatic duct ligation in mice.</a> Journal of interferon, &amp; cytokine research : the official journal of the International Society for Interferon and Cytokine Research. 19, 637-644 (1999).</li><li>Van Gassen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+dynamics+are+regulated+by+local+macrophage+proliferation+and+monocyte+recruitment+in+injured+pancreas.">Macrophage dynamics are regulated by local macrophage proliferation and monocyte recruitment in injured pancreas.</a> European journal of immunology. , (2015).</li><li>Van de Casteele, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenin+3++cells+contribute+to+beta-cell+neogenesis+and+proliferation+in+injured+adult+mouse+pancreas.">Neurogenin 3+ cells contribute to beta-cell neogenesis and proliferation in injured adult mouse pancreas.</a> Cell Death Dis. 4, e523 (2013).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No+evidence+for+beta+cell+neogenesis+in+murine+adult+pancreas.">No evidence for beta cell neogenesis in murine adult pancreas.</a> The Journal of clinical investigation. 123, 2207-2217 (2013).</li><li>Ackermann Misfeldt, A., Costa, R. H., Gannon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-cell+proliferation,+but+not+neogenesis,+following+60%+partial+pancreatectomy+is+impaired+in+the+absence+of+FoxM1.">Beta-cell proliferation, but not neogenesis, following 60% partial pancreatectomy is impaired in the absence of FoxM1.</a> Diabetes. 57, 3069-3077 (2008).</li><li>Lee, C. S., De Leon, D. D., Kaestner, K. H., Stoffers, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+pancreatic+islets+after+partial+pancreatectomy+in+mice+does+not+involve+the+reactivation+of+neurogenin-3.">Regeneration of pancreatic islets after partial pancreatectomy in mice does not involve the reactivation of neurogenin-3.</a> Diabetes. 55, 269-272 (2006).</li><li>Bonner-Weir, S., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+stem+cells.">Pancreatic stem cells.</a> The Journal of pathology. 197, 519-526 (2002).</li><li>Nir, T., Melton, D. A., Dor, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+from+diabetes+in+mice+by+beta+cell+regeneration.">Recovery from diabetes in mice by beta cell regeneration.</a> The Journal of clinical investigation. 117, 2553-2561 (2007).</li><li>Bouwens, L., Rooman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+beta-cell+mass.">Regulation of pancreatic beta-cell mass.</a> Physiol Rev. 85, 1255-1270 (2005).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurog3+gene+dosage+regulates+allocation+of+endocrine+and+exocrine+cell+fates+in+the+developing+mouse+pancreas.">Neurog3 gene dosage regulates allocation of endocrine and exocrine cell fates in the developing mouse pancreas.</a> Developmental biology. 339, 26-37 (2010).</li><li>Pan, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+patterns+of+multipotentiality+in+Ptf1a-expressing+cells+during+pancreas+organogenesis+and+injury-induced+facultative+restoration.">Spatiotemporal patterns of multipotentiality in Ptf1a-expressing cells during pancreas organogenesis and injury-induced facultative restoration.</a> Development. 140, 751-764 (2013).</li><li>Kopp, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox9++ductal+cells+are+multipotent+progenitors+throughout+development+but+do+not+produce+new+endocrine+cells+in+the+normal+or+injured+adult+pancreas.">Sox9+ ductal cells are multipotent progenitors throughout development but do not produce new endocrine cells in the normal or injured adult pancreas.</a> Development. 138, 653-665 (2011).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Neurog3+expression+in+hormone-expressing+islet+cells+is+required+for+endocrine+maturation+and+function.">Sustained Neurog3 expression in hormone-expressing islet cells is required for endocrine maturation and function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 9715-9720 (2009).</li><li>Kopinke, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+tracing+reveals+the+dynamic+contribution+of+Hes1++cells+to+the+developing+and+adult+pancreas.">Lineage tracing reveals the dynamic contribution of Hes1+ cells to the developing and adult pancreas.</a> Development. 138, 431-441 (2011).</li><li>Rankin, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cells+are+not+generated+in+pancreatic+duct+ligation-induced+injury+in+adult+mice.">beta-Cells are not generated in pancreatic duct ligation-induced injury in adult mice.</a> Diabetes. 62, 1634-1645 (2013).</li><li>Solar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+duct+cells+give+rise+to+insulin-producing+beta+cells+during+embryogenesis+but+not+after+birth.">Pancreatic exocrine duct cells give rise to insulin-producing beta cells during embryogenesis but not after birth.</a> Dev Cell. 17, 849-860 (2009).</li><li>Furuyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver,+exocrine+pancreas+and+intestine.">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43, 34-41 (2011).</li><li>Van de Casteele, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+duct+ligation:+beta-cell+proliferation+and+beyond.">Partial duct ligation: beta-cell proliferation and beyond.</a> Diabetes. 63, 2567-2577 (2014).</li><li>Zhang, J., Rouse, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathology+and+pathogenesis+of+caerulein-,+duct+ligation-,+and+arginine-induced+acute+pancreatitis+in+Sprague-Dawley+rats+and+C57BL6+mice.">Histopathology and pathogenesis of caerulein-, duct ligation-, and arginine-induced acute pancreatitis in Sprague-Dawley rats and C57BL6 mice.</a> Histology and histopathology. 29, 1135-1152 (2014).</li><li>Martinez-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epigenetic+regulators+Bmi1+and+Ring1B+are+differentially+regulated+in+pancreatitis+and+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">The epigenetic regulators Bmi1 and Ring1B are differentially regulated in pancreatitis and pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> The Journal of pathology. 219, 205-213 (2009).</li><li>Prevot, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+ductal+transcription+factors+HNF6+and+Sox9+in+pancreatic+acinar-to-ductal+metaplasia.">Role of the ductal transcription factors HNF6 and Sox9 in pancreatic acinar-to-ductal metaplasia.</a> Gut. 61, 1723-1732 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

In the present study, we describe in detail the methodology behind PDL, a mouse injury model to study beta cell neogenesis and proliferation and transdifferentiation of pancreatic non-beta cells. Ambiguity in data on PDL among labs stimulates the need for a standardized protocol for PDL surgery.
Critical steps in the PDL protocol include the selection of healthy, young mice for surgery. Preferably male mice should be used since unpublished data from our lab suggest that estrogen receptor signa...

تزايد انتشار مرض السكري، والتي تؤثر على أكثر من 300 مليون شخص على مستوى العالم 1،2 عزز البحث عن مصادر جديدة للخلايا بيتا المنتجة للأنسولين، على حد سواء في المختبر وفي الجسم الحي، لتجديد نقص كتلة خلايا بيتا. 3 تحديد الرئيسي يمكن لآليات والعوامل التي تنظم تكاثر الخلايا بيتا وبيتا خلية neogenesis، أي تمايز الخلايا بيتا من خلية خلية أو السلف غير بيتا، وتوفير أهداف جديدة لتطوير علاجات التجدد في مرض السكري. في البنكرياس القوارض النامية، جميع أنواع الخلايا والغدد الصماء التفريق من السكان الرحل من خلايا الغدد الصماء السلف، معربا عن عامل النسخ Neurogenin3 (Ngn3). 4،5 في البنكرياس القوارض الكبار، في ظل ظروف فسيولوجية طبيعية، كتلة خلايا بيتا هي الحفاظ على العدد الأمثل لتلبية مطالب الأيضية. التغييرات في بيتا حجم الخلية،موت الخلايا المبرمج والتكرار تشكل آليات رئيسية لبيتا توسيع الخلايا وتتحول إلى أكثر من 6-8 الرغم من أن إمكانيات خلايا بيتا لتتكاثر في ظل ظروف طبيعية فسيولوجية غير متجانسة بين جميع السكان من 9 معدل انتشارها منخفضة ويقتصر إعادة تكرارها من قبل فترة دينامية السكون أو فترة صهر 6،7، وتتأثر العمر وايض الجلوكوز. 10 منذ حتى الآن لم يتم تحديد خلايا الغدد الصماء في البنكرياس السلف الكبار العادي، ويعتقد neogenesis لعدم المساهمة في نمو الخلايا بيتا الكبار العادي. 8 وبالتالي، فإن تحديد خلية الغدد الصماء السلف الاختيارية في البنكرياس الكبار التي يمكن توسيعها وقادرة على إنتاج خلايا بيتا الجديدة ستوفر رواية، وربما مصدر غير محدود من خلايا بيتا. الجزئي لاصق ربط (PDL) هو نموذج إصابة الحيوان الذي تم وصفه للحث على neogenesi خلايا بيتاالصورة في البنكرياس الكبار. 11،12 في هذا النموذج، والقناة البنكرياسية الرئيسي تجفيف ذيل البنكرياس هو ligated جراحيا. العرقلة الناتجة من الصرف خارجية الإفراز يستحث إعادة تشكيل الأنسجة كبير، يرافقه التهاب وضمور عنيبية البعيدة إلى ربط 12-14 ضمن هذه البيئة التهابات، وإعادة التعبير للعلامة الغدد الصماء السلف هو فعل Ngn3 وحجم خلايا بيتا يزيد شقين . هذا الضعف في بيتا النتائج حجم الخلية من توليد خلايا بيتا جديدة من Ngn3 التعبير عن نوع الجنين خلية الغدد الصماء والسلف من انتشار الخلايا الموجودة مسبقا والتي شكلت حديثا بيتا التي تكون عرضة لإعادة ازدواجية دون &quot;فترة هدوء&quot;. 11،15 neogenesis خلايا بيتا وتكرارها في النماذج الإصابة، مثل استئصال البنكرياس 6،7،16-19 والاجتثاث الانتقائي للخلايا بيتا 20 وقد وصفت على نطاق واسع. ومع ذلك، فإن النتيجة التجدد في تسايتأثر النماذج الإلكترونية وفقا لمدى الأضرار التي لحقت ويرتبط مع بيتا كتلة الخلايا الأولية انخفضت 21. PDL هو نموذج العمليات الجراحية التي لا يتأثر كتلة خلايا بيتا الأولية ويتم تنشيط neogenesis خلايا بيتا والانتشار بقوة. في الواقع، في بنكرياس الفئران التي خضعت PDL، ويتم تحديد الخلايا معربا عن Ngn3 بالقرب من البطانة الطلائية للقناة. هذه الخلايا يمكن عزل من البنكرياس ligated من Ngn3-GFP الفئران المعدلة وراثيا باستخدام مضان خلية تنشيط الفرز (FACS) وقادرون على تمييز تجاه خلايا بيتا الوظيفية التالية engraftment في الجسم الحي وخارج ثقافة البنكرياس من E12.5 Ngn3 - / - . الفئران 11 وبالمثل، في Ngn3 CreERT؛ 15 الفئران R26 YFP فيها الخلايا التي تنشط الجين Ngn3 وصفت بشكل دائم بعد الحقن تاموكسيفين، تم الكشف عن Ngn3 خلايا بيتا المشتقة من خلية التسمية إيجابية بعد PDL وعلاوة على ذلك، وخلايا بيتا التي شكلت حديثا تمييع قبل -موجودةجي خلايا بيتا وتحديد موقع تفضيلي في الجزر الصغيرة من خلاله تظهر خلايا بيتا قدرة عالية الانتشار. 15 Ngn3 مهمة لتوسيع خلايا بيتا بعد PDL منذ انخفض Ngn3 التعبير عن الرأي محددة الهدف RNA قصيرة دبوس انخفاضات كبيرة في كتلة خلايا بيتا وتكاثر الخلايا بيتا بعد PDL. 11 والجدير بالذكر أن جزء من Ngn3 خلايا بيتا المشتقة من خلية وكتلة خلايا بيتا بعد PDL يعتمد بشكل كبير على مستوى Ngn3 تحريض 15. هذا هو وفقا لملاحظة أن مستوى عال من Ngn3 التعبير هو خطوة حاسمة لالتزام الغدد الصماء من الأسلاف البنكرياس متعددة القدرات خلال تطوير البنكرياس 22 بالإضافة إلى ذلك، الاجتثاث الانتقائي للNgn3 معربا عن الخلايا عن طريق إدارة الخناق والسم لNgn3 CreERT؛ الفئران R26 iDTR 15 نتائج في المحتوى الأنسولين انخفاض وانخفاض تكاثر الخلايا بيتا، وخاصة في الجزر الصغيرة. <pالطبقة = &quot;jove_content&quot;&gt; وعلى الرغم من تأكيد تحريض Ngn3 التعبير في خلايا القناة بعد PDL من قبل العديد 11،15،16،23،24، Ngn3 التعبير في الجزر خلايا 24،25 والتضارب في نتائج PDL الطعن الملاحظات الأولية لدينا زيادة كتلة خلايا بيتا 26،27، ظهور Ngn3 يعبرون عن المستمدة من القناة الأسلاف الغدد الصماء 24،26،28،29، وزيادة تكاثر الخلايا بيتا 27 بعد PDL 30 يمكن، على الأقل جزئيا، أن تعزى هذه النتائج المتضاربة إلى مجموعة من العوامل، بما في ذلك التغيرات في نقطة زمنية ما بعد العمليات الجراحية في التحليل، ووزن الجسم والجنس وعمر الفئران، الظروف الفسيولوجية والبيئية اللاحقة للعمليات الجراحية، والأهم من ذلك، تزداد باستمرار الخلافات في تقنية جراحية. 30 في أيدينا، وانتشار الخلايا بيتا، والمحتوى الأنسولين، وحجم خلايا بيتا وعدد من الجزر الصغيرة بعد PDL. أيضاNgn3 مرنا يزيد باستمرار، ولكن هناك اختلافات كبيرة في التعبير Ngn3 مرنا بين PDL البنكرياس الذيل، والتي لدينا أي تفسير المباشر. افترضنا أن مستوى Ngn3 مرنا قد تتطابق مع درجة من neogenesis خلايا بيتا من الخلايا غير بيتا 15، ولكن هذا يحتاج إلى مزيد من الأدلة. على الرغم من أنه لا يزيل كل الاختلافات التجريبية، طريقة موحدة لأداء جراحة PDL يسمح التوحيد أفضل في النتائج ويفتح آفاقا جديدة في دراسة تكاثر الخلايا بيتا وneogenesis.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Supplies for preparation area&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hibiscrub&#160;</td>
			<td>Regent Medical</td>
			<td>5601IE5F11</td>
			<td>Chlorhexidin diglucon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>BE-V202526</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun(2%) (Xylazin)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>BE-V041815</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duratears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>34335-8</td>
			<td>ointment for eyes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for surgical area&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Operating microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>10446320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autoclaved surgical instruments</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recirclulating water heating pad</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc.</td>
			<td>TP702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive OP-towel</td>
			<td>BARRIER</td>
			<td>706500-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP-tape</td>
			<td>BARRIER</td>
			<td>381035-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stella 3/5 Compresse de gaze (Sterile)</td>
			<td>Lohmann&#38;Rauscher International</td>
			<td>35968</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Plasco 0,9% NaCl solution</td>
			<td>B.BRAUN</td>
			<td>3521680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8706H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 polyglycol suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>SL-607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for recovery area</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper bedding (paper towel)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic</td>
			<td>ecuPhar</td>
			<td>BE-V342955</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials for analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taqman Ngn3 primer</td>
			<td>Integrated DNA technologies</td>
			<td>Mm.PT.56a.33574796.gs</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taqman CycloA primer</td>
			<td>Integrated DNA technologies</td>
			<td>Mm.PT.39a.2.gs</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rabbit Cleaved Caspase 3 antibody (D175)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5A1E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse/rat Ki67 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-5698-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal anti-actin alpha-Smooth muscle-Cy3 (mouse)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>085K4889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rat Cytokeratin 19&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal Mouse anti-BrdU</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>33342</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surgical injury to the mouse pancreas through ligation of the pancreatic duct as a model for endocrine and exocrine reprogramming and proliferation

توسيع خلايا بيتا في البنكرياس في الجسم الحي أو خارج الجسم، أو توليد خلايا بيتا التي كتبها التمايز من الخلايا الجذعية الجنينية أو الكبار، يمكن أن توفر مصادر للتوسيع جديدة من خلايا بيتا للتخفيف من ندرة المانحة في زرع جزيرة البشري كعلاج لمرض السكري. وعلى الرغم من إحراز تقدم في الآونة الأخيرة نحو هذا الهدف، الآليات التي تنظم بيتا توسيع الخلايا والتمايز من الخلايا الجذعية / السلف لا تزال تتسم. هنا، نحن تصف بروتوكول للنموذج إصابة في الماوس البنكرياس الكبار التي يمكن أن تعمل كأداة لدراسة آليات إعادة تشكيل الأنسجة وتكاثر الخلايا بيتا والتمايز. الجزئي لاصق ربط (PDL) هو ضرر الناجم تجريبيا البنكرياس القوارض التي تنطوي على الربط الجراحي للقناة البنكرياس الرئيسية مما أدى إلى إعاقة تصريف المنتجات الإفرازية للخروج من منطقة الذيل من البنكرياس. الأضرار التي لحقت يدفع ضمور عنيبية، infilt الخلايا المناعيةالتموينية وإعادة تشكيل الأنسجة شديدة. لقد ذكرت سابقا تفعيل Neurogenin (NGN) 3 معربا عن الخلايا الشبيهة السلف الذاتية وزيادة في تكاثر الخلايا بيتا بعد PDL. ولذلك، يوفر PDL أساس لدراسة الإشارات تشارك في ديناميات خلايا بيتا وخصائص من السلف الغدد الصماء في البنكرياس الكبار. منذ ذلك الحين، فإنه لا يزال من غير الواضح إلى حد كبير، مما العوامل ومسارات تسهم في neogenesis خلايا بيتا والانتشار في PDL، فإن بروتوكول موحد لPDL تسمح للمقارنة عبر المختبرات.

PDL يدفع ضمور عنيبية والالتهاب لكنها لا تؤثر على وزن الجسم وسكر الدم في 8 أسابيع من العمر من الذكور BALB / ج الفئران، هو ligated القناة استنزاف إنزيمات خارجية الإفراز من ذيل البنكرياس بينما رئيس الجهاز، ويقع بالقرب من المعدة وال...

Watch this Scientific Journal Video about Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation at JoVE.co

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation.

الإصابات الجراحية للماوس البنكرياس من خلال من ربط والبنكرياس القناة نموذجا للالغدد الصماء وخارجية الإفراز إعادة برمجة وانتشار

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

surgical-injury-to-mouse-pancreas-through-ligation-pancreatic-duct-as

Research

JoVE Journal

Medicine

16.0K Views.  Vrije Universiteit Brussel. This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation. 

Video: Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

القناة الصفراوية ربط في الفئران: تحريض التهاب الكبد والتليف الإصابات التي كتبها الانسدادي ركود صفراوي

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Pancreatic Duct Infusion: An Effective and Selective Method of Drug and Viral Delivery

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, pancreatitis, and pancreatic cancer. All three of these diseases mark active areas of study, not only to develop immediate therapy, but also to better understand their pathophysiology. There are few tools to further these areas of study. Pancreatic duct infusion is an important technique that can allow for lineage tracing, gene introduction, and cell line-specific targeting. The technique requires the intricate dissection of the second portion of the duodenum and ampulla, followed by the occlusion of the bile duct and the cannulation of the pancreatic duct. Although the technique is technically challenging at first, the applications are myriad. Ambiguity in the specifics of the procedure between groups highlighted the need for a standard protocol. This work describes the expression of a green fluorescent protein (GFP) within the pancreas after the pancreatic duct infusion of a viral vector expressing GFP versus a sham surgery. The infusion and therefore expression is specific to the pancreas, without expression present in any other tissue type.

Pancreatic duct infusion is an important technique that can allow for lineage tracing, gene introduction, and cell line-specific targeting. A pancreatic duct infusion technique for drug and viral delivery to pancreatic cells is presented here.

ضخ قناة البنكرياس: طريقة فعالة وانتقائية من المخدرات والتسليم الفيروسي

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

تشريح البنكرياس الماوس للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Robotic Lateral Pancreaticojejunostomy for Chronic Pancreatitis

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The recent rise of robotic and laparoscopic pancreatic surgery has found benefits such as reduced time to functional recovery. Few studies have reported on the feasibility, technique and outcome of robotic LPJ, especially including transection of the gastroduodenal artery. The present study describes the main steps for robotic LPJ in a patient with painful chronic pancreatitis with a dilated main pancreatic duct. The patient underwent robotic LPJ. The LPJ anastomosis is performed using a running suture technique in a longitudinal side-to-side manner. Routinely, the gastroduodenal artery is transected to drain the entire length of the main pancreatic duct. The patient is in French position; 7 trocars are placed (4 robotic, 2 laparoscopic assistants, 1 liver-retractor). After docking of the robot system, the omental bursa is opened, and the right gastroepiploic artery and vein are ligated at their base at the lower border of the pancreas. Intraoperative ultrasonography is performed in order to determine trajectory of the dilated main pancreatic duct which is opened for its entire length after the gastroduodenal artery has been suture ligated both cranially and caudally from the main pancreatic duct. A Roux limb is created, and a latero-lateral PJ is fashioned using several 3-0 barbed sutures. A stapled jejuno-jejunostomy is created at sufficient distance from the pancreatic anastomosis, aided by a 50 cm suture. The described technique for robotic LPJ is a complex but feasible operation for patients with treatment refractory CP and a dilated main pancreatic duct. Due to its complexity, implementation in high volume centers with extensive experience with CP surgery may improve outcomes.

Robotic lateral pancreaticojejunostomy (RLPJ) may be used in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis and a dilated main pancreatic duct. We describe a standardized and reproducible technique for RLPJ, which includes transection of the gastroduodenal artery.

بانكريتيكوجيجونوستومي الجانبية الروبوتية للتهاب البنكرياس المزمن

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological resection of left-sided pancreatic cancer. Several surgical techniques have been described in recent years, but few were specifically designed for minimally invasive approaches. This study describes and demonstrates a standardized and reproducible technique for an adequate oncological resection of pancreatic cancer: laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP).
A 61-year-old woman presented with an incidental finding of a 3 cm mass in the left pancreas suspect for malignancy. Imaging did not reveal distant metastases, central vascular involvement, or morbid obesity, hence the patient was suitable for LRLP. This study describes the main steps of LRLP for pancreatic cancer. First, the lesser sac is opened by transecting the gastrocolic ligament. The splenic flexure of the colon is mobilized and the inferior border of the pancreas including Gerota&#39;s fascia is dissected down to the inferior border of the spleen. The pancreas is tunneled and hung, including Gerota&#8217;s fascia with a vessel loop. At the pancreatic neck, a tunnel is created between the pancreas and the portal vein, likewise a vessel loop is passed. The pancreas is then transected using the graded compression technique with an endostapler. Both the splenic vein and artery are transected before completing the resection. The entire specimen is extracted in a retrieval bag via a small Pfannenstiel incision.
Duration of the surgery was 210 min with 250 mL blood loss. Pathology revealed a R0-resection (&#62;1 mm) of a well-to-moderately differentiated adenocarcinoma originating from an intraductal papillary mucinous neoplasm. A total of 15 tumor-negative lymph nodes were resected. This is a detailed description of LRLP for left-sided pancreatic cancer as is currently being used within the international, multicenter randomized DIPLOMA (Distal Pancreatectomy Minimally Invasive or Open for PDAC) trial.

Oncologically safe left pancreatectomy requires radical resection (R0), Gerota&#8217;s (perirenal) fascia resection, and adequate lymph node dissection. This study describes the technical details of laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP), used in the first international multicenter randomized trial comparing minimally invasive with open left pancreatectomy for pancreatic cancer, the DIPLOMA trial.

المنظار الراديكالي ة الراديكالية استئصال البنكرياس لسرطان البنكرياس: استراتيجية جراحية وتقنية فيديو

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

نموذج زرع رئة الفئران لإصابة نقص التروية / التروية الدافئة: تحسينات لتحسين النتائج

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging study, with an abdominal imaging window, enabled visualization of the cellular dynamics in abdominal organs in vivo. However, due to the soft sheet-like architecture of the mouse pancreas that can be easily influenced by physiologic movement (e.g., peristalsis and respiration), it was difficult to perform stabilized longitudinal in vivo imaging over several weeks at the cellular level to identify, track, and quantify islets or cancer cells in the mouse pancreas. Herein, we describe a method for implanting a novel supporting base, an integrated pancreatic intravital imaging window, that can spatially separate the pancreas from the bowel for longitudinal time-lapse intravital imaging of the pancreas microstructure. Longitudinal in vivo imaging with the imaging window enables stable visualization, allowing for the tracking of islets over a period of 3 weeks and high-resolution three-dimensional imaging of the microstructure, as evidenced here in an orthotopic pancreatic cancer model. With our method, further intravital imaging studies can elucidate the pathophysiology of various diseases involving the pancreas at the cellular level.

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

In vivo high-resolution imaging of the pancreas was facilitated with the pancreatic intravital imaging window.

استقر الطولي في فيفو الخلوية المستوى التصور من البنكرياس في نموذج مورين مع نافذة التصوير داخل الجسم البنكرياس

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a lack of effective treatments in the current clinical practice. With the easy accessibility of transgenic and knockout strains and their small size, which allows minimal doses of drugs required for in vivo evaluation, a well-established experimental model in mice is preferred for AP research. Moreover, SAP induced through sodium taurocholate (TC) is currently one of the most widely used and best characterized models. This model has been investigated for novel therapies and possible molecular events during the process of AP. Here, we present the generation of an AP mouse model using sodium taurocholate and a simple homemade microsyringe. Moreover, we also provide the methodology for the subsequent histology and serological testing.

A mouse model of severe acute pancreatitis is described herein. The procedure presented here is very rapid, simple, and accessible, thereby potentially allowing the study of the molecular mechanisms and different therapeutic interventions in acute pancreatitis in a convenient way.

إنشاء نموذج التهاب البنكرياس الحاد الوخيم للفأر باستخدام الحقن الرجعي لتاوروكولات الصوديوم في القناة الصفراوية البنكرياسية

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a ...

Partial Sciatic Nerve Ligation: A Mouse Model of Chronic Neuropathic Pain to Study the Antinociceptive Effect of Novel Therapies

Management of chronic pain remains challenging to this day, and current treatments are associated with adverse effects, including tolerance and addiction. Chronic neuropathic pain results from lesions or diseases in the somatosensory system. To investigate potential therapies with reduced side effects, animal pain models are the gold standard in preclinical studies. Therefore, well-characterized and well-described models are crucial for the development and validation of innovative therapies. 
Partial ligation of the sciatic nerve (pSNL) is a procedure that induces chronic neuropathic pain in mice, characterized by mechanical and thermal hypersensitivity, ongoing pain, and changes in limb temperature, making this model a great fit to study neuropathic pain preclinically. pSNL is an advantageous model to study neuropathic pain as it reproduces many symptoms observed in humans with neuropathic pain. Furthermore, the surgical procedure is relatively fast and straightforward to perform. Unilateral pSNL of one limb allows for comparison between the ipsilateral and contralateral paws, as well as evaluation of central sensitization. 
To induce chronic neuropathic hypersensitivity, a 9-0 non-absorbable nylon thread is used to ligate the dorsal third of the sciatic nerve. This article describes the surgical procedure and characterizes the development of chronic neuropathic pain through multiple commonly used behavioral tests. As a plethora of innovative therapies are now being investigated to treat chronic pain, this article provides crucial concepts for standardization and an accurate description of surgeries required to induce neuropathic pain.

Partial sciatic nerve ligation induces long-lasting chronic neuropathic pain, characterized by exaggerated responses to thermal and mechanical stimuli. This mouse model of neuropathic pain is commonly used to study innovative therapies for pain management. This article describes in detail the surgical procedure to improve standardization and reproducibility.

ربط العصب الوركي الجزئي: نموذج فأر لألم الأعصاب المزمن لدراسة التأثير المضاد للحساسية للعلاجات الجديدة

Management of chronic pain remains challenging to this day, and current treatments are associated with adverse effects, including tolerance and addiction. ...