The authors acknowledge all colleagues who made this work possible; Ann Demarr&#233;, Veerle Laurysens, Jan De Jonge and Erik Quartier for technical assistance. Financial support was from the VUB Research Council, the Institute for the Promotion of Innovation by Science and Technology in Flanders (IWT), the Beta Cell Biology Consortium (BCBC), the Fund for Scientific Research Flanders (FWO), Diabetes Onderzoek Nederland (DON) and Interuniversity Attraction Pole (IAP).

כל המניפולציות לעקוב אחר ההנחיות שהונפקו על ידי האמנה האירופית להגנה על בעלי החיים בעלי חוליות המשמשת לניסויים ומטרות מדעיות אחרות (ETS 123 וו -2010 / 63 / איחוד אירופי). 1. הכנת איזור העבודה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק שטח ייעודי הכנה, אזור ניתוח ואזור התאוששות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל את ההליך הכירורגי כל בזרימה למינרית כדי למזער מזהמים סביבתיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב את הציוד (כפי שמופיע בחומרים ושיטות) צורך בהכנת השטח, ניתוח והתאוששות, באמצעות טכניקת aseptic מתאימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שכלים כירורגיים הם autoclaved לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק כרית חימום מים הסירקולציה המחודשת בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס במשך ייצוב טמפרטורה במהלך ניתוח. מכסה את כרית החימום עם כרית עמיד למים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק מיקרוסקופ עם הגדלה של לפחות 6.3X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש Steri מכשירlizer, כגון מעקר חרוז חם, כדי לעקר מכשירים בין פרוצדורות כירורגיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן אזור התאוששות בהיקף של כלוב גדול, בשורה של מצעי נייר שטוחים </li></ol> 2. הכנת בעלי חיים לכירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לPDL וניתוח דמה, להשתמש 8 עכברי בן שבוע זכר, שוכנו בכלובים סטנדרטיים ומתוחזק על שעות אור 12 / חושך מחזור 12 שעות והאכיל כרצונך דיאטה מכרסם סטנדרטי. שים לב: כאן, אנו משתמשים בעכברי BALB / cJrJ אלא גם השתמשנו בהצלחה זנים אחרים וזנים מהונדסים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש Buprenophine כשיכוך כאבים מקדים (0.05-0.1 מ&quot;ג / קילוגרם) 30 דקות לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים בזריקת intraperitoneal של 100 מ&quot;ג / קילוגרם של קטמין ו 5 - 10 מ&quot;ג / קילוגרם של xylazine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך הרדמה נכונה על ידי התבוננות אובדן הדרגתי של תנועה רצונית והרפיית שרירים. בדוק את אובדן הרפלקסים על ידי צביטת הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיניים לקודמותיובש אף אוזן גרון של העיניים בזמן הרדמה. </li></ol> 3. אתר כירורגי הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא בית חזה והבטן עם פתרון chlorhexidine חיטוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח שטח של 2.5 סנטימטרים X 1.5 סנטימטר של הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את האזור המגולח באמצעות הגזה טבולה בתמיסת כלורהקסידין, אז פתרון אלכוהול ויישום סופי של פתרון chlorhexidine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את החיה באזור הניתוח, כך שהאתר כירורגית מוכן הוא כלפי מעלה מול המנתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעטוף את העכבר באמצעות וילון כירורגית עמיד למים עם פתיחה שעוזבת את אזור בטן החיטוי נחשף תוך כדי כיסוי שאר הגוף כדי ליצור שדה עבודה סטרילית. לפקח על העכבר לפני ההליך לעומק ההרדמה. </li></ol> 4. לבלב Duct קשירת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושה חתך קו האמצע עליון בעור המשתרע מתהליך xiphoid לטבור באמצעות סטרילילהב כירורגים. הפרד את אלבה Linea הבסיס והצפק באמצעות מספריים סטרילי כדי לחשוף רבע העליון של הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למנוע התייבשות-מהאיברים הפנימיים על ידי קומץ קבוע עם נתרן כלורי 0.9% סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות פינצטה או ספוגית סטרילית, לחזור בו מבטן superiorly, חושף את הטחול ואת אונת הטחול (אזור הזנב) של הלבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לחזור בי תריסריון וחלק מהמעי הריק העליון לרבע הבטן הימנית העליון כדי לחשוף את הראש, הצוואר ואזור גוף של הלבלב מכוסה על ידי הצפק הקרביים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קשירה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאתר את המיקום האנטומי של הצינור הראשי הלבלב באזור הצוואר של הלבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הצפק הקרביים ורצועת gastrocolic, מתן גישה לretroperitoneum, חושף את אזור הגוף והזנב של הלבלב. כדי לחשוף את אזור הצוואר, לבצע תמרון Kocher. הרם את התריסריון וראשהלבלב את retroperitoneum מרומם אותם מהווריד הנבוב הנחות ואב העורקים מתחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות במקום המרית מתחת לאזור הצוואר. ולקשור את צינור הלבלב עם 6-0 חוט Prolene בצד השמאל של וריד השער שמפריד בין אונות גסטרו-התריסריון וטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע קשירה שנייה בסמיכות לקשירה הראשונה כדי להבטיח שהאונות מופרדות כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור בזהירות על מנת שלא לפגוע בכלי הדם שבבסיס, כלומר העורק מעולה pancreaticoduodenal, עורק pancreaticoduodenal הנחותה וחלק הלבלב של עורק הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את האיברים בחזרה לתוך חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך באמצעות חוט פילמנטיות 4-0 polyglycol בדפוס תפר רציף לשרירים / שכבת הצפק ובדפוס תפר רציף לעור. </li></ol></li></ol> 5. ניתוח שאם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את כל הפעולות כמו דהתואר בשלבי 1 עד 4.1.4. בעוד הלבלב חשוף, לא לבצע קשירה של צינור הלבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של שלב 4.1.4, למקם איברים פנימיים חזרה לתוך חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגור את החתך, כמתואר ב4.2.7. </li></ol> טיפול וניטור 6. פוסט-מבצעיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ההליך הכירורגי הוא מלא, במקום את העכבר באזור ההתאוששות. זה מורכב מכלוב מונח על כרית חימום ומרופד בנייר מצעים שטוחים כדי לשמור על טמפרטורת גוף נורמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק תמיכה תזונתית כדי למנוע היפוגליקמיה לאחר ניתוח על ידי מזון טבול ממוקם בתחתית הכלוב. לשם כך, השתמש בכדורי דיאטה מכרסם סטנדרטיים ספוגים במים עד שהם מתרככים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק תמיכת נוזל על ידי המזון הטבול ולספק כרצונך מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש Buprenophine כשיכוך כאבים (0.05-0.1 מ&quot;ג / קילוגרם) פעמיים ביום למשך 2 ימים לאחר ניתוח. במשך כל הניסוי, מעקב, observדואר העכברים להתרחשותם של סימנים אפשריים של זיהום, כוללים הפרשה של נוזל או מוגלה מהפצע, או להידרדרות פיזית מאופיינת בירידה בטיפוח התנהגות ורמת פעילות, תיאבון נמוך ואובדן משקל. </li></ol> 7. הערכה של PDL מוצלח וקציר של זנב PDL ושאם לבלב זנב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים על ידי נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גילוח מחדש את אזור הבטן, כדי למנוע לשאת על פרווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את שכבת עור ושרירי הבטן ולהסיר שטח גדול של עור ושרירים כדי להשיג גישה טובה ללבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות פינצטה או ספוגית סטרילית, הבטן הוא חזר בי superiorly, חושפת את הטחול ואת אונת הטחול (אזור הזנב) של הלבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך בעדינות את התריסריון וחלק מהמעי הריק העליון כדי לחשוף את אונת גסטרו-התריסריון (אזור הראש) של הלבלב. הערה: חלק ligated של לבלב PDL כעת יוקטנו והפך כמעטשקוף כך שהאיים נראים כנקודות קטנות ולבנות. חלק ראש הלבלב הוא ורוד אטומה ואקסוקרינית ברורים lobuli ניתן לצפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת המספריים סטרילי, להפריד את חלק זנב ligated של הלבלב מהטחול, על ידי חיתוך לאורך הטחול. להתנתק רקמת חיבור המחברת את אזור הזנב של הלבלב לאיברים הפנימיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את אזור זנב PDL ממש מול קשירה, לא כולל קשירה ורקמה מייד בסמוך אליו מרקמות שנקטפו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבודד רקמת זנב דמה, בצע את השלבים 7.1 דרך 7.5. מספריים סטרילי באמצעות להפריד את אזור הזנב של לבלב הדמה מהטחול על ידי חיתוך לאורך הטחול. לבודד את אזור הזנב על ידי חיתוך לאזור הצוואר של הלבלב וחיתוך משוחרר רקמת חיבור המחבר את לבלב הזנב לאיברים הפנימיים הערה: שני הזנב ואזור ראש לבלב הדמה הם ורוד אטום, כדי לבודד את שני החלקים בנפרד,לחתוך את הלבלב באזור הצוואר. </li></ol>

<ol>
	<li>Shaw, J. E., Sicree, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+the+prevalence+of+diabetes+for.">Global estimates of the prevalence of diabetes for.</a> Diabetes Res Clin Pract. 87, 4-14 (2010).</li><li>Danaei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National,+regional,+and+global+trends+in+fasting+plasma+glucose+and+diabetes+prevalence+since+1980:+systematic+analysis+of+health+examination+surveys+and+epidemiological+studies+with+370+country-years+and+2&#183;7+million+participants.">National, regional, and global trends in fasting plasma glucose and diabetes prevalence since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 370 country-years and 2&#183;7 million participants.</a> Lancet. 378, 31-40 (2011).</li><li>Borowiak, M., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+beta+cells.">How to make beta cells.</a> Current opinion in Cell Biology. 21, 727-732 (2009).</li><li>Gradwohl, G., Dierich, A., LeMeur, M., Guillemot, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=neurogenin3+is+required+for+the+development+of+the+four+endocrine+cell+lineages+of+the+pancreas.">neurogenin3 is required for the development of the four endocrine cell lineages of the pancreas.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 1607-1611 (2000).</li><li>Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+for+the+pancreatic+lineage:+NGN3++cells+are+islet+progenitors+and+are+distinct+from+duct+progenitors.">Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors.</a> Development. 129, 2447-2457 (2002).</li><li>Dor, Y., Brown, J., Martinez, O. I., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+pancreatic+beta-cells+are+formed+by+self-duplication+rather+than+stem-cell+differentiation.">Adult pancreatic beta-cells are formed by self-duplication rather than stem-cell differentiation.</a> Nature. 429, 41-46 (2004).</li><li>Teta, M., Rankin, M. M., Long, S. Y., Stein, G. M., Kushner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+regeneration+of+adult+beta+cells+does+not+involve+specialized+progenitors.">Growth and regeneration of adult beta cells does not involve specialized progenitors.</a> Dev Cell. 12, 817-826 (2007).</li><li>Bonner-Weir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspective:+Postnatal+pancreatic+beta+cell+growth.">Perspective: Postnatal pancreatic beta cell growth.</a> Endocrinology. 141, 1926-1929 (2000).</li><li>Brennand, K., Huangfu, D., Melton, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All+beta+cells+contribute+equally+to+islet+growth+and+maintenance.">All beta cells contribute equally to islet growth and maintenance.</a> PLoS Biol. 5, e163 (2007).</li><li>Salpeter, S. J., Klein, A. M., Huangfu, D., Grimsby, J., Dor, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+and+aging+control+the+quiescence+period+that+follows+pancreatic+beta+cell+replication.">Glucose and aging control the quiescence period that follows pancreatic beta cell replication.</a> Development. 137, 3205-3213 (2010).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta+cells+can+be+generated+from+endogenous+progenitors+in+injured+adult+mouse+pancreas.">Beta cells can be generated from endogenous progenitors in injured adult mouse pancreas.</a> Cell. 132, 197-207 (2008).</li><li>Wang, R. N., Kloppel, G., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duct-+to+islet-cell+differentiation+and+islet+growth+in+the+pancreas+of+duct-ligated+adult+rats.">Duct- to islet-cell differentiation and islet growth in the pancreas of duct-ligated adult rats.</a> Diabetologia. 38, 1405-1411 (1995).</li><li>Yasuda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+expression+and+induction+of+acinar+cell+apoptosis+after+pancreatic+duct+ligation+in+mice.">Cytokine expression and induction of acinar cell apoptosis after pancreatic duct ligation in mice.</a> Journal of interferon, &amp; cytokine research : the official journal of the International Society for Interferon and Cytokine Research. 19, 637-644 (1999).</li><li>Van Gassen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+dynamics+are+regulated+by+local+macrophage+proliferation+and+monocyte+recruitment+in+injured+pancreas.">Macrophage dynamics are regulated by local macrophage proliferation and monocyte recruitment in injured pancreas.</a> European journal of immunology. , (2015).</li><li>Van de Casteele, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenin+3++cells+contribute+to+beta-cell+neogenesis+and+proliferation+in+injured+adult+mouse+pancreas.">Neurogenin 3+ cells contribute to beta-cell neogenesis and proliferation in injured adult mouse pancreas.</a> Cell Death Dis. 4, e523 (2013).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No+evidence+for+beta+cell+neogenesis+in+murine+adult+pancreas.">No evidence for beta cell neogenesis in murine adult pancreas.</a> The Journal of clinical investigation. 123, 2207-2217 (2013).</li><li>Ackermann Misfeldt, A., Costa, R. H., Gannon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-cell+proliferation,+but+not+neogenesis,+following+60%+partial+pancreatectomy+is+impaired+in+the+absence+of+FoxM1.">Beta-cell proliferation, but not neogenesis, following 60% partial pancreatectomy is impaired in the absence of FoxM1.</a> Diabetes. 57, 3069-3077 (2008).</li><li>Lee, C. S., De Leon, D. D., Kaestner, K. H., Stoffers, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+pancreatic+islets+after+partial+pancreatectomy+in+mice+does+not+involve+the+reactivation+of+neurogenin-3.">Regeneration of pancreatic islets after partial pancreatectomy in mice does not involve the reactivation of neurogenin-3.</a> Diabetes. 55, 269-272 (2006).</li><li>Bonner-Weir, S., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+stem+cells.">Pancreatic stem cells.</a> The Journal of pathology. 197, 519-526 (2002).</li><li>Nir, T., Melton, D. A., Dor, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+from+diabetes+in+mice+by+beta+cell+regeneration.">Recovery from diabetes in mice by beta cell regeneration.</a> The Journal of clinical investigation. 117, 2553-2561 (2007).</li><li>Bouwens, L., Rooman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+beta-cell+mass.">Regulation of pancreatic beta-cell mass.</a> Physiol Rev. 85, 1255-1270 (2005).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurog3+gene+dosage+regulates+allocation+of+endocrine+and+exocrine+cell+fates+in+the+developing+mouse+pancreas.">Neurog3 gene dosage regulates allocation of endocrine and exocrine cell fates in the developing mouse pancreas.</a> Developmental biology. 339, 26-37 (2010).</li><li>Pan, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+patterns+of+multipotentiality+in+Ptf1a-expressing+cells+during+pancreas+organogenesis+and+injury-induced+facultative+restoration.">Spatiotemporal patterns of multipotentiality in Ptf1a-expressing cells during pancreas organogenesis and injury-induced facultative restoration.</a> Development. 140, 751-764 (2013).</li><li>Kopp, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox9++ductal+cells+are+multipotent+progenitors+throughout+development+but+do+not+produce+new+endocrine+cells+in+the+normal+or+injured+adult+pancreas.">Sox9+ ductal cells are multipotent progenitors throughout development but do not produce new endocrine cells in the normal or injured adult pancreas.</a> Development. 138, 653-665 (2011).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Neurog3+expression+in+hormone-expressing+islet+cells+is+required+for+endocrine+maturation+and+function.">Sustained Neurog3 expression in hormone-expressing islet cells is required for endocrine maturation and function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 9715-9720 (2009).</li><li>Kopinke, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+tracing+reveals+the+dynamic+contribution+of+Hes1++cells+to+the+developing+and+adult+pancreas.">Lineage tracing reveals the dynamic contribution of Hes1+ cells to the developing and adult pancreas.</a> Development. 138, 431-441 (2011).</li><li>Rankin, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cells+are+not+generated+in+pancreatic+duct+ligation-induced+injury+in+adult+mice.">beta-Cells are not generated in pancreatic duct ligation-induced injury in adult mice.</a> Diabetes. 62, 1634-1645 (2013).</li><li>Solar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+duct+cells+give+rise+to+insulin-producing+beta+cells+during+embryogenesis+but+not+after+birth.">Pancreatic exocrine duct cells give rise to insulin-producing beta cells during embryogenesis but not after birth.</a> Dev Cell. 17, 849-860 (2009).</li><li>Furuyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver,+exocrine+pancreas+and+intestine.">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43, 34-41 (2011).</li><li>Van de Casteele, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+duct+ligation:+beta-cell+proliferation+and+beyond.">Partial duct ligation: beta-cell proliferation and beyond.</a> Diabetes. 63, 2567-2577 (2014).</li><li>Zhang, J., Rouse, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathology+and+pathogenesis+of+caerulein-,+duct+ligation-,+and+arginine-induced+acute+pancreatitis+in+Sprague-Dawley+rats+and+C57BL6+mice.">Histopathology and pathogenesis of caerulein-, duct ligation-, and arginine-induced acute pancreatitis in Sprague-Dawley rats and C57BL6 mice.</a> Histology and histopathology. 29, 1135-1152 (2014).</li><li>Martinez-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epigenetic+regulators+Bmi1+and+Ring1B+are+differentially+regulated+in+pancreatitis+and+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">The epigenetic regulators Bmi1 and Ring1B are differentially regulated in pancreatitis and pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> The Journal of pathology. 219, 205-213 (2009).</li><li>Prevot, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+ductal+transcription+factors+HNF6+and+Sox9+in+pancreatic+acinar-to-ductal+metaplasia.">Role of the ductal transcription factors HNF6 and Sox9 in pancreatic acinar-to-ductal metaplasia.</a> Gut. 61, 1723-1732 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

In the present study, we describe in detail the methodology behind PDL, a mouse injury model to study beta cell neogenesis and proliferation and transdifferentiation of pancreatic non-beta cells. Ambiguity in data on PDL among labs stimulates the need for a standardized protocol for PDL surgery.
Critical steps in the PDL protocol include the selection of healthy, young mice for surgery. Preferably male mice should be used since unpublished data from our lab suggest that estrogen receptor signa...

השכיחות הגוברת של סוכרת, המשפיעה על יותר מ -300 מיליון בני אדם ברחבי העולם 1,2 יש להגדיל את החיפוש אחר המקורות חדשים של תאי הבטא המייצר אינסולין, הן במבחנה in vivo, כדי לחדש את מסת התאים בטא הלקויה. 3 זיהוי מפתח מנגנונים וגורמים המווסתים את ההתפשטות בטא תא והתא NeoGenesis בטא, כלומר, ההתמיינות של תאי הבטא מתא סלולארי או אב שאינו בטא, יכולים לספק מטרות רומן לפיתוח טיפולי משובי בסוכרת. בלבלב המכרסמים הפיתוח, כל סוגי התאים האנדוקרינית להבדיל מאוכלוסייה חולפת של תאים האנדוקרינית, המבטאת את גורם השעתוק Neurogenin3 (Ngn3). 4,5 בלבלב המכרסמים המבוגרים, בתנאים פיסיולוגיים נורמלים, מסת התאים בטא היא שמרו על מספר אופטימלי כדי לעמוד בדרישות מטבולים. שינויים בגודל תא בטא,אפופטוזיס והשכפול מהווים מנגנונים העיקריים להתרחבות של תאי הבטא ולהפוך-על. 6-8 בעוד שהפוטנציאל של תאי הבטא להתרבות בתנאים פיסיולוגיים נורמלים הוא הומוגני בכל האוכלוסייה, 9 שיעור הריבוי שלהם הוא נמוך ומחדש שכפול מוגבל על ידי תקופה דינמית קפאון או תקופה עקשן 6,7, הושפעה גיל וחילוף חומרים של הגלוקוז. 10 מאז ותאים האנדוקרינית עד כה לא זוהו בלבלב המבוגר הנורמלי, הוא חשב NeoGenesis לא לתרום לצמיחה של תאי הבטא מבוגרים נורמלים. 8 לכן, זיהוי של תא אב האנדוקרינית פקולטטיביים בלבלב המבוגר שניתן להרחבה ומסוגלת מניב תאי הבטא חדשים יספק רומן, אולי מקור בלתי מוגבל של תאי הבטא. קשירת צינור חלקית (PDL) היא מודל פציעת חיה שתואר לגרום neogenesi תא בטאים בלבלב המבוגר. 11,12 במודל זה, צינור הלבלב הראשי ניקוז זנב הלבלב הוא ligated בניתוח. החסימה של ניקוז אקסוקרינית וכתוצאה מכך גורמת לשיפוץ רקמות גדול, מלווה בדלקת וניוון דיסטלי לקשירת acinar. 12-14 בסביבה דלקתית זה, מחדש ביטוי של סמן האב האנדוקרינית Ngn3 מושרה ותאי הבטא הנפח מגדיל כפול . הכפלה זו בתוצאות נפח התא בטא מהדור של תאי הבטא חדשים מNgn3 להביע תא אב האנדוקרינית עוברי-סוג ומהתפשטות של תאי הבטא קיימים מראש ויצרו זה עתה שנוטים מחדש שכפול ללא &quot;תקופת קפאון&quot;. 11,15 NeoGenesis Beta תא ושכפול בדגמי פציעה, כגון לבלב 6,7,16-19 ואבלציה סלקטיבית של תאי הבטא 20 תוארו בהרחבה. עם זאת, תוצאת משובי בthesמודלים דואר מושפעים מהיקף הנזקים הנגרמים והיא קשורה עם מסת תאים בטא ראשוני ירדה 21. PDL הוא מודל ניתוחי שבי מסת התאים בטא הראשונית אינה מושפעת וNeoGenesis תאי הבטא והתפשטות מופעלים חסונה. ואכן, בלבלב של עכברים שעברו PDL, תאים לבטא Ngn3 מזוהים ליד בטנת אפיתל של הצינור. יכולים להיות מבודדים תאים אלה מלבלב ligated של עכברים הטרנסגניים Ngn3-GFP באמצעות תא הקרינה מיון מופעל (FACS) והם מסוגלים להבחין כלפי תאים בטא פונקציונליים הבא engraftment ולתרבות לשעבר vivo של הלבלב של E12.5 Ngn3 - / - . עכברים 11 באופן דומה, בNgn3 CreERT;. עכברי R26 YFP שבו תאים שהפעילו את גן Ngn3 מסומנים באופן קבוע לאחר הזרקת טמוקסיפן, תאי הביתא תווית חיובית Ngn3 תאים שמקורם מזוהים לאחר PDL 15 יתר על כן, תאי הבטא חדש שנוצרו לדלל מראש -existing תאי הבטא ומעדיף לאתר באיים קטנים שבתוכו תאים בטא להראות פוטנציאל התפשטות גבוה. 15 Ngn3 חשוב לתאי הבטא התרחבות לאחר PDL מאז ירד ביטוי Ngn3 באמצעות היעד ספציפי RNA קצר-הסיכה יורד מסת תאים בטא והתפשטות תאים בטא לאחר באופן משמעותי PDL. 11 יש לציין, את החלק היחסי של תאי הבטא תאים שמקורם Ngn3 ומסת התאים בטא לאחר PDL ביקורתי תלויים ברמה של האינדוקציה Ngn3 15. זה בהתאם לתצפית שרמה הגבוהה של ביטוי Ngn3 היא שלב קריטי למחויבות האנדוקרינית מאבות לבלב multipotent במהלך פיתוח לבלב 22 בנוסף, אבלציה סלקטיבית של Ngn3 לבטא בתאים על ידי ממשל דיפטריה-רעל לNgn3 CreERT;. עכברי R26 iDTR תוצאות בתוכן ירד אינסולין והתפשטות תאי הבטא מופחת, במיוחד באיים קטנים. 15 <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; למרות האינדוקציה של ביטוי Ngn3 בתאי צינור לאחר PDL אושרה על ידי רבים 11,15,16,23,24, ביטוי Ngn3 בתאי איים 24,25 ופערים בתוצאה של PDL תיגר התצפיות הראשוניות שלנו מסה של תאי הבטא גדל 26,27, מראה של Ngn3 להביע אבות-נגזר צינור האנדוקרינית 24,26,28,29, וחלוקה של תאי הבטא עלה 27 לאחר PDL. 30 תוצאות הסותרות אלה יכולים, לפחות באופן חלקי, יש לייחס לשילוב של גורמים, כוללים שינויים בנקודות הזמן לאחר הניתוח של ניתוח, משקל גוף, מין וגיל של העכברים, תנאים פיסיולוגיים וסביבתיים שלאחר ניתוח, והכי חשוב, הבדלים בטכניקה ניתוחית. 30 בידיים שלנו, התפשטות בטא תא, תוכן אינסולין, בטא נפח תא ומספר האיים קטנים גדלו באופן עקבי אחרי PDL. כמו כןNgn3 mRNA מגדיל באופן עקבי, אבל יש הבדלים גדולים בביטוי Ngn3 mRNA בין לבלב זנב PDL, שאין לנו הסבר ישיר. חוקרים שערנו כי רמת Ngn3 mRNA עשויה לתאם עם התואר של NeoGenesis תאי הבטא מהתאים שאינם בטא 15, אבל זה צריך הוכחה נוספת. למרות שזה לא להסיר את כל וריאציות הניסיוניות, שיטה סטנדרטית לביצוע ניתוחי PDL מאפשרת לאחידות טובה יותר בתוצאות ופותחת אפיקים חדשים בלימוד התפשטות תאי הבטא וNeoGenesis.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Supplies for preparation area&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hibiscrub&#160;</td>
			<td>Regent Medical</td>
			<td>5601IE5F11</td>
			<td>Chlorhexidin diglucon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>BE-V202526</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun(2%) (Xylazin)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>BE-V041815</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duratears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>34335-8</td>
			<td>ointment for eyes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for surgical area&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Operating microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>10446320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autoclaved surgical instruments</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recirclulating water heating pad</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc.</td>
			<td>TP702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive OP-towel</td>
			<td>BARRIER</td>
			<td>706500-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP-tape</td>
			<td>BARRIER</td>
			<td>381035-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stella 3/5 Compresse de gaze (Sterile)</td>
			<td>Lohmann&#38;Rauscher International</td>
			<td>35968</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Plasco 0,9% NaCl solution</td>
			<td>B.BRAUN</td>
			<td>3521680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8706H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 polyglycol suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>SL-607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for recovery area</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper bedding (paper towel)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetergesic</td>
			<td>ecuPhar</td>
			<td>BE-V342955</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials for analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taqman Ngn3 primer</td>
			<td>Integrated DNA technologies</td>
			<td>Mm.PT.56a.33574796.gs</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taqman CycloA primer</td>
			<td>Integrated DNA technologies</td>
			<td>Mm.PT.39a.2.gs</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rabbit Cleaved Caspase 3 antibody (D175)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5A1E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse/rat Ki67 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-5698-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal anti-actin alpha-Smooth muscle-Cy3 (mouse)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>085K4889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rat Cytokeratin 19&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal Mouse anti-BrdU</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M0744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>33342</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surgical injury to the mouse pancreas through ligation of the pancreatic duct as a model for endocrine and exocrine reprogramming and proliferation

התרחבות של תאים בטא בלבלב in vivo או vivo לשעבר, או דור של תאי הבטא בבידול מתאי גזע עובריים או מבוגר, יכולה לספק מקורות להרחבה חדשים של תאי הבטא כדי להקל על המחסור בתורמי השתלת איון אדם כטיפול בסוכרת. למרות התקדמות שחלה באחרונה נעשתה לקראת מטרה זו, מנגנונים המווסתים את ההרחבה בטא תא והתמיינות של תאי גזע מ/ אב יישארו להתאפיין. כאן, אנו מתארים פרוטוקול למודל פציעה בלבלב העכבר הבוגר שיכול לתפקד ככלי ללימוד מנגנונים של שיפוץ רקמות והתפשטות תאי הבטא ובידול. קשירת צינור חלקית (PDL) היא פגיעה הנגרמת בניסוי של לבלב המכרסמים הכרוך בקשירה כירורגית של צינור הלבלב הראשי וכתוצאה מכך חסימה של ניקוז של מוצרים אקסוקרינית מהאזור הזנב של הלבלב. הנזקים הנגרמים גורם ניוון acinar, infilt תא החיסוןמנה ושיפוץ רקמות קשה. יש לנו שדווחו בעבר ההפעלה של Neurogenin (NGN) 3 לבטא בתאים כמו אב-אנדוגני ועלייה בהתפשטות תאים בטא לאחר PDL. לכן, PDL מספק בסיס ללמוד אותות מעורבים בדינמיקה של תאי הבטא ואת המאפיינים של אב האנדוקרינית בלבלב מבוגר. מאז, הוא עדיין נשאר במידה רבה לא ברור, שגורמים ומסלולים לתרום לNeoGenesis תאי הבטא ושגשוג בPDL, פרוטוקול סטנדרטי לPDL יאפשר להשוואה בכל מעבדות.

PDL induces acinar atrophy and inflammation but does not affect bodyweight and glycemia
In 8 week old male BALB/c mice, the duct draining the exocrine enzymes from the tail of the pancreas is ligated while the organ&#8217;s head, located adjacent to the stomach and duodenum, remains unaffected. Age, sex and weight-matched male BALB/c mice undergo sham surgery recapitulating all steps of partial duct ligation surgery, except the ligation of the pancreatic duct. Pancreas tissue ...

Watch this Scientific Journal Video about Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation at JoVE.co

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation.

פגיעה כירורגית ללבלב העכבר באמצעות קשירת של צינור הלבלב כמודל להאנדוקרינית ואקסוקרינית תכנות מחדש והפצה

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

surgical-injury-to-mouse-pancreas-through-ligation-pancreatic-duct-as

Research

JoVE Journal

Medicine

16.0K Views.  Vrije Universiteit Brussel. This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation. 

Video: Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Pancreatic Duct Infusion: An Effective and Selective Method of Drug and Viral Delivery

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, pancreatitis, and pancreatic cancer. All three of these diseases mark active areas of study, not only to develop immediate therapy, but also to better understand their pathophysiology. There are few tools to further these areas of study. Pancreatic duct infusion is an important technique that can allow for lineage tracing, gene introduction, and cell line-specific targeting. The technique requires the intricate dissection of the second portion of the duodenum and ampulla, followed by the occlusion of the bile duct and the cannulation of the pancreatic duct. Although the technique is technically challenging at first, the applications are myriad. Ambiguity in the specifics of the procedure between groups highlighted the need for a standard protocol. This work describes the expression of a green fluorescent protein (GFP) within the pancreas after the pancreatic duct infusion of a viral vector expressing GFP versus a sham surgery. The infusion and therefore expression is specific to the pancreas, without expression present in any other tissue type.

Pancreatic duct infusion is an important technique that can allow for lineage tracing, gene introduction, and cell line-specific targeting. A pancreatic duct infusion technique for drug and viral delivery to pancreatic cells is presented here.

עירוי צינור הלבלב: שיטה יעילה וסלקטיבית של סמים ומשלוח ויראלי

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

דיסקציה של הלבלב העכבר עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Robotic Lateral Pancreaticojejunostomy for Chronic Pancreatitis

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The recent rise of robotic and laparoscopic pancreatic surgery has found benefits such as reduced time to functional recovery. Few studies have reported on the feasibility, technique and outcome of robotic LPJ, especially including transection of the gastroduodenal artery. The present study describes the main steps for robotic LPJ in a patient with painful chronic pancreatitis with a dilated main pancreatic duct. The patient underwent robotic LPJ. The LPJ anastomosis is performed using a running suture technique in a longitudinal side-to-side manner. Routinely, the gastroduodenal artery is transected to drain the entire length of the main pancreatic duct. The patient is in French position; 7 trocars are placed (4 robotic, 2 laparoscopic assistants, 1 liver-retractor). After docking of the robot system, the omental bursa is opened, and the right gastroepiploic artery and vein are ligated at their base at the lower border of the pancreas. Intraoperative ultrasonography is performed in order to determine trajectory of the dilated main pancreatic duct which is opened for its entire length after the gastroduodenal artery has been suture ligated both cranially and caudally from the main pancreatic duct. A Roux limb is created, and a latero-lateral PJ is fashioned using several 3-0 barbed sutures. A stapled jejuno-jejunostomy is created at sufficient distance from the pancreatic anastomosis, aided by a 50 cm suture. The described technique for robotic LPJ is a complex but feasible operation for patients with treatment refractory CP and a dilated main pancreatic duct. Due to its complexity, implementation in high volume centers with extensive experience with CP surgery may improve outcomes.

Robotic lateral pancreaticojejunostomy (RLPJ) may be used in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis and a dilated main pancreatic duct. We describe a standardized and reproducible technique for RLPJ, which includes transection of the gastroduodenal artery.

Pancreaticojejunostomy לרוחב רובוטיים עבור דלקת לבלב כרונית

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological resection of left-sided pancreatic cancer. Several surgical techniques have been described in recent years, but few were specifically designed for minimally invasive approaches. This study describes and demonstrates a standardized and reproducible technique for an adequate oncological resection of pancreatic cancer: laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP).
A 61-year-old woman presented with an incidental finding of a 3 cm mass in the left pancreas suspect for malignancy. Imaging did not reveal distant metastases, central vascular involvement, or morbid obesity, hence the patient was suitable for LRLP. This study describes the main steps of LRLP for pancreatic cancer. First, the lesser sac is opened by transecting the gastrocolic ligament. The splenic flexure of the colon is mobilized and the inferior border of the pancreas including Gerota&#39;s fascia is dissected down to the inferior border of the spleen. The pancreas is tunneled and hung, including Gerota&#8217;s fascia with a vessel loop. At the pancreatic neck, a tunnel is created between the pancreas and the portal vein, likewise a vessel loop is passed. The pancreas is then transected using the graded compression technique with an endostapler. Both the splenic vein and artery are transected before completing the resection. The entire specimen is extracted in a retrieval bag via a small Pfannenstiel incision.
Duration of the surgery was 210 min with 250 mL blood loss. Pathology revealed a R0-resection (&#62;1 mm) of a well-to-moderately differentiated adenocarcinoma originating from an intraductal papillary mucinous neoplasm. A total of 15 tumor-negative lymph nodes were resected. This is a detailed description of LRLP for left-sided pancreatic cancer as is currently being used within the international, multicenter randomized DIPLOMA (Distal Pancreatectomy Minimally Invasive or Open for PDAC) trial.

Oncologically safe left pancreatectomy requires radical resection (R0), Gerota&#8217;s (perirenal) fascia resection, and adequate lymph node dissection. This study describes the technical details of laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP), used in the first international multicenter randomized trial comparing minimally invasive with open left pancreatectomy for pancreatic cancer, the DIPLOMA trial.

לפרוסקופ שמאל רדיקלי ריתה לסרטן הלבלב: אסטרטגיה כירורגית טכניקה וידאו

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

מודל השתלת ריאה של חולדה של איסכמיה חמה / פגיעה ברפרפוזיה: אופטימיזציות לשיפור התוצאות

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging study, with an abdominal imaging window, enabled visualization of the cellular dynamics in abdominal organs in vivo. However, due to the soft sheet-like architecture of the mouse pancreas that can be easily influenced by physiologic movement (e.g., peristalsis and respiration), it was difficult to perform stabilized longitudinal in vivo imaging over several weeks at the cellular level to identify, track, and quantify islets or cancer cells in the mouse pancreas. Herein, we describe a method for implanting a novel supporting base, an integrated pancreatic intravital imaging window, that can spatially separate the pancreas from the bowel for longitudinal time-lapse intravital imaging of the pancreas microstructure. Longitudinal in vivo imaging with the imaging window enables stable visualization, allowing for the tracking of islets over a period of 3 weeks and high-resolution three-dimensional imaging of the microstructure, as evidenced here in an orthotopic pancreatic cancer model. With our method, further intravital imaging studies can elucidate the pathophysiology of various diseases involving the pancreas at the cellular level.

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

In vivo high-resolution imaging of the pancreas was facilitated with the pancreatic intravital imaging window.

הדמיה מיוצבת של אורך ב-Vivo ברמה התאית של הלבלב במודל מורין עם חלון הדמיה תוך-וינטלית של הלבלב

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a lack of effective treatments in the current clinical practice. With the easy accessibility of transgenic and knockout strains and their small size, which allows minimal doses of drugs required for in vivo evaluation, a well-established experimental model in mice is preferred for AP research. Moreover, SAP induced through sodium taurocholate (TC) is currently one of the most widely used and best characterized models. This model has been investigated for novel therapies and possible molecular events during the process of AP. Here, we present the generation of an AP mouse model using sodium taurocholate and a simple homemade microsyringe. Moreover, we also provide the methodology for the subsequent histology and serological testing.

A mouse model of severe acute pancreatitis is described herein. The procedure presented here is very rapid, simple, and accessible, thereby potentially allowing the study of the molecular mechanisms and different therapeutic interventions in acute pancreatitis in a convenient way.

הקמת מודל דלקת לבלב חריפה חמורה עכבר באמצעות הזרקה מדרדרת של נתרן Taurocholate לתוך צינור ביליופנקראטי

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a ...

Partial Sciatic Nerve Ligation: A Mouse Model of Chronic Neuropathic Pain to Study the Antinociceptive Effect of Novel Therapies

Management of chronic pain remains challenging to this day, and current treatments are associated with adverse effects, including tolerance and addiction. Chronic neuropathic pain results from lesions or diseases in the somatosensory system. To investigate potential therapies with reduced side effects, animal pain models are the gold standard in preclinical studies. Therefore, well-characterized and well-described models are crucial for the development and validation of innovative therapies. 
Partial ligation of the sciatic nerve (pSNL) is a procedure that induces chronic neuropathic pain in mice, characterized by mechanical and thermal hypersensitivity, ongoing pain, and changes in limb temperature, making this model a great fit to study neuropathic pain preclinically. pSNL is an advantageous model to study neuropathic pain as it reproduces many symptoms observed in humans with neuropathic pain. Furthermore, the surgical procedure is relatively fast and straightforward to perform. Unilateral pSNL of one limb allows for comparison between the ipsilateral and contralateral paws, as well as evaluation of central sensitization. 
To induce chronic neuropathic hypersensitivity, a 9-0 non-absorbable nylon thread is used to ligate the dorsal third of the sciatic nerve. This article describes the surgical procedure and characterizes the development of chronic neuropathic pain through multiple commonly used behavioral tests. As a plethora of innovative therapies are now being investigated to treat chronic pain, this article provides crucial concepts for standardization and an accurate description of surgeries required to induce neuropathic pain.

Partial sciatic nerve ligation induces long-lasting chronic neuropathic pain, characterized by exaggerated responses to thermal and mechanical stimuli. This mouse model of neuropathic pain is commonly used to study innovative therapies for pain management. This article describes in detail the surgical procedure to improve standardization and reproducibility.

קשירת עצבים סיאטית חלקית: מודל עכברי של כאב נוירופתי כרוני לחקר ההשפעה האנטינוסיצפטיבית של טיפולים חדשניים

Management of chronic pain remains challenging to this day, and current treatments are associated with adverse effects, including tolerance and addiction. ...