وأيد هذا العمل من قبل العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث من كندا ديسكفري منحة RGPIN36481-08 لويليام G. بندينا.

1. إعداد الكائنات التجريبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار 10 L4 نظمت الديدان الخيطية لكل سلالة 24 ساعة قبل بدء الفحص للتأكد من أن الكائنات الحية هي الشباب عند اختبارها. لكل اختبار متحولة أو نيماتودا اختبار، واختيار 10 L4s (10 للسيطرة و 10 للمقايسة). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الكائنات الحية L4 باستخدام أساليب قياسية 26 ، 27 لمدة 24 ساعة على لوحات أجار القياسية المصنف مع OP50 الإشريكية القولونية . إذا فقدت الكائنات الحية خلال خطوات غسل لاحقة، تعويض عن طريق زيادة حجم العينة بدءا ( أي اختيار 20 الديدان بدلا من 10). ملاحظة: السلوك هو النمط الظاهري المتغير الفطري. تنفيذ الطريقة في ثلاث نسخ لكل سلالة على ثلاثة أيام منفصلة. وتشمل سلالات تحكم إضافية وشروط سلالات جديدة، كما هو مبين في قسم المناقشة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مباشرة قبل الفحص، ونقل أورغا التجريبيةنيسمز إلى لوحة أجار مع عدم وجود البكتيريا والسماح للديدان الخيطية على التحرك بحرية لمدة 1 دقيقة لإزالة البكتيريا الزائدة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا واجهت الكائنات التجريبية ظروف التلوث خلال 24 ساعة قبل الفحص، تجاهل لهم. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 1 مل من M9 على لوحة خالية من البكتيريا لغسل الديدان إلى أنبوب ميكروسنتريفوج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 3000 x ج لمدة 1 دقيقة. يجب أن تشكل الديدان بيليه في الجزء السفلي من الأنبوب. نضح M9 الحل دون تعطيل بيليه دودة. إضافة 1 مل من M9 إلى بيليه دودة، عكس أنبوب لخلط الديدان مع الحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات 1.4 ثلاث مرات أخرى. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم نقل البكتيريا الزائدة في البداية مع الديدان، كرر ما مجموعه 5 مرات. لا ينبغي نقل البكتيريا إلى لوحات سباق الغذاء النحاس. إذا تم نقل الطعام إلى لوحة الفحص، وسوف تتداخل مع جمع البيانات دقيقة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل النهائي، نضح طاف حتى 10081؛ L من M9 وبيليه دودة يبقى. الحذر: السلوكيات المجاعة ذات الصلة تصبح واضحة بعد 30 دقيقة. وبالتالي ينبغي نقل الديدان فورا من الحل بمجرد الانتهاء من خطوات الغسيل. </li></ol> 2. إعداد لوحات الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد القياسية لوحات نغم أجار قبل يومين من الفحص. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم الاحتفاظ لوحات في بيئة رطبة، وجعل لوحات أجار 3 أيام قبل الفحص. بدلا من ذلك، إزالة غطاء لوحة لمدة 3-6 ح لضمان الجفاف السليم (إذا كان في بيئة معقمة). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع علامة دائمة سميكة، وجعل خط على الجانب السفلي من لوحة على طول الحافة الخارجية وآخر لتشكيل حاجز منتصف خط ( الشكل 1 ). يجب أن يكون حاجز خط الوسط متساوي البعد عن كل حافة اللوحة. استخدام مسطرة لضمان قياسات دقيقة. هذه الخطوط سوف تكون بمثابة دليل عند نقل البكتيريا ومحلول النحاس. بشرطيتم نقل E. القولونية قبل حل النحاس، وهذه الخطوط بمثابة مؤشرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة البذور مع 50 ميكرولتر من OP50 E. القولونية على جانب واحد فقط من حاجز النحاس لإنشاء حديقة موحدة ( الشكل 2 ). وينبغي أن يبقى تركيز البكتيريا متسقة عبر المقايسات. ومع ذلك، لوحظ القليل من التباين استجابة للفروق الخفيفة في التركيز. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام خطوط ملحوظ على الجانب السفلي من لوحة لضمان البكتيريا لا تتلامس مع حل النحاس. شريطة أن حل النحاس خطوط حافة لوحة ويشكل حاجز منتصف الخط، ونقل البكتيريا بحيث لن يكون حل النحاس في اتصال مع مصدر الغذاء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علامة مجموعة ثانية من لوحات ونقل أي OP50 E. القولونية لهم ( الشكل 2 ). هذه اللوحات سوف تعمل على تقييم السيطرة السلبية. وينبغي أن يكون لهذه اللوحات أيضاووضع علامة على نصف لوحة للدلالة على الأصل نقل الأولي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للبكتيريا لتجف ثم احتضان لوحات عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها. تأكد من أن البقع البكتيرية لا تنزعج عند نقلها إلى حاضنة أو غرفة 37 درجة مئوية. الاضطراب المفرط يمكن أن يغير موقع أو شكل التصحيح الغذائي. </li></ol> 3. فحص الكيميائي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الطازجة 0.5 M النحاس (إي) محلول كبريتات قبل الفحص وقت البدء. شريطة أن يتم استخدام 125 ميكرولتر من الحل لكل لوحة، توسيع نطاق هذا الحجم يعتمد على عدد لوحات الفحص المستخدمة (على سبيل المثال 5 لوحات الفحص، 625 ميكرولتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 100 ميكرولتر من النحاس (إي) محلول كبريتات على حافة أجار لإنشاء حاجز النحاس الخارجي. وينبغي أن يكون الجانب السفلي ملحوظ من لوحة بمثابة دليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 25 ميكرولتر من محلول النحاس (إي) كبريتات لإنشاء حاجز خط الوسط. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن النحاس (إي) محلول كبريتات القيام بهإس لا تتلامس مع التصحيح البكتيري. استخدام تقنية رصدت كما تسليط الضوء قد تؤثر على الحركة بسبب إندنتاتيونس / الخدوش على أجار. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح حل النحاس لتجف على لوحة. الفترة الزمنية يمكن أن تختلف اعتمادا على لوحة وظروف المختبر. تحقق بصريا لجفاف كل 5 دقائق بعد نقل. ملاحظة: الحل النحاس يعرض لون زرقاء ويمكن التعرف عليها بسهولة. استخدام الأنسجة المختبرية ل داب طفيفة الحل بالقرب من حافة لوحة لتمييز جفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 20 ميكرولتر من بيليه دودة من الجزء السفلي من الأنبوب على نصف خالية من البكتيريا لوحة الفحص. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن 10 الديدان يتم نقلها إلى لوحة الفحص. إذا تم تضمين الديدان الزائدة عن طريق الخطأ، وإزالتها عن طريق التقاط مع زيت الهالوكربون لضمان عدم إضافة أي بكتيريا إلى لوحة. يجب أن يكون كل فحص عدد ثابت من الديدان الخيطية خلال الفحص. ملاحظة: إذا الديدان قليلة جدا هي ترانسفخلال الفحوص، فإن زيادة حجم العينة الأولي سوف يخفف من الخسائر المحتملة أثناء الغسل والتحويلات. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة M9 الزائد من لوحة مع الأنسجة المختبرية. M9 يجب أن لا تتلامس مع محلول النحاس (إي) كبريتات. تنبيه: تأكد من أن الديدان والسطح أجار لا تتأثر أثناء تنفيذ هذه الخطوة. إذا استخدمت قاسية جدا، يمكن أن الأنسجة المختبرية تخلق المسافة البادئة إلى سطح أجار لوحة ويمكن إزالة الديدان. يجب التخلص من الديدان عن طريق الخطأ عن طريق كيمويب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد تم إزالة الحل M9 وجميع الديدان قد بدأت أنماط الحركية غير سائلة، بدء ساعة توقيت الفحص. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على النحو الأمثل، وإزالة الحل M9 في غضون دقيقة. المعلمة الأساسية هي تحديد الحركة الجيبية. الديدان تتحرك بشكل مختلف، على سبيل المثال سحق بدلا من جيبية، عندما تكون في السائل. بدء فحص مشاهدة الفحص مرة واحدة كل من الجهاز التجريبيإيسمس توقف عن سحق. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص لوحات فحص كل 30 دقيقة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحات فحص مع بقع البكتيرية، يسجل إيجابيا الكائنات إذا وصلت إلى التصحيح الغذاء على مدى فترة 4 ساعات. لوحات التحكم السلبية، يسجل إيجابيا الكائنات إذا كانوا قد عبروا الحاجز. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).</li><li>Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensation+in+C.+elegans+(October+25,+2006).">Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 70 (3), 817-821 (1973).</li><li>Ramot, D., MacInnis, B. L., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+temperature-sensing+by+a+single+thermosensory+neuron+in+C.+elegans.">Bidirectional temperature-sensing by a single thermosensory neuron in C. elegans.</a> Nat. Neurosci. 11 (8), 908-915 (2008).</li><li>Russell, J., Vidal-Gadea, A. G., Makay, A., Lanam, C., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humidity+sensation+requires+both+mechanosensory+and+thermosensory+pathways+in+Caenorhabditis+elegans.">Humidity sensation requires both mechanosensory and thermosensory pathways in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (22), 8269-8274 (2014).</li><li>van Campen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+modulation+disorders+in+childhood+epilepsy.">Sensory modulation disorders in childhood epilepsy.</a> J. Neurodev. Disord. 7 (34), (2015).</li><li>Festa, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neocortical+disconnectivity+disrupts+sensory+integration+in+Alzheimer's+disease.">Neocortical disconnectivity disrupts sensory integration in Alzheimer's disease.</a> Neuropsych. 19 (6), 728-738 (2005).</li><li>Boecker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+processing+in+Parkinson's+and+Huntington's+disease:+investigations+with+3D+H(2)(15)O-PET.">Sensory processing in Parkinson's and Huntington's disease: investigations with 3D H(2)(15)O-PET.</a> Brain. 122 (9), 1651-1665 (1999).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+disease+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human disease in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol. J. 5 (12), 1261-1276 (2010).</li><li>O'Reilly, L. P., Luke, C. J., Perlmutter, D. H., Silverman, G. A., Pak, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+in+high-throughput+drug+discovery.">C. elegans in high-throughput drug discovery.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. , 247-253 (2014).</li><li>Thompson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+million+mutation+project:+a+new+approach+to+genetics+in+Caenorhabditis+elegans.">The million mutation project: a new approach to genetics in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Res. 23 (10), 1749-1762 (2013).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Maricq, A. V., Peckol, E., Driscoll, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensory+signaling+in+C.+elegans+mediated+by+the+GLR-1+glutamate+receptor.">Mechanosensory signaling in C. elegans mediated by the GLR-1 glutamate receptor.</a> Nat. 378 (6552), 78-81 (1995).</li><li>Chalasani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+a+circuit+for+olfactory+behaviour+in+Caenorhabditis+elegans.">Dissecting a circuit for olfactory behaviour in Caenorhabditis elegans.</a> Nat. 450 (7166), 63-70 (2007).</li><li>Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+responds+to+chemical+repellents+by+integrating+sensory+inputs+from+the+head+and+the+tail.">C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail.</a> Curr. Biol. 12 (9), 730-734 (2002).</li><li>Hart, A. C., Kass, J., Shapiro, J. E., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+signaling+pathways+mediate+touch+and+osmosensory+responses+in+a+polymodal+sensory+neuron.">Distinct signaling pathways mediate touch and osmosensory responses in a polymodal sensory neuron.</a> J. Neurosci. 19 (6), 1952-1958 (1999).</li><li>Ishihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEN-1,+a+secretory+protein+with+an+LDL+receptor+motif,+regulates+sensory+integration+and+learning+in+Caenorhabditis+elegans.">HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory integration and learning in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 109 (5), 639-649 (2002).</li><li>Saeki, S., Yamamoto, M., Iino, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+chemotaxis+revealed+by+paired+presentation+of+a+chemoattractant+and+starvation+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Plasticity of chemotaxis revealed by paired presentation of a chemoattractant and starvation in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Exp. Biol. 204 (10), 1757-1764 (2001).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Campbell, J. C., Polan-Couillard, L. F., Chin-Sang, I. D., Bendena, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NPR-9,+a+Galanin-Like+G-Protein+Coupled+Receptor,+and+GLR-1+Regulate+Interneuronal+Circuitry+Underlying+Multisensory+Integration+of+Environmental+Cues+in+Caenorhabdities+elegans.">NPR-9, a Galanin-Like G-Protein Coupled Receptor, and GLR-1 Regulate Interneuronal Circuitry Underlying Multisensory Integration of Environmental Cues in Caenorhabdities elegans.</a> PLoS Genet. 12 (5), (2016).</li><li>Harris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+distinct+amine+receptors+operating+at+different+levels+within+the+locomotory+circuit+are+each+essential+for+the+serotonergic+modulation+of+chemosensation+in+Caenorhabditis+elegans.">Three distinct amine receptors operating at different levels within the locomotory circuit are each essential for the serotonergic modulation of chemosensation in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 29 (5), 1446-1456 (2009).</li><li>Harris, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+serotonergic+food+signal+stimulating+sensory-mediated+aversive+behavior+in+C.+elegans.">Dissecting the serotonergic food signal stimulating sensory-mediated aversive behavior in C. elegans.</a> PLoS One. 6 (7), (2011).</li><li>Mitchell, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differential+role+for+neuropeptides+in+acute+and+chronic+adaptive+responses+to+alcohol:+behavioural+and+genetic+analysis+in+Caenorhabditis+elegans.">A differential role for neuropeptides in acute and chronic adaptive responses to alcohol: behavioural and genetic analysis in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 5 (5), (2010).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+modulate+olfactory+acuity,+discrimination,+and+memory+in+Caenorhabditis+elegans.">Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans.</a> Learn Mem. 4 (2), 179-191 (1997).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genet. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+(July+3,+2006).">Behavior (July 3, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Sambongi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+of+cadmium+and+copper+ions+by+externally+exposed+ADL,+ASE,+ASH+neurons+elicits+avoidance+response+in+Caenorhabditis+elegans.">Sensing of cadmium and copper ions by externally exposed ADL, ASE, ASH neurons elicits avoidance response in Caenorhabditis elegans.</a> NeuroReport. 10 (4), 753-757 (1999).</li><li>Gray, J. M., Hill, J. J., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+circuit+for+navigation+in+Caenorhabditis+elegans.">A circuit for navigation in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 102 (9), 3184-3191 (2004).</li><li>Rechavi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Starvation-Induced+Transgenerational+Inheritance+of+Small+RNAs+in+C.+elegans.">Starvation-Induced Transgenerational Inheritance of Small RNAs in C. elegans.</a> Cell. 158 (2), 277-287 (2014).</li><li>Gloria-Soria, A., Azevedo, R. B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=npr-1+Regulates+Foraging+and+Dispersal+Strategies+in+Caenorhabditis+elegans.">npr-1 Regulates Foraging and Dispersal Strategies in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 18 (21), 1694-1699 (2008).</li><li>Beron, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burrowing+behavior+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+A+new+assay+for+the+study+of+neuromuscular+disorders.">The burrowing behavior of the nematode Caenorhabditis elegans: A new assay for the study of neuromuscular disorders.</a> Genes Brain Behav. 14 (4), 357-368 (2015).</li><li>Wang, S. J., Wang, Z. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Track-A-Worm,+An+Open-Source+System+for+Quantitative+Assessment+of+C.+elegans+Locomotory+and+Bending+Behavior.">Track-A-Worm, An Open-Source System for Quantitative Assessment of C. elegans Locomotory and Bending Behavior.</a> PLoS One. 8 (7), (2013).</li></ol>

ليس لدينا ما نكشف عنه.

هذا التصميم مقايسة تعديل سباق سباق الغذاء 24 لتشمل حل النحاس لخلق حاجز خط الوسط نافيريزيف وحول حافة لوحة لمنع فقدان الديدان الخيطية. يتم اختبار الكائنات الحية لقدرتها على عبور حاجز منعش والوصول إلى التصحيح الغذاء على مدى فترة 4 ساعات. في سياق نبر-9 (غف)</em...

وقد استخدمت كاينورهابديتيس ايليجانس كنموذج لدراسة علم الأعصاب لعقود بسبب السهولة النسبية في تحليل الدوائر من الجهاز العصبي تتألف فقط من 302 الخلايا العصبية 1 . شريطة أن يكون الكائن يعتمد على الاستجابة للإشارات البيئية، وكثير من الجهاز العصبي مكرس لتنظيم دمج الإشارات البيئية 2 . على الرغم من بساطة الجهاز العصبي، C. ايليجانس يمكن الكشف عن والرد على إشارات بيئية متنوعة بما في ذلك طارد 3 ، وجذابات 4 ، ودرجة الحرارة 5 ، وحتى الرطوبة 6 . وقد تم ربط الفشل في دمج صحيح إشارات بيئية لعدد من الاضطرابات السلوكية والشروط الاعصاب في النظم نموذج الثدييات 7- 9. مع مجموعة من نماذج الأمراض العصبية المتاحة<html> 10 في C. ايليجانس وتطوير شاشات الأدوية النيماتودا 11 ، وقد أثبت هذا الكائن ليكون نظاما مفيدا لدراسة علم الأعصاب. وبالنظر إلى توافر نيماتودا خريطة الاتصال 1 والطفرات إلى كل جين تقريبا في الجينوم الديدان الخيطية 12 ، فهمنا للجهاز العصبي النيماتودا، وبتوسيع منطقتنا، ويقتصر جزئيا من خلال تصميم المقايسات المناسبة خلاق. وقد تم تطوير عدد من فحوصات الكيميائي على مدى السنوات ال 40 الماضية لتقييم استجابة الديدان الخيطية إلى المحفزات عديمة التنوع 3 ، 4 ، 13 ، 14 ، 15 . وشملت التجارب الأولية إدخال التحفيز البيئي الحاد في حين دودة واحدة تجول على لوحة أجار= &quot;كريف&quot;&gt; 3 ، 14 ، 16 . وسجلت تغييرات فورية على الاستجابات الحركية. على سبيل المثال، يمكن تطبيق الأوكتانول الرائحة متقلبة إلى الشعر وفاحت أمام أنف الخيطية لتحفيز بدء الحركة إلى الوراء في نوع الديدان البرية 17. كما تم تطوير مقايسات أكثر تعقيدا لدمج متغيرات متعددة كوسيلة لتقييم الخيار السلوكي 18 . الاختلاف من هذا الفحص ينطوي على استخدام حل النحاس لخلق حاجز خط الوسط نافيريزيف 4 . وقد وضعت جاذبة، وهي الدياستيل، على جانب واحد من الحاجز الكيميائي مع نقل الديدان بعيدا عن مصدر الدياستيل. وعبرت الديدان المعيبة لاستجابات النحاسية النحاسية على الفور الحاجز للوصول إلى الدياستيل، في حين أن الديدان ذات النوع البري قد صدت في البداية بواسطة الحاجز. وسجلت الردود عندما اقتربت الديدان أولا حاجز النحاسدون ملاحظات طويلة الأجل. عندما يتم تقييم الديدان بعد خضوعها لظروف المجاعة، تنخفض حساسيتها للمؤثرات البيئية 19 . عندما يطفو الأوكتانول الكيميائي الأستراني أمام الأنف الديدان الخيطية، الكائنات الحية البرية تحفز الحركة إلى الوراء في غضون 3-5 سنوات عندما على الغذاء. بعد إزالة هذه الكائنات من الطعام لمدة 10 دقيقة، فإنها تظهر استجابة متأخرة من 8-10 ثانية 20 . وهكذا، مع زيادة المجاعة، تظهر الديدان الخيطية استجابة ناقصة منخفضة للإشارات البيئية الضارة حيث أن البحث عن الغذاء يصبح أكثر أهمية للبقاء على قيد الحياة. على العكس من ذلك، الديدان الخيطية التي تزيد من التعبير عن مستقبلات نيوروببتيد 9 ( نبر-9) ، لا تستجيب للأوكتانول على أو خارج الطعام وتعرض عدم القدرة على الاستجابة لعدد من المحفزات تافهة 21 . هذه الكائنات نبر-9 (غف) أيضا لا تعدل تردد عكسها في وجود الطعام، ولكن يمكنعكس ردا على التحفيز لمسة قاسية تشير إلى أنها قادرة على التحرك إلى الوراء 21 . كما قمنا بتقييم نبر-9 (لف) المسوخ نظرا لأنها تظهر بشكل غير طبيعي انخفاض تردد عكس من الطعام بعد يمكن تعديل سلوكهم في وجود الغذاء 21 . وقد ساعدت اقتران الحالة الغذائية للدودة مع إدخال المحفزات الخارجية الحادة في توضيح الآليات التي من خلالها مسار ذات الصلة الغذائية يمكن أن تعدل على نطاق واسع مسارات الإشارات الحسية 22 ، 23 . كما تم استخدام الغذاء في بيئة الديدان الخيطية لتقييم ردود الانسحاب من الإيثانول 24 . في هذه التجربة، تم تحضين الديدان في تركيزات مختلفة من الإيثانول ثم وضعت على لوحة أجار مع رقعة من المواد الغذائية المعروفة باسم &quot;مقايسة سباق الغذاء&quot;. تم وضع التصحيح الغذائي على حافة واحدة من لوحة بينما الديدان الخيطية ثتوضع بعيدا عن مصدر الغذاء. تم تقييم الانسحاب الإيثانول عن طريق قياس مدة الوقت اللازم للديدان للوصول إلى التصحيح من المواد الغذائية. هذا الاختبار القائم على التغذية النفور النحاس يبني على مقايسة سباق الغذاء لدمج المتغيرات البيئية إضافية، وهي الغذاء والنحاس، في حين أن تقييم التغيرات السلوكية مع مرور الوقت. هذا هو التكيف من استخدام بروتوكول شائع في جميع أنحاء C. ايليجانس المجتمع 4 . وقد استخدم هذا البروتوكول لتقييم ردود نافيريزيف والكشف عن الطعام على مدى فترة أربع ساعات 21 . وبما أن سلوك دودة معرض الجوع بعد 30 دقيقة من الحرمان الغذائي 25 ، ونحن أيضا قادرون على تقييم كيف يمكن للتغيرات في الوضع التغذوي أن تؤثر على الاستجابات البيئية. شروط هذا المقياس قياس كيف الكائنات التجريبية تغيير الاستجابة للمؤثرات تافهة مع مرور الوقت، وبالتالي هذا يقيم التغيرات السلوكية كماتقدم الكائنات الحية نحو حالة جائعة (والقياسات المستمرة للمجاعة لفترات طويلة). منذ الحيوانات NPR-9 (GF) لا تغير سلوكهم في الاستجابة للطعام أو العديد من الإشارات مكره، سعينا إلى تحديد ما إذا كانت هذه العجز السلوكية سيستمر في سياق الموت جوعا. في نهاية المطاف، وقد وضعت هذا التصميم مقايسة على وجه التحديد لتقييم المسوخ نبر-9 (غف) ولكن يمكن أن تتكيف كذلك لتوصيف أيضا سلالات الرواية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="689">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:332px;">M9 Solution [3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO4, H2O to 1 litre. Autoclave to sterilize before use.]</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Produced in lab</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:332px;">Cupric Sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C-1297</td>
			<td style="width:167px;">Use water to appropriately suspend to a concentration of 0.5M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay

ولضمان البقاء، يجب أن تكون الكائنات الحية قادرة على تجنب الموائل غير المواتية مع ضمان مصدر غذائي متسق. كاينورهابديتيس إليغانز يغير أنماطها الحركية عند الكشف عن المحفزات البيئية المتنوعة ويمكن تعديل مجموعة من الاستجابات السلوكية استجابة لظروف المجاعة. الديدان الخيطية عادة ما تظهر استجابة أفرسيف انخفاض عند إزالتها من مصدر الغذاء لأكثر من 30 دقيقة. إن مراقبة التغيرات السلوكية استجابة لحالة تغذوية متغيرة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة للآليات التي تنظم الانتقال من حالة تغذى جيدا إلى حالة جوع. لقد طورنا مقايسة تقيس قدرة النيماتودا على عبور حاجز منعكس ( أي النحاس) ثم تصل إلى مصدر غذائي على مدى فترة طويلة من الزمن. ويستند هذا البروتوكول على العمل السابق من خلال دمج متغيرات متعددة في الطريقة التي تسمح لجمع البيانات المستمر مع تحول الكائنات نحو أن حالة جوعا على نحو متزايد. وعلاوة على ذلك، يسمح هذا الفحص زيادة حجم العينة بحيث يمكن تقييم أكبر عدد من الديدان الخيطية في وقت واحد. الكائنات الحية المعيبة من أجل القدرة على كشف أو الاستجابة للنحاس عبور الحاجز الكيميائي على الفور، في حين أن النيماتودا البرية نوع صدت في البداية. كما الديدان نوع البرية جوعا على نحو متزايد، فإنها تبدأ في عبور الحاجز والوصول إلى مصدر الغذاء. قمنا بتصميم هذا الفحص لتقييم متحولة التي هي غير قادرة على الاستجابة إلى الإشارات البيئية المتنوعة، بما في ذلك الإحساس الغذاء أو الكشف عن المواد الكيميائية نافر. عند تقييمها عبر هذا البروتوكول، عبرت الكائنات المعيبة على الفور الحاجز، ولكن أيضا غير قادرة على الكشف عن مصدر الغذاء. ومن ثم، فإن هذه المسوخ تعبر مرارا الحاجز الكيميائي على الرغم من الوصول مؤقتا إلى مصدر غذائي. هذا الاختبار يمكن اختبار مجموعات من الديدان بشكل مباشر لتقييم العيوب المسار المحتملة المتعلقة النفور والمجاعة.

استخدمنا النوع البري (N2)، نبر-9 (tm1652)، وسلالة نفر-9 أوفيركسريسيون، أي نير-9 (غف) (IC836 - نير-9 :: نبر -9؛ سور-5 :: غفب؛ أودر -1 :: رفب)، لتقييم الردود على المجاعة والنفور النحاس. الكائنات الحية البرية قادرة على الكشف والاستجابة للحاجز ...

Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

ا<em&gt; كاينورهابديتيس ايليجانس</em&gt; الوضع الغذائي القائم على النحاس النفور الفحص

هنا، نقدم كاينورهابديتيس ايليجانس مقايسة محددة تهدف إلى تقييم التغيرات في السلوك النفور النحاس والقدرة على تحديد مصدر الغذاء المشترك، كما تقدم الكائن الحي من تغذية جيدة إلى حالة غذائية جوعا.

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

a-caenorhabditis-elegans-nutritional-status-based-copper-aversion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

6.4K Views.  Queen's University.  هنا، نقدم كاينورهابديتيس ايليجانس مقايسة محددة تهدف إلى تقييم التغيرات في السلوك النفور النحاس والقدرة على تحديد مصدر الغذاء المشترك، كما تقدم الكائن الحي من تغذية جيدة إلى حالة غذائية جوعا. 

Video: A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall neural circuit function. Synapse strength critically depends on the abundance of neurotransmitter receptors clustered at synaptic sites on the postsynaptic membrane. Receptor levels are established developmentally, and can be altered by receptor trafficking between surface-localized, subsynaptic, and intracellular pools, representing important mechanisms of synaptic plasticity and neuromodulation. Rigorous methods to quantify synaptically-localized neurotransmitter receptor abundance are essential to study synaptic development and plasticity. Fluorescence microscopy is an optimal approach because it preserves spatial information, distinguishing synaptic from non-synaptic pools, and discriminating among receptor populations localized to different types of synapses. The genetic model organism Caenorhabditis elegans is particularly well suited for these studies due to the small size and relative simplicity of its nervous system, its transparency, and the availability of powerful genetic techniques, allowing examination of native synapses in intact animals.
Here we present a method for quantifying fluorescently-labeled synaptic neurotransmitter receptors in C. elegans. Its key feature is the automated identification and analysis of individual synapses in three dimensions in multi-plane confocal microscope output files, tabulating position, volume, fluorescence intensity, and total fluorescence for each synapse. This approach has two principal advantages over manual analysis of z-plane projections of confocal data. First, because every plane of the confocal data set is included, no data are lost through z-plane projection, typically based on pixel intensity averages or maxima. Second, identification of synapses is automated, but can be inspected by the experimenter as the data analysis proceeds, allowing fast and accurate extraction of data from large numbers of synapses. Hundreds to thousands of synapses per sample can easily be obtained, producing large data sets to maximize statistical power. Considerations for preparing C. elegans for analysis, and performing confocal imaging to minimize variability between animals within treatment groups are also discussed. Although developed to analyze C. elegans postsynaptic receptors, this method is generally useful for any type of synaptically-localized protein, or indeed, any fluorescence signal that is localized to discrete clusters, puncta, or organelles.
The procedure is performed in three steps: 1) preparation of samples, 2) confocal imaging, and 3) image analysis. Steps 1 and 2 are specific to C. elegans, while step 3 is generally applicable to any punctate fluorescence signal in confocal micrographs.

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

The abundance of neurotransmitter receptors clustered at synapses strongly influences synaptic strength. This method quantifies fluorescently-labeled neurotransmitter receptors in three dimensions with single-synapse resolution in C. elegans, allowing hundreds of synapses to be rapidly characterized within a single sample without distortions introduced by z-plane projection.

الآلي الكمي من الإسفار متشابك في<em&gt; C. ايليجانس</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of Alzheimer's disease (AD) and is found in Lewy body dementia, inclusion body myositis and cerebral amyloid angiopathy 1-4. Amylopathies progressively develop with time. For this reason simple organisms with short lifespans may help to elucidate molecular aspects of these conditions. Here, we describe experimental protocols to study A&beta;-mediated neurodegeneration using the worm Caenorhabditis elegans. Thus, we construct transgenic worms by injecting DNA encoding human A&beta;42 into the syncytial gonads of adult hermaphrodites. Transformant lines are stabilized by a mutagenesis-induced integration. Nematodes are age synchronized by collecting and seeding their eggs. The function of neurons expressing A&beta;42 is tested in opportune behavioral assays (chemotaxis assays). Primary neuronal cultures obtained from embryos are used to complement behavioral data and to test the neuroprotective effects of anti-apoptotic compounds.

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

We describe methods to study aspects of amylopathies in the worm C. elegans. We show how to construct worms expressing human A&beta;42 in neurons and how to test their function in behavioral assays. We further show how to obtain primary neuronal cultures that can be used for pharmacological testing.

A<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; النظام النموذجي للدراسات Amylopathy

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C. elegans genome includes potential antipsychotic drug (APD) targets conserved in humans, including genes encoding proteins required for neurotransmitter synthesis and for synaptic structure and function. APD exposure produces developmental delay and/or lethality in nematodes in a concentration-dependent manner. These phenotypes are caused, in part, by APD-induced inhibition of pharyngeal pumping1,2. Thus, the developmental phenotype has a neuromuscular basis, making it useful for pharmacogenetic studies of neuroleptics. Here we demonstrate detailed procedures for testing APD effects on nematode development and pharyngeal pumping. For the developmental assay, synchronized embryos are placed on nematode growth medium (NGM) plates containing APDs, and the stages of developing animals are then scored daily. For the pharyngeal pumping rate assay, staged young adult animals are tested on NGM plates containing APDs. The number of pharyngeal pumps per unit time is recorded, and the pumping rate is calculated. These assays can be used for studying many other types of small molecules or even large molecules.

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Approaches for testing the effects of antipsychotic drugs (APDs) in Caenorhabditis elegans are demonstrated. Assays are described for testing drug effects on development and viability and on pharyngeal pumping rate. These methods are also applicable for pharmacogenetic experiments with drug classes other than APDs.

أساليب لدراسة آليات عمل المضادة للذهان من أدوية في<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure the activity of neurons during various behaviors. To correlate neural activity with behavior, the animal should not be immobilized but should be able to move. Many behavioral changes occur during long time scales and require recording over many hours of behavior. This also makes it necessary to culture the worms in the presence of food. How can worms be cultured and their neural activity imaged over long time scales? Agarose Microchamber Imaging (AMI) was previously developed to culture and observe small larvae and has now been adapted to study all life stages from early L1 until the adult stage of C. elegans. AMI can be performed on various life stages of C. elegans. Long-term calcium imaging is achieved without immobilizing the animals by using short externally triggered exposures combined with an electron multiplying charge-coupled device (EMCCD) camera recording. Zooming out or scanning can scale up this method to image up to 40 worms in parallel. Thus, a method is described to image behavior and neural activity over long time scales in all life stages of C. elegans.

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Imaging behavior and neural activity over long time scales without immobilization of the animal is a prerequisite to understand behavior. Agarose microfluidic chambers imaging (AMI) can be used to image neural activity and behavior for all life stages of Caenorhabditis elegans.

Microchambers الاغاروز لفترة طويلة التصوير الكالسيوم من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

النسخ في والسلوكية الفحص لMechanosensation من MARCM المستندة<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Dissecting the signaling pathways that control the alteration of morphogenic processes during embryonic development requires robust and sensitive metrics. Embryonic elongation of the nematode Caenorhabditis elegans is a late developmental stage consisting of the elongation of the embryo along its longitudinal axis. This developmental stage is controlled by intercellular communication between hypodermal cells and underlying body-wall muscles. These signaling mechanisms control the morphology of hypodermal cells by remodeling the cytoskeleton and the cell-cell junctions. Measurement of embryonic lethality and developmental arrest at larval stages as well as alteration of cytoskeleton and cell-cell adhesion structures in hypodermal and muscle cells are classical phenotypes that have been used for more than 25 years to dissect these signaling pathways. Recent studies required the development of novel metrics specifically targeting either early or late elongation and characterizing morphogenic defects along the antero-posterior axis of the embryo. Here, we provide detailed protocols enabling the accurate measurement of the length and the width of the elongating embryos as well as the length of synchronized larvae. These methods constitute useful tools to identify genes controlling elongation, to assess whether these genes control both early and late phases of this stage and are required evenly along the antero-posterior axis of the embryo.

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Here we detail protocols specifically designed to monitor morphogenic defects that occur during early and late phases of embryonic elongation of the nematode Caenorhabditis elegans. Ultimately, these protocols are designed to identify genes that regulate these phases and to characterize their differential requirements along the antero-posterior axis of the embryo.

رواية مقاييس لوصف الجنينية الاستطالة للنيماتودا<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Dissecting the signaling pathways that control the alteration of morphogenic processes during embryonic development requires robust and sensitive metrics. ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc superoxide dismutase 1 (SOD1). The structural instability of SOD1 and the detection of SOD1-positive inclusions in familial-ALS patients supports a potential causal role for misfolded and/or aggregated SOD1 in ALS pathology. In this study, we describe the development of a cell-based assay designed to quantify the dynamics of SOD1 aggregation in living cells by high content screening approaches. Using lentiviral vectors, we generated stable cell lines expressing wild-type and mutant A4V SOD1 tagged with yellow fluorescent protein and found that both proteins were expressed in the cytosol without any sign of aggregation. Interestingly, only SOD1 A4V stably expressed in HEK-293, but not in U2OS or SH-SY5Y cell lines, formed aggregates upon proteasome inhibitor treatment. We show that it is possible to quantify aggregation based on dose-response analysis of various proteasome inhibitors, and to track aggregate-formation kinetics by time-lapse microscopy. Our approach introduces the possibility of quantifying the effect of ALS mutations on the role of SOD1 in aggregate formation as well as screening for small molecules that prevent SOD1 A4V aggregation.

We describe a method to quantify the aggregation of misfolded proteins. Our protocol details lentiviral induced stable cell line generation, automated confocal imaging, and image analysis of protein aggregates. As an illustrative application, we studied the effect of small molecules in promoting SOD1 aggregation in a time- and dose-dependent manner.

التنمية المقايسة للقياس الكمي المحتوى عالية Sod1 البروتين متحولة تشكيل التجميعية في الخلايا الحية

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized animals. Highly sensitive, genetically encoded fluorescent reporters of Ca2+ have revolutionized the recording of cell and synaptic activity using non-invasive optical approaches in behaving animals. When combined with genetic and optogenetic techniques, the molecular mechanisms that modulate cell and circuit activity during different behavior states can be identified.
Here we describe methods for ratiometric Ca2+ imaging of single neurons in freely behaving Caenorhabditis elegans worms. We demonstrate a simple mounting technique that gently overlays worms growing on a standard Nematode Growth Media (NGM) agar block with a glass coverslip, permitting animals to be recorded at high-resolution during unrestricted movement and behavior. With this technique, we use the sensitive Ca2+ reporter GCaMP5 to record changes in intracellular Ca2+ in the serotonergic Hermaphrodite Specific Neurons (HSNs) as they drive egg-laying behavior. By co-expressing mCherry, a Ca2+-insensitive fluorescent protein, we can track the position of the HSN within ~ 1 &#181;m and correct for fluctuations in fluorescence caused by changes in focus or movement. Simultaneous, infrared brightfield imaging allows for behavior recording and animal tracking using a motorized stage. By integrating these microscopic techniques and data streams, we can record Ca2+ activity in the C. elegans egg-laying circuit as it progresses between inactive and active behavior states over tens of minutes.

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

This protocol describes the use of genetically encoded Ca2+ reporters to record changes in neural activity in behaving Caenorhabditis elegans worms. &#8195;

تصوير راتيوميتريك الكالسيوم من الخلايا العصبية الفردية في التصرف ايليجانس كاينورهابديتيس

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized ...

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Dendritic spines are specialized sites of synaptic innervation modulated by activity and serve as substrates for learning and memory. Recently, dendritic spines have been described for DD GABAergic neurons as the input sites from presynaptic cholinergic neurons in the motor circuit of Caenorhabditis elegans. This synaptic circuit can now serve as a powerful new in vivo model of spine morphogenesis and function that exploits the facile genetics and ready accessibility of C. elegans to live-cell imaging. 
This protocol describes experimental strategies for assessing DD spine structure and function. In this approach, a super-resolution imaging strategy is used to visualize the intricate shapes of actin-rich dendritic spines. To evaluate the DD spine function, the light-activated opsin, Chrimson, stimulates the presynaptic cholinergic neurons, and the calcium indicator, GCaMP, reports the evoked calcium transients in postsynaptic DD spines. Together, these methods comprise powerful approaches for identifying genetic determinants of dendritic spines in C. elegans that could also direct spine morphogenesis and function in the brain.

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Dendritic spines are important cellular features of the nervous system. Here live imaging methods are described for assessing the structure and function of dendritic spines in C. elegans.&#160;These approaches support the development of mutant screens for genes that define dendritic spine shape or function.

تصوير العمود الفقري التغصني في Caenorhabditis elegans

Dendritic spines are specialized sites of synaptic innervation modulated by activity and serve as substrates for learning and memory. Recently, dendritic ...