עבודה זו נתמכה על ידי מדעי הטבע והנדסה מועצת המחקר של קנדה גילוי מענק RGPIN36481-08 כדי ויליאם ג &#39;בנדנה.

1. הכנת אורגניזמים ניסיוניים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר 10 L4 מבוימות נמטודות לכל זן 24 שעות לפני תחילת assay כדי להבטיח כי אורגניזמים הם צעירים כאשר נבדק. עבור כל נמטודות מוטציה או שליטה נבדק, לבחור 10 L4s (10 עבור שליטה 10 עבור assay). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחזק L4 אורגניזמים בשיטות סטנדרטיות 26 , 27 במשך 24 שעות על לוחות אגר סטנדרטי seeded עם OP50 Escherichia coli . אם אורגניזמים אבדו במהלך הצעדים הבאים לשטוף, לפצות על ידי הגדלת גודל המדגם החל ( כלומר לבחור 20 תולעים במקום 10). הערה: התנהגות היא פנוטיפ משתנה באופן פנימי. בצע את השיטה בשלושה עותקים עבור כל זן על שלושה ימים נפרדים. כלול זנים נוספים שליטה ותנאים עבור זנים הרומן, כפי שמוצג בסעיף הדיון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לפני assay, העברת אורגה ניסיוניNisms על צלחת אגר ללא חיידקים ולאפשר נמטודות לנוע בחופשיות במשך 1 דקות כדי להסיר חיידקים עודפים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אורגניזמים ניסיוני חווה תנאי זיהום במהלך 24 שעות לפני assay, להשליך אותם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 1 מ&quot;ל של M9 על צלחת ללא חיידקים לשטוף תולעים לתוך צינור microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב XG 3000 במשך 1 דקות. תולעים צריך ליצור גלולה בחלק התחתון של הצינור. לשאוב M9 פתרון מבלי לשבש את גלולה תולעת. הוסף 1 מ&quot;ל של M9 כדי גלולה תולעת, להפוך צינור לערבב תולעים עם הפתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 1.4 שלוש פעמים נוספות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם חיידקים עודפים הועבר בתחילה עם תולעים, לחזור על סך של 5 פעמים. אין חיידקים צריכים להיות מועברים צלחות גזע מזון נחושת. אם המזון מועבר צלחת assay, זה יפריע איסוף נתונים מדויקים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לשטוף הסופי, לשאוב supernatant עד 10081, L של M9 ואת גלולה תולעת נשאר. זהירות: התנהגויות הקשורות רעב להתברר לאחר 30 דקות. כתוצאה מכך תולעים צריך להיות מועבר מיד מן הפתרון לאחר השלבים השלמה הושלמו. </li></ol> 2. הכנת לוחות Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת לוחות אגר NGM סטנדרטי יומיים לפני assay. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הצלחות נשמרות בסביבה לחה, לעשות צלחות אגר 3 ימים לפני assay. לחלופין, להסיר את המכסה של הצלחת במשך 3-6 שעות כדי להבטיח יובש נאות (אם בסביבה סטרילית). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם סמן קבוע עבה, לעשות קו על החלק התחתון של הצלחת לאורך הקצה החיצוני ועוד כדי ליצור מחסום קו באמצע ( איור 1 ). מחסום קו אמצע צריך להיות שווה מכל קצה של הצלחת. השתמש בסרגל כדי להבטיח מדידות מדויקות. קווים אלה ישמשו כמדריך בעת העברת חיידקים פתרון נחושת. ובלבדE. coli מועבר לפני הפתרון נחושת, שורות אלה ישמשו אינדיקטורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת זרע עם 50 μL של OP50 E. coli על צד אחד בלבד של המכשול נחושת כדי ליצור דשא אחיד ( איור 2 ). ריכוז בקטריאלי צריך להישאר עקבי על פני מבחני; עם זאת, השתנות מעט נצפתה בתגובה להבדלים מתונים בריכוז. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בקווים מסומנים על החלק התחתון של הצלחת כדי להבטיח את החיידקים לא באים במגע עם פתרון נחושת. בתנאי שתמיסת הנחושת תוחמת את קצה הצלחת ותיצור מחסום של קו אמצע, תעביר את החיידקים כך שפתרון הנחושת לא יבוא במגע עם מקור המזון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סמן קבוצה שנייה של צלחות ולהעביר OP50 E. coli להם ( איור 2 ). לוחות אלה ישמשו להעריך את השליטה השלילית. צלחות אלה צריך גם להיותסימון על מחצית הצלחת כדי לציין את מקור ההעברה הראשונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר חיידקים לייבש ואז צלחות דגירה על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. ודא כי תיקוני בקטריאלי לא מופרעים בעת העברת לחממה 37 מעלות צלזיוס או בחדר. הפרעה מוגזמת יכולה לשנות את המיקום או הצורה של תיקון המזון. </li></ol> 3. Chemotaxis Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרי להכין 0.5 M נחושת (II) סולפט פתרון לפני זמן ההתחלה assay. בתנאי 125 μL של הפתרון משמש לכל צלחת, בהיקף עד נפח זה תלוי במספר צלחות assay בשימוש ( למשל 5 צלחות assay, 625 μL). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 100 μL של נחושת (II) סולפט פתרון על קצה של אגר כדי ליצור מחסום נחושת החיצוני. הצד המסומן של הצלחת צריך לשמש כמדריך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 25 μL של נחושת (II) סולפט פתרון ליצור מחסום קו האמצע. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי הפתרון נחושת (II) סולפט לעשותלא לבוא במגע עם תיקון חיידקי. השתמש בטכניקה מנוקדת כפי streaking עשוי להשפיע על תנועה עקב חריצים / שריטות על אגר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר פתרון נחושת להתייבש על צלחת. פרק הזמן יכול להשתנות בהתאם לתנאי הצלחת ולמעבדה. בדיקה ויזואלית עבור יובש כל 5 דקות לאחר ההעברה. הערה: פתרון הנחושת מציג גוון כחלחל וניתן לזיהוי בקלות. השתמש רקמות מעבדה כדי לטפטף קלות הפתרון ליד קצה הצלחת להבחין יובש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 20 μL של גלולה תולעת מהחלק התחתון של הצינור על חצי חיידקים חינם של צלחת assay. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי 10 תולעים מועברים צלחת assay. אם תולעים נוספות נכללו בטעות, להסיר אותם על ידי בחירה עם שמן הלוקרבון על מנת להבטיח כי אין חיידקים מתווספים לצלחת. Assay כל צריך להיות מספר עקבי של נמטודות במהלך assay. הערה: אם תולעים מעטות מדי הן transfטעה במהלך מבחני, הגדלת גודל המדגם הראשוני יקטין הפסדים פוטנציאליים במהלך שוטף והעברות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עודף M9 מן הצלחת עם רקמת מעבדה. M9 לא צריך לבוא במגע עם נחושת (II) סולפט פתרון. זהירות: ודא כי תולעים משטח אגר להישאר מושפע בעת ביצוע שלב זה. אם משתמשים בחומרה רבה מדי, רקמת המעבדה יכולה ליצור חריצים למשטח אגר של הצלחת והוא יכול להסיר תולעים. תולעים שהוסרו בטעות באמצעות KimWipe צריך להיות מושלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פתרון M9 הוסר וכל התולעים החלו דפוסי קטר לא נוזלי, להתחיל את stopwatch assay. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופטימלי, להסיר את הפתרון M9 בתוך דקות. הפרמטר החיוני הוא זיהוי התנועה הסינוסואידית. תולעים מקוטעות באופן שונה, למשל מחבט ולא סינוסי, כאשר בנוזל. הפעל את assay להפסיק לצפות פעם אחת של איבר ניסיוניאיסמס מפסיק לחבוט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק צלחות assay כל 30 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת צלחות assay עם תיקונים חיידקיים, ציון חיובי אורגניזמים אם הם מגיעים תיקון מזון על פני 4 שעות. עבור לוחות שליטה שלילית, חיובי ציון אורגניזמים אם הם חצו את המכשול. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).</li><li>Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensation+in+C.+elegans+(October+25,+2006).">Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 70 (3), 817-821 (1973).</li><li>Ramot, D., MacInnis, B. L., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+temperature-sensing+by+a+single+thermosensory+neuron+in+C.+elegans.">Bidirectional temperature-sensing by a single thermosensory neuron in C. elegans.</a> Nat. Neurosci. 11 (8), 908-915 (2008).</li><li>Russell, J., Vidal-Gadea, A. G., Makay, A., Lanam, C., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humidity+sensation+requires+both+mechanosensory+and+thermosensory+pathways+in+Caenorhabditis+elegans.">Humidity sensation requires both mechanosensory and thermosensory pathways in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (22), 8269-8274 (2014).</li><li>van Campen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+modulation+disorders+in+childhood+epilepsy.">Sensory modulation disorders in childhood epilepsy.</a> J. Neurodev. Disord. 7 (34), (2015).</li><li>Festa, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neocortical+disconnectivity+disrupts+sensory+integration+in+Alzheimer's+disease.">Neocortical disconnectivity disrupts sensory integration in Alzheimer's disease.</a> Neuropsych. 19 (6), 728-738 (2005).</li><li>Boecker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+processing+in+Parkinson's+and+Huntington's+disease:+investigations+with+3D+H(2)(15)O-PET.">Sensory processing in Parkinson's and Huntington's disease: investigations with 3D H(2)(15)O-PET.</a> Brain. 122 (9), 1651-1665 (1999).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+disease+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human disease in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol. J. 5 (12), 1261-1276 (2010).</li><li>O'Reilly, L. P., Luke, C. J., Perlmutter, D. H., Silverman, G. A., Pak, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+in+high-throughput+drug+discovery.">C. elegans in high-throughput drug discovery.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. , 247-253 (2014).</li><li>Thompson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+million+mutation+project:+a+new+approach+to+genetics+in+Caenorhabditis+elegans.">The million mutation project: a new approach to genetics in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Res. 23 (10), 1749-1762 (2013).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Maricq, A. V., Peckol, E., Driscoll, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensory+signaling+in+C.+elegans+mediated+by+the+GLR-1+glutamate+receptor.">Mechanosensory signaling in C. elegans mediated by the GLR-1 glutamate receptor.</a> Nat. 378 (6552), 78-81 (1995).</li><li>Chalasani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+a+circuit+for+olfactory+behaviour+in+Caenorhabditis+elegans.">Dissecting a circuit for olfactory behaviour in Caenorhabditis elegans.</a> Nat. 450 (7166), 63-70 (2007).</li><li>Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+responds+to+chemical+repellents+by+integrating+sensory+inputs+from+the+head+and+the+tail.">C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail.</a> Curr. Biol. 12 (9), 730-734 (2002).</li><li>Hart, A. C., Kass, J., Shapiro, J. E., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+signaling+pathways+mediate+touch+and+osmosensory+responses+in+a+polymodal+sensory+neuron.">Distinct signaling pathways mediate touch and osmosensory responses in a polymodal sensory neuron.</a> J. Neurosci. 19 (6), 1952-1958 (1999).</li><li>Ishihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEN-1,+a+secretory+protein+with+an+LDL+receptor+motif,+regulates+sensory+integration+and+learning+in+Caenorhabditis+elegans.">HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory integration and learning in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 109 (5), 639-649 (2002).</li><li>Saeki, S., Yamamoto, M., Iino, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+chemotaxis+revealed+by+paired+presentation+of+a+chemoattractant+and+starvation+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Plasticity of chemotaxis revealed by paired presentation of a chemoattractant and starvation in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Exp. Biol. 204 (10), 1757-1764 (2001).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Campbell, J. C., Polan-Couillard, L. F., Chin-Sang, I. D., Bendena, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NPR-9,+a+Galanin-Like+G-Protein+Coupled+Receptor,+and+GLR-1+Regulate+Interneuronal+Circuitry+Underlying+Multisensory+Integration+of+Environmental+Cues+in+Caenorhabdities+elegans.">NPR-9, a Galanin-Like G-Protein Coupled Receptor, and GLR-1 Regulate Interneuronal Circuitry Underlying Multisensory Integration of Environmental Cues in Caenorhabdities elegans.</a> PLoS Genet. 12 (5), (2016).</li><li>Harris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+distinct+amine+receptors+operating+at+different+levels+within+the+locomotory+circuit+are+each+essential+for+the+serotonergic+modulation+of+chemosensation+in+Caenorhabditis+elegans.">Three distinct amine receptors operating at different levels within the locomotory circuit are each essential for the serotonergic modulation of chemosensation in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 29 (5), 1446-1456 (2009).</li><li>Harris, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+serotonergic+food+signal+stimulating+sensory-mediated+aversive+behavior+in+C.+elegans.">Dissecting the serotonergic food signal stimulating sensory-mediated aversive behavior in C. elegans.</a> PLoS One. 6 (7), (2011).</li><li>Mitchell, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differential+role+for+neuropeptides+in+acute+and+chronic+adaptive+responses+to+alcohol:+behavioural+and+genetic+analysis+in+Caenorhabditis+elegans.">A differential role for neuropeptides in acute and chronic adaptive responses to alcohol: behavioural and genetic analysis in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 5 (5), (2010).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+modulate+olfactory+acuity,+discrimination,+and+memory+in+Caenorhabditis+elegans.">Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans.</a> Learn Mem. 4 (2), 179-191 (1997).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genet. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+(July+3,+2006).">Behavior (July 3, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Sambongi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+of+cadmium+and+copper+ions+by+externally+exposed+ADL,+ASE,+ASH+neurons+elicits+avoidance+response+in+Caenorhabditis+elegans.">Sensing of cadmium and copper ions by externally exposed ADL, ASE, ASH neurons elicits avoidance response in Caenorhabditis elegans.</a> NeuroReport. 10 (4), 753-757 (1999).</li><li>Gray, J. M., Hill, J. J., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+circuit+for+navigation+in+Caenorhabditis+elegans.">A circuit for navigation in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 102 (9), 3184-3191 (2004).</li><li>Rechavi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Starvation-Induced+Transgenerational+Inheritance+of+Small+RNAs+in+C.+elegans.">Starvation-Induced Transgenerational Inheritance of Small RNAs in C. elegans.</a> Cell. 158 (2), 277-287 (2014).</li><li>Gloria-Soria, A., Azevedo, R. B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=npr-1+Regulates+Foraging+and+Dispersal+Strategies+in+Caenorhabditis+elegans.">npr-1 Regulates Foraging and Dispersal Strategies in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 18 (21), 1694-1699 (2008).</li><li>Beron, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burrowing+behavior+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+A+new+assay+for+the+study+of+neuromuscular+disorders.">The burrowing behavior of the nematode Caenorhabditis elegans: A new assay for the study of neuromuscular disorders.</a> Genes Brain Behav. 14 (4), 357-368 (2015).</li><li>Wang, S. J., Wang, Z. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Track-A-Worm,+An+Open-Source+System+for+Quantitative+Assessment+of+C.+elegans+Locomotory+and+Bending+Behavior.">Track-A-Worm, An Open-Source System for Quantitative Assessment of C. elegans Locomotory and Bending Behavior.</a> PLoS One. 8 (7), (2013).</li></ol>

אין לנו מה לגלות.

עיצוב assay זה משנה את assay גזע מזון 24 לכלול פתרון נחושת כדי ליצור מחסום midline מרתיע סביב קצה הצלחת כדי למנוע אובדן של נמטודות. אורגניזמים נבדקים על יכולתם לחצות את מחסום מרתיע ולהגיע תיקון מזון על פני 4 שעות. בהקשר של npr-9 (GF) , יש לנו ניצלו assay זה כדי להעריך כ?...

Caenorhabditis elegans שימש מודל לחקר הנוירוביולוגיה במשך עשרות שנים בשל הקלות היחסית בניתוח המעגל של מערכת העצבים המורכבת רק 302 נוירונים 1 . בתנאי שהאורגניזם מסתמך על תגובה לרמזים סביבתיים, חלק גדול ממערכת העצבים מוקדש לוויסות השילוב של אותות סביבתיים 2 . למרות הפשטות של מערכת העצבים שלה, C. elegans יכול לזהות ולהגיב על אותות סביבתיים מגוונים כולל repellents 3 , 4 , 5 טמפרטורות 5 , ואפילו לחות 6 . כישלון לשלב אותות סביבתיים כמו שצריך נקשר מספר הפרעות התנהגותיות תנאים ניווניות במערכות מודל יונקים 7- 9. עם מגוון של מודלים של מחלות עצביות זמינות<html> 10 ב C. elegans ופיתוח של nematode מסכי התרופות 11 , אורגניזם זה הוכיח להיות מערכת שימושית לחקר נוירוביולוגיה. בהתחשב בזמינות של מיפוי nematode connectome 1 ומוטציות כמעט כל גן בגנום nematode 12 , ההבנה שלנו של מערכת העצבים nematode, ועל ידי הארכה שלנו, מוגבל חלקית על ידי העיצוב של מבחני המתאים מבחינה יצירתית. מספר מבחני chemotaxis פותחו במהלך 40 השנים האחרונות כדי להעריך היענות nematode לגירויים מגוונים שונים 3 , 4 , 13 , 14 , 15 . הניסוי הראשוני כלל את ההקדמה של גירוי סביבתי חריף בעוד תולעת בודדת משוטטת על צלחת אגר= &quot;Xref&quot;&gt; 3 , 14 , 16 . נרשמו שינויים מיידיים בתגובות קטריות. לדוגמה, octorol ריחניים נדיפים ניתן להחיל על השיער ו wafted מול האף nematode כדי לעורר את החניכה של תנועה לאחור בתולעים סוג בר 17 . מבחנים מורכבים יותר פותחו גם כדי לשלב משתנים מרובים כאמצעי להערכת בחירה התנהגותית 18 . וריאציה של assay זה כרוך בשימוש של פתרון נחושת כדי ליצור מחסום midline מרתיע 4 . אטרקציה, כלומר דיאכטיל, הונחה על צד אחד של המכשול הכימי עם תולעים שהועברו ממקור הדיאצטיל. תולעים פגומות לתגובות נחושת נחפזות חצו מיד את המכשול כדי להגיע לדיאצטיל, בעוד שתולעים מסוג בר נדחקו בתחילה על ידי המכשול. התגובות נצבעו כאשר התולעים התקרבו לראשונה למחסום הנחושתללא תצפיות לטווח ארוך. כאשר תולעים מוערכים לאחר עוברים תנאי רעב, הרגישות שלהם לגירויים סביבתיים הוא ירד 19 . כאשר octanol כימית מרתיעה הוא wfted מול האף nematode, אורגניזמים סוג בר לעורר תנועה לאחור בתוך 3 - 5 s כאשר על מזון. לאחר אורגניזמים אלה הוסרו מן המזון במשך 10 דקות, הם מפגינים תגובה מאוחרת של 8 - 10 s 20 . לכן, עם רעב מוגבר, נמטודות להציג תגובה מרתיעה מופחתת אותות סביבתיים מזיקים כמו החיפוש אחר מזון הופך חיוני יותר להישרדות. לעומת זאת, נמטודות כי over-express קולטן neuropeptide 9 ( npr-9) , לא מגיבים אוקטנול על או ביטול מזון ולהציג חוסר היכולת להגיב על מספר גירויים מרתיעה 21 . אלה npr-9 (GF) אורגניזמים גם לא לשנות את תדירות היפוך שלהם בנוכחות מזון, אבל יכולהפוך בתגובה לגירויים מגע קשים המציין כי הם מסוגלים תנועה לאחור 21 . יש לנו גם העריכו npr-9 (LF) מוטציות בהתחשב בכך שהם מפגינים תדירות היפוך ירד באופן חריג את האוכל עדיין יכול לווסת את התנהגותם בנוכחות מזון 21 . צימוד המצב התזונתי של התולעת עם ההקדמה של גירויים חיצוניים חריפים סייעה בבירור המנגנונים שבאמצעותם מסלול הקשור למזון יכול לשנות את מסלולי האיתות החושי 22 , 23 . הנוכחות של מזון בסביבה נמטודות שימש גם כדי להעריך תגובות אתנול הנסיגה 24 . בניסוי זה, תולעים הודגרו בריכוזים שונים של אתנול ולאחר מכן הונחו על צלחת אגר עם כתם של מזון המכונה &quot;assay גזע מזון&quot;. תיקון המזון הונח על קצה אחד של הצלחת בעוד נמטודות wEre הניח ממקור המזון. נסיגה אתנול הוערך על ידי מדידת משך הזמן הנדרש עבור תולעים להגיע חתיכת מזון. זה מבוסס תזונת נחושת assay מבוסס בונה על assay גזע מזון לשלב משתנים סביבתיים נוספים, כלומר מזון ונחושת, תוך הערכת שינויים התנהגותיים לאורך זמן. זוהי הסתגלות של פרוטוקול שימוש נפוץ ברחבי הקהילה elegans C. 4 . פרוטוקול זה נעשה שימוש כדי להעריך תגובות מרתיעה ואיתור מזון על פני תקופה של ארבע שעות 21 . מאז התולעת של התנהגויות רעב התערוכה לאחר 30 דקות של מניעת מזון 25 , אנחנו גם מסוגלים להעריך כיצד שינויים במצב התזונתי יכול להשפיע על תגובות סביבתיות. התנאים של assay זה למדוד כיצד אורגניזמים ניסיוני לשנות את התגובה לגירויים מרתיעה לאורך זמן, ומכאן זה מעריך שינויים התנהגותיים כמואורגניזמים מתקדמים לעבר מדינה מורעבת (והמשיכו מדידות של רעב ממושך). מאחר שחיות ה- NF-9 (GF) אינן משנות את התנהגותן בתגובה לאוכל או לרמזים מרתיעים רבים, ביקשנו לזהות אם הגירעונות ההתנהגותיים הללו ימשיכו להתקיים בהקשר של רעב. בסופו של דבר, זה עיצוב assay כבר ניסח במיוחד כדי להעריך את npr-9 (GF) מוטציות אבל יכול להיות מותאם נוספת גם לאפיין זנים חדשניים.

<table><tbody><tr><td>M9 Solution [3 g KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 6 g Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O to 1 litre. Autoclave to sterilize before use.]</td><td></td><td></td><td>Produced in lab</td></tr><tr><td>Cupric Sulfate</td><td>Sigma</td><td>C-1297</td><td>Use water to appropriately suspend to a concentration of 0.5M</td></tr></tbody></table>

a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay

כדי להבטיח הישרדות, אורגניזמים חייבים להיות מסוגלים להימנע בתי גידול שלילי תוך הבטחת מקור מזון עקבי. Caenorhabditis elegans לשנות את דפוסי locomotory שלהם על זיהוי של גירויים סביבתיים שונים והוא יכול לווסת את חבילת תגובות התנהגותיות בתגובה לתנאי רעב. נמטודות בדרך כלל התערוכה תגובה מרתיעה ירידה כאשר הוסרו ממקור מזון במשך 30 דקות. התבוננות בשינויים התנהגותיים בתגובה למעמד תזונתי משתנה יכולה לספק תובנה לגבי המנגנונים המסדירים את המעבר ממצב של רעב עד רעב. פיתחנו assay אשר מודד יכולת של נמטודות לעבור מחסום מרתיע ( כלומר נחושת) ואז להגיע למקור מזון על פני תקופה ממושכת של זמן. פרוטוקול זה בונה על עבודה קודמת על ידי שילוב משתנים מרובים באופן המאפשר איסוף נתונים המשיך כמו האורגניזמים לנוע לעברמצב יותר ויותר מורעב. יתר על כן, assay זה מאפשר הגדלת גודל המדגם, כך אוכלוסיות גדולות יותר של נמטודות ניתן להעריך בו זמנית. אורגניזמים פגומים ביכולת לזהות או להגיב לנחושת מיד לחצות את המכשול הכימי, בעוד נמטודות סוג בר בתחילה דחו. כמו תולעים סוג בר הם יותר ויותר מורעבים, הם מתחילים לחצות את המכשול ולהגיע למקור המזון. עיצבנו assay זה כדי להעריך מוטציה כי הוא מסוגל להגיב על רמזים סביבתיים מגוונים, כולל תחושת מזון או זיהוי של כימיקלים מרתיעה. כאשר מוערכים באמצעות פרוטוקול זה, אורגניזמים פגומים מיד חצה את המכשול, אבל גם לא היו מסוגלים לאתר מקור מזון. לפיכך, מוטציות אלה שוב ושוב לחצות את המכשול הכימי למרות להגיע באופן זמני למקור מזון. Assay זה יכול בקלות לבדוק אוכלוסיות של תולעים להעריך פגמים פוטנציאליים המסלול הקשורים סלידה והרעב.

השתמשנו סוג בר (N2), npr-9 (tm1652), ואת npr-9 overexpression זן, כלומר npr-9 (GF) (IC836 - npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr ), כדי להעריך תגובות לרעב ודחיקת נחושת. אורגניזמים מסוג בר מסוגלים לזהות ולהגיב על מחסום נחושת מרתיעה, ואילו מוטציות npr-9 (GF) אינן יוזמות תגו...

Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

א<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; מצב תזונתיים מבוססי Assay Assersion

כאן, אנו מציגים assay Caenorhabditis elegans- Specific שנועד להעריך שינויים התנהגות הנטייה נחושת ואת היכולת לאתר מקור מזון משותף, כמו האורגניזם מתקדמת ממצב תזונה רעב עד כדי רעב.

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

a-caenorhabditis-elegans-nutritional-status-based-copper-aversion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

6.5K Views.  Queen's University.  כאן, אנו מציגים assay Caenorhabditis elegans- Specific שנועד להעריך שינויים התנהגות הנטייה נחושת ואת היכולת לאתר מקור מזון משותף, כמו האורגניזם מתקדמת ממצב תזונה רעב עד כדי רעב. 

Video: A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection of the neural circuits underlying these behaviors, the development of robust and reproducible behavioral assays is necessary. Previous C. elegans behavioral studies have used variations of a "drop test", a "chemotaxis assay", and a "retention assay" to investigate the response of C. elegans to soluble compounds. The method described in this article seeks to combine the complementary strengths of the three aforementioned assays. Briefly, a small circle in the middle of each assay plate is divided into four quadrants with the control and experimental solutions alternately placed. After the addition of the worms, the assay plates are loaded into a behavior chamber where microscope cameras record the worms' encounters with the treated regions. Automated video analysis is then performed and a preference index (PI) value for each video is generated. The video acquisition and automated analysis features of this method minimizes the experimenter's involvement and any associated errors. Furthermore, minute amounts of the experimental compound are used per assay and the behavior chamber's multi-camera setup increases experimental throughput. This method is particularly useful for conducting behavioral screens of genetic mutants and novel chemical compounds. However, this method is not appropriate for studying stimulus gradient navigation due to the close proximity of the control and experimental solution regions. It should also not be used when only a small population of worms is available. While suitable for assaying responses only to soluble compounds in its current form, this method can be easily modified to accommodate multimodal sensory interaction and optogenetic studies. This method can also be adapted to assay the chemosensory responses of other nematode species.

We present a behavior recording setup and protocol that enables automated analysis of the nematode, Caenorhabditis elegans' preference for soluble compounds in a population-based assay. This article describes the construction of a behavior chamber, the behavioral assay protocol, and video analysis software usage.

ניתוח אוטומטי של אוכלוסיה מבוססת נמטודות מבוססי Assay העדפה

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

Behavior

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and maintenance issues. On the contrary, the nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) has advantages to make it an ideal choice for toxicity testing: a short lifespan, easy cultivation, and efficient reproduction. Here, we describe a protocol for the automatic phenotypic profiling of C. elegans in a 384-well plate. The nematode worms are cultured in a 384-well plate with liquid medium and chemical treatment, and videos are taken of each well to quantify the chemical influence on 33 worm features. Experimental results demonstrate that the quantified phenotype features can classify and predict the acute toxicity for different chemical compounds and establish a priority list for further traditional chemical toxicity assessment tests in a rodent model.

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

A quantitative method has been developed to identify and predict the acute toxicity of chemicals by automatically analyzing the phenotypic profiling of Caenorhabditis elegans. This protocol describes how to treat worms with chemicals in a 384-well plate, capture videos, and quantify toxicological related phenotypes.

וזמינותו תפוקה גבוהה עבור חיזוי של רעילות כימית על ידי אוטומטית פרופילים פנוטיפי של Caenorhabditis elegans

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and ...

Environment

בדיקת תפוקה גבוהה למדידת Caenorhabditis elegans צריכת מזון ותוחלת חיים

Quantifying Food Intake in Caenorhabditis elegans by Measuring Bacterial Clearance

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of Caenorhabditis elegans&#160;(C. elegans), an important parameter when studying the genetics of aging or metabolism. In most species, feeding is determined by measuring the difference between the amount of food provided and the amount left after a given time interval. The method presented here uses the same strategy to determine the feeding of C. elegans. It measures the amount of bacteria, the food source of C. elegans, cleared within 72 h. This method uses 96-well microtiter plates and has allowed the screening of hundreds of drugs for their ability to modulate food intake at a speed and depth not possible in other animal models. The strength of this assay is that it allows to measure feeding and lifespan simultaneously and directly measures the disappearance of food and, thus, is based on the same principles used for other organisms, facilitating species-to-species comparison.

מחבר זרקור: חקר הקשר בין ליפוטוקסיות ו- HFpEF 

This protocol describes an assay to quantify Caenorhabditis elegans feeding rate based on measuring the clearance of bacteria in liquid culture.

כימות צריכת המזון ב- Caenorhabditis elegans על ידי מדידת פינוי חיידקים

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Biology

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s disease (HD) is principally driven by a CAG nucleotide repeat that encodes an expanded glutamine tract in huntingtin protein. Thus, the inhibition of polyglutamine (polyQ) aggregation and, in particular, aggregation-associated neurotoxicity is a useful strategy for the prevention of HD and other polyQ-associated conditions. This paper introduces generalized experimental protocols to assess the neuroprotective capacity of test compounds against HD using established polyQ transgenic Caenorhabditis elegans models. The AM141 strain is chosen for the polyQ aggregation assay as an age-associated phenotype of discrete fluorescent aggregates can be easily observed in its body wall at the adult stage due to muscle-specific expression of polyQ::YFP fusion proteins. In contrast, the HA759 model with strong expression of polyQ-expanded tracts in ASH neurons is used to examine neuronal death and chemoavoidance behavior. To comprehensively evaluate the neuroprotective capacity of target compounds, the above test results are ultimately presented as a radar chart with profiling of multiple phenotypes in a manner of direct comparison and direct viewing.

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Here, we present a protocol to assess the neuroprotective activities of test compounds in Caenorhabditis elegans, including polyglutamine aggregation, neuronal death, and chemoavoidance behavior, as well as an exemplary integration of multiple phenotypes.

Caenorhabditis elegans כמערכת מודל לגילוי תרכובות ביו-אקטיביות נגד רעילות עצבית בתיווך פוליגלוטמין

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s ...

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic human disorders, including cardiovascular and neurodegenerative diseases, diabetes, aging, and cancer. Therefore, it is important to study oxidative stress not only in cell systems but also using whole organisms. C. elegans is an attractive model organism to study the genetics of oxidative stress signal transduction pathways, which are highly evolutionarily conserved.
Here, we provide a protocol to measure oxidative stress resistance in C. elegans in liquid. Briefly, ROS-inducing reagents such as paraquat (PQ) and H2O2 are dissolved in M9 buffer, and solutions are aliquoted in the wells of a 96 well microtiter plate. Synchronized L4/young adult C. elegans animals are transferred to the wells (5-8 animals/well) and survival is measured every hour until most worms are dead. When performing an oxidative stress resistance assay using a low concentration of stressors in plates, aging might influence the behavior of animals upon oxidative stress, which could lead to an incorrect interpretation of the data. However, in the assay described herein, this problem is unlikely to occur since only L4/young adult animals are being used. Moreover, this protocol is inexpensive and results are obtained in one day, which renders this technique attractive for genetic screens. Overall, this will help to understand oxidative stress signal transduction pathways, which could be translated into better characterization of oxidative stress-associated human disorders.

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

מדידת התנגדות סטרס חמצוני של<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; בצלחות microtiter 96-היטב

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid nematode growth media (NGM), allowing the efficient collection of population-level data for survival and other physiological phenotypes, and periodic sampling of subpopulations for fluorescent biomarker quantification. Limitations to this approach are the inability to (1) follow individual worms over time to develop age trajectories for phenotypes of interest and (2) monitor fluorescent biomarkers directly in the context of the culture environment. Alternative culture approaches use liquid culture or microfluidics to monitor individual animals over time, in some cases including fluorescence quantification, with the tradeoff that the culture environment is contextually distinct from solid NGM. The WorMotel is a previously described microfabricated multi-well device for culturing isolated worms on solid NGM. Each worm is maintained in a well containing solid NGM surrounded by a moat filled with copper sulfate, a contact repellent for C. elegans, allowing longitudinal monitoring of individual animals. We find copper sulfate insufficient to prevent worms from fleeing when subjected to aversive interventions common in aging research, including dietary restriction, pathogenic bacteria, and chemical agents that induce cellular stress. The multi-well devices are also molded from polydimethylsiloxane, which produces high background artifacts in fluorescence imaging. This protocol describes a new approach for culturing isolated roundworms on solid NGM using commercially available polystyrene microtrays, originally designed for human leukocyte antigen (HLA) typing, allowing the measurement of survival, physiological phenotypes, and fluorescence across the lifespan. A palmitic acid barrier prevents worms from fleeing, even in the presence of aversive conditions. Each plate can culture up to 96 animals and easily adapts to a variety of conditions, including dietary restriction, RNAi, and chemical additives, and is compatible with automated systems for collecting lifespan and activity data.

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Here, we present a protocol to culture isolated individual nematodes on solid media for lifelong physiological parameter tracking and fluorescence quantification. This culture system includes a palmitic acid barrier around single-worm wells to prevent animals from fleeing, allowing the use of aversive interventions, including pathogenic bacteria and chemical stressors.

תרבות ארוכת טווח של Caenorhabditis elegans בודדים על מדיה מוצקה לניטור פלואורסצנטי אורכי והתערבויות מרתיעות

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid ...

א

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

ניתוח אוטומטי של אוכלוסיה מבוססת נמטודות מבוססי Assay העדפה

וזמינותו תפוקה גבוהה עבור חיזוי של רעילות כימית על ידי אוטומטית פרופילים פנוטיפי של Caenorhabditis elegans

כימות צריכת המזון ב- Caenorhabditis elegans על ידי מדידת פינוי חיידקים

כימות צריכת המזון ב- Caenorhabditis elegans על ידי מדידת פינוי חיידקים

כימות צריכת המזון ב- Caenorhabditis elegans על ידי מדידת פינוי חיידקים

Assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Caenorhabditis elegans כמערכת מודל לגילוי תרכובות ביו-אקטיביות נגד רעילות עצבית בתיווך פוליגלוטמין

מדידת התנגדות סטרס חמצוני של

תרבות ארוכת טווח של Caenorhabditis elegans בודדים על מדיה מוצקה לניטור פלואורסצנטי אורכי והתערבויות מרתיעות