يشكر المؤلفون الدكتور جنيفر يانغ وكوفمان ألكسندر (ساشا) لتقديم المساعدة التقنية مع هذا الأسلوب، فضلا عن العديد من المناقشات المفيدة والهامة. وأجريت فحوصات هرمون مصل حسب يانغ et al.، 2017 في "جامعة فيرجينيا" مركز للبحوث في الاستنساخ يجند الفحص والتحليل الأساسية، وتؤيد بمنحه يونيس كينيدي شرايفر NICHD/المعاهد الوطنية للصحة (نكتري) P50-HD28934.
مصادر لدعم البحوث: 86100 NICHD R01 (كمب)، والإدارة القائمة على النتائج وأيده T32 NICHD 007203.

الأسلوب الموصوفة هنا هو الاتفاق مع الوطني معاهد للرعاية الصحية والحيوانية واستخدام المبادئ التوجيهية، وقد إذن بها برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة في جامعة كاليفورنيا، سان دييغو.
1-التأقلم للمناولة
<ol><li>التعامل مع الإجراء<ol>
<li>ضع أقفاص الماوس في السلامة الأحيائية مجلس الوزراء. إزالة الماوس أول من القفص والمكان على سطح مناسبة (مثل غطاء قفص نظيفة) داخل مجلس الوزراء السلامة الأحيائية.</li>
		<li>كبح جماح بلطف الماوس على سطح العمل بعقد قاعدة الذيل مع السبابة والإبهام من جهة. ثم السكتة الدماغية بقوة على السطح البطني من الذيل، من القاعدة إلى طرف الذيل، بالسبابة والإبهام من جهة أخرى. كرر هذا الجرة 6 مرات (أي 1 من مجموعة) والعودة الماوس إلى قفصة.</li>
		<li>انتظر 6 دقيقة وكرر الخطوة 1.1.2. ملاحظة: في المجموع، خطوة 1.1.2 سوف تتكرر 4 مرات للماوس (أي 4 مجموعات من السكتات الدماغية 6)، حيث أن كل الماوس سوف تتلقى ما مجموعة 24 ذيل ضربات في كل يوم للتعامل.</li>
	</ol>
</li>
	<li>تواتر المناولة اليومية<ol>
<li>من خمس سنوات حتى أسبوعين قبل اليوم جمع الدم المخططة، التعامل مع الفئران كما هو موضح في الخطوة 1، 1، خمسة أيام في الأسبوع (لا تتم معالجة الفئران يوم السبت أو الأحد حتى الأسبوعين الأخيرين من التأقلم).</li>
		<li>إذا كان العلاج التجريبي خلال فترة أخذ العينات سوف تشمل أي معالجة إضافية (مثل سكروفينج أو الحقن داخل)، التأقلم الفئران لهذا النشاط المناولة خلال كل دورة معالجة. ملاحظة: للتأقلم لإجراءات الحقن، استخدام إبرة يتثلم القيام حقن شام.</li>
		<li>خلال الأسبوعين الماضيين قبل اليوم جمع الدم المخططة، التعامل مع الفئران كما هو موضح في 1.1، سبعة أيام في الأسبوع.</li>
		<li>منزل على الأقل أسبوعين قبل يوم جمع الدم المخططة، الفئران في أزواج لتقليل الاختلالات في الفئران أثناء أخذ العينات.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2-إعداد أنابيب جمع الدم
<ol><li>إعداد المخزن المؤقت لفحص LH أولتراسينسيتيفي في زجاجة زجاج: ألبومين المصل البقري 0.2% و 0.05% 20 توين في برنامج تلفزيوني [ز 0.2 بوكل، ز 8 كلوريد الصوديوم، ز 1.44 غ2هبو4 (لا مائي)، 0.24 ز خ2ص4، الماء عالي النقاوة إلى 1 لتر وتصفية ودرجة الحموضة 7.4 اﻷوتوكﻻف] ، تخزين في 4 درجات مئوية. 1 ملاحظة: حجم LH أولتراسينسيتيفي الإنزيم المخزن المؤقت إعداد يمكن حساب استناداً إلى عدد العينات وحجم كل عينة كما هو مبين أدناه (2.2 والمناقشه)</li>
	<li>إعداد أنابيب جمع الدم (0.6 مل ميكروسينتريفوجي أنابيب). تسمية أنابيب والمقايسة الكوة المخزن المؤقت (57 ميليلتر من المخزن المؤقت كل أنبوب؛ الملاحظة، وحدة التخزين هذه قد تختلف تبعاً لحجم الدم التي يتم جمعها أو نسبة الدم إلى المخزن المؤقت المطلوب). أنابيب يمكن أن يكون مستعدا أيام قبل أخذ العينات، وتخزين في 4 درجات مئوية.</li>
</ol>3. جمع الدم
<ol><li>إعداد مواد جمع الدم.<ol>
<li>يعد مجلس الوزراء السلامة البيولوجية لاستخدامها، وترتيب المواد التالية في غطاء محرك السيارة أو عربة القريبة: 10 ميليلتر "الماصة؛" نصائح ماصة (مجموعة 3 ميليلتر أو حجم جمع الدم المطلوب)، والنفايات بن لنصائح الماصة المستخدمة، الموقت، والنسخة المطبوعة مع إعداد الحيوانات وعينه (أرقام ملاحظات بشأن قضايا أخذ العينات أو الحيوان)، الثلجية دلو مع أنابيب جمع الدم ومقص وشاش صغير (2 "x 2"). ملاحظة: "العد" الدالة على جهاز ضبط وقت مختبر مفيد لأنه لم يكن لديه إنذار مسموعة يمكن أن تخل بالفئران</li>
		<li>استخدام علامة دائمة للاحتفال بذيل الماوس كل (بالقرب من القاعدة) للمساعدة في التعرف السريع على الماوس الصحيح أثناء أخذ العينات.</li>
	</ol>
</li>
	<li>لقطة لإعداد مجموعة الذيل والدم قبل.<ol>
<li>في 45 دقيقة قبل بدء جمع الدم، إزالة الماوس أول من قفصة ووضعه على سطح مناسبة (غطاء قفص نظيف يعمل بشكل جيد) إطار السلامة الأحيائية مجلس الوزراء.</li>
		<li>استخدام مقص حاد، والعقيمة لإزالة 1-2 مم طرف ذيل الماوس، بعد إعداد العقيم (أي فرك الكحول وتدين). ملاحظة: هذا يمكن أن يتحقق في الحيوانات مستيقظا مع ضبط النفس لطيف أو تحت التخدير إيسوفلوراني.  بالإضافة إلى ذلك، قد يتم توفير التسكين بناء على توصية إياكوك المحلية.</li>
		<li>السكتة الدماغية ذيل الماوس بعناية كما هو موضح أعلاه (1-1-2؛ 1-2 السكتات الدماغية كافية عموما) حتى الحبرية أشكال الدم على طرف الذيل.</li>
		<li>استخدام ماصة مع تلميح نظيفة لجمع 3 ميليلتر من الدم من طرف الذيل وتجاهل نصيحة ماصة بالدم.</li>
		<li>قبل أن تعود الماوس إلى قفصة، ضمان أن توقف تدفق الدم. إذا لزم الأمر، تطبيق ضغط لطيف مع شاش معقم.</li>
		<li>كرر الخطوات 3.2.1-3.2.5 لجميع الفئران. ويمكن جمع عينات الدم اللاحقة بشدة الجرة ذيل الماوس حتى قطره دم أشكال في الطرف الذيل. ملاحظة: إذا كان لا تشكل معالجة تجميعية دم بعد ضربات ثابتة، يمكن مست الذيل مع وسادة شاش غارقة في المياه المالحة. الجلطات أكثر احتمالاً للنموذج أثناء أخذ العينات أقل تواترا (أي > فواصل زمنية 15 دقيقة). مرة واحدة يتم مسح الجلطة من هذا السياق، يمكن مواصلة أخذ العينات.</li>
		<li>مواصلة جمع 3 ميليلتر من الدم من كل الماوس كما هو موضح أعلاه كل دقيقة 6 لحوالي 45 دقيقة خلال هذه الفترة إعداد جمع الدم قبل. تجاهل نصيحة الدم وماصة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>أخذ عينات من الدم<ol>
<li>جمع 3 ميليلتر من الدم من طرف الذيل كما هو موضح أعلاه. أخذ الحيطة والحذر لضمان أخذ العينة 3 ميليلتر الكامل في تلميح ماصة (بدون فقاعات أو تلوث الفراش). إخراج عينة الدم في المخزن المؤقت للفحص في أنبوب مسمى. مزيج من انعكاس والعودة على أنبوب للجليد.</li>
		<li>قبل أن تعود الماوس إلى قفصة، ضمان أن توقف تدفق الدم. إذا لزم الأمر، تطبيق ضغط لطيف مع شاش معقم.</li>
		<li>كرر الخطوات 3.3.1-3.3.2 لكل الماوس، كل دقيقة 6، خلال مدة محددة سلفا في أخذ العينات. رصد كل الحيوانات لإشارات الاستغاثة (الجفون مغلقة جزئيا مثل، موقف متحدب [لم يسببها العلاج الأخرى] أو عدم الاستجابة للمعالجة) وإنهاء أخذ العينات، إذا لزم الأمر. ملاحظة: استغاثة السلوكية أو المضاعفات الأخرى التي تتطلب إنهاء لأخذ العينات جداً نادراً ما تحدث في المختبر.</li>
		<li>إذا هي euthanized الحيوانات لا بعد أخذ عينات من الدم، التأكد من أن تدفق الدم من الذيل-نصيحة قد توقفت تماما. مسح أي الدم المسكوب من داخل قفص كل الحيوانات (أو أقفاص التغيير) والعودة في أقفاص الحيوانات إلى رف الإسكان.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4-عينة من معالجة وتحليل
<ol><li>تخزين عينات الدم في-20 درجة مئوية حتى التحليل. ملاحظة: LH هو جزيئي في عينات الدم كله تضعف في المخزن المؤقت للمقايسة؛ لا يوجد فصل من الأمصال أو البلازما مطلوب قبل التخزين أو التحليل.</li>
	<li>فحص عينات الدم قبل أليسا أولتراسينسيتيفي كالموصوفة سابقا القيم1 والتقرير في نانوغرام/مليلتر دم كله بعد تصحيح لتخفيف حجم العينة في المخزن المؤقت للمقايسة.</li>
	<li>تحديد نبضات LH في مجموعة البيانات. حساب ومقارنة نبض يعني السعة وتواتر النبض (أو الفاصل الزمني لنبض بين الوكالات) حسب الاقتضاء لمجموعة البيانات. ملاحظة: برامج ومعايير نشر13،14 ، تتوفر15،16 للكشف عن نبضات LH.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Steyn, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+methodology+for+and+assessment+of+pulsatile+luteinizing+hormone+secretion+in+juvenile+and+adult+male+mice.">Development of a methodology for and assessment of pulsatile luteinizing hormone secretion in juvenile and adult male mice.</a> Endocrinology. 154 (12), 4939-4945 (2013).</li><li>McArdle, C. A., Roberson, M. S., Plant, T. M., Zeleznik, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Knobil and Neill's Physiology of Reproduction. , (2015).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapy. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Steiner, R. A., Bremner, W. J., Clifton, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+luteinizing+hormone+pulse+frequency+and+amplitude+by+testosterone+in+the+adult+male+rat.">Regulation of luteinizing hormone pulse frequency and amplitude by testosterone in the adult male rat.</a> Endocrinology. 111 (6), 2055-2061 (1982).</li><li>Moore, A. M., Prescott, M., Marshall, C. J., Yip, S. H., Campbell, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+a+robust+arcuate+GABAergic+input+to+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+in+a+model+of+polycystic+ovarian+syndrome.">Enhancement of a robust arcuate GABAergic input to gonadotropin-releasing hormone neurons in a model of polycystic ovarian syndrome.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 112 (2), 596-601 (2015).</li><li>Czieselsky, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulse+and+Surge+Profiles+of+Luteinizing+Hormone+Secretion+in+the+Mouse.">Pulse and Surge Profiles of Luteinizing Hormone Secretion in the Mouse.</a> Endocrinology. 157 (12), 4794-4802 (2016).</li><li>Campos, P., Herbison, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+GnRH+neurons+reveals+minimal+requirements+for+pulsatile+luteinizing+hormone+secretion.">Optogenetic activation of GnRH neurons reveals minimal requirements for pulsatile luteinizing hormone secretion.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 111 (51), 18387-18392 (2014).</li><li>Yang, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Psychosocial+Stress+Inhibits+LH+Pulsatility+and+Kiss1+Neuronal+Activation+in+Female+Mice.">Acute Psychosocial Stress Inhibits LH Pulsatility and Kiss1 Neuronal Activation in Female Mice.</a> Endocrinology. 158 (11), 3716-3723 (2017).</li><li>Clarkson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+the+hypothalamic+GnRH+pulse+generator+in+mice.">Definition of the hypothalamic GnRH pulse generator in mice.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 114 (47), E10216-E10223 (2017).</li><li>Lewis, V. J., Thacker, W. L., Mitchell, S. H., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technic+for+obtaining+blood+from+mice.">A new technic for obtaining blood from mice.</a> Laboratory Animal Science. 26 (2 Pt 1), 211-213 (1976).</li><li>Abatan, O. I., Welch, K. B., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+saphenous+venipuncture+and+modified+tail-clip+blood+collection+in+mice.">Evaluation of saphenous venipuncture and modified tail-clip blood collection in mice.</a> Journal of the American Association of Laboratory Animal Science. 47 (3), 8-15 (2008).</li><li>Durschlag, M., Wurbel, H., Stauffacher, M., Von Holst, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+blood+collection+in+the+laboratory+mouse+by+tail+incision--modification+of+an+old+technique.">Repeated blood collection in the laboratory mouse by tail incision--modification of an old technique.</a> Physiology and Behavior. 60 (6), 1565-1568 (1996).</li><li>Goodman, R. L., Karsch, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulsatile+secretion+of+luteinizing+hormone:+differential+suppression+by+ovarian+steroids.">Pulsatile secretion of luteinizing hormone: differential suppression by ovarian steroids.</a> Endocrinology. 107 (5), 1286-1290 (1980).</li><li>Clarke, I. J., Cummins, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+gonadotropin-releasing+hormone+pulse+frequency+associated+with+estrogen-induced+luteinizing+hormone+surges+in+ovariectomized+ewes.">Increased gonadotropin-releasing hormone pulse frequency associated with estrogen-induced luteinizing hormone surges in ovariectomized ewes.</a> Endocrinology. 116 (6), 2376-2383 (1985).</li><li>Vidal, A., Zhang, Q., Medigue, C., Fabre, S., Clement, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DynPeak:+an+algorithm+for+pulse+detection+and+frequency+analysis+in+hormonal+time+series.">DynPeak: an algorithm for pulse detection and frequency analysis in hormonal time series.</a> PLoS One. 7 (7), e39001 (2012).</li><li>Merriam, G. R., Wachter, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Algorithms+for+the+study+of+episodic+hormone+secretion.">Algorithms for the study of episodic hormone secretion.</a> American Journal of Physiology. 243 (4), E310-E318 (1982).</li><li>Xie, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Deletion+of+Ghrelin-O-Acyltransferase+on+the+Pulsatile+Release+of+Growth+Hormone+in+Mice.">Effect of Deletion of Ghrelin-O-Acyltransferase on the Pulsatile Release of Growth Hormone in Mice.</a> Journal of Neuroendocrinology. 27 (12), 872-886 (2015).</li><li>Koch, C. E., Leinweber, B., Drengberg, B. C., Blaum, C., Oster, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+circadian+rhythms+and+stress.">Interaction between circadian rhythms and stress.</a> Neurobiology of Stress. 6, 57-67 (2017).</li><li>Tuli, J. S., Smith, J. A., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosterone,+adrenal+and+spleen+weight+in+mice+after+tail+bleeding,+and+its+effect+on+nearby+animals.">Corticosterone, adrenal and spleen weight in mice after tail bleeding, and its effect on nearby animals.</a> Laboratory Animal. 29 (1), 90-95 (1995).</li><li>. Animal Welfare Inspection Guide Available from: <a target="_blank" href="https://www.aphis.usda.gov/animal_welfare/downloads/Animal-Care-Inspection-Guide.pdf">https://www.aphis.usda.gov/animal_welfare/downloads/Animal-Care-Inspection-Guide.pdf</a> (2017)</li><li>Steyn, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+determination+of+pulsatile+growth+hormone+secretion+in+mice.">Development of a method for the determination of pulsatile growth hormone secretion in mice.</a> Endocrinology. 152 (8), 3165-3171 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

هنا يصف لنا وضع بروتوكول لجمع الدم المتكرر لعينات الدم كل طرف الذيل للتقييم لإفراز LH نابض في الفئران. هذا البروتوكول يتيح جمع العينات للكشف عن التغيرات الحادة في إفراز LH نابض عقب التعرض للإجهاد النفسي ومناسبة تماما لتقييم البقول LH تحت الأخرى التلاعب الحاد أو المزمن.
من عناص...

وظيفة الغدد التناسلية في الثدييات متوقفاً على إفراز تروج والهرمون (LH) والهرمون من الغدة النخامية جريب. هي يفرز gonadotropins أما نمط نابض أو الطفرة في الاستجابة لإفراز طائي تروج – الإفراج عن هرمون (GnRH). التوليف وإفراز LH و FSH وينظم عن طريق عمل الغدد الصماء، وباراكريني، وأوتوكريني من مجموعة متنوعة من الجزيئات بما فيها جنره طائي، وهرمونات الستيرويد جوندال، والنظام أضافت-إينهيبين-فوليستاتين، فضلا عن عدد وافر من الظروف الفسيولوجية بما في ذلك توازن الطاقة والإجهاد. 2
نمط نابض LH في الدم ينشأ من إبراء ذمة مفاجئ نوعا من LH في الدم المحيطي، تليها نحو أسي القضاء. هامة تتضمن الميزات نمط تكرار كل تفريغ LH والسعة للاستجابة LH، سواء منها التي تمليها، جزئيا، الإفراج عن جنره. الواجب إلى الصعوبة في جمع الدم طائي النخامية المدخل لقياس جنره نابض، أخذ العينات وقياس LH كوكيل للائحة جنره المحور طائي جوندال الغدة النخامية. ولذلك، يتم ترميز المعلومات الحاسمة في التردد والسعة من البقول LH، الذي لا يمكن تحديده من عينة واحدة.
تحليل لإفراز LH نابض تاريخيا محدودة للثدييات الكبيرة (البشر والقرود والأغنام) نظراً لحجم كبير من الدم والتسامح لجمع عينة الدم المتكرر. في القوارض، أخذ عينات من الدم المتكرر تقتصر على الفئران ويتحقق عن طريق سكني القسطرة أذينية. 3 , 4 بتكلفة منخفضة نسبيا وتوافر الوراثية (مثل لجنة المساواة العرقية-لوكس، كريسبر) والتلاعب الدارة العصبية المعقدة (مثل أوبتوجينيتيكس، تشيموجينيتيكس) جعل الفئران كائن نموذج جذاب؛ ومع ذلك، تحقيق عينات الدم المتكررة والتحليل اللاحق لتركيزات LH حتى مؤخرا، أثبت بعيد المنال. كان رائدا في هذه المهمة الضخمة ستاين وزملاء العمل. وقد بدأت 1 منذ ذلك الحين، عدد من معامل الاستفادة من أخذ عينات من الدم المتكررة وفحوصات LH فائقة الحساسية لتقييم إفراز LH نابض في مجموعة متنوعة من النماذج التجريبية. 5 , 6 , 7 , 8 , 9 تجدر بالسعي إلى طريقة عملية لجمع عينات الدم متعددة من الفئران في التقدم لمالا يقل عن 40 سنة10 مع التحسينات المتعددة المقدمة على طول الطريق. 11 , 12
يمثل تقييم أنماط نبض LH (أي من التردد والسعة) صقل كبرى في رصد إفراز تروج القاعدية في هذا النموذج الحيواني يستهدف وراثيا. تقليديا، تم تحديد تركيزات LH في الفئران في عينة دم واحدة. إحدى نقاط الضعف لعينات نقطة واحدة مجموعة البيانات اختلافاً كبيرا نظراً لأن تركيزات LH بطبيعة الحال متقلبة خلال كل نبضة. ضعف آخر وأن القياسات المعزولة أصلاً افتقد المعلومات الحاسمة التي تنقلها إلى أنماط إفراز LH نبض. وهكذا، طريقة لجمع عينات الدم المتكرر في التصرف بحرية، الفئران غير المقيد (باستثناء معالجة لطيف أثناء أخذ العينات) ستوفر معلومات معززة وتكون مفيدة للعديد من مختبرات التحقيق في تنظيم هرمون نابض.
هنا، يمكننا وصف بروتوكول لجمع متكررة (كل دقيقة 6) الدم عينات من الفئران مستيقظا، غير المقيد. الأهم من ذلك، أننا تشتمل التعامل مع تأقلم البروتوكول الذي يسمح بالكشف عن القوى والمستمر لإفراز LH نابض في عينات الدم كله جمعت على مدى يمكن تحديد طول الوقت الذي ما قبل وما بعد التقييم التحدي حاد، مثل الاستجابة للإجهاد النفسي والاجتماعي لتجميد وضبط النفس. وقد وصفت مقايسة فعال لتركيزات LH من عينات الدم كله سابقا؛ 1 هذا البروتوكول وتركز على أسلوب لجمع عينات الدم لقياس نبض LH.

<table><tbody><tr><td>Biosaftey cabinet</td><td>Lab Products Inc</td><td>L/F-B</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma</td><td>A5403</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 (anhydrous)</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Ultrapure water</td><td>Millipore</td><td></td><td>Purified and filtered water</td></tr><tr><td>Broome Rodent Restraint Device</td><td>Harvard Apparatus</td><td>52-0460</td><td>Not necessary for blood collection, but were used in the collection of representative data.</td></tr><tr><td>DynPeak</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0039001</td></tr></tbody></table>

frequent tail-tip blood sampling in mice for the assessment of pulsatile luteinizing hormone secretion

في العديد من أجهزة الغدد الصماء، تعميم العوامل أو الهرمونات لا يتم إصدارها بشكل مستمر، ولكن يتم ويفرز كنبض منفصلة في استجابة لعامل الإفراج. إجراءات أخذ العينات نقطة واحدة لا تكفي لنفهم تماما أهمية نمط الافرازية نابض الهرمونات أما في الظروف الفسيولوجية العادية أو أثناء ظروف التقلبات البيولوجية. الهرمون (LH) هو توليفها من قبل الخلايا جونادوتروبي الغدة النخامية الأمامية ويفرز في نمط نابض مما يتطلب كثرة جمع عينات الدم لتقييم النبض. هذا لم يكن ممكناً في الفئران حتى الآونة الأخيرة، نتيجة لتطور مقايسة LH حساسية عالية ووتيرة النهوض في تقنية لجمع عينة صغيرة الحجم، وفي البداية وصف ستاين والزملاء. 1 هنا يمكننا وصف بروتوكول لجمع عينة الدم المحيطي متكررة من الفئران مع تأقلم معالجة كافية للكشف عن إفراز LH نابض. تفاصيل البروتوكول الحالي فترة تأقلم موسعة التي تتيح تقييم لنبضات قوية ومستمرة من ناحية اليسار على مدى ساعات عدة. في هذا البروتوكول، ويتم قص غيض الذيل ويتم جمع الدم من الذيل باستخدام ماصة اليد. لتقييم LH نابض في الفئران جوناديكتوميزيد، المسلسل عينات جمعت كل دقيقة 5-6 ل 90-180 دقيقة الأهم من ذلك، يمكن أن يتم جمع الدم وقياس نبضات قوية من ناحية اليسار في الفئران مستيقظا، ويتصرف بحرية، نظراً لمعالجة كافية التأقلم والجهود المبذولة للحد من الإجهاد البيئي. تأقلم كافية يمكن أن يتحقق في غضون 4-5 أسابيع قبل جمع الدم. ويبرز هذا البروتوكول السلف في منهجية لضمان جمع عينات الدم كله لتقييم الأنماط إفراز LH نابض على مدى ساعات عدة في الماوس، نموذج حيوان قوية لأبحاث الغدد الصم العصبية.

أنماط نبض LH الممثل من الفئران 4 مبينة في الشكل 1 (بيانات طبعها من يانغ et al.، 2017). وتم قياس LH في عينات الدم المتكرر لتحديد الاستجابة لتحدي إجهاد النفسي حاد. أوفاريكتوميزيد فئران C57/Bl6 الإناث الكبار والتعامل معها كما هو مفصل في هذا البروتوكول لجمع الدم المت...

Watch this Scientific Journal Video about Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion at JoVE.com

Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

نقدم هنا بروتوكول أخذ عينات دم الذيل-نصيحة لجمع العينات متكررة في الفئران غير المقيد. هذا الأسلوب مفيداً لتقييم أنماط من إفراز الهرمون نابض ويمكن تكييفه لتحليل للعوامل الأخرى المتداولة.

كثرة أخذ عينات الدم الذيل-نصيحة في الفئران للتقييم لإفراز الهرمون نابض

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing ...

frequent-tail-tip-blood-sampling-mice-for-assessment-pulsatile

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.7K Views.  University of California, San Diego School of Medicine. نقدم هنا بروتوكول أخذ عينات دم الذيل-نصيحة لجمع العينات متكررة في الفئران غير المقيد. هذا الأسلوب مفيداً لتقييم أنماط من إفراز الهرمون نابض ويمكن تكييفه لتحليل للعوامل الأخرى المتداولة.

Video: Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. The tail veins of mice are small, and it is sometimes difficult to obtain the required blood volume by conventional puncture methods. This study investigates the superiority of repeated blood sample collection from tail veins of mice through use of a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier (experimental group) compared to conventional blood sampling methods (conventional group), performed by beginners and experts, respectively. With the help of an eyeglass magnifier, a butterfly needle tip is inserted into the tail vein of each mouse in the experimental group. When the vein is penetrated successfully, a blood sample is collected in the vacuum collection tube by insertion of the rubber end of a butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The plunger is then used to collect blood without the help of the eyeglass magnifier in the conventional group. Success rates of blood sample collection by the beginners and experts were shown to be 70% vs. 100% (p &#60; 0.01) in the experimental group and 35% vs. 85% (p &#60; 0.01) in the conventional group. For both beginners and experts, puncture times required for obtaining required blood sample were significantly lower in the experimental group compared to the conventional group (2.40 &#177; 0.75 vs. 2.90 &#177; 0.31, p &#60; 0.05; 1.15 &#177; 0.37 vs. 1.55 &#177; 0.76, p &#60; 0.05). In conclusion, the presented blood sampling technique is feasible and easy to practice and enables frequent sampling of adequate blood volumes from non-anesthetized mice.&#160;

This study reports blood sampling from tail vein in mice using a vacuum extraction tube system with eyeglass magnifier. Our method is easy to practice and could be used for repeat blood sampling in mice.

جمع الدم معدلة من الأوردة ذيل الفئران غير تخديره بنظام جمع الدم فراغ والنظارات المكبر

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...

Behavior

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a lean PCOS-like mouse model that mimics women with PCOS is clinically meaningful. In this protocol, we describe such a model. By inserting a 4 mm length of DHT (dihydrotestosterone) crystal powder pellet (total length of pellet is 8 mm), and replacing it monthly, we are able to produce a PCOS-like mouse model with serum DHT levels 2 fold higher than mice not implanted with DHT (no-DHT). We observed reproductive and metabolic dysfunction without changing body weight and body composition. While exhibiting a high degree of infertility, a small subset of these PCOS-like female mice can get pregnant and their offspring show delayed puberty and increased testosterone as adults. This PCOS-like lean mouse model is a useful tool to study the pathophysiology of PCOS and the offspring from these PCOS-like dams.

We describe the development of a lean PCOS-like mouse model with&#160;dihydrotestosterone pellet to study the pathophysiology of PCOS and the offspring from these PCOS-like dams.

نموذج الماوس هايبراندروجينيك لدراسة متلازمة تكيس المبيض

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Developmental Biology

Handling Techniques to Reduce Stress in Mice

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects on&#160;animal well-being and can also be a confounding factor for experimental variables such as anxiety measures. Over the years, handling techniques that minimize handling-related stress have been developed with a particular focus on rats, and little attention to mice. However, it has been shown that mice can be habituated to manipulations using handling techniques. Habituating mice to handling reduces stress, facilitates routine handling, improves animal wellbeing, decreases data variability, and improves experimental reliability. Despite beneficial effects of handling, the tail-pick up approach, which is particularly stressful, is still widely used. This paper provides a detailed description and demonstration of a newly developed mouse-handling technique intended to minimize the stress experienced by the animal during human interaction. This manual technique is performed over 3 days (3D-handling technique) and focuses on the animal&#39;s capacity to habituate to the experimenter. This study also shows the effect of previously established tunnel handling techniques (using a polycarbonate tunnel) and the tail-pick up technique. Specifically studied are their effects on anxiety-like behaviors, using behavioral tests (Elevated-Plus Maze and Novelty Suppressed Feeding), voluntary interaction with experimenters and physiological measurement (corticosterone levels). The 3D-handling technique and the tunnel handling technique reduced anxiety-like phenotypes. In the first experiment, using 6-month-old male mice, the 3D-handling technique significantly improved experimenter interaction. In the second experiment, using 2.5-month-old female, it reduced corticosterone levels. As such, the 3D-handling is a useful approach in scenarios where interaction with the experimenter is required or preferred, or where tunnel handling may not be possible during the experiment.

This paper describes a handling technique in mice, the 3D-handling technique, which facilitates routine handling by reducing anxiety-like behaviors and presents details on two existing related techniques (tunnel and tail handling).

تقنيات التعامل مع الحد من الإجهاد في الفئران

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the production of new mouse models of disease and investigations into the hormonal regulation of tissue degeneration (or regeneration) following pathological challenge. The murine reproductive (or estrous) cycle is divided into 4 stages: proestrus, estrus, metestrus, and diestrus. Defined fluctuations in circulating levels of the ovarian steroids 17-&beta;-estradiol and progesterone, the gonadotropins luteinizing and follicle stimulating hormones, and the luteotropic hormone prolactin signal transition through these reproductive stages. Changes in cell typology within the murine vaginal canal reflect these underlying endocrine events. Daily assessment of the relative ratio of nucleated epithelial cells, cornified squamous epithelial cells, and leukocytes present in vaginal smears can be used to identify murine estrous stages. The degree of invasiveness, however, employed in collecting these samples can alter reproductive status and elicit an inflammatory response that can confound cytological assessment of smears. Here, we describe a simple, non-invasive protocol that can be used to determine the stage of the estrous cycle of a female mouse without altering her reproductive cycle. We detail how to differentiate between the four stages of the estrous cycle by collection and analysis of predominant cell typology in vaginal smears and we show how these changes can be interpreted with respect to endocrine status.

Here, we describe how to identify the stage of the murine reproductive (proestrus, estrus, metestrus, or diestrus) by simple, non-invasive collection and cytological assessment of vaginal smear samples. We further describe how vaginal cytology reflects circulating hormonal levels underlying transition through the murine reproductive cycle.

أداء الغسل المهبلي، كريستال تلوين بنفسجي، والتقييم النسيجية المهبلية لتحديد دورة دقي الماوس التدريج

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Biology

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

جمع الدم من خلال ثقب الوريد تحت الترقوة في الفئران

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Medicine

Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a class of many different molecules with many pathways involved in their synthesis and metabolism. A starting point for evaluating lipid hemostasis for nutrition and obesity research is needed. This paper describes three easy and accessible methods that require little expertise or practice to master, and that can be adapted by most labs to screen for lipid-metabolism abnormalities in mice. These methods are (1) measuring several fasting serum lipid molecules using commercial kits (2) assaying for dietary lipid-handling capability through an oral intralipid tolerance test, and (3) evaluating the response to a pharmaceutical compound, CL 316,243, in mice. Together, these methods will provide a high-level overview of lipid handling capability in mice.

This paper provides three easy and accessible assays for assessing lipid metabolism in mice.

تقييم قدرة معالجة الدهون في الجسم كله في الفئران

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a ...

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.

Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.

أخذ عينات الدم من الوريد الذيل الأفقي من الفئران

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

Evaluation of Hepatic Glucose Production in a Polycystic Ovary Syndrome Mouse Model

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is a common disease that results in disorders of glucose metabolism, such as insulin resistance and glucose intolerance. Dysregulated glucose metabolism is an important manifestation of the disease and is the key to its pathogenesis. Therefore, studies involving evaluation of glucose metabolism in PCOS are of utmost importance. Very few studies have quantified hepatic glucose production directly in PCOS models using non-radioactive glucose tracers. In this study, we discuss step-by-step instructions for the quantification of the rate of hepatic glucose production in a PCOS mouse model by measuring M+2 enrichment of [6,6-2H2]glucose, a stable isotopic glucose tracer, via gas chromatography - mass spectrometry (GCMS). This procedure involves creation of stable isotopic glucose tracer solution, use of tail vein catheter placement and infusion of the glucose tracer in both fasting and glucose-rich states in the same mouse in tandem. The enrichment of [6,6-2H2]glucose is measured using pentaacetate derivative in GCMS. This technique can be applied to a wide variety of studies involving direct measurement of the rate of hepatic glucose production.

This study describes the direct measurement of hepatic glucose production in a polycystic ovary syndrome mouse model by using a stable isotopic glucose tracer via tail vein in both fasting and glucose-rich states in tandem.

تقييم إنتاج الجلوكوز الكبدي في نموذج ماوس متلازمة المبيض المتعدد الكيسات

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is a common disease that results in disorders of glucose metabolism, such as insulin resistance and glucose intolerance. ...

تقنية DREADDs وأخذ عينات الدم الآلي

Remote Neuronal Activation Coupled with Automated Blood Sampling to Induce and Measure Circulating Luteinizing Hormone in Mice

Circulating luteinizing hormone (LH) levels are an essential index of the functioning of the hypothalamic-pituitary control of reproduction. The role of numerous inputs and neuronal populations in the modulation of LH release is still unknown. Measuring changes in LH levels in mice is often a challenge since they are easily disrupted by environmental stress. Current techniques to measure LH release and pulsatility require long-term training for mice to adapt to manipulation stress, certain restraint, the presence of the investigator, and working on individual animals, reducing its usefulness for many research questions.
This paper presents a technique to remotely activate specific neuronal populations using Designer Receptor Exclusively Activated by Designer Drugs (DREADDs) technology coupled with automated sequential blood sampling in conscious, freely moving, and undisturbed mice. We first describe the stereotaxic surgery protocol to deliver adeno-associated virus (AAV) vectors expressing DREADDs to specific neuronal populations. Next, we describe the protocol for carotid artery and jugular vein cannulation and postsurgical connection to the CULEX automated blood sampling system. Finally, we describe the protocol for clozapine-N-oxide intravenous injection for remote neuronal activation and automated blood collection. This technique allows for programmed automated sampling every 5 min or longer for a given period, coupled with intravenous substance injection at a desired time point or duration. Overall, we found this technique to be a powerful approach for research on neuroendocrine control.

تسليط الضوء على المؤلف: التسريب الآلي وأخذ عينات الدم للتحليل الهرموني الدقيق في الفئران الواعية

Luteinizing hormone (LH) pulsatility is a hallmark of reproductive function. We describe a protocol for remote activation of specific neuronal populations linked to serial automated blood collection. This technique allows timed hormonal modulation, multiplexing, and minimizing manipulation effects on LH levels in conscious freely moving, and undisturbed animals.

التنشيط العصبي عن بعد إلى جانب أخذ عينات الدم الآلي للحث على قياس هرمون اللوتين المتداول في الفئران وقياسه

Circulating luteinizing hormone (LH) levels are an essential index of the functioning of the hypothalamic-pituitary control of reproduction. The role of ...

كثرة أخذ عينات الدم الذيل-نصيحة في الفئران للتقييم لإفراز الهرمون نابض

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

جمع الدم معدلة من الأوردة ذيل الفئران غير تخديره بنظام جمع الدم فراغ والنظارات المكبر

نموذج الماوس هايبراندروجينيك لدراسة متلازمة تكيس المبيض

تقنيات التعامل مع الحد من الإجهاد في الفئران

أداء الغسل المهبلي، كريستال تلوين بنفسجي، والتقييم النسيجية المهبلية لتحديد دورة دقي الماوس التدريج

جمع الدم من خلال ثقب الوريد تحت الترقوة في الفئران

تقييم قدرة معالجة الدهون في الجسم كله في الفئران

أخذ عينات الدم من الوريد الذيل الأفقي من الفئران

تقييم إنتاج الجلوكوز الكبدي في نموذج ماوس متلازمة المبيض المتعدد الكيسات

التنشيط العصبي عن بعد إلى جانب أخذ عينات الدم الآلي للحث على قياس هرمون اللوتين المتداول في الفئران وقياسه

التنشيط العصبي عن بعد إلى جانب أخذ عينات الدم الآلي للحث على قياس هرمون اللوتين المتداول في الفئران وقياسه