يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الاستنساخ. والغدد الصماء. وتنطبق على دراسة متلازمة المبيض المتعدد الكيسات أو متلازمة تكيس المبايض وفرط الاندروجين.
وميزة هذا technic هو أنه يسهل متسقة, موحد, الإفراج عن المدى الطويل من الهرمونات بطريقة فعالة مكلفة. JHUs علاج الإجراء سيكون بينغ شيويه ، وهو فني من مختبري. لإعداد ديهدروتستوسترون أو دهت بيليه، استخدم شفرة حلاقة لقطع قطعة 15 ملليمتر من أنابيب السيليكون.
واستخدم حقنة ثلاثية المليلتر مجهزة بإبرة قياس حادة 20 لحقن السيليكون اللاصق الطبي من 2 إلى 5 ملليمترات في نهاية واحدة من الأنبوب. السماح لتجفيف الأنابيب بين عشية وضحاها. وتحقق من فقاعات الهواء على نهاية مختومة.
ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة صب مسحوق DHT في زورق من البلاستيك في flowhood. اعجاب فتح نهاية لاصقة توج أنبوب في مسحوق. باستخدام مشبك ورق مُستقيم كبير، قم بتقبيد المسحوق إلى أسفل الأنبوب، حتى يصل DHT إلى العمق التجريبي المناسب.
ثم ختم الجانب المفتوح من الأنبوب مع السيليكون بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، وقطع كل جانب مختومة للحصول على طول اثنين ملليمتر من السيليكون على جانبي DHT ولا الكريات التحكم DHT. ثم تخزين الكريات في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر ملفوفة مع احباط في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر.
ل PCOS نموذج الماوس جيل موازين تصل إلى 20 دهت أو الكريات التحكم في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر منفصلة تحتوي على 30 ملليلتر من 0.9 في المئة ملحي لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية. في اليوم التالي، تأكيد عدم الاستجابة لقرصة إصبع في تخدير شهرين فأر أنثى من العمر واستخدام الشاش العقيم لإدارة التتابع Povidone-اليود و 70 في المئة الإيثينول الدعك إلى منطقة الجراحة. بعد ذلك، قم بعمل شق من خمسة ملليمترات من خلال الجلد بالقرب من الرقبة.
واستخدم 10 مقياس trocar لجعل نفق 15 ملليمتر في الاتجاه الرسترال. استخدام trocar لإدخال بيليه dorsally في النفق وختم شق مع لاصق الجراحية. يدويا تقريب حواف الجرح مع ملقط واستخدام ضربات بالفرشاة لطيف لتطبيق ثلاث طبقات رقيقة من لاصق السائل إلى سنتيمتر واحد من كل جانب من حواف الجرح معارضة.
ثم ضع الفأرة وحدها في قفص على وسادة الحرارة مع مراقبة حتى إعادة شغل كامل. استبدال بيليه كل أربعة أسابيع للحفاظ على مستوى ثابت من التعرض للاندروجين. بعد ثلاثة أيام من إدخال بيليه، استخدم ماصة P10 لبخ عشرة ميكرولترات من المالحة العقيمة في تجويف المهبل واستخدام طرف ماصة لاسترداد الملحية على الفور.
انشر عينة الخلية الملوحة المهبلية على شريحة مسمّاة. والسماح للملوحة لتجف في درجة حرارة الغرفة. إصلاح الشرائح المجففة في حاوية من 100 في المئة ethynol لمدة خمس دقائق على الأقل.
ثم وصمة عار الشرائح لمدة دقيقة واحدة كل في المخزن المؤقت B وC العازلة من مجموعة تلوين dif سريعة. في نهاية حضانة C العازلة غسل الشرائح مع مياه الصنبور لمدة ثلاث ثوان وتجفيفها في درجة حرارة الغرفة. لتحديد estrous عرض دوري الشرائح تحت الهدف عشر مرات من المجهر الخفيف.
حساب الأيام في كل مرحلة والقسمة على إجمالي عدد الأيام لحساب النسبة المئوية للوقت في كل مرحلة. لاختبار تحمل الجلوكوز، 20 يوما DHT الإدراج، صيام الفئران بين عشية وضحاها. وزن الفئران في صباح اليوم التالي، واستخدام glucometer وشرائط اختبار لقياس مستوى السكر في الدم في الوريد الذيل.
حقن الفئران مع غرامين لكل كيلوغرام من وزن الجسم 20 في المئة دكستروز. ثم قياس مستوى الجلوكوز من العينات الدم الذيل الوريدي في 15, 30, 60, 90, 120 دقيقة بعد إدارة دكستروز. للحصول على ذرية أنثى من DHT إدراج السيدات، حرك الماوس الإناث لاختبارها في القفص مع ذكر الخصبة ثبت في اليوم 15، بعد إدخال بيليه.
توثيق وزن الجسم dames كل أسبوع لتحديد ما إذا كان الماوس هو حامل. في اليوم التالي للولادة سبعة، تراجع تلميح lancet في لصق الوشم ووضع علامة كل الجرو مع وشم على إصبع الاصبع. وزن الفئران ملحوظ كل سبعة أيام حتى 70 يوما من العمر.
بين تاريخ ما بعد الولادة 12 إلى 16، الأذن لكمة الفئران لترقيمها وفقا للنظام كما هو موضح في الشكل. لتمييز الجنس، قم بفحص الجانب البطني لكل فأرة ذات علامات. سيكون لدى الإناث حلمات مرئية.
لجمع عينات الدم لمختلف التحليلات المصب استخدام لانسيت لجمع حجم التجريبية التقريبية من الدم بين تسعة وعشرة صباحا عن طريق نزيف الوريد تحت المنازل. وطاردة مركزية العينات للسماح بجمع المصل. ثم تخزين عينات الأمصال في أنابيب أجهزة الطرد المركزي الصغرى 1.5 ملليلتر في ناقص 80 درجة مئوية حتى تحليلها.
لتقييم سن البلوغ في النسل الأنثوي DHT ، كل يوم بعد الفوم في يوم 21 بعد الولادة ، تحقق من الفتحة المهبلية عن طريق الفحص البصري. واستخدام الكوادر لقياس المسافة التناسلية للأنو. على الرغم من أن القيم المطلقة لمصل DHT تختلف بين قياس الطيف الشامل وتحليل إليسا، فإن التغيير الشعبي النسبي لـ DHT مقابل الإدراج غير DHT مشابه من كل من المقايسات وعبر التجارب.
يتم زيادة مستويات DHT بشكل كبير من مرحلة ما قبل الحمل من خلال الحمل في كل من DHT ولا الفئران DHT. ومع ذلك، مستويات DHT هي مزدوجة أعلى في الفئران DHT مقارنة مع عدم وجود الفئران DHT في كل من نقاط الوقت قبل الحمل والحملي. تظهر بنات DHT الكبار اختلافات في الوظيفة الإنجابية.
على سبيل المثال ، تعطلت دوري eestrous بالمقارنة مع الكبار لا بنات DHT تعاني من أوقات أطول بكثير في ميتستروس يموت وأقل من الوقت في الموالية esterous وestrous. أثناء محاولة هذا الإجراء من المهم أن نتذكر لاحتضان الكريات لمدة 24 ساعة قبل أن يتم استخدامها للإفراج عن هرمون موحد. بعد هذا الإجراء، يمكن أيضا فحص العواقب الإنجابية والأيضية للتعرض DHT.
بعد تطورها ، مهد هذا التقني الطريق للباحثين في مجال علم الغدد التناسلية وتفاعلات الجنين الأم لدراسة متلازمة تكيس المُتَسَنّى وتأثير فرط الاندروجين المنخفض في الفئران الأنثوية. لا تنس أن العمل مع DHT يمكن أن تكون خطرة للغاية والاحتياطات مثل ارتداء القفازات وقناع ونظارات واقية، والعمل في غطاء واقية من السلامة الحيوية، وينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
