نشكر فرجينيا دوهرتي وJunmei ياو لتقديم المساعدة التقنية. وقد تم تمويل هذا البحث من قبل NIMH (R01 MH084966)، ومكتب أبحاث الجيش الأمريكي وكالة مشاريع أبحاث الدفاع المتقدمة (منح W911NF-10-1-0059) إلى KAG.

وقد أجريت التجارب باستخدام كل الذكور البالغين لونغ إيفانس الفئران. وكانت جميع الإجراءات وفقا لالمعاهد الوطنية الأميركية للصحة (NIH) دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وتمت الموافقة من قبل لجنة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام من معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا ورعاية الحيوان ومكتب مراجعة استخدام وUSAMRMC. 1. إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Heparinise القسطرة والمحاقن عن طريق وضع إبرة محمية في 500 أنبوب ميكرولتر تحتوي على الهيبارين (USP 1000 وحدة / مل) ثم الشفط وطرد حل الهيبارين عن طريق إبرة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق القسطرة فراشة للحقنة. الحفاظ على الدرع خلال إبرة القسطرة لحماية طرف حاد من التلف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب وحدة من الهيبارين التي هي أكبر قليلا من حجم الدم التي سيتم جمعها. فصل حقنة وملئه بالهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة إرفاق المحقنة إلى القسطرة واستخدامالهواء لطرد حل الهيبارين الزائد. ضمان تتبع فقط تبقى المبالغ في الأنابيب، والإبرة، والمحاقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القسطرة العقيمة، مع الحقنة لا تزال تعلق، على سطح معقم. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين بسرعة الفئران في قطعة قماش نظيفة ضمان fore- وhindpaws هي في وضع مريح وتنفس غير مقيد. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين التفاف مع هوك وحلقة الشريط. تأكد من أن الأعضاء التناسلية الخارجية لا تتقلص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هل لديك مساعد بلطف وكبح جماح بحزم الفئران (البطن وقاعدة الذيل) على سطح العمل الصلبة مع ذيل شنقا قبالة حافة العداد. </li></ol></li></ol> أخذ العينات 2. الدم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزج الذيل في 42 ° C الماء لمدة 40-50 ثانية لتمدد الأوعية الدموية وتجف الذيل مع منشفة ورقية. تحديد موقع الوريد الذيل إلى أن نزفت (تدوير الجسم كله مع الذيل لمنع التواء الذيل). ملاحظة: الاحترار كاف من الذيل هو أمر حاسم لcollectio السريعن لعينة الدم. إذا تم مقيدة الأوعية الدموية، تحديد المكان المناسب للقسطرة أمر صعب، ويقل تدفق الدم إلى حد كبير. وسادة التدفئة يمكن أن تستخدم كبديل للمياه الغمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد نقطة أخذ العينات. ملاحظة: الشريان تقع على طول الجانب منتصف الظهري من الذيل. لا تستخدم هذا لأخذ العينات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استهداف إما أوردة الذيل اليسار واليمين التي تكمن الوحشي للشريان. تصبغ الذيل، والذي يختلف من التوتر ويزيد مع التقدم في السن، قد تخفي بعض الأوعية الدموية. استهداف جزء من الوريد في الجزء السفلي من الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح المنطقة المستهدفة مع 2٪ الكلورهيكسيدين محلول مطهر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلق ضغط سلبي في حقنة والقسطرة عن طريق سحب الغواص من الصفر إلى ما يقرب من 50 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد ذيل بلطف وبحزم بالقرب من الحافة للحفاظ على الذيل مباشرة في جميع أنحاء جمع العينات. ضمان تدفق الدم لا المغطي من قبل قبضة ضيقة للغاية.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج ببطء قسطرة في الوريد بزاوية حادة حوالي 5 سم من طرف الذيل. عندما يتم اختراق الوريد، وتدفق الدم إلى القسطرة. سحب ببطء المكبس من حقنة لجمع الصوت المطلوب بمعدل ثابت (~ 20 ميكرولتر لكل ثانية). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التشاور مع الموظفين البيطريين للحصول على معلومات حول حجم الدم الأقصى التي يمكن جمعها. الحد الأقصى لمقدار الدم الذي ينبغي جمع يعتمد على الوزن والحالة الصحية من الفئران. لا تسحب أكثر من 15٪ من إجمالي حجم الدم في فترة 14 يوم. ملاحظة: الدم هو أكثر بكثير من الصعب جمع من الحيوانات التي جرى التشديد تماما في الدقائق السابقة لجمع العينات لأن هرمونات التوتر انقباض الأوعية الدموية. على سبيل المثال، نقل قفص المنزل فأر إلى غرفة جديدة، مع عدة دقائق للالتفاف الحيوان، أو الإدراج المتكرر لقسطرة في الوريد من المحتمل أن تحدث استجابة للضغوط الحادة جميع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسهيل الدم ..تدفق د كتبها &#39;حلب&#39; الوريد. تشغيل الاصبع على طول الوريد، من القاعدة نحو طرف الذيل، ولكن يبقى أكثر من 2 سم من غيض من إبرة أو القسطرة قد تصبح طردت من الوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا الدم لا يمكن جمعها بنجاح من موقع الأولي من اختراق القسطرة، إعادة ادخال الإبرة في أعلى الوريد. إذا تم جمع الدم في موقع الأولي، وإعادة الضغط على إبرة عن طريق قطع وثم إعادة توصيل القسطرة والمحاقن مسبقة لإعادة الإدراج في الوريد. بشكل عام، وتجنب الاختراقات إضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما اختراقات متعددة يمكن أن يسبب انهيار الوريد الذيل، التي يتم فيها قطع وصول الدم الى الذيل قبالة والأنسجة الرخوة ذيل يصبح necrotized، الموت ببطء الفئران إذا كان هناك ذيل انهيار الوريد. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم جمعها حجم العينة المناسب، والإفراج عن الضغط في حقنة عن طريق قطع وإعادة توصيل القسطرة. نضح باستخدام قليلا على المكبس حقنة (~ 50 &amp; #181؛ ل)، وسحب الإبرة من الوريد. ملاحظة: إذا تم سحب الإبرة دون الإفراج عن أول الضغط في الحقنة، والدم يتقطر من الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق لفترة وجيزة الضغط على الموقع الإدراج لوقف النزيف، ومسح المنطقة بمحلول مطهر. عودة الفئران إلى قفص وطنه. </li></ol> 3. تجهيز عينة من الدم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح الهواء لضمان عدم بقاء أي الدموية داخل إبرة القسطرة، واستخدام المقص لقطع أنابيب القسطرة فوق الإبرة. طرد الدم إلى العقيمة 1.5 مل أنبوب microcentrifuge. ملاحظة: إذا تم دفع الدم من خلال إبرة، قد يسبب قوة القص خلايا الدم الحمراء للتمزق التي يمكن أن تتداخل مع العديد من المقايسات المصب. إزالة الإبرة لتجنب انحلال الدم. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجمع بلازما الدم، وأنابيب استخدام التي تحتوي على EDTA كمضاد للتجلط (هنا، استخدم 10 ميكرولتر من 0.1 M EDTA عن 200-400 ميكرولتر من الدم؛ وضمان تركيز EDTA المستخدمة لا تتدخل ثإيث فحص المصب) ومكان على الجليد. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور عينات دم كاملة في 2100 x ج في أجهزة الطرد المركزي المبردة (4 درجة مئوية) لمدة 10 دقيقة في غضون 10 دقيقة من جمع. أزل البلازما، وتجنب إزعاج طبقات خلايا الدم الحمراء والبيضاء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجمع عينات من مصل الدم، وعينات من المكان (دون تخثر) في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى 30 دقيقة لتمكين التخثر. تدور أنابيب جمع في أجهزة الطرد المركزي المبردة (4 ° C) في 2000 ز س. ويمكن بعد ذلك مزال المصل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام العينات على الفور، أو تخزينها في -80 درجة مئوية لمدة سنة واحدة. </li></ol>

<ol>
	<li>Vausort, M., Wagner, D. R., Devaux, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+Noncoding+RNAs+in+Patients+with+Acute+Myocardial+Infarction.">Long Noncoding RNAs in Patients with Acute Myocardial Infarction.</a> Circ Res. 115 (7), 668-677 (2014).</li><li>Shah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+for+Early+Detection+of+Colorectal+Cancer+and+Polyps:+Systematic+Review.">Biomarkers for Early Detection of Colorectal Cancer and Polyps: Systematic Review.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 23 (9), 1712-1728 (2014).</li><li>Chan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+blood-based+protein+biomarker+strategies+in+the+study+of+psychiatric+disorders.">Applications of blood-based protein biomarker strategies in the study of psychiatric disorders.</a> Prog Neurobiol. , (2014).</li><li>Cao, L., Li, L., Lin, D., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+induces+learning+impairment+that+is+mediated+by+interleukin+1beta+in+rodents.">Isoflurane induces learning impairment that is mediated by interleukin 1beta in rodents.</a> PLoS One. 7 (12), e51431 (2012).</li><li>Culley, D. J., Baxter, M. G., Yukhananov, R., Crosby, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+impairment+of+acquisition+of+a+spatial+memory+task+following+isoflurane-nitrous+oxide+anesthesia+in+rats.">Long-term impairment of acquisition of a spatial memory task following isoflurane-nitrous oxide anesthesia in rats.</a> Anesthesiology. 100 (2), 309-314 (2004).</li><li>Vahl, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+ACTH+and+corticosterone+sampling+methods+in+rats.">Comparative analysis of ACTH and corticosterone sampling methods in rats.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (5), E823-E828 (2005).</li><li>Kalinichenko, L. S., Koplik, E. V., Pertsov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+profile+of+peripheral+blood+in+rats+with+various+behavioral+characteristics+during+acute+emotional+stress.">Cytokine profile of peripheral blood in rats with various behavioral characteristics during acute emotional stress.</a> Bull Exp Biol Med. 156 (4), 441-444 (2014).</li><li>McEwen, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+effects+of+stress+hormones+in+health+and+disease:+Understanding+the+protective+and+damaging+effects+of+stress+and+stress+mediators.">Central effects of stress hormones in health and disease: Understanding the protective and damaging effects of stress and stress mediators.</a> Eur J Pharmacol. 583 (2-3), 174-185 (2008).</li><li>Sanchez, A., Toledo-Pinto, E. A., Menezes, M. L., Pereira, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+norepinephrine+and+epinephrine+concentrations+in+adrenal+gland+of+the+rats+submitted+to+acute+immobilization+stress.">Changes in norepinephrine and epinephrine concentrations in adrenal gland of the rats submitted to acute immobilization stress.</a> Pharmacol Res. 48 (6), 607-613 (2003).</li><li>Meyer, R. M., Burgos-Robles, A., Liu, E., Correia, S. S., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+ghrelin-growth+hormone+axis+drives+stress-induced+vulnerability+to+enhanced+fear.">A ghrelin-growth hormone axis drives stress-induced vulnerability to enhanced fear.</a> Mol Psychiatry. , (2013).</li><li>Knoll, A. T., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynorphin,+stress,+and+depression.">Dynorphin, stress, and depression.</a> Brain Res. 1314 (56-73), (2010).</li><li>Harvey, B. H., Brand, L., Jeeva, Z., Stein, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical/hippocampal+monoamines,+HPA-axis+changes+and+aversive+behavior+following+stress+and+restress+in+an+animal+model+of+post-traumatic+stress+disorder.">Cortical/hippocampal monoamines, HPA-axis changes and aversive behavior following stress and restress in an animal model of post-traumatic stress disorder.</a> Physiol Behav. 87 (5), 881-890 (2006).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

هنا، نحن تصف الإجراء سريع وبسيط للحصول على عينة من الدم من الفئران التي تقدم مزايا هامة على التقنيات الأخرى المستخدمة بشكل شائع. أولا، أنها لا تتطلب التخدير، على النقيض من أخذ العينات من حبل الوريد أو الجيوب الأنفية retroorbital. عندما يتم جمع عينات الدم المحيطة الإجراءات السلوكية، إدارة التخدير غير مرغوب فيها لأنها يمكن أن تتداخل مع التعلم والذاكرة 4،5. ثانيا، لأنه يتيح القدرة على جمع كميات أكبر من الدم تقنيات بزل الوريد أخرى، مثل جمع من الأوردة دواسة الصافن أو الظهرية. باستخدام تقنية الموضحة هنا، ما يصل الى 1.5 مل من الدم يمكن جمعها من الفئران عند نقطة زمنية واحدة، وبلغ حجم التداول الذي يسمح بسهولة فحوصات متعددة ليتم تشغيلها في نفس الوقت. أخيرا، هذا الإجراء يقلل من احتمال حدوث ضرر الأنسجة مقارنة بتر ذيل طرف أو نزيف retroorbital. استخدام هذا الإجراء يسهل الامتثال لW الحيوانقانون elfare ودليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، والتي تتطلب التقليل من الألم والمعاناة التي تنجم عن الإجراءات المخبرية التي أجريت على الحيوانات. فمن المستحسن أن المحققين جديد إلى هذا الأسلوب ممارسة أساليب ضبط النفس والذيل النزيف من أجل تقليل الوقت الذي يتم تقييد حيوانات التجارب. الدم التي تم جمعها في أقل من 3 دقائق من بدء ضبط النفس ويوفر أفضل النتائج. بروتوكول الموصوفة هنا يمكن أن تستخدم لأخذ عينات 1-4 مرات في الأسبوع، ولكن ليس أكثر من مرتين في اليوم الواحد. بينما مجموعات الدم المتكرر يمكن القيام بها، ومواقع أخذ العينات المختلفة تتحرك صعودا من قاعدة الذيل يجب استخدام، ويجب أن يكون بالتناوب الأوردة ذيل اليسار واليمين كمواقع أخذ العينات. حجم الدم الكلي من القوارض 6-7٪ من وزن الجسم، ويجب أن تجمع ما لا يزيد عن 15٪ من حجم الدم الكلي خلال فترة أسبوع 2. مصل الدمأو يضم البلازما حوالي 40-60٪ من حجم العينة التي تم جمعها. اخذ عينات من الدم عبر الأوردة الذيل الأفقي ويمكن أيضا أن يؤديها في الماوس كما هو موضح هنا مع بعض التعديلات الطفيفة. أولا، يمكن استخدام مقياس صغير فقط (27 G) القسطرة. الثانية، فمن المستحسن استخدام رادع أنبوب، بدلا من التفاف، لشل حركة الفئران. حجم الدم التي يمكن الحصول عليها من الماوس باستخدام بزل الوريد من حزمة الأوعية الدموية تحت الفك السفلي (200-500 ميكرولتر) أكبر مما يمكن جمعها بأمان من الوريد ذيل (200 ميكرولتر كحد أقصى). لأن أخذ عينات الدم من الحزمة الوعائية تحت الفك السفلي يتطلب الحد الأدنى من ضبط النفس وربما تسفر عن المزيد من الدم، وهذا هو الطريق المفضل لأخذ العينات في الماوس. والسرعة التي قد يتم تنفيذ هذا الإجراء، جنبا إلى جنب مع طبيعته الغازية الحد الأدنى، كما يقلل من الاضطراب المحتملة للتدابير القائمة على الدم عن طريق الاستجابة للضغط النفسي الحاد 6. الالاستجابة للضغط النفسي الحاد يمكن أن يغير مستويات تداول العديد من الجزيئات، بما في ذلك المحفزة وغيرها من عوامل المناعة النشطة 7، الهرمونات من محور الغدة النخامية، الغدة الكظرية 8، الهرمونات في الجهاز العصبي الودي 9، جريلين 10، الأفيونيات الذاتية 11، الدوبامين، و السيروتونين 12. وإذا رغبت يستريح تعميم تدابير من هذه الجزيئات أو غيرها التي تنظمها هذه الجزيئات، فمن المهم للحد من الاستجابة للضغط النفسي، والتي يتم تشغيلها ضمن اقل من دقيقة من بداية التعرض للإجهاد. استجابات التوتر لا يغير فقط في تكوين الدم، ولكن أيضا تمثل عقبة فنية لأخذ عينات الدم بسبب انقباض الأوعية الدموية عن طريق زيادة الدافع من الجهاز العصبي الودي. يصبح من الصعب الحصول على زيادة تدفق الدم ثابتا من الفئران التي شن الاستجابة للضغط النفسي الحاد. لذلك، يجب أن تكون الشدة الحيوان قطرةأوتوماتيكية من أجل الحصول بسرعة العينات التي تعكس الحالة الفسيولوجية للاهتمام.

المؤشرات الحيوية التي تم الحصول عليها من دم توفر المفيد التشخيص، التنبؤية، وتقسيمها التدابير في سياقات السريرية عديدة، بما في ذلك أمراض القلب والأوعية الدموية 1، علوم السرطان 2، والمرض النفسي 3. أنها يمكن أن تستخدم أيضا في مجال العلوم الأساسية لتقييم &quot;الدولة&quot; للكائن الحي، بما في ذلك درجة من الجوع، والتهاب، أو الإجهاد الحاضر. يمكن أن تتأثر هذه التدابير من قبل المتغيرات التي قد تكون أو لا تكون حاسمة لمسألة الفائدة، بما في ذلك الوقت من اليوم الذي يتم الحصول على العينة ونوع الجنس من الموضوعات. ويمكن أيضا أن تتأثر من قبل الاجهاد الناجم خلال إجراءات أخذ عينات الدم نفسها. يمكن أن هرمونات التوتر والشعور بالألم يغير بسرعة تكوين الدم. القوارض هي الحيوانات المختبرية الأكثر شيوعا، ولقد تم تطوير أساليب متعددة لجمع الدم. الأسلوب الأمثل لأخذ عينات الدم يجب أن يكون الحد الأدنى الفيزيولوجيتأثير لتر على الحيوان، لا تحتاج إلى تخدير، والسماح أخذ العينات سريعة ومتكررة، وتوفير حجم الدم الكافي للعديد من التطبيقات المصب. تقنيات شعبية لجمع الدم مثل قسطرة للحبل الوريد أو بتر ذيل طرف لا تلبي هذه المعايير. والهدف من هذا البروتوكول هو لوصف تقنية اخذ عينات من الدم لاستخدامها في الفئران التي هي مرهقة الحد الأدنى، لا تتطلب التخدير، ويسمح لمجموعات الدم متعددة ضمن موضوع واحد، ويوفر حجم عينة كبيرة نسبيا بحيث فحوصات متعددة يمكن أداؤها على عينة واحدة. والهدف من هذه الطريقة هو الحصول على عينات الدم التي تتأثر الحد الأدنى من الاستجابة للضغط النفسي الحاد.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sodium heparin (1000 USP units/ml)</td>
			<td>Patternson Veterinary Supply</td>
			<td>25021040010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>JT Taylor</td>
			<td>JT2020-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermachlor Rinse-Chlorhexadine</td>
			<td>Butler Schein</td>
			<td>6356</td>
			<td>Topical antiseptic solution, 2% chlorhexidine gluconate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SURFLO Winged Infusion Sets, Terumo, butterfly catheters</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>TESV25BLK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Tuberculin 1cc syringes</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>BD309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>89202-682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 &#956;l microcentrifuge tubes</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>21150-330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, stainless steel, 5&#34;</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>82027-586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500ml plastic beaker</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>414004-149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean cloth wrap</td>
			<td>Butler Schein</td>
			<td>2993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Velcro tape, .75&#34; width</td>
			<td>Monoprice</td>
			<td>B004AF9II6</td>
			<td>Hook and loop tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>62344-641</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sampling blood from the lateral tail vein of the rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.

بلازما الدم التي تم جمعها من الوريد الذيل الأفقي كما هو موضح في البروتوكول يعطي عينة البلازما التي كانت شفافة والأصفر الشاحب في المظهر. كما هو مبين في الشكل 1، انحلال الدم في عينة يضفي صبغة حمراء لالبلازما. الاستجابة للضغط النفسي الحاد يمكن أن يغير بسرعة تكوين الدم. على سبيل المثال، يمكن تعميم تركيز الكورتيزون تزيد بشكل ملحوظ في غضون 10 دقيقة من التعرض للإجهاد، كما هو مبين في الشكل (2). المستويات القاعدية المنخفضة للكورتيزون التي تم الحصول عليها مع هذا الأسلوب قبل الضغوطات التعرض تكشف عن أن إجراءات أخذ العينات في حد ذاته ليس مصدرا هاما من مصادر التوتر. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig1.jpg" /> الشكل 1: يظهر مظهر نموذج (A) عينة hemolyzed. بعد الطرد المركزي، البلازما أو مصل طبقة (سطح تدل عليه AR الأسودصف) يبدو مشوبة مع الوردي أو الأحمر. الصبغات الداكنة تشير إلى مستويات أعلى من انحلال الدم. (B) بعد الطرد المركزي، وعينة تم جمعها بشكل صحيح يكون واضحا، والمظهر مصفر إلى الشريط العلوي (السطح الذي يشير إليه السهم الأسود)، والتي تتطابق مع البلازما غير hemolyzed أو مصل. عند إزالة هذه الطبقة، فمن المهم أن لا تخل الدم الكامل الأساسي، إما عن طريق دفع غيض ماصة في طبقة الدم الكامل أو عن طريق الشفط من الدم كله إلى الحافة. يجب التخلص من أي البلازما أو مصل ملوثة بالدم كله. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig2.jpg" /> الشكل 2: مرتفعة كورتيزون البلازما بسرعة بعد تجربة مرهقة تم الحصول على الدم من الوريد الذيل الأفقي من الإناث البالغات الفئران الطويل ايفانز قبل و10 دقيقة بعد التعرض ل4 نغمات (10 ثانية و 2 كيلو هرتز، 85 ديسيبل) المشارك إنهاء. مع فوtshocks (1 ثانية، و 350 أمبير). كان كورتيزون بلازما الدم في الأساس (290.4 ± 138.8 غ / مل) أقل بكثير من احظت مستويات 10 دقيقة بعد عرض الإجهاد footshock (2204.8 ± 454.5 غ / مل، ص = 0.02، ن = 4)، على النحو الذي يحدده ر تقرن -test. *، P &lt;0.05

Watch this Scientific Journal Video about Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat at JoVE.com

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.

أخذ عينات الدم من الوريد الذيل الأفقي من الفئران

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

sampling-blood-from-the-lateral-tail-vein-of-the-rat

Research

JoVE Journal

Biology

101.9K Views.  Massachusetts Institute of Technology. Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.

Video: Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture

Drawing blood from rodents is necessary for a large number of both in vitro and in vivo studies. Sites of blood draws are numerous in rodents: retro-orbital sinus, jugular vein, maxillary vein, saphenous vein, heart. Each technique has its advantages and disadvantages, and some are not approved any more in some countries (e.g., retro-orbital draws in Holland). A discussion of different techniques for drawing blood are available 1-3.
Here, we present two techniques for drawing blood from rats, each with its specific applications.
Blood draw from the saphenous vein, provided it is done properly, induces minimal distress in animals and does not require anesthesia. This technique allows repeated draws of small amounts of blood, such as needed for pharmacokinetic studies 4,5, determining plasma chemistry, or blood counts 6.
Cardiac puncture allows the collection of large amounts of blood from a single animal (up to 10 ml of blood can be drawn from a 150 g rat). This technique is therefore very useful as a terminal procedure when drawing blood from the saphenous would not provide a large enough sample. We use cardiac puncture when we need sufficient amounts of serum from a specific strain of rats to grow T lymphocyte lines in vitro 4-9.

Blood draws are necessary in a large number of studies, for example to study the pharmacokinetics profile of a compound. Here, we demonstrate how to draw blood from rats using two techniques: blood draw from the saphenous vein or by cardiac puncture.

سحب الدم من الفئران عن طريق الوريد الصافن والبزل القلب

Drawing blood from rodents is necessary for a large number of both in vitro and in vivo studies. Sites of blood draws are numerous in rodents: ...

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates micro-dissection of four major brain regions include olfactory bulb, frontal cortex, striatum and hippocampus in fresh rat brain tissue. Useful tips for quick removal of respective regions to avoid RNA and protein degradation of the tissue are given.

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates micro-dissection of four major brain regions include olfactory bulb, frontal cortex, striatum and hippocampus in fresh rat brain tissue. Useful tips for quick removal of respective regions to avoid RNA and protein degradation of the tissue are given.

الجزئي تشريح الدماغ الجرذ لاستخراج الحمض النووي الريبي أو البروتينات من منطقة الدماغ الخاصة

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates ...

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer and infections, but are also implicated in the early stages of pregnancy and transplant rejection. These cells are present in peripheral blood, from which they can be isolated. Cells can be isolated using either positive or negative selection. For positive selection we use antibodies directed to a surface marker present only on the cells of interest whereas for negative selection we use cocktails of antibodies targeted to surface markers present on all cells but the cells of interest. This latter technique presents the advantage of leaving the cells of interest free of antibodies, thereby reducing the risk of unwanted cell activation or differenciation. In this video-protocol we demonstrate how to separate NK cells from human blood by negative selection, using the RosetteSep kit from StemCell technologies. The procedure involves obtaining human peripheral blood (under an institutional review board-approved protocol to protect the human subjects) and mixing it with a cocktail of antibodies that will bind to markers absent on NK cells, but present on all other mononuclear cells present in peripheral blood (e.g., T lymphocytes, monocytes...). The antibodies present in the cocktail are conjugated to antibodies directed to glycophorin A on erythrocytes. All unwanted cells and red blood cells will therefore be trapped in complexes. The mix of blood and antibody cocktail is then diluted, overlayed on a Histopaque gradient, and centrifuged. NK cells (&gt;80% pure) can be collected at the interface between the Histopaque and the diluted plasma. Similar cocktails are available for enrichment of other cell populations, such as human T lymphocytes.

Natural killer cells are a small population of lymphocytes. Here we show how to isolate these cells from human blood by negative selection, using a kit from StemCell Technologies. The cells obtained are viable and untouched by antibodies, and therefore ready to be used for a number of procedures.

تخصيب خلايا NK من دم الانسان مع مجموعة من تقنيات RosetteSep StemCell

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

Blood Collection from the American Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus

The horseshoe crab has the best-characterized immune system of any long-lived invertebrate. The study of immunity in horseshoe crabs has been facilitated by the ease in collecting large volumes of blood and from the simplicity of the blood. Horseshoe crabs show only a single cell type in the general circulation, the granular amebocyte. The plasma has the salt content of sea water and only three abundant proteins, hemocyanin, the respiratory protein, the C-reactive proteins, which function in the cytolytic destruction of foreign cells, including bacterial cells, and &alpha;2-macroglobulin, which inhibits the proteases of invading pathogens. Blood is collected by direct cardiac puncture under conditions that minimize contamination by lipopolysaccharide (a.k.a., endotoxin, LPS), a product of the Gram-negative bacteria. A large animal can yield 200 - 400 mL of blood. For the study of the plasma, blood cells are immediately removed from the plasma by centrifugation and the plasma can then be fractionated into its constituent proteins. The blood cells are conveniently studied microscopically by collecting small volumes of blood into LPS-free isotonic saline (0.5 M NaCl) under conditions that permit direct microscopic examination by placing one of more LPS-free coverglasses on the culture dish surface, then mounting those coverglasses in simple observation chambers following cell attachment. A second preparation for direct observation is to collect 3 - 5 mL of blood in a LPS-free embryo dish and then explanting fragments of aggregated amebocytes to a chamber that sandwiches the tissue between a slide and a coverglass. In this preparation, the motile amebocytes migrate onto the coverglass surface, where they can readily be observed. The blood clotting system involves aggregation of amebocytes and the formation of an extracellular clot of a protein, coagulin, which is released from the secretory granules of the blood cells. Biochemical analysis of washed blood cells requires that aggregation and degranulation does not occur, which can be accomplished by collecting blood into 0.1 volumes of 2% Tween-20, 0.5 M LPS-free NaCl, followed by centrifugation of the cells and washing with 0.5 M NaCl.

The American horseshoe crab, Limulus polyphemus, is arguably the most convenient source for large quantities of blood of any invertebrate. The blood is simple in composition, with only one cell-type in the general circulation, the granular amebocyte, and only three abundant proteins in the plasma, hemocyanin, the C-reactive proteins, and &alpha;2-macroglobulin. Blood is collected from the heart and the blood cells and plasma are separated by centrifugation.

كوكتيل من الدم والسرطان حدوة الحصان الأميركي ، الليمول Polyphemus

The horseshoe crab has the best-characterized immune system of any long-lived invertebrate.  The study of immunity in horseshoe crabs has been facilitated ...

Preparation of Rat Tail Tendons for Biomechanical and Mechanobiological Studies

Rat tail tendons (RTTs) are a common biological model used in experimental in vitro studies in the fields of tendon physiology and tendinopathy. Working with those tissues is challenging because they are very fragile, and until now there was no rigorously detailed protocol for their isolation.
Faced with these challenges, we have developed methods and instruments to facilitate manipulation of RTTs and control tissue viability, sterility and integrity. This article describes the experimental procedures used to prepare RTTs for biomechanical and mechanobiological studies. Our work is divided into four main steps: extraction, cross-sectional area measurement, rinsing and loading into the bioreactor chamber.
At each step, all procedures, materials and manipulations are presented in detail so that they can be easily reproduced. Moreover, the specific instruments developed are presented: a manipulation plate used to segregate RTTs, an optic micrometer to position the tissue during the cross-sectional area measurement and an anchoring system to attach the RTTs onto a bioreactor.
Finally, we describe the results obtained after multiple tests to validate our methods. The viability, sterility and integrity evaluations demonstrate that our procedures are sufficiently rigorous for manipulations of fragile tissues such as rat tail tendons.

This article describes the experimental procedures used to prepare rat tail tendons for biomechanical and mechanobiological studies. Several features of the main steps in preparation are demonstrated, beginning with extraction, cross-sectional area measurement, rinsing and loading into the bioreactor chamber.

إعداد الأوتار ذيل فأر النشاط الحيوي للدراسات وMechanobiological

Rat tail tendons (RTTs) are a common biological model used in experimental in vitro studies in the fields of tendon physiology and tendinopathy. Working ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) have shown to be convenient, easy to obtain and culture, and thus are the most widely studied endothelial cells. However, for research focused on processes like angiogenesis, permeability or many others, microvascular endothelial cells (ECs) are a much more physiologically relevant model to study 2. Furthermore, ECs isolated from knockout mice provide a useful tool for analysis of protein function ex vivo. Several approaches to isolate and culture microvascular ECs of different origin have been reported to date 3-7, but consistent isolation and culture of pure ECs is still a major technical problem in many laboratories. Here, we provide a step-by-step protocol on a reliable and relatively simple method of isolating and culturing mouse lung endothelial cells (MLECs). In this approach, lung tissue obtained from 6- to 8-day old pups is first cut into pieces, digested with collagenase/dispase (C/D) solution and dispersed mechanically into single-cell suspension. MLECS are purified from cell suspension using positive selection with anti-PECAM-1 antibody conjugated to Dynabeads using a Magnetic Particle Concentrator (MPC). Such purified cells are cultured on gelatin-coated tissue culture (TC) dishes until they become confluent. At that point, cells are further purified using Dynabeads coupled to anti-ICAM-2 antibody. MLECs obtained with this protocol exhibit a cobblestone phenotype, as visualized by phase-contrast light microscopy, and their endothelial phenotype has been confirmed using FACS analysis with anti-VE-cadherin 8 and anti-VEGFR2 9 antibodies and immunofluorescent staining of VE-cadherin. In our hands, this two-step isolation procedure consistently and reliably yields a pure population of MLECs, which can be further cultured. This method will enable researchers to take advantage of the growing number of knockout and transgenic mice to directly correlate in vivo studies with results of in vitro experiments performed on isolated MLECs and thus help to reveal molecular mechanisms of vascular phenotypes observed in vivo.

Here, we describe a protocol for isolation and culture of murine pulmonary endothelial cells. This method comprises mechanic and enzymatic lung tissue dissociation as well as a 2-step purification process using anti-PECAM-1 and anti-ICAM-2 antibodies conjugated to magnetic beads, which produces a pure endothelial cell population of mostly microvascular origin.

العزلة والثقافة في الخلايا البطانية الرئوي من الفئران حديثي الولادة

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with real time imaging, it becomes feasible to determine permeability changes in individual pulmonary microvessels. Herein we describe steps to isolate rat lungs and perfuse them with autologous blood. Then, we outline steps to infuse fluorophores or agents via a microcatheter into a small lung region. Using these procedures described, we determined permeability increases in rat lung microvessels in response to infusions of bacterial lipopolysaccharide. The data revealed that lipopolysaccharide increased fluid leak across both venular and capillary microvessel segments. Thus, this method makes it possible to compare permeability responses among vascular segments and thus, define any heterogeneity in the response. While commonly used methods to define lung permeability require postprocessing of lung tissue samples, the use of real time imaging obviates this requirement as evident from the present method. Thus, the isolated lung preparation combined with real time imaging offers several advantages over traditional methods to determine lung microvascular permeability, yet is a straightforward method to develop and implement.

The isolated blood-perfused lung preparation makes it feasible to visualize microvessel networks on the lung surface. Here we describe an approach to quantify permeability of single microvessels in isolated lungs using real time fluorescence imaging.

قياس النفاذية في واحدة Microvessel المعزولة الجرذ إعداد الرئة perfused الدم

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

Non-Terminal Blood Sampling Techniques in Guinea Pigs

Guinea pigs possess several biological similarities to humans and are validated experimental animal models1-3. However, the use of guinea pigs currently represents a relatively narrow area of research and descriptive data on specific methodology is correspondingly scarce. The anatomical features of guinea pigs are slightly different from other rodent models, hence modulation of sampling techniques to accommodate for species-specific differences, e.g., compared to mice and rats, are necessary to obtain sufficient and high quality samples. As both long and short term in vivo studies often require repeated blood sampling the choice of technique should be well considered in order to reduce stress and discomfort in the animals but also to ensure survival as well as compliance with requirements of sample size and accessibility. Venous blood samples can be obtained at a number of sites in guinea pigs e.g., the saphenous and jugular veins, each technique containing both advantages and disadvantages4,5. Here, we present four different blood sampling techniques for either conscious or anaesthetized guinea pigs. The procedures are all non-terminal procedures provided that sample volumes and number of samples do not exceed guidelines for blood collection in laboratory animals6. All the described methods have been thoroughly tested and applied for repeated in vivo blood sampling in studies within our research facility.

Though a known model, the guinea pig currently represents a niche in experimental animal sciences and limited data is available on the execution of most procedures. Here we present four different approaches to non-terminal in vivo blood sampling techniques in either conscious or anaesthetized guinea pigs.

غير الطرفية تقنيات أخذ العينات الدم في غينيا الخنازير

Guinea pigs possess several biological similarities to humans and are validated experimental animal models1-3. However, the use of guinea pigs currently ...

Efficient iPS Cell Generation from Blood Using Episomes and HDAC Inhibitors

This manuscript illustrates a protocol for efficiently creating integration-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) from peripheral blood using episomal plasmids and histone deacetylase (HDAC) inhibitors. The advantages of this approach include: (1) the use of a minimal amount of peripheral blood as a source material; (2) nonintegrating reprogramming vectors; (3) a cost effective method for generating vector free iPSCs; (4) a single transfection; and (5) the use of small molecules to facilitate epigenetic reprogramming. Briefly, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are isolated from routine phlebotomy samples and then cultured in defined growth factors to yield a highly proliferative erythrocyte progenitor cell population that is remarkably amenable to reprogramming. Nonintegrating, nontransmissible episomal plasmids expressing OCT4, SOX2, KLF4, MYCL, LIN28A, and a p53 short hairpin (sh)RNA are introduced into the derived erythroblasts via a single nucleofection. Cotransfection of an episome that expresses enhanced green fluorescent protein (eGFP) allows for easy identification of transfected cells. A separate replication-deficient plasmid expressing Epstein-Barr nuclear antigen 1 (EBNA1) is also added to the reaction mixture for increased expression of episomal proteins. Transfected cells are then plated onto a layer of irradiated mouse embryonic fibroblasts (iMEFs) for continued reprogramming. As soon as iPSC-like colonies appear at about twelve days after nucleofection, HDAC inhibitors are added to the medium to facilitate epigenetic remodeling. We have found that the inclusion of HDAC inhibitors routinely increases the generation of fully reprogrammed iPSC colonies by 2 fold. Once iPSC colonies exhibit typical human embryonic stem cell (hESC) morphology, they are gently transferred to individual iMEF-coated tissue culture plates for continued growth and expansion.

Here we describe a protocol for generating human induced pluripotent stem cells from peripheral blood using an episome based reprogramming strategy and histone deacetylase inhibitors.

كفاءة الجذع الجيل خلية من الدم عن طريق Episomes وHDAC المانعون

This manuscript illustrates a protocol for efficiently creating integration-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) from peripheral blood using ...

Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for detecting the successful establishment of blood chimerism in parabionts by a caudal vein injection of glucose. Parabiotic mice were constructed. Glucose was injected into the donor mouse through the tail vein, and the fluctuation of blood glucose level was measured in both mice using a blood glucometer at different time points. Our results showed that after glucose injection, the blood glucose level in donor mice increased sharply after 1 min and decreased slowly thereafter. Meanwhile, the blood glucose level of the recipient mice peaked 15 min after injection. Similar results were obtained with Evans blue, used as a positive control for glucose. The synchronous fluctuation of blood glucose levels indicates that blood flow between the two mice was established successfully.

Here we describe a new method of detecting successful establishment of shared blood circulation of two parabionts through a caudal vein injection of glucose, which causes minimal damage and is not fatal to the parabionts.

الكشف عن إنشاء إمدادات الدم المشتركة في الفئران الباربايوتيك عن طريق حقن الجلوكوز في الوريد Caudal

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for ...