يمكن أن توفر هذه الطريقة معلومات هامة تتعلق الإيكولوجيا pupation من اليرقات أوراق الشاي، ectropis grisescens، مثل سلوكها pupation والناجية من الجراء استجابة لعوامل بيئية مختلفة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية، فإنه يسمح لك لاستخدام طريقة بسيطة مثل قياس تفضيل pupation ونجاح ظهور ectropis grisescens. للبدء، وقطع يطلق النار الطازجة من نباتات الشاي.
ثم تعبئة قارورة مثلثة 250 ملليلتر مع ماء الصنبور ووضع يطلق النار في القارورة. نقل ثلاثة إلى أربعة قارورة إلى حوض بلاستيكي. بعد ذلك، الإفراج 1، 000 إلى 2،000 اليرقات من مستعمرة مختبر E.grisescens على أوراق الشاي يطلق النار.
الحفاظ على اليرقات في ظروف المختبرات الخاضعة للرقابة. الحصول على اليرقات الناضجة الأخيرة التي تسقط من أوراق البراعم وتجول بنشاط على طول قاع الحوض. تعقيم التربة والرمال في فرن مجفف 80 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام.
ثم جفف التربة والرمال على درجة حرارة 50 درجة مئوية لعدة أسابيع. وتجفف عينات الركيزة بما فيه الكفاية عندما لا يتغير الوزن مع مرور الوقت. استخدام الحشرات خشبية وقذائف هاون لطحن التربة المجففة.
ثم غربلة الرمل والتربة الأرضية من خلال منخل ثلاثة ملليمترات. إضافة الكمية المطلوبة من الماء المقطر إلى أكياس مختومة تحتوي على ركائز وتخلط جيدا. بعد ذلك، استخدم أوراق PVC لتقسيم حاويات البولي بروبلين إلى ست غرف متساوية.
إصلاح أوراق PVC وختم الشقوق مع الغراء الساخن. بعد ذلك، ملء الغرف الست مع نفس النوع من الركيزة مع محتويات الرطوبة المختلفة. استخدام قطعة صغيرة من الشريط للصق أربع إلى ست قطع من الأوراق الطازجة إلى السطح الداخلي للغطاء من حاوية البولي بروبلين.
بعد ذلك ، حرر 30 يرقات ناضجة أخيرة على الأوراق التي تم لصقها على غطاء الحاوية ذات الحجرة. بعناية تحويل الغطاء أكثر وتغطية الحاوية. الحفاظ على الساحة bioassay في غرفة بيئية مع 14 إلى 10 ضوء / ضوء الظلام في 26 درجة مئوية.
في اليوم الخامس، عد عدد من pupae على سطح الركيزة في كل غرفة. تفكيك bioassay وفرز عدد من pupae. أولاً، استخدم أوراق PVC لتقسيم حاويات البولي بروبلين إلى أربع غرف.
ثم، إصلاح وختم أوراق PVC مع الغراء الساخن. تعبئة غرف الحاوية مع أربعة أنواع من الركيزة مع نفس محتوى الرطوبة وأوامر معين عشوائيا. ثم، استخدم الشريط للصق أوراق الشاي الطازجة إلى الغطاء قبل تحويله على الحاوية.
بعد ذلك ، نقل اليرقات إلى الأوراق وتسجيل وتحليل البيانات كما هو موضح في بروتوكول النص. بعد إعداد 12 من علاجات محتوى الرطوبة الركيزة ، أضف الركيزة إلى الحاويات البلاستيكية. ثم إطلاق سراح 15 يرقات ناضجة الأخيرة في الركيزة لكل ساحة.
الحفاظ على كل من الساحات bioassay في غرفة بيئية مع 14 إلى 10 ضوء / الظلام photoperiod في 26 درجة مئوية. في اليوم الثالث ، عد عدد من الخادر وأي يرقات ميتة على سطح الركيزة لكل ساحة. وأخيراً، سجل عدد البالغين الناشئين كل يوم حتى لا يظهر أي بالغ جديد لمدة 15 يوماً.
في هذا البروتوكول، تم استخدام الرطوبة والركيزة bioassays اختيار لدراسة تفضيل pupation من E.grisescens. وأظهرت bioassays اختيار الرطوبة أن المزيد من الأفراد pupated على أو داخل 5٪ و 35٪ رطوبة الرمال مقارنة مع 80٪ رطوبة الرمال. ومع ذلك، يفضل عدد أكبر بكثير من الأفراد على الـ pupate على التربة أو داخلها مع محتوى رطوبة متوسط.
كشفت bioassays اختيار الركيزة أن الرمال كان يفضل أكثر من قبل E.grisescens تحت ظروف الرطوبة 20٪، وتحت ظروف الرطوبة 80٪. ومع ذلك، لم يتم العثور على تفضيل التبّاين بين الركائز الأربعة تحت ظروف رطوبة 50٪. بعد التطوير ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم الحشرات لاستكشاف بيئة التبغ للعديد من الحشرات التي تُجرد التربة.
