이 방법은 차 잎 애벌레의 새끼 생태에 관한 중요한 정보를 제공 할 수 있습니다, 에트로피스 grisescens, 이러한 그들의 새끼 행동과 다른 환경 요인에 대한 응답으로 푸파 생존과 같은. 이 기술의 주요 장점은, 그것은 당신이 Ectropis grisescens의 pupation 환경 설정 및 출현 성공을 측정하는 등의 간단한 방법을 사용할 수 있습니다. 우선, 차 식물에서 신선한 싹을 잘라.
그런 다음 250 밀리리터 삼각형 플라스크를 수돗물로 채우고 싹을 플라스크에 넣습니다. 플라스크를 3~4개의 플라스크를 플라스틱 분지로 옮는다. 다음으로, 일래센의 실험실 식민지에서 1, 000에서 2, 000 애벌레를 차 싹의 잎에 방출한다.
통제된 실험실 조건에서 애벌레를 유지하십시오. 싹의 잎에서 떨어지는 성숙한 마지막 별 애벌레를 얻고 적극적으로 분지의 바닥을 따라 방황. 토양과 모래를 섭씨 80도 오븐 건조기에서 3일간 살균합니다.
그런 다음 몇 주 동안 50섭씨에서 토양과 모래를 모두 건조시다. 기판 샘플은 시간이 지남에 따라 무게가 변하지 않을 때 충분히 건조됩니다. 말린 토양을 갈기 위해 나무 유봉과 박격포를 사용합니다.
그런 다음 모래와 지상 토양을 3밀리미터 체로 체질합니다. 필요한 양의 증류수를 기판을 포함하는 밀봉된 가방에 넣고 철저히 섞습니다. 다음으로 PVC 시트를 사용하여 폴리프로필렌 용기를 6개의 동일한 챔버로 나눕니다.
PVC 시트를 고정하고 뜨거운 접착제로 균열을 밀봉합니다. 다음으로, 6개의 챔버를 동일한 유형의 기판으로 다른 수분 함량으로 채웁니다. 작은 테이프 조각을 사용하여 폴리 프로필렌 용기의 뚜껑 의 내부 표면에 신선한 잎 4 ~ 6 조각을 붙여 넣습니다.
다음으로, 챔버 용기의 뚜껑에 붙여진 잎에 성숙한 라스트 애벌레 30마리를 놓습니다. 뚜껑을 조심스럽게 뒤집어 용기를 덮습니다. 섭씨 26도에서 14~10광/어두운 광도가 있는 환경 챔버에서 바이오아세이 경기장을 유지합니다.
5일째에는 각 챔버의 기판 표면에 새끼의 수를 계산합니다. 바이오아세이를 해체하고 푸파의 수를 계산합니다. 먼저 PVC 시트를 사용하여 폴리프로필렌 용기를 4개의 챔버로 나눕니다.
그런 다음 뜨거운 접착제로 PVC 시트를 수정하고 밀봉하십시오. 용기의 챔버를 동일한 수분 함량과 무작위로 할당된 주문으로 4가지 유형의 기판으로 채웁니다. 그런 다음 테이프를 사용하여 신선한 차 잎을 뚜껑에 붙여 넣은 다음 용기에 뒤집어 놓습니다.
다음으로, 애벌레를 나뭇잎으로 옮기고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 데이터를 기록하고 분석합니다. 12기판 수분 함량 처리를 준비한 후, 플라스틱 용기에 기판을 추가합니다. 그런 다음 각 경기장의 기판에 15 성숙한 마지막 별 애벌레를 풀어 놓습니다.
섭씨 26도에서 14~10광/암흑 광도가 있는 환경 챔버의 각 바이오아세이 경기장을 유지합니다. 셋째 날에는 각 경기장의 기판 표면에 새끼와 죽은 애벌레의 수를 계산합니다. 마지막으로, 15일 동안 새로운 성인이 나오지 않고 매일 신흥 성인의 수를 기록합니다.
이 프로토콜에서, 수분 및 기질 선택 bioassays는 e.grisescens의 새끼 선호도를 연구하기 위하여 이용되었습니다. 수분 선택 바이오아세이는 80%의 수분 모래에 비해 5%와 35% 이내의 수분 모래에 더 많은 개인이 모여 있는 것으로 나타났다. 그러나, 훨씬 더 많은 개인 중간 수 분 함량으로 토양 또는 토양 내에서 새끼를 선호.
기판 선택 바이오아세이는 모래가 20%의 수분 조건하에서, 그리고 80% 수분 조건 하에서 E.grisescens에 의해 가장 선호되었다는 것을 밝혔습니다. 그러나 50%의 수분 조건에서 4개의 기판 중에는 새끼 선호도가 발견되지 않았다. 개발 후, 이 기술은 곤충학 분야의 연구원들이 많은 토양 을 푸핑 곤충의 새끼 생태를 탐구할 수있는 길을 열었습니다.