Este método pode fornecer informações importantes relacionadas à ecologia de pupation de lagartas de folhas de chá, ectropis grisescens, como seus comportamentos de pupação e a sobrevivência da pupae em resposta a diferentes fatores ambientais. A principal vantagem dessa técnica, permite que você use um método simples, como medir a preferência de pupação e o sucesso de emergência do Ectropis grisescens. Para começar, corte brotos frescos de plantas de chá.
Em seguida, encha um frasco triangular de 250 mililitros com água da torneira e coloque os tiros no frasco. Transfira de três a quatro frascos para uma bacia de plástico. Em seguida, solte 1.000 a 2.000 larvas de uma colônia de laboratório de E.grisescens nas folhas dos brotos de chá.
Mantenha as larvas em condições laboratoriais controladas. Obtenha as larvas maduras e de última instar que caem das folhas dos brotos e vagueie ativamente pelo fundo da bacia. Esterilize o solo e a areia em uma secadora de forno de 80 graus Celsius por três dias.
Em seguida, seque tanto o solo quanto a areia a 50 graus Celsius por várias semanas. As amostras de substrato são suficientemente secas quando o peso não muda ao longo do tempo. Use um pilão de madeira e argamassa para moer o solo seco.
Em seguida, peneirar a areia e o solo moído através de uma peneira de três milímetros. Adicione a quantidade necessária de água destilada aos sacos selados contendo os substratos e misture bem. Em seguida, use folhas de PVC para dividir recipientes de polipropileno em seis câmaras iguais.
Conserte as folhas de PVC e sele as rachaduras com cola quente. Em seguida, encha as seis câmaras com o mesmo tipo de substrato com diferentes conteúdos de umidade. Use pequenos pedaços de fita para colar de quatro a seis pedaços de folhas frescas na superfície interna da tampa do recipiente de polipropileno.
Em seguida, solte 30 larvas maduras de última instar nas folhas coladas na tampa do recipiente de câmara. Vire cuidadosamente a tampa e cubra o recipiente. Mantenha a arena de bioensaio em uma câmara ambiental com um fotoperíodo claro/escuro de 14 a 10 graus Celsius.
No quinto dia, conte o número de pupas na superfície do substrato em cada câmara. Desmonte o bioensa e conte o número de pupas. Primeiro, use folhas de PVC para dividir os recipientes de polipropileno em quatro câmaras.
Em seguida, fixar e selar as folhas de PVC com cola quente. Encha as câmaras do recipiente com quatro tipos de substrato com o mesmo teor de umidade e ordens atribuídas aleatoriamente. Em seguida, use fita para colar folhas de chá frescas na tampa antes de entregá-la ao recipiente.
Em seguida, transfira larvas para as folhas e registo e analise os dados conforme descrito no protocolo de texto. Após a preparação dos 12 tratamentos de teor de umidade do substrato, adicione o substrato aos recipientes plásticos. Em seguida, libere 15 larvas maduras de última instar no substrato de cada arena.
Mantenha cada uma das arenas de bioensaio em uma câmara ambiental com um fotoperíodo claro/escuro de 14 a 10 graus Celsius. No terceiro dia, conte o número de pupas e qualquer larva morta na superfície do substrato de cada arena. Finalmente, registo o número de adultos emergentes todos os dias até que nenhum novo adulto emerja por 15 dias.
Neste protocolo, foram utilizados bioensatos de escolha de umidade e substrato para estudar a preferência de pupação de E.grisescens. Os bioensaões de escolha da umidade mostraram que mais indivíduos filhotes na areia de 5% e 35% de umidade em comparação com a areia de 80% da umidade. No entanto, significativamente mais indivíduos preferiram pupate sobre ou dentro do solo com teor de umidade intermediário.
Os bioensaões de escolha de substrato revelaram que a areia era mais preferida pelos E.grisescens em condições de umidade de 20%, e sob condições de umidade de 80%. No entanto, não foi encontrada preferência de pupação entre os quatro substratos em condições de umidade de 50%. Após o desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores do campo da entomologia explorarem a ecologia da pupação de muitos insetos pupantes do solo.
