يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في علم الأحياء التطوري، مثل تطور التواصل الاجتماعي. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر أدلة مباشرة على شكل وجود العضلات المحاكاة. أنه يلغي التخمين في عملية تشريح، وأنه يحافظ على طبقات العضلات.
جنبا إلى جنب مع DiceCT، تشريح عكس هو معيار الذهب الجديد للتحقيق العضلات المحاكاة. للبدء، اتبع بروتوكول النص المصاحب لتثبيت العينة وإعدادها. ثم، نقل العينة إلى غطاء الدخان.
ثم شطف العينة لعدة ساعات في المياه الجارية. مرة واحدة وقد تم شطف العينة، بات يجف مع المناشف الورقية، ونقلها إلى محطة عمل. مع إزالة الدماغ وإزالة الكالفاريا الإفراط، وجعل شق واحد بالقرب من منطقة الغلابيلا من الجمجمة، وآخر على طول الجانب السدي من الجمجمة، حيث عظم الجمجمة سليمة.
Palpate لprotuberance القذالي الخارجي على حافة السد من الجمجمة. هذا يمثل المنطقة التي تلتقي فيها الجمجمة بالعمود الفقري. ثم استخدم مشرط وجعل شق خط الوسط، بدءا من protuberance القذالي الخارجي.
قطع العينة على ضوء الجداري والمنطقة الأمامية من الجمجمة. استمر ومرر فوق المنطقة المدارية بين العينين، أسفل منطقة الأنف، على طول الطريق عبر منطقة الأنف الخارجية بين الناريس. المقبل، وجعل قطع على الفك السفلي بين القناطر السفلي والمركزي، ونقل مشرط caudally نحو الترقوة.
عند هذه النقطة، اختر جانب واحد من قناع الوجه، والإفراج عنه من الجمجمة، وترك الجانب الآخر في مكانه. بدءا من منطقة القذالي، واستخدام مشرط لقطع قناع الوجه، بما في ذلك العضلات المحاكاة، بعيدا عن عظم القذالي من الجمجمة، وسحب القناع متشنجا ووميشوائيا. قطع العضلات occipitalis بعيدا عن الجمجمة، وترك كمية صغيرة من العضلات وراء على الجمجمة، بحيث لا يزال يمكن تصور المرفق، مرة واحدة وقد تم إزالة قناع الوجه.
من خلال ترك جزء من العضلات وراء على الجمجمة العظمية وcartilaginous، يمكن الحفاظ على المرفقات وتسجيلها في وقت لاحق. بمجرد ضرب الأذن الخارجية، حدد مكان العضلات العضلية. قطع من خلال هذه العضلات، بحيث يبقى جزء صغير من كل عضلة مع الجمجمة.
ثم، قطع من خلال الغضروف المرن ربط الأذن الخارجية إلى الجمجمة. الاستمرار في سحب قناع rostrally، والإفراج عن كل عضلة المحاكاة من الجمجمة، وترك جزء صغير من كل عضلة وراء على الجمجمة. بمجرد وجود قناع الوجه سليمة من جانب واحد من الجمجمة، والسماح لها بالجلوس مع العضلات المعرضة للهواء، لمدة ساعة إلى ثلاث ساعات، اعتمادا على حجم العينة.
هذا سوف يُضَم النسيج الضام على قناع الوجه، ويزيد من تباين اللون بين العضلات والنسيج الضام. مع التباين بين العضلات والأنسجة الضامة الآن تعزيز، استخدم عدد ثلاثة مشرط، ملقط، ومقص صغير لإزالة الأنسجة الضامة كافية، من أجل تصور العضلات. الطبقة السطحية من العضلات المحاكاة في هذا التشريح العكسي، ورفع بلطف وفصل الطبقة العميقة من العضلات من الطبقة السطحية، وإزالة الأنسجة الضامة المحيطة العضلات السطحية.
عند الانتهاء، والعودة قناع الوجه الناتج مرة أخرى إلى formalin. قد يتم إيقاف الإجراء هنا ، قبل الانتقال إلى مزيد من التشريح ، أو قبل الاستمرار في التلطيخ. في كل خطوة متدخلة، والسماح بوقت التجفيف كافية من قناع الوجه، بحيث يمكن تمييز الأنسجة الضامة بسهولة من الأنسجة العضلية.
من أجل أن يكون تصور العضلات المحاكاة باستخدام التصوير المقطعي ، وصمة عار الأقنعة باستخدام محلول اليود عن طريق وضع القناع في حل تلطيخ لوغول ، كما هو موضح في بروتوكول النص المرافق. تستغرق عملية التلطيخ عادة حوالي أسبوعين، في حل 1.75٪لوجول. ومع ذلك، يختلف هذا التوقيت، اعتمادا على عدة عوامل.
ويوصى المسح المتقطع مع التكيف مع تلطيخ يرافقه. بالنسبة للمسح المقطعي، قم أولاً بإعداد قناع الوجه باستخدام مسواك خشبية لتركيب قناع الوجه على مادة منخفضة الكثافة، مثل رغوة الأزهار. هذا سوف القضاء على أي التجاعيد في القناع، والحد من حركتها لأنها تجف قليلا أثناء المسح الضوئي.
بعد ذلك، ضع العينة في حاوية منخفضة الكثافة، وآمن بها في مكانها. بمجرد تأمين، ضع العينة في الماسح الضوئي، أغلق الباب، ودرّر الأشعة السينية. ثم قم بإعداد معلمات التصوير المقطعي المحوسب لإجراء فحص تصوير مقطعي عالي الدقة بالأشعة السينية.
باستخدام التباعد بين شريحة وبين مسافة بكسل من حوالي 0.05 ملليمتر لهذه التفحص، كما سيتم حجب كراسات صغيرة في دقة أقل. إذا كانت ملزمة غير قادر على أن تصور تماما، بسبب الإفراط في اإلحام، وضع قناع الوجه في حل إزالة وصمة عار مثل 10٪ formalin، أو 5٪ ثيوسلفات الصوديوم لإزالة بعض وصمة عار. بعد ضبط تلطيخ، مسح قناع الوجه مرة أخرى، والاستمرار في إجراء التعديلات اللازمة، حتى جميع كراسات قادرة على أن تكون تصور كامل.
باستخدام تشريح عكسي لإنشاء قناع الوجه، يمكن في بعض الأحيان أن ينظر إلى تمثيل أكمل من العضلات المحاكاة، مما كانت عليه في منهجية التشريح التقليدية. تعمل هذه الطريقة على مجموعة من أحجام الجسم، من الجسم الصغير الصغير من Marmoset، إلى الرئيسيات ذات الجسم الكبير مثل الشمبانزي. في الرئيسيات الصغيرة الجسم التي لها عضلات الوجه gracil، قد تكون بعض من العضلات الوجه لا يمكن تمييزها عن النسيج الضام المحيطة بها، ويمكن أن تضيع أثناء تشريح.
قد يؤدي وجود بقعة اليود، مثل لوغول، إلى تحسين التباين ويساعد على حل عضلات المحاكاة الفردية، وكذلك مُجاملات العضلات الفردية، وللمرة الأولى، الحصول على كميات كبيرة من العضلات من هذه العضلات. كما هو موضح هنا، بعض من العضلات الصغيرة جدا، المرتبطة الأذن الخارجية، واضحة للعيان في المسح. ليس من غير المألوف لهذه العضلات أن يغيب في بعض إجراءات التشريح العكسي, ربما بسبب صغر حجمها.
هذا جعل حجم ثلاثي الأبعاد يسمح لعتبة الحجم الأساسية ورسم خرائط اللون ، لتصور العضلات بسهولة أكبر ، من خلال الفحص المتقاطع وحده. هنا يمكنك أن ترى أن كراسات العضلات الفردية واضحة للعيان في المقطع المقطع، مما يجعل تشريح الرقمية مجدية. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نضع في اعتبارنا، أن عليك التحرك ببطء، بحذر، ومع المداولات، لأن هذه الطريقة مدمرة في الطبيعة.
بعد هذا الإجراء، قد يتم استخدام أساليب أخرى، مثل المعالجة النسيجية، للإجابة على أسئلة إضافية، مثل قطر الألياف، أو كتابة الألياف الميوسين. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال البيولوجيا التطورية ، لاستكشاف تطور تعبير الوجه والتواصل البصري في الثدييات غير البشرية ، وفي البشر. لا تنسى، أن العمل مع formalin، ومشرط محملة يمكن أن تكون خطرة للغاية.
الاحتياطات، مثل شطف العينة الخاصة بك، ومعرفة مكان مشرط الخاص بك في جميع الأوقات، وينبغي أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
