الكيس اللمفاوي الباطن مطلوب للتطور الطبيعي للأذن الداخلية. نظرا لأنه لا يمكن الوصول إليه في الموقع للدراسات الهيكلية والفسيولوجية والجزيئية ، فإن تشريحه من النماذج الحيوانية ، وخاصة نماذج الفئران ، أمر ضروري. يعد تشريح الكيس اللمفاوي الداخلي وتحضيره أمرا صعبا للغاية بسبب هيكله الظهاري الرقيق والحساس ، وقربه والتزامه بالأنسجة المجاورة.
يسهل نهجنا تصور وتحديد الكيس وفصله عن الأنسجة المجاورة. يمكن أن تؤدي الأمراض والاضطرابات التي تؤثر على الوظيفة الطبيعية للكيس اللمفاوي البطاني إلى فقدان السمع والتوازن. تقنيتنا ضرورية لتوضيح العمليات الخلوية والجزيئية والفسيولوجية الكامنة وراء وظائف الكيس اللمفاوي الباطن.
سيوضح الإجراء هيون جاي لي ، زميل زائر ما بعد الدكتوراه من مختبري. ابدأ بترتيب مستحضر الأذن الداخلية في طبق زراعة أنسجة 35 ملم يحتوي على PBS مع جذر العصب القحفي الثامن موجه لأعلى. باستخدام ملقط رقم 4 ، أمسك الأنسجة في القوقعة وحدد القناة الدهليزية ، والقنوات نصف الدائرية الأمامية والخلفية ، والصلب المشترك ، والجيب السيني.
ثم استخدم إبرة قياس 27 مثبتة على حقنة سعة مليلتر واحد لشق الأم الجافية والقناة الدهليزية ، بالإضافة إلى الأنسجة الضامة الأساسية المحيطة بكيس الليمفاوية الباطنة. بعد إجراء شق في النسيج الضام الجانبي للكيس اللمفاوي البطاني، استخدم الملقط لتثبيت النسيج الضام وتقشيره عن طريق سحبه بعيدا عن العظم الصدغي. قم بإزالة أي حطام متبقي بعناية وافصل ظهارة الكيس اللمفاوي البطاني عن الأنسجة المحيطة.
لتشريح الكيس اللمفاوي المفتوح ، أمسك الجزء الجذعي من المستحضر لمراقبة المقطع العرضي للتجويف. ثم أدخل إبرة قياس 27 في التجويف وحركها لتقطيع الكيس اللمفاوي إلى ورقتين. أمسك حافة كل نسيج يشبه الورقة بالملقط وافصلها عن بعضها البعض.
في التحليل التمثيلي ، تم تصور قسم متوسط السهمي من جمجمة هذه الفئران قبل وبعد إزالة نصف الدماغ باستخدام tdTomato المضأل. كان الكيس اللمفاوي الداخلي مرئيا بسهولة حتى بدون تشريح. تم عزل الأذنين الداخلية من الفئران في اليوم الجنيني 16.6 وكذلك اليوم 5 و 30 بعد الولادة.
لوحظت الأكياس اللمفاوية الداخلية تحت تكبير أعلى. بالنسبة للفئران P30 ، يصعب عزل القناة اللمفاوية الداخلية بسبب تغليفها في العظام. تمت دراسة الكيمياء المناعية للأكياس اللمفاوية الداخلية السليمة من E16.5 و P5 باستخدام وضع العلامات على الأجسام المضادة المضادة SLC26A4 والفالويدين.
تم استخدام الفالودين لتسليط الضوء على الكيس اللمفاوي الداخلي والأنسجة الملتحمة المحيطة به. تظهر صور التكبير العالية لظهارة الكيس اللمفاوي الباطن المفتوح في P5 أن SLC26A4 المسمى باللون الأخضر موضعية في المنطقة القمية لمجموعة فرعية من الخلايا. أهم شيء يجب تذكره عند محاولة هذا الإجراء هو أن تكون لطيفا جدا لتجنب إتلاف الكيس اللمفاوي الباطن.
يمكن استخدام نسيج الكيس اللمفاوي الثابت المعزول بواسطة هذا النهج للتهجين في الموقع ، ونطاق الحمض النووي الريبي ، والكيمياء المناعية. يمكن استخدام الأنسجة الحية لتحضير الحمض النووي الريبي لتحليل النسخ وعلم وظائف الأعضاء. تم استخدام هذا النهج لدراسة نسخ الكيس اللمفاوي الداخلي ، إما ككل أو في تحليل تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية للمساهمة في توصيف أنواع الخلايا المختلفة.
