Bu yöntem, evrimsel biyolojide sosyal iletişimin evrimi gibi temel soruların yanıtlatIlmesine yardımcı olabilir. Bu tekniğin başlıca avantajları, mimetik kasların şekli ve varlığı için doğrudan kanıt sağlamasıdır. Diseksiyon sürecindeki tahminleri ortadan kaldırır ve kas tabakalarını korur.
DiceCT ile birlikte, ters diseksiyon mimetik kas araştırma için yeni altın standarttır. Başlamak için, numune fiksasyonu ve hazırlanması için eşlik eden metin protokolünü uygulayın. Daha sonra, duman kaputuna örnek aktarın.
Daha sonra, suyu akan suda birkaç saat durulayın. Numune durulandıktan sonra kağıt havlularla kurulayın ve bir iş istasyonuna aktarın. Beyin ve üzerini örten calvaria kaldırıldı ile, kafatasının glabella bölgeye yakın bir kesi yapmak, ve kafatası nın kaudal yönü boyunca başka, kafatası nın kaudal yönü boyunca, kafatası kemik bozulmamış olduğu.
Kafatasının kaudal kenarında dış oksipital protuberance için Palpate. Bu kafatasının omurilikle buluştuğu bölgeyi gösteriyor. Sonra bir neşter kullanın ve bir orta hat kesi yapmak, dış oksipital protuberance başlayan.
Kafatasının parietal ve frontal bölge üzerinde örnek rostrally kesin. Devam edin ve göz arasında yörünge bölgesi üzerinden geçmek, burun bölgesi aşağı, nares arasındaki dış burun bölgesi boyunca tüm yol. Daha sonra, alt ve merkezi kesici dişler arasında mandibula bir kesim yapmak ve köprücük kemiği doğru caudally neşter hareket ettirin.
Bu noktada, yüz maskesinin bir tarafını seçin ve kafatasından serbest bırakın, diğer tarafı yerinde bırakın. Oksipital bölgeden başlayarak, mimetik kas da dahil olmak üzere yüz maskesini kesmek için neşter kullanın, kafatasının oksipital kemik uzak, maske rostrally ve yanal çekerek. Oksipitalis kasını kafatasından uzaklaştırın, kafatasının arkasında küçük bir miktar kas bırakarak, böylece yüz maskesi çıkarıldıktan sonra ekinin hala görselleştirilebis olmasını sağlar.
Kemikli ve kıkırdak kafatası üzerinde arkasında kas bazı kısmını bırakarak, ekleri korunabilir ve daha sonra kaydedilebilir. Dış kulak vurulduktan sonra, auriküler kasları niçin bulun. Bu kasları kes, böylece her kas küçük bir kısmı kafatası ile kalır.
Sonra, kafatasına dış kulak takarak elastik kıkırdak ile kesti. Maske rostrally çekmeye devam edin, ve kafatası her mimetik kas serbest, kafatası üzerinde arkasında her kas küçük bir kısmını bırakarak. Kafatasının bir tarafında sağlam bir yüz maskesi olduğunda, numunenin büyüklüğüne bağlı olarak, bir ila üç saat boyunca, havaya maruz kas ile oturup izin verin.
Bu yüz maskesi bağ dokusu desiccate, ve kas ve bağ dokusu arasındaki renk kontrastı artırmak. Kas ve bağ dokusu arasındaki kontrast şimdi geliştirilmiş ile, kas görselleştirmek için, yeterli bağ dokusu kaldırmak için üç sayı neşter, forceps ve mikro makas kullanın. Bu ters diseksiyonda mimetik kas yüzeysel tabaka, yavaşça kaldırmak ve yüzeysel tabaka dan kas derin tabakası ayırmak, ve yüzeysel kas çevreleyen bağ dokuları kaldırın.
Bittiğinde, ortaya çıkan yüz maskesini formalin'e geri döndürün. Prosedür burada duraklatılmış olabilir, daha fazla diseksiyon geçmeden önce, ya da boyama devam etmeden önce. Her müdahale adımda, yüz maskesi yeterli kuruma süresi sağlar, böylece bağ dokusu kolayca kas dokusundan ayırt edilebilir.
Mimetik kasların CT taraması ile görüntülenebilmesi için maskeleri, eşlik eden metin protokolünde açıklandığı gibi, Maskeyi Lugol'un boyama solüsyonuna yerleştirerek iyot solüsyonu kullanarak lekeleyin. Lugol çözeltisi %1.75 oranında boyama işlemi genellikle yaklaşık iki hafta sürer. Ancak, bu zamanlama çeşitli etkenlere bağlı olarak değişir.
Eşlik eden boyama ayarı ile aralıklı tarama önerilir. CT taraması için, önce yüz maskesini çiçek köpüğü gibi düşük yoğunluklu bir malzemenin üzerine takmak için tahta kürdanlar kullanarak hazırlayın. Bu maske herhangi bir kırışıklıkları ortadan kaldırır, ve tarama sırasında biraz kurur gibi hareketini sınırlamak.
Daha sonra, numuneyi düşük yoğunluklu bir kapta yerleştirin ve yerine sabitleyin. Bir kez güvenli, tarayıcı içine örnek yerleştirin, kapıyı kapatın ve X-ışınları açın. Daha sonra, yüksek çözünürlüklü X-Ray bilgisayarlı tomografi taraması için CT taraması parametrelerini ayarlayın.
Küçük fasiküller daha düşük çözünürlükte gizleneceği için, bu taramalar için yaklaşık 0,05 milimetrelik dilimler arası aralık ve pikseller arası mesafe kullanılır. Fasiküller tam olarak görüntülenmezise, aşırı boyama nedeniyle yüz maskesini %10 formalin veya %5 sodyum tiyosülfat gibi lekesiz bir solüsyona yerleştirerek lekenin bir kısmını çıkarın. Boyama ayarlandıktan sonra, yüz maskesini tekrar tarayın ve tüm fasiküller tam olarak görselleştirilene kadar gerekli ayarlamaları yapmaya devam edin.
Bir yüz maskesi oluşturmak için ters diseksiyon kullanarak, mimetik kas daha dolgun bir temsilbazen görülebilir, geleneksel diseksiyon metodolojisi daha. Bu yöntem, Marmoset'in küçük, küçük gövdesinden şempanze gibi büyük gövdeli primatlara kadar çeşitli vücut boyutları üzerinde çalışır. Yüz kasları olan küçük gövdeli primatlarda, yüz kaslarının bir kısmı çevredeki bağ dokusundan ayırt edilemez olabilir ve diseksiyon sırasında kaybolabilir.
Lugol gibi bir iyot lekesi, kontrastı artırabilir ve hem bireysel mimetik kasların hem de bireysel kas fasiküllerinin çözülmesine yardımcı olabilir ve ilk kez bu gracil kasların tüm kas hacimlerini elde edebilirsiniz. Burada gösterildiği gibi, dış kulak ile ilişkili çok küçük kasların bazıları, DiceCT taramalarıaçıkça görülebilir. Bu kasların bazı ters diseksiyon prosedürleri, belki de küçük boyutu nedeniyle kaçırılmaması için nadir değildir.
Bu üç boyutlu hacim işleme temel hacim eşik ve renk haritalama için izin verir, daha kolay kas görselleştirmek için, çapraz sorgu ile tek başına daha. Burada bireysel kas fasiküllerinin kesitte açıkça görülebildiğine göre, dijital diseksiyonu uygulanabilir hale getirebilirsiniz. Bu prosedürü denerken, bu yöntem doğada yıkıcı olduğu gibi, yavaş, ihtiyatlı ve müzakere ile hareket gerektiğini akılda tutmak önemlidir.
Bu yordamı takiben, histolojik işleme gibi diğer yöntemler, lif çapı veya miyozin lif yazma gibi ek soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu teknik, geliştirildikten sonra evrimsel biyoloji alanında araştırmacıların insan dışı memelilerde ve insanlarda yüz ifadesi ve görsel iletişimin evrimini keşfetmelerinin yolunu açmıştır. Formalin ve dolu bir neşter ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın.
Numunenizi durulama ve neşterinizin her zaman nerede olduğunu bilmek gibi önlemler bu işlemi gerçekleştirirken alınmalıdır.
