שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בביולוגיה האבולוציונית, כגון האבולוציה של תקשורת חברתית. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא מספקת ראיות ישירות עבור צורה ונוכחות של שרירים מימטיים. זה מבטל את הניחושים בתהליך הניתוח, והוא משמר שכבות שרירים.
בשילוב עם DiceCT, ניתוח הפוך הוא תקן הזהב החדש לחקירת שרירים מימטיים. כדי להתחיל, בצע את פרוטוקול הטקסט הנלווה עבור קיבעון והכנה של דגימה. לאחר מכן, העבר את הדגימה למכסה המנוע של האדים.
לאחר מכן, לשטוף את הדגימה במשך כמה שעות במים זורמים. לאחר שהדגימה נשטיפת, טופסים אותה יבשה במגבות נייר, ומעבירים אותה לתחנת עבודה. עם המוח וגולגולת יתר הוסר, לעשות חתך אחד ליד אזור glabella של הגולגולת, ועוד לאורך ההיבט caudal של הגולגולת, שם עצם הגולגולת שלם.
תן תן תן תן לחץ חוץ על הפתגם העורפי בקצה הגולגולת. זה מסמן את האזור שבו הגולגולת פוגשת את עמוד השדרה. לאחר מכן השתמש אזמל ולעשות חתך קו האמצע, החל protuberance העורפי החיצוני.
חותכים את הדגימה על פני האזור הקודקודי והחזיתי של הגולגולת. המשך ולעבור מעל אזור המסלול בין העיניים, במורד אזור האף, כל הדרך דרך אזור האף החיצוני בין nares. לאחר מכן, לעשות חתך על הלסת התחתונה והמרכזית החותכים, ולהזיז את האזמל באופן סיבתי לכיוון עצם הבריח.
בשלב זה, לבחור צד אחד של מסכת הפנים, ולשחרר אותו מן הגולגולת, משאיר את הצד השני במקום. החל באזור העורפי, השתמש באזמל כדי לחתוך את מסכת הפנים, כולל שרירים מימטיים, הרחק העצם העורפית של הגולגולת, מושך את המסכה rostrally וצולח. חותכים את שריר העורף מן הגולגולת, משאיר כמות קטנה של השריר מאחור על הגולגולת, כך ההחזקה שלה עדיין ניתן לדמיין, לאחר מסכת הפנים הוסר.
על ידי השארת חלק מהשריר מאחור על הגולגולת הגרמי והעגלתי, ניתן לשמר ולהקליט קבצים מצורפים במועד מאוחר יותר. לאחר האוזן החיצונית נפגעת, לאתר את השרירים auricular. חותכים דרך השרירים האלה, כך שחלק קטן של כל שריר נשאר עם הגולגולת.
לאחר מכן, לחתוך דרך הסחוס האלסטי חיבור האוזן החיצונית לגולגולת. ממשיכים למשוך את המסכה, ומשחררים כל שריר מימטי מהגולגולת, משאירים חלק קטן מכל שריר מאחור על הגולגולת. ברגע שיש מסכת פנים שלמה מצד אחד של הגולגולת, לאפשר לו לשבת בחוץ עם השרירים חשופים לאוויר, במשך שעה עד שלוש שעות, בהתאם לגודל של הדגימה.
זה יהיה לדכא את רקמת החיבור על מסכת הפנים, ולהגדיל את ניגודיות הצבע בין שריר רקמת חיבור. עם הניגוד בין שריר לרקמת חיבור משופרת כעת, השתמש במספר שלוש אזמל, מדפים ומספריים מיקרו כדי להסיר רקמת חיבור מספקת, על מנת לדמיין את השרירים. השכבה השטחית של השרירים הומיטיים בתפיסה הפוכה זו, מרימים ומפרידים בעדינות את שכבת השרירים העמוקה מהשכבה השטחית, ומסירים את רקמות החיבור המקיפות את השרירים השטחיים.
בסיום, להחזיר את מסכת הפנים וכתוצאה מכך בחזרה לפורמלין. ההליך עשוי להיות מושהה כאן, לפני שעבר לנתח נוסף, או לפני שתמשיך להכתים. בכל שלב מתערב, לאפשר זמן ייבוש מספיק של מסכת הפנים, כך רקמת החיבור ניתן להבחין בקלות מתוך רקמת השריר.
על מנת שהשרידים הומיטיים יתוארו באמצעות סריקת CT, הכתימו את המסכות באמצעות תווי יוד על ידי הנחת המסכה בתספור הכתמים של לוגול, כמתואר בפרוטוקול הטקסט הנלווה. תהליך הכתמים אורך בדרך כלל כשבועיים, ב-1.75% מהפתרון של לוגול. עם זאת, תזמון זה משתנה, בהתאם למספר גורמים.
מומלץ לבצע סריקה לסירוגין עם כוונון כתמים מלווה. לסריקת CT, הכינו תחילה את מסכת הפנים באמצעות קיסמים מעץ כדי להרכיב את מסכת הפנים על חומר בצפיפות נמוכה, כגון קצף פרחוני. זה יבטל את כל הקמטים במסכה, ולהגביל את תנועתו כפי שהוא מתייבש מעט במהלך הסריקה.
לאחר מכן, מניחים את הדגימה במיכל בצפיפות נמוכה, ומאבטחים אותה למקומה. לאחר הבטחה, מקם את הדגימה בסורק, סגור את הדלת והדליק את צילומי הרנטגן. לאחר מכן, הגדר את הפרמטרים של סריקת CT לסריקת טומוגרפיה ממוחשבת ברנטגן ברזולוציה גבוהה.
באמצעות ריווח בין פרוסות ומרחק בין פיקסלים של כ 0.05 מילימטרים עבור סריקות אלה, כמו fascicles קטן יהיה מוסתר ברזולוציה נמוכה יותר. אם fascicles אינם מסוגלים להיות חזותיים באופן מלא, בשל overstaining, למקם מסכת פנים לתוך פתרון דה כתם כגון 10%פורמלין, או 5%נתרן thiosulfate כדי להסיר חלק מהכתם. לאחר התאמת הכתמים, לסרוק את מסכת הפנים שוב, ולהמשיך לבצע את ההתאמות הדרושות, עד שכל fascicles מסוגלים להיות חזותיים באופן מלא.
באמצעות ניתוח הפוך כדי ליצור מסכת פנים, ייצוג מלא יותר של שריר מימטי לפעמים ניתן לראות, מאשר במתודולוגיית ניתוח מסורתית. שיטה זו פועלת במגוון גדלי גוף, החל מהגוף הזעיר והקטן של המרמוסט, דרך פרימטים בעלי גוף גדול כמו השימפנזה. בפרימטים בעלי גוף קטן בעלי שרירי פנים גרייסיל, חלק מהשרירים בפנים עשויים להיות בלתי ניתנים להבחנה מרקמה החיבור שמסביב, ועשויים ללכת לאיבוד במהלך הניתוח.
כתם יוד, כגון לוגול, עשוי לשפר את הניגוד ולעזור לפתור הן שרירים מימטיים בודדים, כמו גם fascicles שרירים בודדים, ובפעם הראשונה, להשיג כמויות שרירים שלמות של שרירי gracil אלה. כפי שמוצג כאן, חלק מהשרירים הקטנים מאוד, הקשורים לאוזן החיצונית, נראים בבירור בסריקות הקוביות. זה לא נדיר עבור השרירים האלה להחמיץ כמה הליכי ניתוח הפוכים, אולי בשל גודלם הקטן.
עיבוד נפח תלת מימדי זה מאפשר סף נפח בסיסי ומיפוי צבעים, כדי לדמיין את השרירים בקלות רבה יותר, מאשר עם חקירה נגדית בלבד. כאן אתה יכול לראות כי fascicles שריר בודדים גלויים בבירור חתך רוחב, מה שהופך את הניתוח הדיגיטלי ריאלי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור, כי אתה צריך לנוע לאט, בזהירות, עם דיון, כמו שיטה זו היא הרסנית בטבע.
בעקבות הליך זה, שיטות אחרות, כגון עיבוד היסטולוגי, עשוי לשמש כדי לענות על שאלות נוספות, כגון קוטר סיבים, או הקלדת סיבי מיוסין. לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הביולוגיה האבולוציונית, לחקור את האבולוציה של הבעת פנים ותקשורת חזותית ביונקים לא אנושיים ובבני אדם. אל תשכח, כי עבודה עם פורמלין, ואזמל טעון יכול להיות מסוכן מאוד.
אמצעי זהירות, כגון שטיפת הדגימה שלך, ולדעת איפה האזמל שלך הוא בכל עת, יש לנקוט בעת ביצוע הליך זה.
