RAW يود أن أشكر أعضاء زون ومختبرات البحوث ديفيدسون لما قدموه من مساهمات لا تحصى للمساعدة على وضع استراتيجيات والتي شكلت تدريجيا هذه التقنية في تشريح الزرد الكبار على مدى العقد الماضي. بالإضافة إلى ذلك ، نود أن نعرب عن امتناننا لموظفي مركز نوتردام للبحوث اسماك الزرد لتوفير الرعاية الممتازة تربية الجارية لمستعمرة الزرد لدينا. حصل RAW تمويل البحوث من منح الجائزة NIH - NIDDK DK083512 ، ومختبر السخي البدء بتمويل من جامعة نوتردام.

1. تشريح الكلى الزرد الكبار من عينة الحيوانات غير المثبتة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الزرد بين البالغين في سن 3-6 أشهر للتشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الاسماك التي وضعها في الطبق مع 0.2 ٪ 7.0 درجة الحموضة Tricaine لحوالي 4-5 دقائق ، وتراقب عن كثب لنرى أن يتوقف عن الحركة الخياشيم والقلب توقف الضرب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملعقة ، ورفع من الأسماك في حوض الاستحمام Tricaine كمية صغيرة من الحل ، الحل صب ومكان الحيوان برفق على منشفة ورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من مقص حاد تشريح لإزالة رأس الحيوان ، مما يجعل من مجرد قطع وراء الوصاد الخيشومية (الشكل 1 ، مسار A). تجاهل رأسه في حاوية نفايات بيولوجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدم المقص لفتح تشريح جسم الحيوان ، من خلال جعل شق بطني طويلة ، بدءا من الرأس وتنتهي في الذيل في قاعدة الزعنفة الذيلية (الشكل 1 ، ب المسار). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأعضاء الداخلية للحيوان باستخدام زوج من ملاقط تشريح / ملقط ، ووضعها في النفايات بيولوجية. يجب الحرص على عدم فرشاة جدار الجسم الظهري ، وهذا هو الموقع في الكلى (الشكل 2). إذا كان لديك اختيار الأسماك الإناث ، وسوف تحتاج لحلج القطن البيض النامية للخروج من تجويف الجسم ، والذي يمكن القيام به بسهولة باستخدام الملقط الزاوية الزوج أو ملاقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام إبر تشريح يعلقون فتح الجدران الجسم إلى علبة تشريح ، وزاوية دبابيس بحيث يمكن تصور الكلى. وسوف تمتلك الكلى شكل سمة (الرأس ، والجذع / السرج ، والذيل) واللون ، ويجري تتخللها تصبغ ملون أسود (الشكل 2). قد تشاهد أيضا الأبهر مليئة الدم المحيطي ، والذي يمتد الى اسفل خط الوسط لهيكل الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط غرامة لفصل الكلى من جدار الجسم الظهري ، وذلك باستخدام ملقط زوج واحد من رفع الكلى كما يمكنك فصل الجهاز من الأنسجة الضامة التي تكمن وراء ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المكان برفق الكلى في السيارة المطلوب لمزيد من الدراسات الخلية الحية ، مثل أنبوب microcentrifuge تحتوي 1X PBS لإعداد نظام مراقبة الأصول الميدانية. </li></ol> 2. إعداد وتشريح الكلى الزرد الكبار من عينة الحيوانات الثابتة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل PBST paraformaldehyde/1X 4 ٪. تغلي الحل بحل PFA إلى حل ، ثم تبرد الخليط إلى 4 درجات مئوية وإضافة dimethylsulfoxide 0.1 ٪. كان لدينا أكثر نجاحا مع الحفاظ على نسيج من استخدام الحلول الطازجة PFA مقابل aliquots المجمدة. جعل حل ما يكفي لغمر الزرد الكبار خلال التشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء علبة تشريح مع الحل التثبيت بما يكفي لغمر الزرد الكبار خلال التشريح. علينا تنفيذ الخطوات اللاحقة مع هذا الدرج وضعه تحت المجهر ، والتي يمكن وضعها في غطاء الكيميائية للحد من التعرض لتثبيت الروائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الزرد بين البالغين في سن 3-6 أشهر للتشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الاسماك التي وضعها في الطبق مع 0.2 ٪ 7.0 درجة الحموضة Tricaine لنحو 5 دقائق ، وتراقب عن كثب لنرى أن الخياشيم والقلب النابض تتوقف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملعقة ، ورفع من الأسماك في حوض الاستحمام Tricaine كمية صغيرة من الحل ، الحل صب ومكان الحيوان برفق على منشفة ورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من مقص حاد تشريح لإزالة رأس الحيوان ، مما يجعل من مجرد قطع وراء الوصاد الخيشومية (الشكل 1 ، مسار A). تجاهل رأسه في حاوية نفايات بيولوجية ، والمكان على الفور في درج الحيوانية تشريح PFA المحتوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدم المقص لفتح تشريح جسم الحيوان ، من خلال جعل شق بطني طويلة ، بدءا من الرأس وتنتهي في الذيل في قاعدة الزعنفة الذيلية (الشكل 1 ، ب المسار) ، والحفاظ على الجسم المغمور جزئيا خلال الإجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأعضاء الداخلية للحيوان باستخدام زوج من ملاقط تشريح / ملقط ، ووضعها في النفايات بيولوجية. يجب الحرص على عدم فرشاة جدار الجسم الظهري ، وهذا هو الموقع في الكلى (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام إبر تشريح يعلقون فتح الجدران الجسم ، وزاوية دبابيس بحيث يمكن تصور الكلى. وسوف تمتلك الكلى شكل سمة (الرأس ، والسرج ، والذيل) واللون ، ويجري تتخللها تصبغ ملون أسود (الشكل 2). قد تشاهد أيضا الأبهر مليئة الدم المحيطي ، والذي يمتد الى اسفل خط الوسط لهيكل الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإصلاح العينة بين عشية وضحاها ، ووضع درج في 4 درجات مئوية عندما كنت فعلت مع ترتيب العينات المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي ، وإزالة الحل PFA من الدرج واستبدال 1X PBST. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط غرامة لفصل بعناية الكلى من جدار الجسم الظهري ، وذلك باستخدام ملقط زوج واحد من رفع الكلى كما يمكنك فصل الجهاز من الأنسجة الضامة التي تكمن وراء ذلك. سوف تكون لينة نسيج الكلى ومرن من DMSO تثبيتي في الحل ، مما يجعل من الممكن لتشريح الجهاز الكلوي بالكامل في قطعة واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تستخدم على نطاقحمل الماصة نقلها إلى مكان الكلى في أنبوب microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن الآن الكلى تتم معالجتها لإجراء مزيد من جبل النسيجي أو كليا في الموقع دراسات التعبير الجيني واستنادا الى الدراسة المطلوبة. </li></ol> 3. ممثل النتائج : الخطوات التي يتم تخطيطي في الشكل رقم 1 يبين إجراء تشريح. يمكن التعرف على الكلى على أساس الشكل المميز له ، والتلون ، والموقع التشريحي على الجدار الظهري للتجويف جسم الحيوان ، كما هو مبين في الشكل 2. ويمكن بعد تشريح جبل الكلى ثابت ، مجمل العينة في الموقع التهجين يمكن استخدامها لإضفاء الطابع المحلي على التعبير عن الجينات في المصالح ، كما هو مبين في الشكل 3. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1 : الإجراءات التي تمكن من الوصول المباشر للتشريح الكلى الكبار الزرد. (أ) يتم تشريح الزرد الموت الرحيم بطريقة متدرجة (المشار إليها بواسطة أرقام والسهام) لإعطاء الباحث أسهل الوصول إلى جهاز الكلى كاملة. صور من تجويف البطن قبل (ب) وبعد (C) إزالة الأجهزة في البطن. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2 : التصور الكلى الزرد في عينة غير المثبت بعد إزالة الأجهزة في تجويف الجسم ، والكلى يظهر كجهاز واحد بالارض التي هي ملتصقة على جدار الجسم الظهري عبر الأنسجة الضامة (A) ، ولقد تم schematized (B) لإظهار شكلها التشريحية. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3 : جبل الجامع في الموقع التهجين التي أجريت على الجهاز الكبار الكلى بالكامل. (أ) يتم الكشف عن محاضر في cadherin17 نبيب النيفرون الكلى من الكبار ، والموسع في (A &#39;) ، (ب) هي النصوص المترجمة mafba أنواع الخلايا القريبة نفرون في الكلى الكبار (مقارنة نبيب بأكملها في لوحة A) (B&#39; ) موسع للرأي والتعبير mafba تكشف على وجه التحديد أن يتم ترجمة النصوص إلى الخلايا (ف) من تصفية خلية رجلاء الدم (كبيبة) ونبيب الملتوية القريبة (PCT).

<ol>
	<li>Stocum, D. L., Zupanc, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretching+the+limits:+stem+cells+in+regeneration+science.">Stretching the limits: stem cells in regeneration science.</a> Dev. Dyn. 237, 3648-3671 (2008).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 353-367 (2007).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullman, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+organs+from+the+adult+zebrafish.">Dissection of organs from the adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Mione, M. C., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+model+for+cancer.">The zebrafish as a model for cancer.</a> Dis. Model Mech. 3, 517-523 (2010).</li><li>Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+of+hematopoiesis.">Developmental biology of hematopoiesis.</a> Blood. 86, 2876-2891 (1995).</li><li>Davidson, A. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'definitive'+(and+'primitive')+guide+to+zebrafish+hematopoiesis.">The 'definitive' (and 'primitive') guide to zebrafish hematopoiesis.</a> Oncogene. 23, 7233-7246 (2004).</li><li>Orkin, S. H., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoiesis:+an+evolving+paradigm+for+stem+cell+biology.">Hematopoiesis: an evolving paradigm for stem cell biology.</a> Cell. 132, 631-644 (2008).</li><li>Reimschuessel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fish+model+of+renal+regeneration+and+development.">A fish model of renal regeneration and development.</a> ILAR J. 42, 285-291 (2001).</li><li>Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mesonephric+development+and+regeneration+using+transgenic+zebrafish.">Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).</li><li>Diep, C. Q., Ma, D., Holm, T., Naylor, R., Arora, N., Wingert, R., Bollig, F., Djordjevic, G., Lichman, B., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+adult+nephron+progenitors+capable+of+kidney+regeneration+in+zebrafish.">Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish.</a> Nature. 470, 95-100 (2011).</li><li>Traver, D., Paw, B. H., Poss, K. D., Penberthy, W. T., Lin, S., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants.">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat. Immunol. 4, 1238-1246 (2003).</li><li>Weber, G. J., Choe, S. E., Dooley, K. A., Paffett-Lugassy, N. N., Zhou, Y., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant-specific+gene+programs+in+the+zebrafish.">Mutant-specific gene programs in the zebrafish.</a> Blood. 106, 521-530 (2005).</li><li>Sumanas, S., Jorniak, T., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+vascular+endothelial-specific+genes+by+the+microarray+analysis+of+the+zebrafish+cloche+mutants.">Identification of novel vascular endothelial-specific genes by the microarray analysis of the zebrafish cloche mutants.</a> Blood. 106, 534-541 (2005).</li><li>Burns, C. E., Traver, D., Mayhall, E., Shepard, J. L., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+fate+is+established+by+the+Notch-Runx+pathway.">Hematopoietic stem cell fate is established by the Notch-Runx pathway.</a> Genes Dev. 19, 2331-2342 (2005).</li><li>Little, M. H., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+there+such+a+thing+as+a+renal+stem+cell.">Is there such a thing as a renal stem cell.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 20, 2112-2117 (2009).</li><li>Stachura, D. L., Reyes, J. R., Bartunek, P., Paw, B. H., Zon, L. I., Traver, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+kidney+stromal+cell+lines+support+multilineage+hematopoiesis.">Zebrafish kidney stromal cell lines support multilineage hematopoiesis.</a> Blood. 114, 279-289 (2009).</li><li>North, T. E., Goessling, W., Walkley, C. R., Lengerke, C., Kopani, K. R., Lord, A. M., Weber, G. J., Bowman, T. V., Jang, I. H., Grosser, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E2+regulates+vertebrate+haematopoietic+stem+cell+homeostasis.">Prostaglandin E2 regulates vertebrate haematopoietic stem cell homeostasis.</a> Nature. 447, 1007-1011 (2007).</li><li>Wingert, R. A., Selleck, R., Yu, J., Song, H. D., Chen, Z., Song, A., Zhou, Y., Thisse, B., Thisse, C., McMahon, A. P., Davidson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cdx+genes+and+retinoic+acid+control+the+positioning+and+segmentation+of+the+zebrafish+pronephros.">The cdx genes and retinoic acid control the positioning and segmentation of the zebrafish pronephros.</a> PLoS Genet. 3, 1922-1938 (2007).</li><li>de Groh, E. D., Swanhart, L. M., Cosentino, C. C., Jackson, R. L., Dai, W., Kitchens, C. A., Day, B. W., Smithgall, T. E., Hukriede, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+histone+deacetylase+expands+the+renal+progenitor+cell+population.">Inhibition of histone deacetylase expands the renal progenitor cell population.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 794-802 (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الخلايا الجذعية البالغة هي مكونات حيوية وأساسية التي تحافظ على شكل الجسم البالغ 1. يمكن أن الخلايا الجذعية تستخدم أيضا لمواجهة الأضرار التي تتحملها الدول الجسم أثناء المرض ، وضعف أو فقدان الخلايا الجذعية البالغة يمكن ان يؤدي الى انخفاض وظيفة الجهاز والتي تورطت في دفع الأورام الخبيثة السرطانية وتسهم في الشيخوخة. الخلايا الجذعية البالغة خواص الخلوية التي تميزها عن أنواع الخلايا المتمايزة. بناء على انقسام الخلايا ، والخلايا الجذعية البالغة هي قادرة على التجديد الذاتي وإنتاج الخلايا الاصلية التي بدورها يمكن أن تؤدي إلى نسل متباينة متميزة. هناك اهتماما كبيرا في فهم مسارات اتخاذ القرارات التي تنظم مصير الخلية وفعالية من الخلايا الجذعية للبالغين بسبب دورهم المهم في توازن الأنسجة 1. على سبيل المثال ، العديد من العلماء يسعون حاليا للتعرف على الإشارات التي تحافظ على خلايا مختلفة من السكان البالغين الجذعية في مكانها المناسب ، أو المكروية المتخصصة ، وكيف أثرت هذه العوامل الخلطية الكوة. الكبار الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) هي خلايا متعددة الإمكانات التي تغذي التجديد المستمر لخلايا الدم في الحيوانات 8. تكون الدم هي عملية حيوية ومستمرة باستمرار خلال حياة الكائن الفقاريات لأن خلايا الدم الناضجة أنواع متباينة قصيرة الأجل ، وبالتالي يجب أن تتجدد بشكل منتظم. لأنها تفرق ، HSCs توريد هذا الطلب حاسما عن طريق تجديد الذات وإنتاج سلسلة من الأسلاف التي تؤدي إلى محمر ، الأنساب النواء ، اللمفاوية والدم النخاعي. كل هذه الأنواع من خلايا الدم يؤدي وظائف فريدة من نوعها في الدورة الدموية ، بما في ذلك توفير تبادل الغازات في الأنسجة ، وسيلة لمنع تسرب اصابات في الأوعية الدموية عن طريق تكوين جلطة ، أو آليات الدفاع ضد غزو الجراثيم. في حين تم الاعتراف HSCs لسنوات عديدة ، وعدد كبير من الأسئلة لا تزال دون إجابة رائعة حول هذه الخلايا مدهشة. وقد حددت الدراسات التي أجريت مؤخرا من HSCs فرعية مختلفة مع خصائص ذاتية التجديد على المدى الطويل ، والكشف عن المكونات المتخصصة والإشارات التي تعدل سلوك HSC 8. والزرد هو الآن من بين الركائز الأساسية لنماذج بحثية تكون الدم ، على أساس الصفات الوراثية والجزيئية لهذا النموذج الحيوان 8. وقد أدت البحوث الاستفادة من الزرد إلى رؤى جديدة حول البيولوجيا شهادة الثانوية العامة التي يتم حفظها مع ارتفاع الفقاريات مثل الثدييات ، مع التشديد على أهمية الطب الحيوي التحقيقات الدم الأسماك 8. تاريخيا ، والمعارف حول HSCs قد مهد الطريق لحملات تسعى لاكتشاف ما إذا كان يتم الاحتفاظ أجهزة الجسم الأخرى من الخلايا الجذعية للبالغين. ويقدر الآن العديد من السكان البالغين الخلية الجذعية في الوجود ، التي تمتد عبر هياكل متنوعة من الدماغ إلى الأمعاء والجلد والعضلات والهيكل العظمي. مواصلة بذل الجهود في مجال الخلايا الجذعية وتسعى إلى تحديد كيفية خلايا جذعية للبالغين وغيرها من أنواع الخلايا المختلفة حتى يمكن عرض قوة معززة في مختلف البيئات. فيما يتعلق الكلى ، وكان هناك نقاش كبير بين الكلى ما إذا كان وجود خلايا جذعية الكلوي 16. وقد وثقت نتائج مستقلة السكان من خلايا الكلى في الثدييات التي تمتلك درجات متفاوتة من إمكانات التجدد ، ولكن فهم متماسك من هذه التقارير لم يتحقق بعد. ومن المثير للاهتمام ، وهناك أدلة قوية لدعم الفكرة القائلة بأن العديد من أنواع الأسماك التي يمكن أن تمتلك خلايا الوقود بقوة تجديد النيفرون المتضررة ، فضلا عن النمو النيفرون جديدة كليا خلال مرحلة البلوغ 9. وقد حددت الأعمال الأخيرة بصمات الجزيئي للخلايا الجذعية للبالغين في الكلى 10،11 الزرد ، وبرهنت على فاعلية الذات تجديد هذه الخلايا الجذعية ما يسمى / السلف كلوي (محاولات RPCs) 11. هناك حاجة لدراسات المستقبل للتأكد مما إذا كانت خلايا الكلى مماثلة موجودة في الثدييات. ومع ذلك ، فقد استمرت التحقيقات حول الآليات الخلوية والجزيئية التي تنظم محاولات RPCs الأسماك توفير نظرة ثاقبة كيف يمكن حفز التجدد المفاخر في الكلى الثدييات. فمن الواضح أنه لا يزال هناك الكثير الذي ينبغي فهمه حول محاولات RPCs ، والتي يمكن تنفيذها في العديد من الأدوات المتاحة الآن للباحث الزرد لمعالجة هذه المسائل المثيرة للاهتمام. في هذا البروتوكول ، ونحن لدينا وصف طريقة لتحديد التشريحية وتشريح الكلى الزرد الكبار. ويمكن استخدام خطوات بديلة لتشريح الكلى ، مثل فتح التجويف البطني مع شق بطني باستخدام مقص التشريح ، ولكن واجهتنا أكثر نجاحا في الحصول على كامل الكلى عند دبس فتح جدار البطن ويتم إزالة الرأس. الدم والكلى ويمكن الباحثين على حد سواء الذين يرغبون في عزل والعمل مع هذه أنواع الخلايا إما استخدام أسلوب تشريح. تجدر الإشارة إلى أن الأسلوب وصفنا من أجل عزل وركينومن المؤكد غ مع الكلى الكبار الزرد لا تقتصر على العلماء الذين يرغبون في متابعة المسائل الكبار بيولوجيا الخلايا الجذعية ، وتشريح هذا الجهاز يمكن أن تسهل هذه الدراسات للباحثين متابعة التحقيقات حول مواضيع تتراوح بين علم وظائف الأعضاء في الشيخوخة. كذلك ، يمكن أن يقترن هذا الأسلوب مع تكنولوجيات أخرى مثل البذور المعدلة وراثيا ، وذلك لتسمية جزيئيا ثم تنقية ودراسة المجموعات السكانية الفرعية منفصلة من خلايا الدم أو الكلى أو وراثيا من wildtype الزرد متحولة 11. نتطلع ، مثل تنقية الإجراءات التفصيلية لأنواع الخلايا الجذعية والسلف هو أمر حيوي لكسب المعرفة حول كيفية تنظيم سلوكهم ، والتجارب التشغيلية مثل زرع أو زراعة السلف تشكل الأساس الذي يعرف قوة وهوية هذه الخلايا. التطورات الحديثة في أساليب لدم ثقافة السلف فتح آفاقا جديدة لكثير من الدراسة ، ويمكن تكييفها لزراعة الكلى للسكان 17. وقد الزرد الوراثة الكيميائية ناجحة في تحديد المسارات التي تعدل HSCs والأسلاف الكلوي في سياقات مختلفة 18-20 ، وستظل وسيلة مفيدة لاختبار في تركيبة مع تقنيات البيولوجيا الخلوية أعلاه. أخذت معا ، كان هناك عدد من المساهمات الرائدة في مجال أمراض الدم وأمراض الكلى باستخدام نموذج الزرد ، واستمر البحث في هذه المجالات وعود إلى رؤى تمارس تحويلية أخرى في السنوات المقبلة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th></tr><tr><td> مقص تشريح </td><td> Roboz </td><td> RS - 5882 </td></tr><tr><td> تشريح ملقط </td><td> Roboz </td><td> RS - 5010 </td></tr><tr><td> ملقط تشريح الزاوية </td><td> Roboz </td><td> RS - 5058 </td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> سيغما </td><td> E10521 </td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> خدمات الإلكترون المجهر </td><td> 19210 </td></tr></tbody></table>

dissection of the adult zebrafish kidney

الباحثين العاملين في حقل يزدهر بيولوجيا الخلايا الجذعية للبالغين يسعون لفهم الإشارات التي تنظم السلوك وظيفة الخلايا الجذعية خلال التوازن الطبيعي والحالات المرضية. فهم الخلايا الجذعية البالغة والآثار واسعة المدى على مستقبل الطب التجديدي 1. على سبيل المثال ، يمكن معرفة أفضل عن الكبار بيولوجيا الخلايا الجذعية تسهيل تصميم الاستراتيجيات العلاجية التي يتم تشغيلها في أجهزة لعلاج أنفسهم أو حتى إيجاد طرق لأجهزة المتنامية في المختبر التي يمكن زرعها في البشر 1. أصبحت نموذجا الزرد الحيوان القوي لدراسة بيولوجيا الخلايا الفقاريات 2. كانت هناك وثائق مستفيضة وتحليل التطور الجنيني في الزرد 3. إلا أن العلماء في الآونة الأخيرة سعى إلى توثيق التشريح الكبار والتقنيات الجراحية تشريح 4 ، كما كانت هناك حركة التقدمية داخل المجتمع الزرد لتوسيع تطبيقات هذا الكائن البحوث للدراسات الكبار. على سبيل المثال ، هناك توسع في استخدام المصالح الزرد للتحقيق في بيولوجيا الخلايا الجذعية للبالغين من السكان وتقديم نماذج متطورة من البالغين بأمراض مثل سرطان 5. تاريخيا ، تم عزل الكلى الكبار الزرد مفيدة لدراسة تكون الدم ، والكلى هو الموقع التشريحي للإنتاج خلايا الدم في الأسماك 6،7. تتألف من وحدات الكلى نفرون الفنية موجودة في ترتيبات arborized ، وتحيط بها الأنسجة المكونة للدم التي تتوزع في جميع أنحاء المسافات الفاصلة. مكون للدم يتكون من الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) وذريتها التي تعيش في الكلى حتى يفرق عضال 8. بالإضافة إلى ذلك ، ويقدر الآن أن مجموعة من الخلايا الجذعية / السلف كلوي (محاولات RPCs) تسكن أيضا الجهاز الكلوي الزرد وتمكين كل من التجدد والنمو الكلى ، كما لوحظ في أنواع الأسماك الأخرى 9-11. في ضوء هذا الاكتشاف الجديد ، والكلى الزرد واحد الجهاز الذي يضم الموقع اثنين من الفرص المثيرة للبالغين دراسات بيولوجيا الخلايا الجذعية. فمن الواضح أنه يمكن عمل الكثير من المسائل العالقة بشكل جيد مع هذا النظام التجريبي. لتشجيع التوسع في هذا المجال ، من المفيد لتوثيق مفصل لطرق تصور ثم عزل الكلى الزرد الكبار الجهاز. تفاصيل هذا البروتوكول إجراء تشريح لدينا في الكلى الكبار على حد سواء من الحيوانات غير الثابتة والثابتة. ويمكن استخدام تشريح الجهاز الكلوي لعزل وتوصيف الخلايا الجذعية المكونة للدم والكلى وذريتهم باستخدام تقنيات معروفة مثل الأنسجة ، مضان تنشيط الخلايا الفرز (FACS) 11،12 ، 13،14 التنميط التعبير ، والزرع 11،15. نأمل أن نشر هذا البروتوكول سيتيح للباحثين معرفة أوسع لتنفيذ استخدام دراسات الزرد التي يمكن ترجمتها في نهاية المطاف للتطبيق البشري.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Adult Zebrafish Kidney at JoVE.com

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

الكلى الزرد هي موطن كل من الخلايا الجذعية المكونة للدم والكلى / السلف الكبار ، ويمثل فرصة رائعة لدراسة هذه الخلية أنواع وذريتها في الفقاريات الحي النموذجي. هنا ، علينا أن نظهر إجراء تشريح التفصيلية التي تمكن الباحث من تحديد وإزالة جراحيا الكلى الزرد الكبار ، والتي يمكن استخدامها لتطبيقات مثل عزل الخلايا ، وزرع ، ودراسات التعبير و / أو السكان الكلى خلايا الدم.

تشريح الكلى اسماك الزرد الكبار

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

36.4K Views.  University of Notre Dame. الكلى الزرد هي موطن كل من الخلايا الجذعية المكونة للدم والكلى / السلف الكبار ، ويمثل فرصة رائعة لدراسة هذه الخلية أنواع وذريتها في الفقاريات الحي النموذجي. هنا ، علينا أن نظهر إجراء تشريح التفصيلية التي تمكن الباحث من تحديد وإزالة جراحيا الكلى الزرد الكبار ، وال...

Video: Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an organism. The functional definition of a HSC is a transplanted cell that has the ability to reconstitute all the blood lineages of an irradiated recipient long term. This designation was established by decades of seminal work in mammalian systems. Using hematopoietic cell transplantation (HCT) and reverse genetic manipulations in the mouse, the underlying regulatory factors of HSC biology are beginning to be unveiled, but are still largely under-explored. Recently, the zebrafish has emerged as a powerful genetic model to study vertebrate hematopoiesis. Establishing HCT in zebrafish will allow scientists to utilize the large-scale genetic and chemical screening methodologies available in zebrafish to reveal novel mechanisms underlying HSC regulation. In this article, we demonstrate a method to perform HCT in adult zebrafish. We show the dissection and preparation of zebrafish whole kidney marrow, the site of adult hematopoiesis in the zebrafish, and the introduction of these donor cells into the circulation of irradiated recipient fish via intracardiac injection. Additionally, we describe the post-transplant care of fish in an "ICU" to increase their long-term health. In general, gentle care of the fish before, during, and after the transplant is critical to increase the number of fish that will survive more than one month following the procedure, which is essential for assessment of long term (&lt;3 month) engraftment. The experimental data used to establish this protocol will be published elsewhere. The establishment of this protocol will allow for the merger of large-scale zebrafish genetics and transplant biology.

In this article, we demonstrate a method to perform HCT in adult zebrafish.

زرع نخاع الكلى في الجامعة اسماك الزرد الكبار

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

الجسيمة والجميلة تشريح الأذن الداخلية الظهارة الحسية في اسماك الزرد الكبار ( دانيو rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental analysis of the embryo and larva is extensive and the morphology has been well documented, descriptions of adult zebrafish anatomy and studies of development of the adult structures and organs, together with techniques for working with adults are lacking. The organs of the larva undergo significant changes in their overall structure, morphology, and anatomical location during the larval to adult transition.  Externally, the transparent larva develops its characteristic adult striped pigment pattern and paired pelvic fins, while internally, the organs undergo massive growth and remodeling.  In addition, the bipotential gonad primordium develops into either testis or ovary.  This protocol identifies many of the organs of the adult and demonstrates methods for dissection of the brain, gonads, gastrointestinal system, heart, and kidney of the adult zebrafish. The dissected organs can be used for in situ hybridization, immunohistochemistry, histology, RNA extraction, protein analysis, and other molecular techniques.  This protocol will assist in the broadening of studies in the zebrafish to include the remodeling of larval organs, the morphogenesis of organs specific to the adult and other investigations of the adult organ systems.

This protocol describes a procedure for identifying and dissecting organs from the adult zebrafish.

تشريح هيئات من اسماك الزرد الكبار

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, this method makes it difficult to know how much reagent is absorbed or taken up per fish. Some experimental questions, particularly those related to metabolic studies, may be better addressed by delivering a defined quantity to each fish, based on weight. Here we present a method for intraperitoneal (IP) injection into adult zebrafish. Injection is into the abdominal cavity, posterior to the pelvic girdle. This procedure is adapted from veterinary methods used for larger fish. It is safe, as we have observed zero mortality. Additionally, we have seen bleeding at the injection site in only 5 out of 127 injections, and in each of those cases the bleeding was brief, lasting several seconds, and the quantity of blood lost was small. Success with this procedure requires gentle handling of the fish through several steps including fasting, weighing, anesthetizing, injection, and recovery. Precautions are required to minimize stress throughout the procedure. Our precautions include using a small injection volume and a 35G needle. We use Cortland salt solution as the vehicle, which is osmotically balanced for freshwater fish. Aeration of the gills is maintained during the injection procedure by first bringing the fish into a surgical plane of anesthesia, which allows slow operculum movements, and second, by holding the fish in a trough within a water-saturated sponge during the injection itself. We demonstrate the utility of IP injection by injecting glucose and monitoring the rise in blood glucose level and its subsequent return to normal. As stress is known to increase blood glucose in teleost fish, we compare blood glucose levels in vehicle-injected and non-injected adults and show that the procedure does not cause a significant rise in blood glucose.

We demonstrate intraperitoneal injection into adult zebrafish. We use a 10 &mu;l NanoFil microsyringe controlled by a Micro4 controller and UltraMicroPump III. This demonstration includes the use of cold water as an anesthetic.

حقن داخل الصفاق الى اسماك الزرد الكبار

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Transplantation of Cells Directly into the Kidney of Adult Zebrafish

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic diseases1. However, most organs are not easily accessible, necessitating the need to develop surgical methods to gain access to these structures. In this video article, we describe a method for transplanting cells directly into the kidney of adult zebrafish, a popular model to study regeneration and disease2. Recipient fish are pre-conditioned by irradiation to suppress the immune rejection of the injected cells3. We demonstrate how the head kidney can be exposed by a lateral incision in the flank of the fish, followed by the injection of cells directly in to the organ. Using fluorescently labeled whole kidney marrow cells comprising a mixed population of renal and hematopoietic precursors, we show that nephron progenitors can engraft and differentiate into new renal tissue - the gold standard of any cell-based regenerative therapy. This technique can be adapted to deliver purified stem or progenitor cells and/or small molecules to the kidney as well as other internal organs and further enhances the zebrafish as a versatile model to study regenerative medicine.

Cell transplantation is an essential technique for studying tissue regeneration and for developing cell-based therapies of disease. We demonstrate here a microsurgical technique that permits the transplantation of genetically labeled cells directly into the kidney of adult zebrafish fish.

زرع الخلايا مباشرة في الكلى من اسماك الزرد الكبار

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work examining post-embryonic through adult cardiac development has been limited7-10. Examining the changing morphology of the maturing and aging heart are restricted by the lack of techniques available for staging and isolating juvenile and adult hearts. In order to analyze heart development over the fish's lifespan, we dissect zebrafish hearts at numerous stages and photograph them for further analysis11. The morphological features of the heart can easily be quantified and individual hearts can be further analyzed by a host of standard methods. Zebrafish grow at variable rates and maturation correlates better with fish size than age, thus, post-fixation, we photograph and measure fish length as a gauge of fish maturation. This protocol explains two distinct, size dependent dissection techniques for zebrafish, ranging from larvae 3.5mm standard length (SL) with hearts of 100&mu;m ventricle length (VL), to adults, with SL of 30mm and VL 1mm or larger. Larval and adult fish have quite distinct body and organ morphology. Larvae are not only significantly smaller, they have less pigment and each organ is visually very difficult to identify. For this reason, we use distinct dissection techniques.
We used pre-dissection fixation procedures, as we discovered that hearts dissected directly after euthanization have a more variable morphology, with very loose and balloon like atria compared with hearts removed following fixation. The fish fixed prior to dissection, retain in vivo morphology and chamber position (data not shown). In addition, for demonstration purposes, we take advantage of the heart (myocardial) specific GFP transgenic Tg(myl7:GFP)twu34 (12), which allows us to visualize the entire heart and is particularly useful at early stages in development when the cardiac morphology is less distinct from surrounding tissues. Dissection of the heart makes further analysis of the cell and molecular biology underlying heart development and maturation using in situ hybridization, immunohistochemistry, RNA extraction or other analytical methods easier in post-embryonic zebrafish. This protocol will provide a valuable technique for the study of cardiac development maturation and aging.

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

A clear, standardized method for dissection and isolation of the zebrafish heart at multiple developmental stages are described. Annotation and quantification techniques are also discussed.

تشريح القلب في اليرقات ، اسماك الزرد الأحداث والكبار ، دانيو rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal neurons. In contrast, the adult zebrafish retina possesses the robust ability to spontaneously regenerate any neuronal class that is lost in a variety of different retinal damage models, including retinal puncture, chemical ablation, concentrated high temperature, and intense light treatment 1-8. Our lab extensively characterized regeneration of photoreceptors following constant intense light treatment and inner retinal neurons after intravitreal ouabain injection 2, 5, 9. In all cases, resident M&uuml;ller glia re-enter the cell cycle to produce neuronal progenitors, which continue to proliferate and migrate to the proper retinal layer, where they differentiate into the deficient neurons. 
	We characterized five different stages during regeneration of the light-damaged retina that were highlighted by specific cellular responses. We identified several differentially expressed genes at each stage of retinal regeneration by mRNA microarray analysis 10. Many of these genes are also critical for ocular development. To test the role of each candidate gene/protein during retinal regeneration, we needed to develop a method to conditionally limit the expression of a candidate protein only at times during regeneration of the adult retina. 
	Morpholino oligos are widely used to study loss of function of specific proteins during the development of zebrafish, Xenopus, chick, mouse, and tumors in human xenografts 11-14. These modified oligos basepair with complementary RNA sequence to either block the splicing or translation of the target RNA. Morpholinos are stable in the cell and can eliminate or "knockdown" protein expression for three to five days 12. 
	Here, we describe a method to efficiently knockdown target protein expression in the adult zebrafish retina. This method employs lissamine-tagged antisense morpholinos that are injected into the vitreous of the adult zebrafish eye. Using electrode forceps, the morpholino is then electroporated into all the cell types of the dorsal and central retina. Lissamine provides the charge on the morpholino for electroporation and can be visualized to assess the presence of the morpholino in the retinal cells. 
	Conditional knockdown in the retina can be used to examine the role of specific proteins at different times during regeneration. Additionally, this approach can be used to study the role of specific proteins in the undamaged retina, in such processes as visual transduction and visual processing in second order neurons.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

A method to conditionally knockdown a target protein&#x2019;s expression in the adult zebrafish retina is described, which involves intravitreally injecting antisense morpholinos and electroporating them into the retina. The resulting protein is knocked down for several days, which allows testing the protein&#x2019;s role in the regenerating or intact retina.

في الجسم الحي من Electroporation Morpholinos في شبكية العين اسماك الزرد الكبار

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration of adult tissues, such as the heart1, retina2, spinal cord3, optic nerve4, sensory hair cells5, and fins6.
The zebrafish fin is a relatively simple appendage that is easily manipulated to study multiple stages in epimorphic regeneration. Classically, fin regeneration was characterized by three distinct stages: wound healing, blastema formation, and fin outgrowth. After amputating part of the fin, the surrounding epithelium proliferates and migrates over the wound. At 33 &deg;C, this process occurs within six hours post-amputation (hpa, Figure 1B)6,7. Next, underlying cells from different lineages (ex. bone, blood, glia, fibroblast) re-enter the cell cycle to form a proliferative blastema, while the overlying epidermis continues to proliferate (Figure 1D)8. Outgrowth occurs as cells proximal to the blastema re-differentiate into their respective lineages to form new tissue (Figure 1E)8. Depending on the level of the amputation, full regeneration is completed in a week to a month.
The expression of a large number of gene families, including wnt, hox, fgf, msx, retinoic acid, shh, notch, bmp, and activin-betaA genes, is up-regulated during specific stages of fin regeneration9-16. However, the roles of these genes and their encoded proteins during regeneration have been difficult to assess, unless a specific inhibitor for the protein exists13, a temperature-sensitive mutant exists or a transgenic animal (either overexpressing the wild-type protein or a dominant-negative protein) was generated7,12. We developed a reverse genetic technique to quickly and easily test the function of any gene during fin regeneration.
Morpholino oligonucleotides are widely used to study loss of specific proteins during zebrafish, Xenopus, chick, and mouse development17-19. Morpholinos basepair with a complementary RNA sequence to either block pre-mRNA splicing or mRNA translation. We describe a method to efficiently introduce fluorescein-tagged antisense morpholinos into regenerating zebrafish fins to knockdown expression of the target protein. The morpholino is micro-injected into each blastema of the regenerating zebrafish tail fin and electroporated into the surrounding cells. Fluorescein provides the charge to electroporate the morpholino and to visualize the morpholino in the fin tissue.
This protocol permits conditional protein knockdown to examine the role of specific proteins during regenerative fin outgrowth. In the Discussion, we describe how this approach can be adapted to study the role of specific proteins during wound healing or blastema formation, as well as a potential marker of cell migration during blastema formation.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

We describe a method to conditionally knockdown the expression of a target protein during adult zebrafish fin regeneration. This technique involves micro-injecting and electroporating antisense oligonucleotide morpholinos into fin tissue, which allows testing the protein&#x2019;s role in various stages of fin regeneration, including wound healing, blastema formation, and regenerative outgrowth.

في Electroporation المجراة من Morpholinos في الكبار التجديد زعنفة الذيل الزرد

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

Gavaging اسماك الزرد الكبار

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Analysis of Nephron Composition and Function in the Adult Zebrafish Kidney

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys are composed of functional units known as nephrons, which are highly conserved with other vertebrates, including mammals. Research in zebrafish has recently demonstrated that two distinctive phenomena transpire after adult nephrons incur damage: first, there is robust regeneration within existing nephrons that replaces the destroyed tubule epithelial cells; second, entirely new nephrons are produced from renal progenitors in a process known as neonephrogenesis. In contrast, humans and other mammals seem to have only a limited ability for nephron epithelial regeneration. To date, the mechanisms responsible for these kidney regeneration phenomena remain poorly understood. Since adult zebrafish kidneys undergo both nephron epithelial regeneration and neonephrogenesis, they provide an outstanding experimental paradigm to study these events. Further, there is a wide range of genetic and pharmacological tools available in the zebrafish model that can be used to delineate the cellular and molecular mechanisms that regulate renal regeneration. One essential aspect of such research is the evaluation of nephron structure and function. This protocol describes a set of labeling techniques that can be used to gauge renal composition and test nephron functionality in the adult zebrafish kidney. Thus, these methods are widely applicable to the future phenotypic characterization of adult zebrafish kidney injury paradigms, which include but are not limited to, nephrotoxicant exposure regimes or genetic methods of targeted cell death such as the nitroreductase mediated cell ablation technique. Further, these methods could be used to study genetic perturbations in adult kidney formation and could also be applied to assess renal status during chronic disease modeling.

The zebrafish adult kidney is an excellent system for renal regeneration and disease studies. An essential aspect of such research is the assessment of nephron structure and function. This protocol describes several methodologies that can be implemented to assess nephron tubule composition and to evaluate renal reabsorption.

تحليل التركيب كليون وظيفة في الكلى اسماك الزرد الكبار

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...