يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال السرطان حول كيفية دعم البيئة الدقيقة لنمو الورم أو ما إذا كان دواء معين يمكن أن يمنع تطور سرطان الثدي بشكل فعال. المزايا الرئيسية لتقنية تحريض الورم هي أنه لا توجد حاجة إلى إجراء عملية جراحية وأنها طريقة أقل الغازية التي لإنشاء سرطان الثدي في الموقع. باستخدام هذه التقنية ، تنمو الخلايا السرطانية داخل وسادة الدهون الثديية ، في بيئة الأنسجة المناسبة ، وتحاكي تطور سرطان الثدي البشري بشكل أوثق من الحقن تحت الجلد أو xenograft إلى خلايا الفئران.
كي شين كاو، فنينا، وأنا، سوف نساعد غان لين تشانغ في إثبات هذا الإجراء. في اليوم السابق للعملية، يدويا كبح جماح الماوس المتلقي وتحويل الجانب بطن الحيوان تصل إلى الفراء أن يحلق حول الحلمات الرابعة. امسح الفراء بطبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر.
استخدام الماء المقطر لإزالة كريم بعد 30 إلى 60 ثانية وتجفيف الماوس مع المناشف الورقية الناعمة. في يوم العملية ، تمييع تعليق خلية سرطان الثدي إلى مرتين عشر إلى الخلايا الخامسة لكل ملليلتر من تركيز PBS ، في أنبوب microcentrifuge معقمة على الجليد. قبل كل حقنة، قم بتحميل حقنة واحدة، حقنة ملليلتر واحدة مجهزة بإبرة 45 في 16، مع 50 ميكرولترات من الخلايا لكل فأرة.
وتأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع في كل مخدر. تطبيق مرهم على عيون الحيوان واستخدام ملاقط خيمة الجلد حول الحلمة الرابعة من الفأرة الأولى، لإنشاء نفق للمحاقن لمتابعة. عقد الحقنة مع شطبة تواجه صعودا وتحت الجلد تدخل الجلد في خمسة إلى 10 ملليمترات من الحلمة، وبعد النفق حتى تلميح إبرة تصل تقريبا الحلمة.
استخدام ملاقط خيمة الجلد حول الحلمة الأولى يخلق نفقا للمحاقن لمتابعة. يجب إدخال الإبرة بين نصائح الملاقط وينبغي أن ترفع بدلاً من الاكتئاب في الأنسجة. قم بتحريك رأس الإبرة بعناية إلى داخل وسادة الدهون الثديية حتى تصبح القشرة تحت الحلمة، وحرر خيمة الجلد للسماح بحقن بطيء للخلايا السرطانية.
عند الإدراج، قم بتحريك طرف الإبرة بعناية إلى داخل وسادة الدهون الثديية حتى تكون الممشى تحت الحلمة. وسوف تشعر بمقاومة لضمان تسليم الخلايا إلى الموقع الصحيح. عندما يتم حقن جميع الخلايا، قم بتحويل الإبرة قليلاً إلى الجانب ثم سحب الحقنة ببطء.
استخدام مسحة القطن لممارسة الضغط على جرح إبرة لمدة 10 إلى 20 ثانية، لجعل هناك لا تسرب السوائل. يجب أن تظهر الحلمة المحقونة كـ كرة شفافة وبيضاء ومسطحة ، مع وجود الحلمة في المركز. لإنشاء حجم الورم، كبح جماح الجانب البطن الماوس حتى واستخدام الفرجار لقياس طول الورم وعرضه.
لالتقاط الورم bioluminescence، 10 دقائق قبل التصوير حقن 150 ملليغرام لكل كيلوغرام من D-لوسيفرين في الجزء الخلفي من رقبة الماوس. والتقاط الصور الناسخة بيولوجيا من الورم الأساسي و الانبثاث تحت المعلمات المناسبة التصوير الاحتياد الحيوي. عند نقطة الوقت التجريبي المناسبة، استخدم المقصات لجني الورم من الجلد.
وتطبيق الحلول المسكنة على موقع الجراحة لتخفيف الألم بعد الجراحة. ثم أغلق الجلد بالخيوط الجراحية وفقًا للبروتوكولات القياسية. السماح للحيوان بالتعافي تحت مصباح الاحترار مع مراقبة حتى الشفاء التام.
استخدام مشرط لخفض الورم الأساسي إلى قطعتين متساويتين. تخزين نصف الأنسجة في 4٪ شبهformaldehyde للحماة الدموية اللاحقة وويسين تلطيخ ومناعة الكيمياء. تجميد النصف الآخر في النيتروجين السائل لغربي النشاف أو العزلة RNAi.
في نقطة النهاية التجريبية المناسبة حصاد الرئتين وفقا لبروتوكولات التشريح القياسية وغسل الجهاز في برنامج تلفزيوني. ثم إصلاح الرئتين في 4٪ paraformaldehyde للتحقق من الانبثاث بواسطة الهماتوسلين وتلطيخ إيوسين. يمكن قياس نمو الورم الأساسي من خلال حجم الورم والتخمين الحيوي للخلايا السرطانية الحية ، كما هو موضح.
لا يتم ملاحظة الانبثاث خلال المراحل المبكرة من التطعيم حيث لم يتم تحديد أي ورم ثانوي ، أو أن الإشارات الإنارة الحيوية القوية للورم الأساسي تعرقل اكتشاف بؤرة انبثاثية صغيرة مع إشارات ضعيفة. بعد استئصال، يمكن الكشف عن إشارة التخمة الحيوية من بؤر النقيلي للأعضاء البعيدة وتحليلها. تحليل مورفولوجيا كل من ورم الثدي الأولية وأقسام الرئة من قبل الهماتوسلين وتلطيخ إيوسين يكشف زيادة تولد الأوعية في الخلايا السرطانية تلقيح الحيوانات كما يتضح من مضادة للأقراص CD31 تلطيخ علامة microvessel.
عند محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن تتأكد من أن طرف الإبرة في الموقع الصحيح قبل تسليم الخلايا السرطانية. بعد هذا الإجراء, يمكن إجراء المرذاذ, مثل الموجات فوق الصوتية الحيوانية, للإجابة على أسئلة إضافية حول مكملات المثانة من الورم الأساسي في الجسم الحي. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الأورام وتطوير الدواء في استكشاف العوامل الرئيسية والمسارات التي تشارك في الأورام وآليات الدواء المضاد للسرطان في نماذج المورين.
لا ننسى أن العمل مع ايزوفلوران أو غيرها من التخدير الغاز يمكن أن يكون من الصعب للغاية للجرعة وأن الاحتياطات مثل استخدام قناع الكربون المنشط, ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
