إعداد الماوس لعملية جراحية. حلق الربع السفلي من البطن باستخدام شفرة حلاقة وتطهير المنطقة باليود. ضع الماوس على سطح عمل نظيف على ظهره مع توجيه الرأس بعيدًا عن المشغل.
إجراء شق الجلد طولي حوالي نصف سنتيمتر في أسفل البطن الأيسر. يجب الحرص على عدم اختراق تجويف البريتوني. استخدم مقص صغير لتمديد الشق حوالي 1-2 سنتيمتر.
جعل شق العضلي للوصول إلى تجويف البريتوني. في معظم الحالات ، يكون ال cecum على الجانب الأيسر من البطن. عزل الـ(سيكوم)
باستخدام ملقط حادة، تشريحية، وبلطف وبعناية فضح الأعوم من خلال شق. الخطوة الرابعة هي الربط. موقف الربط على cecum يحدد مستوى شدة الإنتان.
الربط ما يقرب من 75٪ من cecum يؤدي إلى الإنتان الشديد. ligating 50٪ من cecum يحفز الإنتان متوسط المستوى. في حين أن ربط 25٪ أو أقل من الأعوس سيؤدي إلى تعفن الدم طفيفة.
ليغيت الأعون في الموقع المعين. تأكد من عدم ligate صمام ileocecal. الخطوة الخامسة هي ثقب الـ(سيكوم)
باستخدام إبرة، ثقب الأعوم مع واحد من خلال ومن خلال ثقب في منتصف الطريق بين الربط وطرف من الأعوم. تأكد من عدم ثقب أي أوعية دموية. لضمان وجود ثقب كامل ، بثق قطرة صغيرة من البراز من كل من ثقوب الإبر.
استبدال بعناية cecum في تجويف البطن. أغلق عضلات البطن عن طريق وضع خياطة بسيطة على التوالي وإغلاق الجلد. تنظيف الجلد مع اليود.
حقن الماوس مع محلول ملحي مسبق الدفء لإنعاش. ضع الفأرة مرة أخرى في القفص مع إمكانية وصول غير محدودة إلى الطعام والماء. بعد حوالي ثلاثة أيام من الربط cecal وثقب أو إجراء CLP، ونحن نخضع الماوس لضربة ثانية مع عدوى داخل الأنف لتحفيز الالتهاب الرئوي الذي يحدث في كثير من الأحيان في تعفن الدم.
اقترب من رقبة الفأر من الخلف ، بسلاسة ولطف. الإبهام وسببة اليد اليسرى تشكل موقف على شكل حرف U. عقد الرقبة مباشرة وراء الأذنين حتى يتم تقييد رأس الماوس تماما.
إدخال العدوى داخل الأنف. باستخدام ماصة 100 ميكرولتر، وغرس سلالة المكورات العنقودية aureus intranasally. عقد الماوس في وضع مستقيم، إسقاط ببطء اثنين إلى ثلاثة ميكرولترات من الحل البكتيري في كل من أنف الماوس.
رفع الماوس صعودا وهبوطا مع رأسه صعودا وذيل لأسفل للمساعدة في حل البكتيرية دخول القصبة الهوائية. رفع الماوس بسرعة بسرعة مع خفض بلطف وببطء. كرر تقطير 15 مرة أو حتى يتم غرس كل محلول البكتيرية.
الخطوة الأخيرة هي إنهاء الإجراء. وضع الماوس على الفراش الزاوية في حوالي زاوية 35 درجة لاسترداد. تأكد من أن الماوس على ظهره مع رأسه وضع.
مشاهدة الماوس للتأكد من أنه تم استردادها تماما من التخدير والعملية. بعد تسطيح الفراش، ضع الماوس مرة أخرى في القفص مع إمكانية وصول غير محدودة إلى الطعام والماء. بدأت الفئران تموت في حوالي 12 ساعة بعد تحريض التهاب الصفاق.
وكان معدل الوفيات أعلى بكثير بالنسبة للفئران مع CLP قبل الالتهاب الرئوي. ثلاثة أيام بعد الجراحة، وكان الفئران CLP أكثر الوفيات مع إدارة داخل الأنف من المكورات العنقودية أوريوس. زادت مستويات السيتوكينات المصلية الموالية للالتهابات بشكل كبير في 24 ساعة بعد تقطير البكتيريا في الفئران الإنتان بالمقارنة مع الفئران التي كان CLP وحدها أو الشام تشغيل الفئران مع إصابة ثانية.
ومع ذلك ، أظهرت الفئران مزدوجة ضرب انخفاض كبير في مستويات السيتوكين السوائل BAL بالمقارنة مع كل من SA وجراحة الشام بالإضافة إلى الفئران SA. وبالتالي CLP يضعف الدفاع المضيف ويزيد من التعرض للعدوى. هذا النموذج المزدوج ضرب هو أداة قيمة لفهم الآليات الجزيئية للتفاعل المضيف الممرض، والتي قد تفتح الطريق لتطوير جديدة، فعالة الأدوية والعلاجات الأخرى لعدوى الحشرات الخارقة.
