手術のためにマウスを準備します。カミソリを使用して腹部の下の象限を剃り、ヨウ素で領域を消毒します。マウスを背面のクリーンな作業面に置き、頭をオペレータから離します。
左下腹部に長い皮膚切開を約半センチにします。腹腔を貫通しないように注意してください。小さいはさみを使って切開を1~2センチほど伸ばします。
腹腔へのアクセスを得るために筋肉内切開を行います.ほとんどの場合、盲腸は腹部の左側にあります。セクカムを分離します。
鈍い、解剖学的鉗子を使用して、穏やかに慎重に切開を通して盲検を露出させる。ステップ4はライゲーションです。セカム上のライゲーションの位置は敗血症の重症度レベルを決定する。
セクムの約75%を結紮すると、重度の敗血症を誘発する。セクムの50%を結紮すると、中レベル敗血症を誘発する。一方、セクカムの25%以下を結紮すると軽度の敗血症が生じる。
指定された位置でセカムをリゲートします。イレオセカルバルブをリゲートしないようにしてください。ステップ5は、セクカムを穿刺することです。
針を使用して、単一のスルーでセカムを穿穿刺し、結紮とセカムの先端の間の途中で穿刺する。血管を穿刺しないようにしてください。完全な穿刺があったことを確認するには、両方の針穴から小さな便の液滴を押し出します。
慎重に腹腔にセクカムを交換してください。簡単なランニング縫合糸を適用して腹部の筋肉を閉じ、皮膚を閉じます。ヨウ素で肌をきれいにします。
マウスに事前に温めた生理食前溶液を注入して蘇生します。食べ物と水への無制限のアクセスでケージに戻ってマウスを置きます。脳結紮と穿刺またはCLP処置から約3日後、我々は敗血症でしばしば起こる肺炎を刺激するために鼻腔内感染でマウスを2回目のヒットに服従させる。
後ろからマウスの首に近づき、滑らかに優しく。左手の親指と人差し指はU字型の位置を形成する。マウスヘッドが完全に拘束されるように、耳のすぐ後ろに首を保持します。
鼻腔内感染を導入する。100マイクロリットルピペットを用いて、黄色ブドウ球菌株を鼻腔内に植え付ける。マウスを直立した位置に保持し、ゆっくりと2〜3マイクロリットルの細菌溶液をマウスの両方の鼻孔に落とします。
マウスを頭を上下に上げ、尾を下にして、細菌溶液が気管に入るのを助けます。マウスを素早く上げながら、ゆっくりと下げます。15回、または全ての細菌溶液が植え付けされるまで、この蒸留を繰り返します。
最後の手順は、手順を完了することです。角度のある寝具の上にマウスを約35度の角度で置いて回復します。マウスが頭を上げて背面に置かっていることを確認します。
マウスが麻酔と手順から完全に回復していることを確認します。寝具を平らにした後、食べ物と水への無制限のアクセスでケージにマウスを戻します。マウスは腹炎の誘導後約12時間で死に始めた。
肺炎の前にCLPを持つマウスの死亡率ははるかに高かった。術後3日間、CLPマウスは黄色ブドウ球菌の鼻腔内投与でより多くの死亡率を有していた。血清プロ炎症性サイトカインのレベルは、CLP単独またはシャム操作マウス単独のマウスと比較して敗血症マウスの細菌中毒後24時間で有意に増加した。
しかし、ダブルヒットマウスは、SAおよびシャム手術とSAマウスの両方と比較してBAL流体サイトカインレベルの有意な減少を示した。したがってCLPは宿主防御を損ない、感染に対する感受性を増大させる。このデュアルヒットモデルは、宿主と病原体の相互作用のための分子メカニズムを理解するための貴重なツールであり、スーパーバグ感染のための新しい効果的な薬物および他の治療法を開発する道を開く可能性があります。
