Préparez la souris pour la chirurgie. Raser les quadrants inférieurs de l’abdomen à l’aide d’un rasoir et désinfecter la zone avec de l’iode. Placez la souris sur une surface de travail propre sur son dos avec la tête pointant loin de l’opérateur.
Faire une incision longitudinale de la peau d’environ un demi-centimètre de long dans le bas-ventre gauche. Veillez à ne pas pénétrer dans la cavité péritonéale. Utilisez de petits ciseaux pour étendre l’incision d’environ un à deux centimètres.
Faire une incision intramusculaire pour accéder à la cavité péritonéale. Dans la plupart des cas, le cecum est sur le côté gauche de l’abdomen. Isoler le cecum.
À l’aide de forceps émoussés et anatomiques, exposer délicatement et soigneusement le cécu par l’incision. La quatrième étape est la ligature. La position de la ligature sur le cecum détermine le niveau de gravité de la septicémie.
Ligating approximativement 75%du cecum induit le sepsis grave. Ligating 50%du cecum induit la septicémie de niveau moyen. Alors que la ligature de 25% ou moins du cecum se traduira par une septicémie mineure.
Ligate le cecum à la position désignée. Assurez-vous de ne pas ligate la valve ileocecal. La cinquième étape consiste à percer le cecum.
À l’aide d’une aiguille, perforer le cécu avec un seul à travers et à travers la perforation à mi-chemin entre la ligature et la pointe du cecum. Assurez-vous de ne percer aucun vaisseau sanguin. Pour s’assurer qu’il y avait une ponction complète, extrader une petite gouttelette d’excréments des deux trous d’aiguille.
Remplacez soigneusement le cécu dans la cavité abdominale. Fermez la musculature abdominale en appliquant de simples sutures de course et fermez la peau. Nettoyer la peau avec de l’iode.
Injecter à la souris une solution saline préchauffée pour réanimer. Remettre la souris dans la cage avec un accès illimité à la nourriture et à l’eau. Après environ trois jours de la ligature cécale et la perforation ou la procédure CLP, nous soumettons la souris à un deuxième coup avec une infection intranasale pour stimuler la pneumonie qui se produit souvent dans la septicémie.
Approchez le cou de la souris par derrière, en douceur et en douceur. Le pouce et l’index de la main gauche forment une position en forme de U. Tenez le cou immédiatement derrière les oreilles de sorte que la tête de la souris est complètement retenue.
Introduire l’infection intranasale. À l’aide d’une pipette de 100 microlitres, instiller la souche staphylococcus aureus intranasally. Tenant la souris en position verticale, déposez lentement deux à trois microlitres de la solution bactérienne dans les deux narines de la souris.
Soulevez la souris de haut en bas avec sa tête vers le haut et la queue vers le bas pour aider la solution bactérienne à pénétrer dans la trachée. Soulevez la souris rapidement tout en l’abaissant doucement et lentement. Répétez l’instillation 15 fois ou jusqu’à ce que toute la solution bactérienne soit inculquée.
La dernière étape consiste à terminer la procédure. Mentez la souris sur la literie inclinée à un angle d’environ 35 degrés pour récupérer. Assurez-vous que la souris est sur le dos avec sa tête couchée.
Surveillez la souris pour vous assurer qu’elle est complètement récupérée de l’anesthésie et de la procédure. Après avoir aplati la literie, remettre la souris dans la cage avec un accès illimité à la nourriture et à l’eau. Les souris ont commencé à mourir vers 12 heures après l’induction de la péritonite.
La mortalité était beaucoup plus élevée chez les souris atteintes de PCL avant une pneumonie. Trois jours après chirurgie, les souris de CLP ont eu plus de mortalité avec une administration intranasal de staphylococcus aureus. Les niveaux des cytokines pro-inflammatoires de sérum ont sensiblement augmenté à 24 heures après instillation bactérienne dans les souris de sepsis comparées aux souris qui ont eu CLP seules ou les souris sham actionnées avec un deuxième coup.
Cependant, les souris à double succès ont montré la diminution significative des niveaux de cytokine liquide de BAL comparés à la chirurgie de SA et de Sham plus les souris de SA. Par conséquent, CLP nuit à la défense de l’hôte et augmente la sensibilité à l’infection. Ce modèle à double succès est un outil précieux pour comprendre les mécanismes moléculaires de l’interaction hôte-pathogène, qui peuvent ouvrir la voie à la développement de nouveaux médicaments efficaces et d’autres thérapeutiques pour les infections à superbactéries.
