脓毒症诱导免疫抑制的切卡结扎和穿刺和鼻内感染双重模型的设计

准备鼠标做手术。用剃须刀剃掉腹部的下部象限，用碘对该区域进行消毒。将鼠标放在其背面清洁的工作表面上，头部指向远离操作员的位置。

在左下腹部做一个长约半厘米的纵向皮肤切口。小心不要穿透腹腔。用小剪刀将切口延长约一到两厘米。

做一个肌肉切口，以获得进入腹腔。在大多数情况下，cecum 位于腹部左侧。隔离 cecum 。

使用钝的解剖钳子，通过切口轻轻地和仔细地暴露 cecum。第四步是结扎。结扎在 cecum 上的位置决定了败血症的严重程度级别。

连接约75%的塞库姆诱发严重的败血症。50%的塞库姆诱发中级败血症。而连接 25% 或更少的 cecum 将导致轻微的败血症。

在指定位置将 cecum 拉起。确保不要将气量阀除垢。第五步是刺穿塞库姆。

使用针头，在结扎和切库姆尖端之间的中间穿刺，用单通和穿刺打穿。确保不要刺穿任何血管。为确保完全穿刺，从两个针孔中挤出一小滴粪便。

小心地将 cecum 更换到腹腔中。通过应用简单的运行缝合线关闭腹部肌肉并关闭皮肤。用碘清洁皮肤。

将鼠标注入预热盐水溶液以复苏。将鼠标放回笼子，无限制地获得食物和水。在从切卡结扎和穿刺或CLP程序约三天后，我们让小鼠受到第二次鼻内感染，以刺激肺炎，经常发生在败血症。

从后面接近鼠标的脖子，平稳而轻柔。左手的拇指和食指形成一个U形位置。将脖子放在耳朵后面，使鼠标头完全克制。

引入鼻内感染。使用100微升移液器，在鼻内注入金黄色葡萄球菌菌株。将鼠标直立放置，缓慢地将两到三微升的细菌溶液滴入小鼠的两个鼻孔中。

向上和向下抬起鼠标，其头部向上和尾部向下，以帮助细菌溶液进入气管。快速抬起鼠标，同时轻轻缓慢地降低鼠标。重复灌输15次，或直到所有细菌溶液被灌输。

最后一步是完成该过程。将鼠标以大约 35 度角将鼠标放在倾斜的床上用品上以恢复。确保鼠标的背面是头部。

观察鼠标，以确保它完全从麻醉和手术恢复。将床上用品压平后，将鼠标放回笼子，无限量获得食物和水。小鼠在进入周膜炎后大约12小时后开始死亡。

肺炎前患有CLP的小鼠的死亡率要高得多。手术后三天，CLP小鼠的死亡率较高，而金黄色葡萄球菌的鼻内给法则较高。与单独使用CLP的小鼠或第二次击中的Sham手术小鼠相比，在败血症小鼠细菌注入后24小时内血清亲炎细胞因子的含量显著增加。

然而，与SA和Sham手术加上SA小鼠相比，双击小鼠的BAL液体细胞因子水平显著降低。因此，CLP 会损害主机防御，增加感染的易感性。这种双命中模型是了解宿主-病原体相互作用的分子机制的宝贵工具，它可能为开发新的、有效的药物和其他治疗超级细菌感染的药物开辟途径。