수술을 위해 마우스를 준비합니다. 면도기로 복부의 하부 사분면을 면도하고 요오드로 지역을 소독하십시오. 마우스를 뒤쪽의 깨끗한 작업 표면에 놓고 머리가 연산자에서 멀리 가리키는 것으로 나타났습니다.
왼쪽 하복부에서 반 센티미터 길이의 세로 피부 절개를 합니다. 복막 구멍을 뚫지 않도록 주의하십시오. 작은 가위를 사용하여 절개를 약 1~2센티미터 확장합니다.
복막 구멍에 접근하기 위해 근육 절개를 합니다. 대부분의 경우, cecum은 복부의 왼쪽에 있습니다. cecum을 분리합니다.
무딘 해부학 적 집게를 사용하여 절개를 통해 cecum을 부드럽게 조심스럽게 노출시합니다. 4단계는 결찰입니다. cecum에 결찰의 위치는 패혈증의 심각도 수준을 결정합니다.
약 75%의 세이컴을 계면 심한 패혈증을 유발합니다. cecum의 50%를 리칭하는 것은 중간 수준의 패혈증을 유도합니다. 반면 25% 이하의 세쿰은 경미한 패혈증을 초래할 것입니다.
지정된 위치에서 cecum을 리게이트합니다. 일레오세칼 밸브를 리게이트하지 않도록 하십시오. 5단계는 cecum을 펑크하는 것입니다.
바늘을 사용하여, 결찰과 cecum의 끝 사이의 중간 방법을 통해 단일 관통으로 cecum을 천공. 혈관에 구멍을 뚫지 않도록 하십시오. 완전한 펑크가 있는지 확인하기 위해 두 바늘 구멍에서 작은 배설물 방울을 제거하십시오.
조심스럽게 복강으로 cecum을 교체. 간단한 달리기 봉합사를 적용하여 복부 근육을 닫고 피부를 닫습니다. 요오드로 피부를 청소하십시오.
미리 데워진 식염수 용액으로 마우스를 주입하여 소생시합니다. 음식과 물에 무제한 액세스 할 수 있도록 다시 케이지에 마우스를 배치합니다. 세칼 결찰 및 천자 또는 CLP 절차에서 대략 3 일 후에, 우리는 패혈증에서 수시로 생기는 폐염을 자극하기 위하여 비강 내 감염으로 마우스를 두 번째 명중으로 주체합니다.
마우스의 목에 뒤에서 매끄럽고 부드럽게 접근합니다. 왼손의 엄지손가락과 검지 손가락은 U자형 위치를 형성한다. 마우스 머리가 완전히 절제되도록 목은 귀 바로 뒤에 누를 수 있습니다.
비강 내 감염을 소개합니다. 100 마이크로리터 파이펫을 사용하여 포도상 구균 균주를 인트라나슬로 주입합니다. 마우스를 똑바로 세게 유지하여 세균용 용액의 2~3마이크로리터를 마우스의 콧구멍에 천천히 떨어뜨립니다.
마우스를 위아래로 위아래로 올리고 꼬리를 아래로 올려 세균용 용액이 기관으로 진입할 수 있도록 돕습니다. 마우스를 부드럽게 천천히 낮추면서 마우스를 빠르게 올립니다. 모든 세균용 용액이 주입될 때까지 15회 또는 주입을 반복합니다.
마지막 단계는 절차를 완료하는 것입니다. 마우스를 약 35도 각도로 각진 침구에 놓아 복구합니다. 마우스가 머리를 누워 서 허리에 있는지 확인합니다.
마우스를 보고 마취및 절차에서 완전히 회복되었는지 확인하십시오. 침구를 평평하게 한 후 음식과 물에 무제한으로 마우스를 케이지에 다시 놓습니다. 마우스는 회대염의 유도 후에 약 12 시간에 정지하기 시작했습니다.
사망률은 폐렴 전에 CLP를 가진 마우스를 위해 훨씬 더 높았습니다. 수술 후 3일 동안 CLP 마우스는 포도상 구균의 비강 내 투여로 더 많은 사망률을 보였습니다. 혈청 프로 염증 성 사이토카인의 수준은 혈청 단독으로 CLP를 가진 마우스또는 두 번째 히트를 가진 Sham 작동 마우스에 비해 패혈증 마우스에 있는 세균성 주입 후에 24 시간에서 현저하게 증가했습니다.
그러나, 이중 히트 마우스는 SA와 샴 수술 플러스 SA 마우스모두에 비해 BAL 유체 사이토카인 수준에서 상당한 감소를 나타냈다. 따라서 CLP는 호스트 방어를 손상시키고 감염에 대한 감수성을 증가시킵니다. 이 이중 히트 모델은 숙주 병원체 상호 작용을위한 분자 메커니즘을 이해하는 귀중한 도구이며, 이는 슈퍼 버그 감염을위한 새롭고 효과적인 약물 및 기타 치료법을 개발하는 길을 열 수 있습니다.
