وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 HL109420 إلى WM وAHA 9320033N إلى LY.

طعم خيفي مسانج الماوس والكسب غير المشروع نموذج زرع وقد وافق جميع الدراسات على الحيوانات من قبل المؤسسات ورعاية الحيوان لجان استخدام جامعة ييل. لنموذج طعم خيفي، وموسط شرائح الأبهر الصدري من الذكور، 4-5 الاسبوع WT القديمة (C57BL/6J) أو الفئران الإنترفيرون γR-KO في الشريان الأورطي البطني من المتلقي أنثى، الأسبوع WT القديمة 8-12 باستخدام نهاية إلى نهاية المجهرية تقنية توصيلي (انظر المقبل للحصول على التفاصيل). للحصول على نموذج الكسب غير المشروع مسانج، وموسط شرائح للأبهر الصدري من الذكور، 4-5 الاسبوع الفئران WT القديم إلى أبهر البطن من الذكور، 8-12 أسبوع من العمر الإنترفيرون γR1-KO باستخدام نهاية إلى نهاية المجهرية توصيلي تقنية. في 1 أسبوع بعد العمل الجراحي، تم تلقيح الحيوانات الرابع مع ​​Ad5.CMV الماوس الإنترفيرون γ أو Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) في 1 × 10 9 PFU. مصل الماوس الإنترفيرون γ تم قياس مستويات بواسطة ELISA (eBioscience) في 1 و بعد 5 أسابيع الإدارة اتش. بعض الحيوانات تلقى BrdU(سيغما الدريخ) في 100 ملغ / كغ الشوري لمدة 2 اسابيع قبل التضحية. نهاية إلى نهاية المجهرية تقنية توصيلي (سيتم اتخاذ فيديو لهذا الجزء): 1. إجراء المانحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع الحقن داخل الصفاق المانحة من الكيتامين (50 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التأكد من التخدير كافية، ضع الفئران المانحة تحت المجهر التشغيل في X8-30 التكبير على صينية في موقف ضعيف، واستخدام اليود الوسادة الإعدادية والإعدادية الوسادة الكحول لإعداد جدار الصدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شق جدار الصدر الأمامي من خلال الضلوع والحجاب الحاجز لفضح القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الأذين الأيمن، وضخ 10 مل من heparinized (100 U / مل) محلول ملحي في البطين الأيسر لطرد الفئران باستخدام حقنة 10 مل مع إبرة عيار 25. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقطع القلب والرئتين لفضح طول الشريان الأورطي الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الشريان الأورطي الصدري بعناية لتقليل الصدمة مباشرة، حين إلىه تحديد وligate وتقسيم فروع الخشب باستخدام 11-0 خاط بالقرب من الشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة في الشريان الأورطي الصدري خال من الأنسجة المحيطة بها، واستئصال الأبهر الصدري كامل للزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح نهاية قطع من الشريان الأورطي المانحة مع heparinized (100 U / مل) محلول ملحي، وتخزينها في نفس الحل على الجليد (حتى 6 ساعة) حتى الزرع. </li></ol> 2. إجراء المتلقي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الفئران المتلقي مع كيتوبروفين الملكية الفكرية (5 ملغ / كلغ) لتسكين الألم، وthenanesthetize الفئران مع الكيتامين IP (50 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ). الفئران المتلقية هي تخدير عميق في غضون 10 دقيقة لمدة 60-90 دقيقة. أثناء الجراحة، ويتم تقييم مستوى التخدير كل 15 دقيقة بواسطة معسر جدار البطن الأمامي أو القدم باستخدام ملقط. إذا يتفاعل الحيوان إلى المنبهات الضارة في أي وقت أثناء الجراحة، سيتم من قبل SC أو الدردشة تدار جرعة إضافية من الكيتامين وزيلازين (1/4 أو 1/3 جرعة الأصلي) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التأكد من التخدير كافية، يحلق الفراء في جدار البطن الأمامي باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، وتنظيف الجلد باستخدام اليود الإعدادية الوسادة والكحول الاعداديه منصة، وتغطية العينين باستخدام مرهم للعين. أثناء الجراحة، سيتم استخدام تقنيات العقيم التالية للعمليات، بما في ذلك التنظيف طاولة العمليات مع التبييض 10٪، وارتداء قفازات معقمة وباستخدام أدوات معقمة المجهرية (الصكوك تعقيمها بالبخار لبدء العملية، ثم الزجاج الساخن حبة تعقيم الصكوك بين عمليات متعددة، الخ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران المتلقية تحت المجهر التشغيل في التكبير من X8-30 على صينية في موقف ضعيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شق جدار البطن في خط الوسط من سيفي الشكل إلى العانة، وانتشرت جدار البطن بصرف النظر باستخدام الصغرى ضام لفضح تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب الأمعاء متفوق والتفاف بشاش مبلل بمحلول ملحي. الفئران المتلقية تصبح توترت بسبب فقدان هيئة التعليم العالير من خلال الأمعاء تخريجها. فمن المهم للحفاظ على الدفء الحيوان. ومع ذلك، لا يتم استخدام لوحة التدفئة أثناء الجراحة كما انخفاض حرارة الجسم متواضعة ذات فائدة في منع إصابة في العمود الفقري خلال انسداد تدفق الدم الأبهري وكذلك هناك نقل الحرارة غير فعالة مع تدفق الدم الغائب على النصف السفلي من الجسم الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأعضاء التناسلية دون المستوى، والتفاف مناطق البطن من الفئران المتلقية بشاش المالحة حل مبلل، واستخدامها لسحب المستقيم إلى الجانب الأيمن من البطن. والمروية الأنسجة تتعرض دوريا مع محلول ملحي خلال الزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بصراحة جزء من الشريان الأورطي infrarenal بين السفينة الكلوي قريب والتشعب الأبهري بشكل أقصى وفصل من الوريد الأجوف السفلي (IVC) بعناية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وligate كل من الفروع الصغيرة التي تنشأ من هذا الجزء من الشريان الأورطي البطني باستخدام مادة البولي أميد 11-0 خياطة حيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عبر المشبك الجزء المعزول منالأبهر bdominal باستخدام اثنين من المشابك الأوعية الدموية المجاورة بشكل مباشر 5 مم وبصرف النظر، واحد في كل نهاية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القطع الشريان الأورطي البطني بين المشابك باستخدام الصغرى مقص حاد لإنشاء مواقع توصيلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقطع شريحة صغيرة من الشريان الأورطي البطني (تصل إلى 0.4 ملم في الطول) من واحد قطع الشريان الأورطي نهاية المتلقي مقطوع لاستيعاب الكسب غير المشروع الأبهر المانحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح شرائح الأبهر بين المشابك باستخدام محلول ملحي heparinized لإزالة الدم المتبقي. يتم ري قطاعات الأبهر بين المشابك والكسب غير المشروع الأبهر المانحة دوريا مع heparinized (100 U / مل) محلول ملحي (ما يصل الى 40 مل / كجم) خلال مفاغرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القطع جانبي الشريان الأورطي المانحة مع الدقيقة مقص حاد لإنشاء الكسب غير المشروع شريحة من 2.5 ملم في الطول للزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الكسب غير المشروع الأبهر المانحة في موقف مثلي، يفاغر الدانية والقاصية نهاية الكسب غير المشروع المانحة لالدانية والقاصية قطع نهاية المستلم من الشريان الأورطي البطني، على التوالي، مع وضع حد-Tنمط O-نهاية باستخدام مادة البولي أميد 11-0 خياطة حيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالغرز المستمر، ضع الغرز البقاء في 3 و 09:00 المواقف أولا. بين اثنين من الغرز البقاء في كل جانب من الكسب غير المشروع، يفاغر على حد سواء حواف قطع في غرز 3-4 باستخدام الخيوط الجراحية على التوالي، وربط الغرز تشغيل للبقاء الغرز مع عقدة مزدوجة. لأن كلا طبقات من إغلاق مستمرة، يتم زيادة خطر تفزر. يجب أن يكون الكسب غير المشروع الأبهر المانحة في طول المناسبة للاتصال الدانية والقاصية قطع نهاية المستلم من الشريان الأورطي البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالغرز توقف، بناء أربعة مفاغرة في 3 و 09:00 المواقف في كلا الجانبين من الكسب غير المشروع أولا، ويفاغر على حد سواء حواف قطع في غرز 3-4 بين اثنين من الغرز البقاء في كل جانب من الكسب غير المشروع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الافراج عن المشبك البعيدة للسماح بتدفق الوراء في الكسب غير المشروع، وتحديد مواقع النزيف وجعل غرز إضافية في غضون 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التأكد الارقاء مرضية، والإفراج عن المشبك الداني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكيد المباح الكسب غير المشروع من قبل وجود نبض قوي في الكسب غير المشروع والجزء المجاور القريب من الشريان الأورطي البطني الأم، وخاصة في الجزء المجاور القاصي من الشريان الأورطي البطني والشريان المساريقي السفلي. النظر في تخثر في مواقع توصيلي إذا كان نبض يقلل في غضون بضع دقائق بعد استعادة تدفق الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرجاع الأمعاء إلى تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطة إغلاق جدار البطن باستخدام 5-0 خياطة النايلون في طبقة العضلات وطبقة الجلد، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران المتلقي في قفص نظيفة على الجزء العلوي من وسادة التدفئة، والانتظار 1-2 الموارد البشرية لالفئران ليستعيد وعيه والتعافي من التخدير. فمن المهم للحفاظ على الدفء الكافي الحيوان خلال فترة الانتعاش. الحفاظ على الفئران في قفص دافئ وجاف قبل أعقاب الحيوان من التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم وظيفة الحركة من أطرافه الخلفية بعد الشفاء الفئران، ومرة ​​أخرى في اليوم الثاني. وسوف يتم تأكيد عملية جراحية زرع ناجحة طو يتم احترام أي خلل في الأطراف الخلفية في الفئران المتلقية في اليوم الثاني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة الفئران المتلقي مع كيتوبروفين في مياه الشرب (5 ملغ / كغ / د = 27 ميكروغرام / مل في مياه الشرب) لمدة 48 ساعة. إذا أي الفئران المتلقية تعاني من ألم غير مرتاح من المسكنات بعد العملية الجراحية كما يتضح من فقدان الحركة، وعدم العريس، غير طبيعية تتزاحم الموقف، وغيرها، وسوف يتم التخلص. وسوف يتم التخلص من الحيوانات في نهاية محددة سلفا نقاط بعد 1-60 أيام. </li></ol> تحليل الكسب غير المشروع وتم شراء ترقيع الشريان في طعم خيفي في 4 أسابيع والطعوم في نموذج الكسب غير المشروع مسانج كانت 6 أسابيع بعد العملية (بعد 5 أسابيع العدوى الفيروسية) وتحليلها بواسطة تقنيات النسيجية القياسية لالمرنة فان Gieson (EVG) تلطيخ، الهيماتوكسيلين ويوزين (HE) تلطيخ وتلطيخ المناعي. تم التقاط الصور باستخدام نظام المجهر المناعي (زايس). كان العد الخلية نواة محاطة المناعية إيجابية أداءإد تحت التكبير عالية ومتوسط ​​من 5 المقاطع العرضية لكل الكسب غير المشروع. القياسات منطقة الكسب غير المشروع من التجويف (داخل البطانة)، البطانية (بين الصفيحة المرنة البطانة والداخلية، IEL)، ووسائل الإعلام (بين IEL والصفيحة المرنة الخارجية، وثعبان البحر)، سمك الجدار (بين الصفيحة المرنة البطانة والخارجية) وحسبت السفينة كله (داخل ثعبان البحر) من 5 المسلسل المقاطع العرضية، 150 ميكرون وبصرف النظر عن كل الكسب غير المشروع، وذلك باستخدام تحليل الصور بمساعدة الحاسوب والمعاهد الوطنية للصحة الصورة 1.60 ( <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/nih-image</a> ). التحليل الإحصائي يتم التعبير عن كافة البيانات كما يعني ± SEM. ثنائي الطرف، وأجريت الاختبارات ر الاقتران وتحليل ANOVA اتجاهين باستخدام برنامج حاسوبي بريزم (GraphPad البرمجيات). واعتبرت الاختلافات مع P &lt;0.05 للإشارة إلى الأهمية الإحصائية.

<ol>
	<li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis.">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li><li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection.">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li><li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li><li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart.">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allograft+arteriopathy:+pathogenesis+update.">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+vascular+disease:+immune+response+meets+the+vessel+wall.">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li><li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts:+role+of+interferon-gamma.">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li><li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts.">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li><li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients.">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li><li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells.">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li><li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+some+females+reject+males?+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection.">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li><li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy.">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li><li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis.">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li><li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes.">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li><li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy.">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li><li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation.">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li><li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries.">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li><li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+vascular+rejection:+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models.">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li><li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells.">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li><li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-&#947;-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion.">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-&#947;-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li></ol>

ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

وتركز البروتوكولات المذكورة على نماذج GA الماوس. يمكن تطبيق إجراءات لنماذج أخرى زرع الكسب غير المشروع. وتشمل هذه النماذج طعم أجنبي أنسنة (أي قطاعات الشريان التاجي الإنسان موسط في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي)، ورفض نموذج الفأر GA الحادة (أي...

arteriosclerois الكسب غير المشروع (GA)، وتسمى أيضا اعتلال وعائي طعم خيفي، هي آفة مرضية أن يتطور مع مرور أشهر إلى سنوات في الأعضاء المزروعة التي تتميز منتشر، تضيق كفافي من كامل شجرة الأوعية الدموية الكسب غير المشروع 7. قد يسبب المراحل المبكرة التضيق غريب الأطوار والتنسيق التي هي أكثر وضوحا في الشرايين، وبالتالي تشبه على نحو أوثق التضيق ينظر في تصلب الشرايين التقليدية. فقدان التجويف السفن الكسب غير المشروع نتائج من التوسع باطنة بسبب تسلل الخلايا T المضيفة والضامة وخصوصا لتراكم المصفوفة خارج الخلية والعضلات الملساء مثل الخلايا نشأت من الكسب غير المشروع، مضيف أو كليهما 5، 13، 19، أن يتم تعويض كاف بواسطة الخارج إعادة عرض السفينة. في المغايرة القلب، الآفات الأكثر أهمية هي تلك سريريا في الشرايين التاجية نخابي وداخل عضلة القلب. في نهاية المطاف، سوف GA الشرايين التاجية يسبب فشل القلب الإقفاري. GA هو السبب الرئيسي في وقت متأخر غرام القلبفقدان الخلف. والتضيق من GA تتوقف عند خطوط الدرز، تورط بقوة استجابة المضيف لalloantigens الكسب غير المشروع في المرضية ويقودنا لتصنيف GA باعتبارها شكلا من أشكال الرفض المزمن 3. ومع ذلك، قد غيرها من إصابة الشرايين أشكال تزيد من خطر GA، إما من خلال زيادة العبء صافي الإصابة أو عن طريق تكثيف و / أو تحوير استجابة منيع للمستضد الخيفي. يتم الاحتفاظ الخلية (EC) بطانة بطانة الشرايين الكسب غير المشروع في GA الإنسان والمناطق الأكثر سطحية من البطانية المتاخمة للبطانة EC هو موقع تسلل بشدة من المضيف المستمدة من الإنترفيرون γ إنتاج خلايا تي والضامة 11؛ في بعض المرضى يرتبط GA مع تطور alloantibodies المانحة الخاصة التي تربط لالكسب غير المشروع EC 16 ولكن الأوعية تظهر أدلة تذكر للنخر فيبرينية الذي هو سمة من الرفض الحاد الأجسام المضادة التي تتوسط فيها 11. العنصر الأكثر أهمية من GA المرضية هوانتشار الخلايا على نحو سلس مثل العضلات داخل البطانية، وإذا كان يمكن القبض على هذه العملية، من غير المرجح أن تقدم GA. وكان العمل السابق من مجموعتنا أظهرت أن intimas من قطاعات الشريان التاجي الإنسان موسط في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي توسيع استجابة لخلايا نقل adoptively T الإنسان خيفي إلى الجهة المانحة الشريان وأن هذه العملية يمكن أن تحول دون تحييد الإنسان الإنترفيرون γ 18. الخارجية علاوة على ذلك الإنسان الإنترفيرون γ يمكن أن تسبب باطنة (وسطي) انتشار الخلايا العضلية الملساء (VSMC) الأوعية الدموية في هذه الطعوم الشريانية في غياب الخلايا التائية البشرية 15 و 17. (من المهم أن نلاحظ أن الإنسان والفأر الإنترفيرون γ لا يعبرون الأنواع، مستبعدا الآثار غير المباشرة على المضيف الماوس في هذا النظام التجريبي.) هذه نماذج الماوس أنسنة والاستفادة من تلخص الإنسان T خلية / التفاعلات الخلية الأوعية الدموية وباطنة وتتكون إلى حد كبير من الآفات الخلايا البشرية (أي الكسب غير المشروع المستمدة)،كما لوحظ في العينات السريرية، لكنها لا تلخص تماما الوضع السريري لأنها تتجاهل دور الضامة المضيف وأنواع الخلايا ربما الأخرى المشاركة في الآفات زرع السريرية. A نموذج الفأر التقليدية من هذه العملية يمكن أن تعالج هذه المشكلة نظريا، استكمال أوجه القصور في نموذج إنساني من خلال إشراك الجهاز المناعي المضيف كاملة وتوفير ميزة إضافية تتمثل في السماح للقوة النهج الوراثية الماوس ليتم تطبيقها على جورجيا. نماذج الماوس الأكثر استخداما على نطاق واسع اثنين تنطوي على زرع القلب والشريان منتبذ مثلي زرع 1. مصنوعة من الآفات التي تنمي في شرايين القلب ترقيع منتبذ إلى حد كبير من خلايا المضيف، على الأرجح من أصل نخاع العظام، في حين أن الخلايا البطانية في الشرايين في ترقيع قلب الإنسان هي في الغالب من أصل الكسب غير المشروع 5، 13، 19. هذا هو الفرق الكبير الذي أدى بنا إلى تطوير نماذج الماوس بديل. مداخلةوالشريان الأورطي الفار من سلالة واحدة إلى أخرى المستلم سلالة الفأر هو محدود حتى أكثر كنموذج لهذا الرفض المزمن في البشر لأن الخلية بوساطة الحاد استجابة الرفض في هذا النموذج الماوس يلغي تماما كل خلايا الأوعية الدموية المانحة المستمدة من الكسب غير المشروع في غضون شهرين الى ثلاثة 19 أسابيع. وبالتالي، فإن تغييرات لاحقة شهدت في قطاع سفينة موسط هي وحدها استجابة الخلايا المضيفة التي إسكانها في decellularized سفينة السقالة، وخلق حالة مصطنعة للغاية من أهمية محدودة كنموذج للتغيرات في الأوعية الكسب غير المشروع التي تحدث في العيادة. وقد وضعنا مؤخرا اثنين من نماذج الماوس الجديد للتحايل على هذه المشاكل 21. النموذج الأول ينطوي على مداخلة من شريحة سفينة من ماوس الذكور إلى مستلم الإناث من نفس السلالة الفطرية (C57BL/6J). النموذج الثاني ينطوي فاصلة شريحة الشريان من النوع البري C57BL/6J المانحة الماوس إلى ماوس المضيف من نفس السلالة والجنس التي تفتقر إلى تفصيلeptor لالإنترفيرون γ (الإنترفيرون γR-KO)، يليه إدارة الماوس الإنترفيرون γ (تسليمها عن طريق العدوى من كبد الفأر مع متجه الفيروسة الغدانية. هنا، نحن تصف بروتوكولات مفصلة ومزايا لدينا الماوس GA النماذج.

<table border="1" >
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of the Reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>C57BL/6J (H-2b)</td>
 <td>Jackson Laboratories 
 (Bar Harbor, ME)</td>
 <td>000664</td>
 <td>Donor (5 weeks) 
 Recipient (8-12weeks)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine Hydrochloride Injection </td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-2053</td>
 <td>Storage Solution(50 mg/ml) 
 Working Solution(5 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td> Xylazine Sterile Solution</td>
 <td>Lloyd Inc.</td>
 <td>NADA# 139-236</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution(1 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen</td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution-oral 
 (0.027 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heparin Sodium</td>
 <td>Sagent Pharmaceticals</td>
 <td>NDC 25021-400</td>
 <td>Storage Solution(1000 U/ml) 
 Working Solution(100 U/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride)</td>
 <td>CareFusion</td>
 <td>AL4109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.9% Sodium Chloride Injection</td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-4888-10</td>
 <td>To prepare the anesthetic </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum Ophthalmic Ointment </td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>NDC 17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine Prep Pads </td>
 <td>Triad Disposables, Inc.</td>
 <td>NDC 50730-3201-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alcohol Prep Pads</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>NDC 68599-5805-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MZ95</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Scissors</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5693</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spring Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>15009-08</td>
 <td>To transect the aorta of donor or recipient </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Narrow Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>14088-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle Holder/Forceps</td>
 <td>MICRINS</td>
 <td>MI1542</td>
 <td>To hold the needle</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>11254-20</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11251-35</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Standard Pattern Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11000-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>13011-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LANCASTER Eye Speculum</td>
 <td>Zepf Medical Instruments</td>
 <td>42-1209-07</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Vascular Clip</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-6472</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Clip Applying Forceps With Lock</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5440</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Polyamide Monofilament Suture</td>
 <td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
 <td>Cat #T4A10Q07</td>
 <td>10-0 suture, Needle=70 microns</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Monofilament Nylon Suture</td>
 <td>Syneture 
 (Covidien)</td>
 <td>SN-1956</td>
 <td>6-0 suture</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-Woven Songes</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>Reorder No. 94442000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309659</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>3 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309657</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309604</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18G 1 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305196</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25G 7/8, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305124</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hearting Pad</td>
 <td>Sunbeam</td>
 <td>Z-1228-001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>9854-500</td>
 <td></td>
 </tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 2. Specific reagents and equipment.</td>
</tr>
 </tbody>
</table>

mouse models for graft arteriosclerosis

arteriosclerois الكسب غير المشروع (GA)، وتسمى أيضا اعتلال وعائي طعم خيفي، هي آفة مرضية أن يتطور مع مرور أشهر إلى سنوات في الأعضاء المزروعة التي تتميز منتشر، تضيق كفافي من شجرة الأوعية الدموية الكسب غير المشروع بأكمله. العنصر الأكثر أهمية من GA المرضية هو انتشار السلس خلايا تشبه العضلات داخل البطانية. عندما يتم موسط شريحة الشريان التاجي الإنسان في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي، وintimas يمكن توسيع ردا على خلايا T الإنسان نقل adoptively خيفي إلى الجهة المانحة الشريان أو خارجية الإنسان الإنترفيرون γ في غياب الخلايا التائية البشرية. مداخلة من الشريان الأورطي الفار من سلالة واحدة إلى أخرى المستلم سلالة الماوس يقتصر كنموذج لهذا الرفض المزمن في البشر لأن استجابة الرفض الخلية بوساطة الحادة في هذا النموذج الماوس يلغي تماما كل الخلايا المانحة المستمدة من الأوعية الدموية من الكسب غير المشروع في غضون شهرين الى ثلاثة أسابيع. وقد وضعنا مؤخرا اثنين متر جديدة[أوس] نماذج للتحايل على هذه المشاكل. النموذج الأول ينطوي على مداخلة من شريحة سفينة من ماوس الذكور إلى مستلم الإناث من نفس السلالة الفطرية (C57BL/6J). يتم توجيه رفض الكسب غير المشروع في هذه الحالة فقط ضد مستضدات التوافق النسيجي طفيفة المشفرة بواسطة كروموسوم Y (موجودة في الذكور ولكن ليس الأنثى) واستجابة الرفض الذي تستتبعه هو كسلان بما فيه الكفاية للحفاظ على خلايا العضلات الملساء المانحة المستمدة لعدة أسابيع. النموذج الثاني ينطوي فاصلة شريحة الشريان من النوع البري C57BL/6J المانحة الماوس إلى ماوس المضيف من نفس السلالة والجنس التي تفتقر إلى مستقبلات للالإنترفيرون γ تليها إدارة الماوس الإنترفيرون γ (تسليمها عن طريق العدوى من الفأرة الكبد مع متجه الفيروسة الغدانية، وليس هناك رفض في هذه الحالة لأن كلا من الجهات المانحة والمتلقية الفئران هي من نفس السلالة والجنس ولكن الخلايا المانحة العضلات الملساء تتكاثر ردا على خلوى في حين أن الخلايا المشتقة من المضيف، وتفتقر إلى مستقبلات للهذا خلوى، لا تستجيب. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، كلا النموذجين يمكن استخدامها لتقييم تأثير جينات معينة على GA التقدم. هنا، نحن تصف بروتوكولات مفصلة لدينا الماوس GA النماذج.

الماوس طعم خيفي تصلب الشرايين (GA) نموذج: في هذا النموذج، يتم زرعها في الشريان الأورطي المانحة الذكور إلى الإناث المتلقية بحيث المضيف يدفع alloreactive T الردود منيع للمستضد الخيفي الخلية بوساطة ضد مستضد Y قاصر (القاصر التوافق النسيجي HY المستضد الخاص بالذكور) أعرب ع...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models for Graft Arteriosclerosis at JoVE.com

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

نحن تصف بروتوكولات لدينا arteriosclerois الكسب غير المشروع الماوس (GA) نماذج التي تنطوي على مداخلة من شريحة سفينة الماوس إلى المتلقي من نفس السلالة الفطرية. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، يمكن للنموذج تقييم تأثير جينات معينة على GA.

نماذج الماوس لتصلب الشرايين الكسب غير المشروع

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K Views.  Yale University School of Medicine. نحن تصف بروتوكولات لدينا arteriosclerois الكسب غير المشروع الماوس (GA) نماذج التي تنطوي على مداخلة من شريحة سفينة الماوس إلى المتلقي من نفس السلالة الفطرية. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، يمكن للنموذج تقييم تأثير جينات معينة على GA.

Video: Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

MRI and PET in Mouse Models of Myocardial Infarction

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ideal model for testing novel therapeutic strategies.
In vivo magnetic resonance imaging (MRI) gives excellent views of the heart noninvasively with clear anatomical detail, which can be used for accurate functional assessment. Contrast agents can provide basic measures of tissue viability but these are nonspecific. Positron emission tomography (PET) is a complementary technique that is highly specific for molecular imaging, but lacks the anatomical detail of MRI. Used together, these techniques offer a sensitive, specific and quantitative tool for the assessment of the heart in disease and recovery following treatment.
In this paper we explain how these methods are carried out in mouse models of acute myocardial infarction. The procedures described here were designed for the assessment of putative protective drug treatments. We used MRI to measure systolic function and infarct size with late gadolinium enhancement, and PET with fluorodeoxyglucose (FDG) to assess metabolic function in the infarcted region. The paper focuses on practical aspects such as slice planning, accurate gating, drug delivery, segmentation of images, and multimodal coregistration. The methods presented here achieve good repeatability and accuracy maintaining a high throughput.

We describe how to perform MRI and PET imaging of the mouse heart. The protocol is tailored to assess treatment efficacy in models of myocardial infarction and heart failure.

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ...

Production of Apolipoprotein C-III Knockout Rabbits using Zinc Finger Nucleases

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins (HDL). It has been recognized that high levels of plasma ApoCIII constitutea risk factor for cardiovascular diseases (CVD). Elevated plasma ApoCIII level often correlates with insulin resistance, obesity, and hypertriglyceridemia. Invaluable knowledge on the roles of ApoCIIIin lipid metabolisms and CVD has been obtained from transgenic mouse models including ApoCIII knockout (KO) mice; however, it is noted that the metabolism of lipoprotein in mice is different from that of humans in many aspects. It is not known until now whether elevated plasma ApoCIII is directly atherogenic. We worked to develop ApoCIII KO rabbits in the present study based on the hypothesis that rabbits can serve as a reasonablemodelfor studying human lipid metabolism and atherosclerosis. Zinc finger nuclease (ZFN) sets targeting rabbit ApoCIIIgene were subjected to in vitro validation prior to embryo microinjection. The mRNA was injected to the cytoplasm of 35 rabbit pronuclear stage embryos, and evaluated the mutation rates at the blastocyst state. Of sixteen blastocysts that were assayed, a satisfactory 50% mutation rate (8/16) at the targeting site was achieved, supporting the use of Set 1 for in vivo experiments. Next, we microinjected 145 embryos with Set 1 mRNA, and transferred these embryos to 7 recipient rabbits. After 30 days gestation, 21 kits were born, out of which five were confirmed as ApoCIII KO rabbits after PCR sequencing assays. The KO animal rate (#KO kits/total born) was 23.8%. The overall production efficiency is 3.4% (5 kits/145 embryos transferred). The present work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits. These ApoCIII KO rabbits are novel resources to study the roles of ApoCIII in lipid metabolisms.

Recent development in gene targeting tools makes production of knockout (KO) rabbits possible. In the present work, we generated five Apolipoprotein (Apo) C-III KO rabbits using Zinc Finger Nucleases (ZFN). This work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits.

إنتاج ئي C-III الأرانب الضربة القاضية باستخدام الزنك Nucleases فنجر

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

زرع الوريد الأجوف السفلي مداخلة الكسب غير المشروع في نموذج الفأر

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

الماوس زرع الكلى: نماذج من طعم خيفي رفض

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal systems. HFUS has the ability to detect structures as small as 30 &#181;m, a property that has been utilized for visualizing superficial lymph nodes in rodents in brightness (B)-mode. Combining power Doppler with B-mode imaging allows for measuring circulatory blood flow within lymph nodes and other organs. While HFUS has been utilized for lymph node imaging in a number of mouse&#160; model systems, a detailed protocol describing HFUS imaging and characterization of the cervical lymph nodes in mice has not been reported. Here, we show that HFUS can be adapted to detect and characterize cervical lymph nodes in mice. Combined B-mode and power Doppler imaging can be used to detect increases in blood flow in immunologically-enlarged cervical nodes. We also describe the use of B-mode imaging to conduct fine needle biopsies of cervical lymph nodes to retrieve lymph tissue for histological&#160; analysis. Finally, software-aided steps are described to calculate changes in lymph node volume and to visualize changes in lymph node morphology following image reconstruction. The ability to visually monitor changes in cervical lymph node biology over time provides a simple and powerful technique for the non-invasive monitoring of cervical lymph node alterations in preclinical mouse models of oral cavity disease.

This protocol describes the application of high-frequency ultrasound (HFUS) for imaging mouse cervical lymph nodes. This technique optimizes visualization and quantification of cervical lymph node morphology, volume and blood flow. Image-guided biopsy of cervical lymph nodes and processing of lymph tissue for histological evaluation is also demonstrated.

عالية التردد التصوير بالموجات فوق الصوتية للماوس عنق الرحم الغدد الليمفاوية

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.

We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.

نموذج الفأر من منيع للمستضد الخيفي الناجم عن رفض الأوعية الدموية وزراعة تصلب الشرايين

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

Bioluminescence-Based Tumor Quantification Method for Monitoring Tumor Progression and Treatment Effects in Mouse Lymphoma Models

Although bioluminescence imaging (BLI) shows promise for monitoring tumor burden in animal models of cancer, these analyses remain mostly qualitative. Here we describe a method for bioluminescence imaging to obtain a semi-quantitative analysis of tumor burden and treatment response. This method is based on the calculation of a luminoscore, a value that allows comparisons of two animals from the same or different experiments. Current BLI instruments enable the calculation of this luminoscore, which relies mainly on the acquisition conditions (back and front acquisitions) and the drawing of the region of interest (manual markup around the mouse). Using two previously described mouse lymphoma models based on cell engraftment, we show that the luminoscore method can serve as a noninvasive way to verify successful tumor cell inoculation, monitor tumor burden, and evaluate the effects of in situ cancer treatment (CpG-DNA). Finally, we show that this method suits different experimental designs. We suggest that this method be used for early estimates of treatment response in preclinical small-animal studies.

Bioluminescence imaging is a well-known tool for localizing tumors and metastases, but quantification of these images often requires complex calculations and particular instruments. We describe the easy-to-use luminoscore method, based on precise acquisition conditions, requiring no calculations, and enabling tumor burden and treatment response to be monitored in mouse models.

الطريقة ورم الكمي القائم على تلألؤ بيولوجي لتطور الورم الرصد وآثار العلاج في نماذج الماوس الغدد اللمفاوية

Although bioluminescence imaging (BLI) shows promise for monitoring tumor burden in animal models of cancer, these analyses remain mostly qualitative. ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies have suggested that nerves may also modulate skin disorders including atopic dermatitis, psoriasis and cancer. Here, we describe protocols for testing the requirement for nerves in maintaining a cutaneous mechanosensory organ, the touch dome (TD). Specifically, we discuss methods for genetically labeling, harvesting and visualizing TDs by whole-mount staining, and for performing unilateral surgical denervation on mouse dorsal back skin. Together, these approaches can be used to directly compare TD morphology and gene expression in denervated as well as sham-operated skin from the same animal. These methods can also be readily adapted to examine the requirement for nerves in mouse models of skin pathology. Finally, the ability to repeatedly sample the skin provides an opportunity to monitor disease progression at different stages and times after initiation.

This article includes detailed protocols for genetic labeling of mouse skin, surgical denervation, skin biopsy and visualizing labeled epithelia by whole-mount &#946;-galactosidase staining. These methods can be used to test the requirement for nerves in mouse models of normal and pathological skin.

الجلدي إزالة التعصيب الجراحي: هناك طريقة لاختبار شرط لالأعصاب في نماذج الماوس من الأمراض الجلدية

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

الوريد الإعتراض نموذج: نموذج مناسب لدراسة الالتفافية الكسب غير المشروع الإنفتاح

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function in diabetic nephropathy and podocyte-specific VEGF-A knock-out mice; therefore, this protocol describes the full kidney work-up used in our lab to assess these mouse models of glomerular disease, enabling a vast amount of information regarding kidney and glomerular function to be obtained from a single mouse. In comparison to alternative methods presented in the literature to assess glomerular function, the use of the method outlined in this paper enables the glomerular phenotype to be fully evaluated from multiple aspects. By using this method, the researcher can determine the kidney phenotype of the model and assess the mechanism as to why the phenotype develops. This vital information on the mechanism of disease is required when examining potential therapeutic avenues in these models. The methods allow for detailed functional assessment of the glomerular filtration barrier through measurement of the urinary albumin creatinine ratio and individual glomerular water permeability, as well as both structural and ultra-structural examination using the Periodic Acid Schiff stain and electron microscopy. Furthermore, analysis of the genes dysregulated at the mRNA and protein level enables mechanistic analysis of glomerular function. This protocol outlines the generic but adaptable methods that can be applied to all mouse models of glomerular disease.

This protocol describes a full kidney work-up that should be carried out in mouse models of glomerular disease. The methods allow for detailed functional, structural, and mechanistic analysis of glomerular function, which can be applied to all mouse models of glomerular disease.

تقييم لوظيفة الكلي في نماذج الماوس من المرض الكبيبي

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...