سرطان الخلايا الكلوية واضحة أو CCRCC, هو النوع الفرعي الأكثر شيوعا من سرطان الكلى. توطين CCRCC له نتيجة إيجابية مع الجراحة. ومع ذلك، فإن ثلث المرضى CCRCC تطوير الانبثاث البعيد إلى الرئة.
مما يؤدي إلى نتيجة سيئة للغاية للمرضى. لسوء الحظ، لا يوجد علاج متاح لهذه المرحلة القاتلة. كما أن الآلية الجزيئية للنقائل لا تزال موحية.
والغرض من هذا البروتوكول هو إدخال ومقارنة نموذجين حيوانيتين تم وضعهما مؤخراً من أجل CCRCC النقيلي. النموذج الأول هو الماوس من زرع الموضوع. في هذا النموذج الماوس، يتم زرع CCRCC غير متجانسة إلى كبسولة الكلى من الماوس.
نمو الورم والنقائل هي الأصول بعد 10 أسابيع. النموذج الثاني هو نموذج الغشاء الكورالي الولاتويك الدجاج، أو نموذج CAM. في هذا النموذج الدجاج يتم زرع CCRCC غير متجانسة في البيض.
نمو الورم والخلايا السرطانية المنتشرة هي الأصول بعد 10 أيام من زرع قبل يفقس الجنين. إنبثاث الرئة هو الأصول بعد 24 يوما من زرع. وهو بعد أسبوعين من الفقس.
وسوف يكون هذان النموذجان الجديدان مفيدين لمواصلة دراسة الآلية الجزيئية وراء الانبثاث في CCRCC. يرجى ملاحظة أن إجراء CAM غير موجود في هذا الفيديو. يتم وصف البروتوكول التفصيلي لنموذج CAM وتصويره في مقال آخر من قبل Sharrow وآخرون.
بعد تخدير الماوس، وتطهير الجزء الخلفي من الفأر تماما مع بوفيدون اليود لمدة ثلاث مرات. اتبعها 70٪ ethnol مرة واحدة، ومسحها الجافة مع مسحات القطن العقيمة. ثم تطبيق ثلاثة معقمة الطبية تُغطي بشكل متسلسل الظهر كله من أجل إنشاء مجال الجراحية وكذلك لشل الماوس.
قبل العملية، يجب على المشغلين تطهير أصابعهم مع بوديندون اليود. ضع الماوس في موضع عرضة. واستخدم الأصابع لتحديد موقع الكلية اليسرى أسفل الجناح الأيسر.
استخدام زوج من ملقط حادة ومقص لقطع الجلد والعضلات فتح طبقة تحت الموقع المحدد. استخدم مسحات قطنية معقمة وملاطة لإضفاء الصبغة الخارجية على الكلية اليسرى جزئيًا من البطن. تحميل إما حقنة الأنسولين أو حقنة هاملتون مخصصة مع تعليق الخلايا السرطانية أعدت بشكل منفصل.
حقن 20 ميكرولترات من تعليق الخلية تحت كبسولة الكلى. سحب ببطء إبرة من أجل ترسيخ حل مصفوفة الخلوية اضافية. وكذلك لمنع النزيف أو تسرب الخلايا السرطانية.
وبعد ذلك، استخدم مسحة قطنية معقمة لدفع الكلية إلى الخلف إلى البطن. استخدام خياطة لخياطة طبقة العضلات. تطهير الجلد مع بوديوني اليود.
و، وإغلاق الجلد مع الجرح لصناعة السيارات لقطات. زرع زرع الخلايا السرطانية زرع العظام نمت بنجاح على الفئران الكلى كما أكد BLI. على الرغم من عدم وجود فرق في النمو الأولي، إلا أن الورم النقيلي غير المتجانس كان له انبثاث قوي إلى الرئة.
كما تم تأكيد الانبثاث عن طريق الكيمياء المناعية. وبالمثل، كانت أعداد الخلايا السرطانية المتداولة أعلى في الفئران التي تحمل ورمًا النقيليًا من تلك التي تحمل ورمًا غير النقيلي. في التوافق مع نموذج الماوس نموذج كام أظهرت أيضا أي فرق في النمو بين الأورام النقيلي وغير النقيلي.
من ناحية أخرى ، كان عدد الخلايا السرطانية المتداولة أعلى بكثير في البيض مع الأورام النقيلي. لوحظ الانبثاث القابل للكشف عن الانبثاث في الرئتين من الدجاج المفقوس. وفي الختام، أوضح هذا البروتوكول نموذجين جديدين لحيوانات CCRCC النقيلي.
قام كل من الفأرة ونماذج الدجاج بتلخيص نقائل الرئة التي لوحظت في العيادة. سيكون هذان النموذجان ما قبل السريريين مفيدين لتوسيع فهم الآلية الجزيئية وراء الانبثاث. وكذلك لاكتشاف علاجات جديدة لCCRCC النقيلي.
