على الرغم من أن رأب الأوعية يساعد المرضى الذين يعانون من مرض الشريان التاجي، لا يزال من الممكن أن تحدث أحداث القلب والأوعية الدموية بعد العملية. كما يتم الحصول على الـ MPCs والجزيئات القابلة للذوبان من الدورة الدموية التاجية، يمكن ربطها بدرجة تلف الأوعية الدموية وإصلاحها. ولذلك يمكن استخدام MPC التاجية واللذوبان المستويات وسيط لتقدير أحداث القلب والأوعية الدموية والتكهن في المرضى الذين يعانون من مرض الشريان التاجي يخضع للرأب الوعائي التاجي.
يمكن أيضاً استخدام الـ MPCs والجزيئات القابلة للذوبان لتقدير المضاعفات والتكهنات التي تحدث في ظل ظروف نقص تروية مختلفة، مثل السكتة الدماغية الإقفارية المتكررة للأطراف. ومن بين الاجراءات سيكون ادواردو فيرا-غوميز واليخاندرو هرنانديز-باتريسيو، فنيان مختبر، وكارين دي لا فيغا-مورينو وكارلوس زامورا-اليمان، طلاب الدراسات العليا. كما ستتظاهر غابرييلا ألكسندرا دومينغيز بيريز، طالبة ماجستير العلوم، وألبرتو ميلشور لوبيز، وهو طالب دكتوراه، وماريو أنطونيو تيليز غونزاليس، وهو متعاون في ماجستير العلوم.
في غضون ساعة واحدة من جمع، ونقل ستة ملليلتر من عينة الدم المقطوع إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر وتمييع الدم بنسبة واحد إلى واحد في برنامج تلفزيوني. إضافة ملليلترين من كثافة التدرج المتوسطة إلى ثلاثة أنابيب الاختبار ونقل بعناية ثلاثة aliquots متساوية من الدم المخفف في كل أنبوب من متوسطة الكثافة الانحدار. فصل الخلايا عن طريق الطرد المركزي ونقل الخلايا في واجهة إلى أنبوب جديد.
غسل الخلايا التي تم جمعها مرة واحدة في ملليلترين من برنامج تلفزيوني لمدة ست دقائق، تليها ستة يغسل في ملليلتر من برنامج تلفزيوني جديد لكل غسل لمدة دقيقتين. بعد الغسيل الأخير، إعادة تعليق بيليه الخلية التي تحتوي على MPC في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني للعد وإضافة واحد مرة عشر مرات إلى الخلايا الست إلى المسمى خمسة أنابيب تدفق المليلتر. بيليه الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإضافة 100 ميكرولترات من الأجسام المضادة المناسبة من الفائدة، مخففة في محلول احتضان الأجسام المضادة لكل أنبوب.
خلط بلطف الخلايا مع كل كوكتيل الأجسام المضادة المضافة لمدة 10 ثوان، ووضع العينات في أربع درجات مئوية، محمية من الضوء، لمدة 20 دقيقة. في نهاية الحضانة، الطرد المركزي العينات وإعادة تعليق الكريات في 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني تكملها اثنين من ملليمولار EDTA. باستخدام عناصر التحكم المتطابقة مع الأيزوتايب لإعداد تلطيخ الخلفية ، وتحليل العينات حسب قياس التدفق وفقًا للبروتوكولات القياسية ، والبوابات على الخلايا الليمفاوية في مؤامرة مبعثرة إلى الأمام من خلال الجانب ، لاستبعاد الحبيبات الحبيبية المتبقية ، والحطام الخلوي ، والجسيمات الأخرى.
تعيين بوابة تحتوي على عدد كبير من الخلايا مع CD45-إيجابية CD34-النمط الظاهري إيجابي. بعد ذلك ، استخدم CD45 -positive CD34-positive gate لتحديد كيناز إدراج مستقبلات المجال CD133 أو خلايا CD184 إيجابية. ويمكن بعد ذلك تحديد الفئات الفرعية التابعة للـ MPC من خلال علامات سطح الخلايا المحددة الخاصة بها، كما يمكن الإبلاغ عنها كنسبة مئوية من الأحداث المسورة.
لتحديد تركيز العلامات الحيوية القابلة للذوبان في عينات الدم التي تم جمعها ، أولاً ، قم بغسل لوحات ELISA المغلفة مسبقًا مرتين مع مخزن الغسيل الذي توفره مجموعة الأدوات وتسمية أنابيب القياسية والعينة والتحكم. جهاز طرد مركزي عينة الدم لفصل مكونات الدم و aliquot البلازما في أنابيب العينة. نقل المعايير والعينات والضوابط إلى الآبار المناسبة وختم واحتضان لوحة في 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة.
في نهاية الحضانة، والتخلص من محتويات البئر وإضافة الأجسام المضادة للكشف عن البيوتين إلى كل بئر. بعد فترة حضانة لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، تخلص من محتويات اللوحة واغسل الآبار ثلاث مرات مع عازلة غسيل طازجة لكل غسل. بعد الغسيل الأخير، احتضان العينات مع Streptavidin حل العمل لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية تليها ثلاثة يغسل، كما هو موضح.
بعد الغسيل الأخير، علاج العينات مع الركيزة رباعي الميثيل بنزين لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. عندما يتطور اللون، إضافة وقف الحل من عدة وقراءة امتصاص الكثافة البصرية في قارئ ELISA microplate. لتحديد تركيز عامل نخر الورم ألفا، وinterleukin-1 بيتا، وذلك باستخدام متعدد المثبط المناعي، وتسمية معيار، عينة، والتحكم في أنابيب ودوامة قوارير حبة المغناطيسي لمدة 30 ثانية.
إضافة الخرز إلى الآبار المناسبة من لوحة المقايسة متعددة. عندما تم إضافة كل من الخرز، إدراج بإحكام غسالة لوحة مغناطيسية المحمولة، وانتظر دقيقتين للخرز لتتراكم على الجزء السفلي من كل بئر، قبل عكس بسرعة كل من غسالة لوحة مغناطيسية المحمولة، وتجميع لوحة على حاوية النفايات. بعد ذلك، إضافة 150 ميكرولترات من الغسيل العازلة لكل بئر والانتظار 30 ثانية للسماح للخرز تتراكم على الجزء السفلي.
تجاهل محتويات مرة أخرى كما أظهرت للتو وإضافة 25 ميكرولترات من المخزن المؤقت الشامل و 25 ميكرولترات من المعايير المعدة والعينات والضوابط. ختم لوحة لاحتضان ما لا يقل عن 60 دقيقة، محمية من الضوء في درجة حرارة الغرفة، و 500 التناوب في الدقيقة الواحدة. في نهاية الحضانة، إضافة 150 ميكرولترات من العازلة غسل إلى كل بئر والسماح للخرز لتسوية لمدة 30 ثانية.
ثم، استخدام غسالة لوحة لتجاهل محتويات البئر وتسمية كل بئر مع 25 ميكرولترات من الكشف عن خليط الأجسام المضادة تليها اثنين من يغسل، كما هو موضح. بعد الغسيل الثاني، احتضان العينات مع 25 ميكرولترات من Streptavidin PE لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، إضافة 120 ميكرولترات من قراءة العازلة لكل بئر وختم لوحة لاحتضان لمدة خمس دقائق، محمية من الضوء في درجة حرارة الغرفة، لمدة 500 التناوب في الدقيقة الواحدة.
ثم، تحميل لوحة على قارئ مقايسة متعددة وضبط المعلمات القراءة وفقا لكل تحليل. تم جمع الشريان التاجي والزهرة والجيوب الأنفية والدم المحيطي من 52 مريضًا خضعوا لتصوير الأوعية التاجية وأظهروا انتشارًا مرتفعًا لارتفاع ضغط الدم وعسر الدم. وكان التركيز التاجي الأساسي لمعظم MPCs أقل بكثير في المرضى الذين طوروا الأحداث القلبية الوعائية السلبية الرئيسية، مع انخفاض أكبر في السكان الفرعية MPC CD34 إيجابية CD133-positive، وD45-positive، CD34-positive، CD133-positive، CD184-positive.
وبالمثل، كان المرضى الذين طوروا الأحداث القلبية الوعائية السلبية الرئيسية خط أساس زيادة في كميات التاجية من ICAM-1 القابل للذوبان وكميات أقل من البروتين metallomatrix 9. أظهرت الـ MPCs التاجية والذوبان ICAM-1 قدرة التكهن لبقاء القلب والأوعية الدموية السلبية الرئيسية خالية من الحدث. ومن المثير للاهتمام، التعبير عن عامل نخر الورم ألفا أظهرت الاختلافات وفقا لوقت القياس وموقع أخذ العينات التاجية على أساس مقارنة مناطق مختلفة من التجويف في الشريان التاجي نفسه، وذلك باستخدام الموجات فوق الصوتية داخل الأوعية.
أثناء عزل MPC، تأكد من نقل الدم إلى تدرج الكثافة، وجمع الخلايا من الواجهة بعد الطرد المركزي بعناية. الدوامة الدورية تمنع حبة هطول الأمطار واستخدام غسالة لوحة مغناطيسية يساعد على الحفاظ على الخرز داخل الآبار أثناء غسل. إن الـMPCs التاجية والجزيئات القابلة للذوبان مفيدة لتحديد مخاطر أحداث القلب والأوعية الدموية أثناء المتابعة بعد رأب الأوعية، مما يساعد في توفير الوقاية الثانوية للأفراد المعرضين للخطر لأن هذه التقنية تعكس العملية الفسيولوجية التي تحدث أثناء توقف الحل، وقد يكون من المفيد للظروف التي تلعب فيها بيولوجيا الأوعية الدموية دورًا.
