لا توجد حاليا أي أدوية راسخة في تعزيز تشكيل هيتروكروماتين. هنا نقدم طريقة بسيطة وفعالة لتحديد مركبات الجزيئات الصغيرة التي تعزز هذه العملية. يوفر بروتوكول الفحص لدينا بسيطة وغير مكلفة وسهلة المتابعة في نظام المعلومات الحية لتحديد المخدرات غيريروكروماتين تعزيز.
قد يؤدي تحديد المركبات التي تعزز تكوين هيتروكروماتين إلى اكتشاف آليات السرطان التي تُعالج وعلاج السرطان. وقد تم قياس هذا فعالة من حيث التكلفة لتحديد المركبات التي تروج للهيروكوسوماتين في Drosophila يمكن أيضا أن تستخدم لحساب يضرب شكل كما هو مقياس وقائي لأعلى تجمع الخلايا من فحص الخلايا. بروتوكول الفحص لدينا يمكن أن تكون مفيدة أيضا للشاشات التجريبية سريعة وهذا Drosophila TranSheet النظام تنتج نمط ظاهري لون العين المتنوعة التي ترتبط عكسيا إلى كمية heterochromatin الموجودة في الطاير.
المساعدة في إثبات الإجراء سيكون كيني داو، وهو طالب في كلية الدراسات العليا من مختبرنا. بعد تحديد وإعداد مكتبة دواء للفحص باستخدام مذيب مناسب ، والتركيز المطلوب ، عبر ثلاثة ذباب ذكر مع ثلاثة أو أكثر من الذباب الإناث البكر في قارورة الطعام 25 في 95 ملليمتر. مع تسعة ملليمترات من معيار دروسوفيليا الغذاء المتوسطة.
قم بإعداد ثلاث قوارير متماثلة لكل دواء. إضافة قارورة تحكم واحدة للشاشة. والسماح للذباب لوضع البيض لمدة يومين في درجة حرارة الغرفة.
في اليوم الثاني من الصليب، تخدير الذباب مع انفجار قصير من ثاني أكسيد الكربون. وتجاهل الوالدين الذباب في زجاجة تحتوي على 70٪ الإيثانول. المقبل, تخفيف كل مركب المخدرات من المخزون الأولي لحضور تركيز نهائي الضرس الجزئي في 33٪ DMSO في الماء.
وإضافة 60 ميكرولترات من المخدرات، أو السيطرة 33٪ DMSO وحدها، على رأس الطعام ذبابة. ثم تأكد من عدم وجود ذباب الوالدين داخل القنينات. وإضافة محلول الدواء إلى قارورة مناسبة.
بعد يومين من ظهور ذباب F1 ، نقل الذباب المهذب من قارورة واحدة في وقت واحد على لوحة تشريح مسامية مع تصفية ثاني أكسيد الكربون من خلال من تحت ورقة التصفية. تحت مجهر تشريح، وفحص كل ذبابة كاملة، وتحديد جميع الذكور heterozygous من خلال افتقارهم إلى مجعد س المهيمنة نمط ظاهري الجناح المجعد. يسجل لون العين من كل ذكر غير مغاير على مقياس من واحد إلى خمسة.
مع درجة واحدة يتم تعيينها إلى أقل من 5٪ أحمر متناثرة العين مجموع المساحة. إضافة اثنين من نقاط للذباب مع 6 إلى 25٪ بقعة حمراء العين مجموع مساحة السطح. a ثلاثة إلى الذباب مع 26 إلى 50٪ بقعة حمراء العين مجموع مساحة السطح.
4 إلى الذباب مع 51 إلى 75٪ بقعة حمراء العين مجموع مساحة السطح. وخمسة الذباب مع أكثر من 75٪ بقعة حمراء العين مجموع مساحة السطح. ثم حساب متوسط مؤشر اللون لجميع الذكور من كل قارورة سجل في ثلاثية.
للتأكد من أن المركبات تعزز بالفعل تشكيل هيتروكروماتين، يمكن إجراء تقنية مختلفة للتحقق من الصحة، مثل النشاف الغربي. في هذه التجربة التمثيلية ، تم فحص مكتبة دواء جزيء صغير ، مجموعة الأورام 3 ، والتي تتكون من 97 أدوية الأورام المعتمدة من إدارة الأغذية والعقاقير ، باستخدام سلالة DX1 من Drosophila Melanogaster. وفقا لمقايسة الفرز، الميثوتريكسيت، مشفرة ك E7 في المكتبة، تسبب في معظم الاختلاف داخل سلالة Dx1.
مما يشير إلى أن الميثوتريكسيت يمكن أن يكون الدواء الواعد لتعزيز التيروكروماتين للعلاج السرطاني المستهدف في المستقبل. للتأكد من أن هذا المركب يعزز التحول غيريروكروماتين، تم تنفيذ بيانات البقع الغربية. مما يدل على تنظيم حتى من تنسيق هيتروكرووماتين في البروتين المرتبطة بها، H3K9 تريثيتيليشن، والتحقق من صحة نتائج الفحص.
الخطوة الحاسمة هي تسجيل لون العين لكل من الذباب الذكور 11-18 DX1 البيضاء على مقياس من واحد إلى خمسة وفقا لمسار دراسة محدد سلفا. يمكننا استخدام البقع الغربية أو الكبت المناعي لتأكيد الضربات. اكتشاف المركبات التي يشتبه في تعزيز تشكيل هيتروكرووماتين قد يؤدي أيضا إلى اكتشاف الآلية الجينية الرابعة لتطوير السرطان والتجارب السريرية في المرضى البشر.
