يمكن استخدام هذه الطريقة لإعادة إنتاج الأحداث الالتهابية التي تحدث في التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد. من الممكن دراسة التغيرات في أنسجة البنكرياس في مراحلها المبكرة ، وهو أمر غير ممكن بشكل عام في العيادة. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها سريعة وسهلة التكاثر للباحث المدرب ، وتقدم نتائج مماثلة لالتهاب البنكرياس الحاد في البشر.
يمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة الاستجابات المناعية الدوائية لجزيئات الدواء والتدخلات العلاجية الأخرى ، لأنها تسمح بدراسة الخلايا التوسطية الالتهابية في البنكرياس والأعضاء المجاورة. عند محاولة هذا البروتوكول، تحديد موقع الأعضاء وإنشاء منطقة العلبة أمر بالغ الأهمية. حفظ موقع الأعضاء وممارسة تطبيق الحقن أولا باستخدام محلول ملون مثل الميثيلين الأزرق.
بعد التحقق من عمق التخدير مع قرصة إصبع القدم، وتنظيف منطقة البطن من الماوس تخدير مع محلول اليود 5٪povidone. باستخدام أداة تشذيب الشعر، قم بإزالة الشعر بين الصدر وأسفل البطن وانظف منطقة جراحية تبلغ مساحتها حوالي سنتيمترين مربعين مع الكحول بنسبة 70٪. شل حركة الحيوان على اللوحة الجراحية واستخدام مقص لقطع خمسة ملليمترات من الجلد أفقيا على الجزء العلوي من البطن وسنتيمتر واحد تحت عملية xiphoid.
كرر قطع على الصفاق لإجراء استئصال البطن مع الحد الأدنى من التعرض لتجويف. باستخدام الراس، اسحب الكبد نحو الرأس على بعد سنتيمتر واحد تقريبا من الأمعاء وحدد موقع منطقة البنكرياس والاثني عشر. باستخدام ملقط، رفع الكبد نحو رأس الحيوان.
عن طريق سحب بلطف جزء من الأمعاء الدقيقة، وإصلاح طرفي الجانبية مع خياطة البولي بروبلين 6-0 للحصول على رؤية أفضل للجزء البعيدة من القناة الصفراوية المشتركة أيضا. باستخدام مقطع وعاء صغير ، قم بعزل القناة الصفراوية الشائعة القريبة مؤقتا. كشف الجهاز من تجويف البطن.
ثم جعل انسداد مؤقت من القناة الصفراوية المشتركة البعيدة مع 8-0 خياطه. للوصول إلى القناة الصفراوية الشائعة ، ثقب المنطقة periampullary ، والتي تظهر كجزء أبيض من جدار الأمعاء الدقيقة. مع إبرة 0.4 ملليمتر متصلة أنبوب البولي ايثيلين 0.54 ملليمتر، بدء ضخ مضخة ل2.5٪ حقن محلول توروتشولات الصوديوم بسرعة ثابتة من 10 ميكرولتر لكل 10 غراما من وزن الجسم لمدة ثلاث دقائق.
بعد التسريب ، قم بإزالة مقطع السفينة الصغيرة ، المؤقت 8-0 خياطة، وإبرة الحقن من القناة الصفراوية البنكرياس. خياطة البطن مع 6-0 غير ماصة monofilament البولي بروبلين خياطة. يجب ألا يزيد الوقت بين استئصال البطن وخياطة النهاية عن 30 دقيقة.
بعد الجراحة، إيواء الحيوانات في صناديق البولي ايثيلين اصطف مع حلق الخشب والماء والغذاء الإعلانية libitum. عقد بلطف الحيوان مع الجلد انسحبت، وتعزيز نتوء طفيف من مقلة العين، ووضع الحيوان مع العين التي تواجه صعودا. غرس قطرة من مرهم العين التي تحتوي على مخدر موضعي في عين الحيوان.
ضع نهاية أنبوب شعري في الزاوية الوسيطة للعين وأدخله برفق تحت مقلة العين بزاوية تتراوح بين 30 و45 درجة تقريبا. تدوير أنبوب الشعرية حتى يبدأ تدفق الدم. بمجرد انتهاء المجموعة، تأكد من التوازن عن طريق الحفاظ على الجفون مغلقة مع ضغط الضوء.
في وقت لاحق، وذلك باستخدام إبرة قياس 27، حقن أربعة ملليلتر من الجليد البارد PBS في تجويف الصفاق من الماوس. بعد الحقن، قم بتدليك الصفاق برفق لمدة 10 ثوان لإزالة الخلايا الملتزم بها. باستخدام مقص وملاقط، وجعل قطع صغيرة من 0.5 سم على الجلد الداخلي والعضلات لفضح تجويف البطن.
إدراج ماصة لمبة في الصفاق وجمع أكبر قدر ممكن من السوائل، مع الحرص على عدم يستنشق الأنسجة الدهنية. جمع جزء من البنكرياس من منطقة الرأس لمزيد من المعالجة. إيداع السائل الذي تم جمعه في أنابيب أبقى على الجليد.
ثم طرد السائل البريتوني في 250 مرة G لمدة خمس دقائق وتخزين supernatant للدوس interleukin-6. للحصول على المصل، والطرد المركزي عينات الدم التي تم جمعها في 700 مرة G لمدة 15 دقيقة وتخزين supernatant للأميلاز والدوس interleukin-6. أظهر تحليل أنسجة البنكرياس بعد 12 ساعة من تحريض التهاب البنكرياس الحاد التهابا شديدا في العضو المصاب بالمقارنة مع عينات الأنسجة من المجموعة الصورية.
ومثلت نتائج مماثلة من خلال الفحص النسيجي بعد تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوسين لعينات الأنسجة من صور وAPTA. وقدم تحليل مصل الدم زيادة كبيرة في تركيز الأميليز المصل وبينلوكين-6 السيتوكين في مجموعة AP مقارنة مع مجموعة صورية. وفي الوقت نفسه، كان تركيز إنترلوكين-6 أعلى بكثير في سائل التجويف الصفاقي في مجموعة AP.
تعتمد شدة التهاب البنكرياس في هذا النموذج بشكل متناسب على التركيز وحجم وضغط التسريب ووقت تحريض التهاب البنكرياس الحاد. مع مساعدة من هذه التقنية, آثار اللافاج الصفاق المستمر على التهاب البنكرياس الحاد الشديد يمكن دراستها.
