تحليل البروتينات الدهنية البلازما مهم جدا لتشخيص فرط االليب الدم والتحقيق في تصلب الشرايين. في هذا البروتوكول، ونحن سوف أعرض الطريقة الأساسية باستخدام الطارد الفائق لعزل البروتينات الدهنية البلازما. هذه الطريقة تسمح للباحثين باستخدام ملليلتر واحد من البلازما لعزل سبعة كسور البروتين الدهني.
ويمكن استخدام هذه الكسور للدهون، apolipoproteins، فضلا عن دراسات وظيفية جيدة يمكن تطبيق هذه الطريقة لكل من عينات الإنسان والحيوان لتشخيص ديسليبيديما والأمراض ذات الصلة. تبدأ عن طريق نقل ملليلتر واحد من البلازما في كل أنبوب الطرد الفائقة البولي. ثم تحميل الأنابيب في الدوار زاوية ثابتة والطرد المركزي البلازما في 356، 000 مرات G لمدة 2.5 ساعة في أربع درجات مئوية.
ضبط موقف شفرة في مقسم أنبوب إلى مستوى بين الجزء العلوي والكسر السفلي. قطع الأنابيب باستخدام تقطيع اللحم وجمع الجزء العلوي، ما يقرب من 200 ميكرولترس، في أنبوب صغير جديد. جمع الجزء السفلي المتبقية في أنبوب جديد polycarbonate ultracentrifuge للفصل المقبل.
ضبط حجم الحجم الإجمالي إلى 800 ميكرولترات بإضافة نفس حل الكثافة. ضبط الكسر السفلي إلى كثافة 1.02 غرام لكل ملليلتر عن طريق إضافة 58.9 ميكرولترات من 1.21 غرام لكل ميلليلتر، و 141.1 ميكرولترات من 1.02 غرام لكل ملليلتر حل لمجمل حجم واحد ملليلتر. تحميل هذه الأنابيب في الدوار زاوية ثابتة والطرد المركزي في 356، 000 مرات G لمدة 2.5 ساعة في أربع درجات مئوية.
استمر في جمع الكسور العليا، وضبط كثافة الكسور السفلية، والطرد المركزي لكثافات الكسور التي تبلغ 1.02 و1.04 و1.06 و1.08 و1.1 و1.21 غرام لكل ملليلتر. للطرد النهائي فائق التركيز، الطرد المركزي في 513، 000 مرة G لمدة أربع ساعات في أربع درجات مئوية. تظهر هنا ملامح البروتين الدهني للأرانب التي تتغذى إما على نظام غذائي عادي أو نظام غذائي عالي الكوليسترول.
الأرانب هي الأعشاب، وبالتالي فإن البلازما TC، TG، ومستويات PL عموما أقل من تلك التي من البشر والفئران. في الأرانب العادية العادية التي تغذيها الحمية الغذائية، يتم توزيع TC بشكل رئيسي في HDL3 و LDL. في أنواع الأرانب البرية على نظام غذائي عادي القياسية, يتم توزيع 39٪ من البلازما TG في VLDLs, في حين أن 57٪ من PL البلازما الواردة في HDL3.
عندما تم تحدي الأرانب مع اتباع نظام غذائي عالي الكوليسترول ، فإنها سرعان ما وضعت فرط الكوليسترول. وقد تميزت ملامح البروتين الدهني بهم من قبل ارتفاع ملحوظ من VLDLs. سبعة كسور البروتين الدهني من الأرانب من النوع البري تغذية إما معيار عادي أو نظام غذائي عالي الكوليسترول تم تشغيلها على هلام بولياكريلاميد SDS وتصور مع تلطيخ مصرف البحرين المركزي.
على نظام غذائي عالي الكوليسترول، كانت محتويات ApoB-100 و ApoE في VLDLs وIDLs وLDLs مرتفعة بشكل ملحوظ. تم استخدام النشاف الغربي لمقارنة apolipoproteins وملامح lipoprotein من ثلاثة الأرانب hyperlipidemic مختلفة: ارتفاع الكوليسترول في النظام الغذائي تغذية الأرانب من نوع البرية، ApoE الأرانب بالضربة القاضية، وواتانابي هيريتوبل الأرانب Hyperlipidemic مع نقص مستقبلات LDL. يتميز ApoB التي تحتوي على جزيئات من الأرانب ذات النوع البري عالية الكوليسترول التي تغذيها بالنظام الغذائي بزيادة محتويات ApoB-100 و ApoE ، في حين أظهرت الأرانب خروج المغلوب ApoE زيادة ApoB-48 جنبا إلى جنب مع ظهور ApoA-1.
الأرانب Hyperlipidemic اتانابي هينيبلي هي نقص وراثيا في وظائف مستقبلات LDL، لذلك لوحظ زيادة ملحوظة من ApoB-100 في LDLs يرافقه انخفاض ApoA-1 في HDLs، على غرار المرضى فرط الكوليسترول في الدم الأسرة البشرية. استرداد العينة هو الأكثر أهمية في هذا الإجراء. لتقليل فقدان العينة، يجب على المرء أن يكون حريصا على جمع الكسر وحل تماما هطول اللزوج في الجزء السفلي.
بعد جمع سبعة كسور البروتين الدهني، يتطلب غسيل الكلى للفرز. وبمجرد اكتمال غسيل الكلى، عينات البروتينات الدهنية للتحليل باستخدام صفحة SDS، النشاف الغربي، ودراسة الخلايا. في الإعداد السريري، يفصل الطرد الفائق التركيز عادة البروتينات الدهنية إلى أربعة كسور.
يمكن أن يعزل الأسلوب الحالي سبعة كسور البروتينات الدهنية، والذي يوفر المزيد من التفاصيل من البروتينات الدهنية للتحقيق في فرط سليبيب الدم.
