يجمع هذا البروتوكول بين منهجية ذات صلة سريريا ونموذج أبحاث حيواني راسخ. وسوف يساعد في الإجابة على الأسئلة حول التطور السمعي والصقل والتغيرات الوظيفية في السمع بعد التلاعب الجيني. هذه التقنية غير جراحية ، لذلك لا تتطلب أي جراحة ويمكن دمجها مع تجارب إضافية.
أيضا ، يستغرق الأمر حوالي ساعة واحدة فقط للأداء. يمكن استخدام هذه الطريقة على أي نوع من أنواع الطيور الصغيرة. لذا فإن علم وظائف الأعضاء المقارن سهل نسبيا.
يمكن للدجاج ABR أيضا تقييم التأثير على السمع الوظيفي بعد التلاعب الجيني. ابدأ بالحصول على بيض دجاج مقرن أبيض مخصب بعد ذلك ، احتضن البويضة عند 38 درجة مئوية ورطوبة 50٪ لمدة 21 يوما قبل تاريخ الاختبار المطلوب.
بمجرد أن تفقس البيضة ، قم بوزن الحيوان عن طريق وضعه بلطف في قارب وزن كبير. بعد حقن التخدير ، ضع الحيوان مرة أخرى في الحاضنة. ثم تحقق مما إذا كانت الرقبة تعرج وقرصة إصبع الحيوان باستخدام الملقط.
كخطوة تالية ، حدد جنس الدجاج باستخدام ريش جناحه. في وقت لاحق ، ضع كريم مزيل الشعر مع قضيب طرف قطني على منطقة الرأس والرقبة ، خاصة بالقرب من فتحة الأذن للطائر. الآن استخدم مناديل كحولية من الأيزوبروبيل بنسبة 70٪ لمسح الريش وأي كريم مزيل للشعر متبقي والجلد على الرأس والرقبة.
أيضا ، تعقيم الأقطاب الكهربائية تحت الجلد والتحقيق المستقيمي باستخدام مسح الكحول الأيزوبروبيل 70 ٪. ضع الحيوان في غرفة عزل صوتي ومحمية كهربائيا ، مما يضمن أن البيئة لديها الحد الأدنى من الضوضاء الكهربائية والصوتية للحصول على أفضل التسجيلات. استخدم وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان.
الآن أدخل مسبار المستقيم وثبت رأس الحيوان في مكانه أو ضع المنقار على كائن لتجنب الحركة غير المرغوب فيها. بعد ذلك تأكد من أن غرفة التحكم في درجة الحرارة تحافظ على درجة حرارة الحيوان بين 37 و 41 درجة مئوية. استخدم ثلاثة أقطاب كهربائية لإبرة الفولاذ المقاوم للصدأ وكلوريد الفضة كأقطاب كهربائية مرجعية ونشطة ومشتركة.
ضع كل قطب كهربائي تحت الجلد من 2 إلى 3 ملليمترات في الرأس ، ولكن ليس عميقا بما يكفي لاختراق الجمجمة ، ثم قم بكز القطب من الجلد ، مما يعرض الطرف. لتسجيل قناة واحدة، ضع القطب النشط فوق الجمجمة عند خط الوسط بقدر ما يصل إلى قناة الأذن. ضع القطب المرجعي خلف الأذن حيث سيتم تسليم الحافز ، وضع القطب الأرضي خلف الأذن المقابلة في الرقبة.
الآن تحقق من مقاومة القطب الكهربائي. تأكد من أن مقاومة القطب الكهربائي الإجمالية لا تتجاوز خمسة كيلو أوم. أيضا ، حافظ على مقاومة القطب البيني أقل من ثلاثة كيلوغرامات أوم.
بالنسبة لتسجيل ABR ، اعتمادا على أجهزة وبرامج الاستحواذ ، تأكد من معايرة مستويات الصوت الصحيحة عبر ترددات التحفيز المستخدمة. الآن حرك جهاز محول الصوت نحو الأذن النشطة للحيوان وضعه على عمق ضحل يبلغ مليمترين في قناة الأذن. أخيرا ، تحقق من الحيوان أثناء الاختبار.
إذا بدت النتائج غير طبيعية أو غائبة، فقم بتغيير موضع محول الصوت في قناة الأذن. أولا ، افتح البرنامج للحصول على تسجيلات ABR. اضبط الحدود العليا والدنيا لرفض القطع الأثرية على حوالي 25 ميكروفولت ، بحيث يستبعد الحيوان أو الحركة أو الضوضاء أثناء الاجتياح هذا الاجتياح من التحليل.
اجمع ما لا يقل عن 1024 عملية مسح للحصول على استجابة متوسطة كبيرة يمكن القيام بها في تسجيلين من 512 عملية مسح لكل منهما. وهذا يضمن أن تكون الاستجابة محفزة وقابلة للتكرار. في إعدادات مكبر الصوت للبرنامج ، اضبط الكسب على 100،000 ، ومرشح التمرير المنخفض على 3،000 هرتز ، ومرشح التمرير العالي على 100 هرتز.
اضبط معدل عرض التحفيز بين 10 و 20 محفزا في الثانية ، والمدة الزمنية لتحفيز النقر على 100 ميكروثانية. بعد ذلك ، اضبط معدل أخذ العينات على 40 كيلوهرتز ، 25 ميكروثانية للحصول على أفضل بيانات الدقة واضبط استقطاب التحفيز على التناوب. في حالة تسجيل 512 عملية اجتياح، اجمع بين اختبارين منفصلين لإنشاء متوسط اكتساح 1024، واستمر في التسجيل بكثافة أقل وأقل حتى لا يمكن تحديد الإمكانات المستحثة.
خفض شدة التحفيز بخطوات من خمسة ديسيبل مستوى ضغط الصوت للعثور على أدنى كثافة تحفيز تثير استجابة مثيرة. تعريف عتبة ABR بأنها أدنى كثافة تحفيز تثير استجابة مثيرة يمكن اكتشافها. بعد القتل الرحيم وقطع رأس الحيوان والتجربة عن طريق تنظيف وسادة التدفئة ومسبار المستقيم وأقطاب كلوريد الفضة باستخدام مناديل كحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪ ، تأكد من حفظ جميع الآثار المكتسبة.
يمثل هذا الرقم النقرة ABR. زادت زمن انتقال ذروة الموجة الأولى بحوالي 0.3 مللي ثانية لكل انخفاض قدره 20 ديسيبل في شدة التحفيز. قدمت الموجة الأولى أيضا أكبر سعة ذروة وأدنى تباين في الكمون الذروة لجميع قمم شكل الموجة.
يوضح الرسم البياني النغمة التي أثارها انفجار ABR. وشوهدت أفضل استجابة عند 1000 هيرتز. يوضح الشكل أنه إذا لم يتم الحفاظ على درجة حرارة الجسم ، فإن وظائف كثافة الكمون في ABR متغيرة للغاية وغالبا ما تكون غير دقيقة.
يوضح الشكل أن ABRs المسجلة من الفقس الذي يقل عمره عن ثلاث ساعات ، والتي تحمل علامة P1 ، لها زمن انتقال ذروة طويل بشكل كبير وتقل سعات الذروة مقارنة بالفقس الأكبر سنا ، المسمى P2. يقارن الشكل بين 75 ديسيبل من آثار النقر على مستوى ضغط الصوت في نفس الحيوان مع مواضع قطب مرجعية مختلفة. حدثت سعة ذروة الموجة الثانية لوضع الخشاء مللي ثانية واحدة بعد ذروة الموجة الثانية لوضع الرقبة. من المحتمل أن يعكس هذا الفارق الزمني مواقع التوليد العصبي ABR بالنسبة لوضع القطب الكهربائي.
كانت الاستجابات بين الأذنين متشابهة مع تغييرات طفيفة في سعات الذروة على الأرجح بسبب وضع سماعة الأذن. إن الكمون للأذن اليسرى واليمنى المكافئة يدعم الوظيفة الصحية المتساوية لكل من الأذنين ونصفي الكرة المخية في الدجاج المفرخ. يمكن أن يميز وضع محول الصوت الصحيح بين النتائج الجيدة وغير الجيدة.
يجب أن يكون الدجاج ABR قويا مع نسبة إشارة إلى ضوضاء جيدة. يمكن تطبيق جميع الأسئلة التي تناولتها دراسات ABR في أنواع الطيور الأخرى على الدجاج. أيضا ، يمكن لأبحاث الفسيولوجيا الجزيئية في الدجاج الجنيني دمج هذا في منهجية الجسم الحي.
