Bu protokol, klinik olarak ilgili bir metodolojiyi köklü bir hayvan araştırma modeliyle birleştirir. İşitsel gelişim ve iyileştirme ve genetik manipülasyonu takiben işitmedeki fonksiyonel değişiklikler hakkındaki soruları cevaplamaya yardımcı olacaktır. Bu teknik noninvazivdir, bu nedenle ameliyat gerektirmez ve ek deneylerle birleştirilebilir.
Ayrıca, gerçekleştirmek sadece bir saat sürer. Bu yöntem herhangi bir küçük kuş türünde kullanılabilir. Bu yüzden karşılaştırmalı fizyoloji nispeten kolaydır.
Tavuk ABR, genetik manipülasyonu takiben fonksiyonel işitme üzerindeki etkisini de değerlendirebilir. Döllenmiş beyaz bacak boynuzlu tavuk yumurtası alarak başlayın. Daha sonra, yumurtayı istenen test tarihinden 21 gün önce 38 santigrat derecede ve% 50 nemde kuluçkaya yatırın.
Yumurta yumurtadan çıktıktan sonra, hayvanı yavaşça büyük bir tartım teknesine yerleştirerek tartın. Anestezi enjeksiyonundan sonra, hayvanı tekrar inkübatöre yerleştirin. Ardından boynun topallayıp gevşek olmadığını kontrol edin ve forseps kullanarak hayvanın ayak parmağını sıkıştırın.
Bir sonraki adım olarak, kanat tüylerini kullanarak tavuğun cinsiyetini belirleyin. Daha sonra, pamuklu uçlu bir aplikatör ile tüy dökücü kremi baş ve boyun bölgesine, özellikle de kuş için kulak açıklığının yakınında uygulayın. Şimdi tüyleri, kalan tüy dökücü kremleri ve baş ve boyundaki cildi silmek için% 70 izopropil alkollü mendil kullanın.
Ayrıca, subdermal elektrotları ve rektal probu% 70 izopropil alkollü mendil kullanarak sterilize edin. Hayvanı ses yalıtımlı ve elektrik korumalı bir odaya yerleştirin, böylece ortamın en iyi kayıtlar için minimum elektriksel ve akustik gürültüye sahip olmasını sağlayın. Hayvan vücut ısısını korumak için bir ısıtma yastığı kullanın.
Şimdi rektal probu yerleştirin ve hayvanın kafasını yerine sabitleyin veya istenmeyen hareketleri önlemek için gagayı bir nesneye yaslayın. Daha sonra sıcaklık kontrol odasının hayvanın sıcaklığını 37 ila 41 santigrat derece arasında tuttuğundan emin olun. Referans olarak üç paslanmaz çelik, gümüş klorür iğne elektrotu kullanın, aktif ve ortak toprak elektrotları.
Her elektrodu deri altı olarak kafaya iki ila üç milimetre yerleştirin, ancak kafatasına nüfuz edecek kadar derin değil ve ardından elektrodu deriden dışarı çıkararak ucu açığa çıkarın. Tek kanallı kayıt için, aktif elektrodu kafatasının üstüne, kulak kanalı kadar kaudal olan orta hatta yerleştirin. Referans elektrodunu, uyaranın verileceği kulağın arkasına yerleştirin ve zemin elektrodunu boyundaki kontralateral kulağın arkasına yerleştirin.
Şimdi elektrot empedansını kontrol edin. Genel elektrot empedansının beş kilo ohm'u geçmediğinden emin olun. Ayrıca, interelektrot empedansını üç kilo ohm'un altında tutun.
ABR kaydı için, edinme donanımına ve yazılımına bağlı olarak, kullanılan uyaran frekansları arasında doğru ses seviyelerini kalibre ettiğinizden emin olun. Şimdi ses dönüştürücü aparatını hayvanın aktif kulağına doğru hareket ettirin ve kulak kanalında iki milimetrelik sığ bir derinliğe yerleştirin. Son olarak, test sırasında hayvanı kontrol edin.
Sonuçlar anormal görünüyorsa veya yoksa, ses dönüştürücüyü kulak kanalında yeniden konumlandırın. İlk olarak, ABR kayıtlarını almak için yazılımı açın. Yapı reddetme üst ve alt sınırlarını yaklaşık 25 mikrovolta ayarlayın, böylece bir süpürme sırasında hayvan, hareket veya gürültü bu süpürmeyi analizden hariç tutacaktır.
Her biri 512 süpürme içeren iki kayıtta yapılabilecek büyük bir ortalama yanıt elde etmek için en az 1024 süpürme toplayın. Bu, yanıtın uyaranın uyandırılmasını ve tekrarlanabilir olmasını sağlar. Yazılımın amplifikatör ayarlarında, kazancı 100.000, düşük geçiş filtresini 3.000 Hertz ve yüksek geçiş filtresini 100 Hertz olarak ayarlayın.
Uyaran sunum hızını saniyede 10 ila 20 uyaran arasında ve tıklama uyarıcısının süresini 100 mikrosaniye olarak ayarlayın. Ardından, örnekleme hızını en iyi çözünürlük verileri için 40 kilohertz, 25 mikrosaniye olarak ayarlayın ve uyaran polarizasyonunu dönüşümlü olarak ayarlayın. 512 süpürme kaydediyorsanız, 1.024 süpürme ortalaması oluşturmak için iki ayrı testi birleştirin ve uyandırılan potansiyel artık tanımlanamayana kadar daha düşük ve daha düşük yoğunluklarda kaydetmeye devam edin.
Uyarılmış bir yanıt ortaya çıkaran en düşük uyaran yoğunluğunu bulmak için uyaran yoğunluğunu beş desibel ses basıncı seviyesinin adımlarıyla azaltın. ABR eşiğini, tespit edilebilir bir uyarılmış yanıt ortaya çıkaran en düşük uyaran yoğunluğu olarak tanımlayın. Isıtma yastığını, rektal probu ve gümüş klorür elektrotlarını% 70 izopropil alkol mendilleriyle temizleyerek hayvanı ve deneyi ötenazi ve kafasını kestikten sonra, elde edilen tüm izlerin kaydedildiğinden emin olun.
Bu rakam tıklama ABR'sini temsil eder. Dalga I tepe gecikmesi, uyaran yoğunluğundaki her 20 desibel azalma için yaklaşık 0,3 milisaniye artmıştır. Dalga I ayrıca tüm dalga formu zirvelerinin en büyük tepe genliğini ve en düşük tepe gecikme değişkenliğini sundu.
Grafik, ABR'yi uyandıran ton patlamasını göstermektedir. En iyi yanıt 1.000 Hertz'de görüldü. Şekil, vücut ısısı korunmazsa, ABR'nin gecikme yoğunluğu fonksiyonlarının oldukça değişken ve genellikle yanlış olduğunu göstermektedir.
Şekil, P1 olarak etiketlenen üç saatten daha eski yavrulardan kaydedilen ABR'lerin, P2 olarak etiketlenmiş yaşlı yavrulara kıyasla pik gecikme sürelerinin önemli ölçüde uzadığını ve pik genliklerinin azaldığını göstermektedir. Şekil, aynı hayvandaki 75 desibel ses basıncı seviyesi tıklama izlerini farklı referans elektrot yerleşimleriyle karşılaştırmaktadır. Mastoid yerleşimi için dalga II tepe genliği, boyun yerleşimi için dalga II zirvesinden bir milisaniye sonra meydana geldi. Bu zaman farkı muhtemelen elektrot yerleşimine göre ABR nöral üretim bölgelerini yansıtır.
İki kulak arasındaki tepkiler, muhtemelen kulaklık konumlandırması nedeniyle tepe genliklerindeki küçük değişikliklerle benzerdi. Sol ve sağ kulağın gecikmesinin eşdeğer olması, yavru tavukta hem kulakların hem de beyin sapı yarımkürelerinin eşit derecede sağlıklı işlevini destekler. Doğru ses dönüştürücü yerleşimi, iyi ve hiç sonuç vermemeyi ayırt edebilir.
Tavuk ABR, iyi bir sinyal-gürültü oranı ile sağlam olmalıdır. Diğer kuş türlerinde ABR çalışmaları ile ele alınan tüm sorular tavuğa uygulanabilir. Ayrıca, embriyonik tavukta moleküler fizyoloji araştırması bunu in vivo metodolojiyi içerebilir.
