حقنة ثابتة من نقطتين لنموذج إزالة الميالين البؤري الناجم عن الليسوفوسفاتيديل كولين في الفئران

نموذجنا وثيق الصلة بأمراض إزالة الميالين، وخاصة التصلب المتعدد. ويمكن أن يساهم في التقدم في الأبحاث ذات الصلة ذات الصلة سريريا. إنه بروتوكول مفصل يمكن أن يسبب بشكل مباشر إزالة الميالين الشديدة بسرعة وثبات في الفئران عن طريق الإجراء الجراحي.

أثناء تجربة هذه التقنية لأول مرة ، كن صبورا ، وتأكد من دقة الإحداثيات. ابدأ بتوصيل إبرة قياس 32 بحقنة سعة 5 ميكرولترات. سحب 5 ميكرولترات من محلول LPC لإعداد الحقن.

بعد ذلك ، تأكد من عمق تخدير الماوس من خلال عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم بينما يكون التنفس سلسا. ضع الماوس في الإطار المجسم، مع الجانب الظهري لأعلى، وقم بتأمين الرأس باستخدام مخروط الأنف ومشبك الأسنان. قم بإصلاح الماوس على الجهاز المجسمي باستخدام قضبان الأذن الثنائية.

تأكد من أن قضبان الأذن مستوية والرأس أفقي ومستقر. تطهير جلد الرأس عن طريق المسح باليودوفور. ثم استخدم المشرط لقطع شق صغير إلى حوالي 1.5 سم على طول خط الوسط لفروة الرأس لفضح الجمجمة.

امسح المهارة باستخدام قطعة قطن مغموسة في بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 1٪ حتى يتم الكشف عن البريجما واللامدا واليافوخ الخلفي. ضع المحقنة على الجهاز المجسم. تأكد من تحديد الموقع الأفقي لرأس الحيوان ، وتحديد موقع الجسم الثفني.

بمجرد تحديد موقع الحقن ، سجل الإحداثيات ، واصنع علامة بعلامة على الجمجمة. حفر بلطف الموقع المحدد مع حفر الجمجمة. احرص على تجنب أي نزيف.

حرك الإبرة ببطء إلى الإحداثيات المحددة. للحث على إزالة الميالين من الجسم الثفني ، حقن 2 ميكرولتر من محلول LPC في كل موقع حقن بمعدل 0.4 ميكرولتر في الدقيقة. بعد الحقن ، احتفظ بالإبرة في كل موقع لمدة 10 دقائق إضافية.

أخيرا ، قم بخياطة الجلد بخياطة 4-0 ، وانتظر حتى يستيقظ الحيوان في غضون 10 دقائق. تظهر الصورة التمثيلية اكتشاف جحافل المادة البيضاء عبر تلطيخ Luxol الأزرق السريع. من النتائج ، يمكن رؤية إزالة الميالين المستقرة من الجسم الثفني في 10 و 28 يوما بعد الحقن.

يظهر هنا التقدير الكمي لمنطقة إزالة الميالين في نقاط زمنية مختلفة. من خلال تلطيخ التألق المناعي للبروتين الأساسي المتحلل للمايلين ، لوحظت زيادة ملحوظة في dMBP في المجموعة التي تم حقنها بواسطة LPC في 10 أيام بعد الحقن ، والتي تمثل فقدان المايلين في الجسم الثفني. أظهر تحليل اللطخة الغربية لبروتين المايلين الأساسي ، أو MBP ، فقدانا كبيرا ل MBP بعد حقن LPC.

تم استخدام بيتا أكتين كعنصر تحكم في التحميل لقياس التعبير الأساسي. تؤكد صور المجهر الإلكتروني البنية الفائقة النخاعية في الجسم الثفني لمجموعة صورية ومجموعة حقن LPC. GST-pi هو علامة على خلية سلائف oligodendrocyte ، أو OPC ، نضج التمايز.

بعد 10 أيام من حقن LPC ، انخفض GST-pi مقارنة بالمجموعة الوهمية. في الوقت نفسه ، يمكن أن تنعكس القدرة على انتشار الخلايا قليلة التغصن من خلال نسبة تكاثر الخلايا قليلة التغصن وإجمالي خلايا سلالة الخلايا قليلة التغصن. تمثل النسبة الأعلى المزيد من انتشار الخلايا قليلة التغصن بعد 10 أيام من الحقن.

تظهر الصور التمثيلية مسار سباحة الفئران في كل مجموعة ، في وجود المنصة وبعد إزالة المنصة. تشير النتائج إلى أن الذاكرة المكانية للفئران المزيلة للميالين ضعيفة بشكل كبير في نموذج حقن LPC المكون من نقطتين. أثناء محاولة هذا الإجراء ، تأكد من دقة معدل الحقن ، واحتفظ بالإبرة في كل موقع لمدة 10 دقائق إضافية.