Notre modèle est très pertinent pour les maladies de démyélinisation, en particulier la sclérose en plaques. Et cela peut contribuer à l’avancement de la recherche cliniquement pertinente connexe. C’est un protocole détaillé qui pourrait directement causer une démyélinisation sévère rapidement et de manière stable chez la souris par intervention chirurgicale.
Lorsque vous essayez cette technique pour la première fois, soyez patient et assurez-vous que les coordonnées sont précises. Commencez par connecter une aiguille de calibre 32 à une seringue de 5 microlitres. Retirer 5 microlitres de solution LPC pour la préparation de l’injection.
Ensuite, confirmez la profondeur de l’anesthésie de la souris par l’absence de réflexe de pincement des orteils pendant que la respiration est douce. Placez la souris dans le cadre stéréotaxique avec la face dorsale vers le haut et fixez la tête avec un cône nasal et une pince dentaire. Fixez la souris à l’appareil stéréotaxique avec des barres d’oreille bilatérales.
Assurez-vous que les barres d’oreille sont de niveau et que la tête est horizontale et stable. Désinfectez la peau de la tête en essuyant avec de l’iodophor. Ensuite, utilisez un scalpel pour couper une petite incision à environ 1,5 centimètre le long de la ligne médiane du cuir chevelu pour exposer le crâne.
Essuyez la compétence avec un coton-tige trempé dans du peroxyde d’hydrogène à 1% jusqu’à ce que le bregma, le lambda et la fontanelle postérieure soient exposés. Placez la seringue sur l’appareil stéréotaxique. Assurez-vous du positionnement horizontal de la tête de l’animal et localisez le corps calleux.
Une fois le site d’injection déterminé, notez les coordonnées et faites une marque avec un marqueur sur le crâne. Percez doucement le site marqué avec une perceuse à crâne. Prenez soin d’éviter tout saignement.
Déplacez lentement l’aiguille jusqu’aux coordonnées données. Pour induire la démyélinisation du corps calleux, injecter 2 microlitres de solution de PLC à chaque site d’injection à raison de 0,4 microlitre par minute. Après l’injection, gardez l’aiguille dans chaque site pendant 10 minutes supplémentaires.
Enfin, suturez la peau avec une suture 4-0 et attendez que l’animal se réveille dans les 10 minutes. L’image représentative montre la détection des légions de substance blanche via la coloration bleue rapide Luxol. D’après les résultats, une démyélinisation stable du corps calleux peut être observée 10 et 28 jours après l’injection.
La quantification de la zone de démyélinisation à différents moments est présentée ici. Grâce à la coloration par immunofluorescence de la protéine basique dégradée de la myéline, une augmentation remarquable du dMBP a été observée dans le groupe injecté par LPC 10 jours après l’injection, ce qui représente une perte de myéline dans le corps calleux. L’analyse par transfert Western de l’expression de la protéine basique de la myéline, ou MBP, a montré une perte significative de MBP après injection de LPC.
La bêta-actine a été utilisée comme contrôle de charge pour mesurer l’expression de base. Les images de microscopie électronique confirment l’ultrastructure myélinisée dans le corps calleux du groupe simulé et du groupe injecté par LPC. GST-pi est le marqueur de la maturation de la différenciation des cellules précurseurs d’oligodendrocytes, ou OPC.
Après 10 jours d’injection de PLC, le GST-pi a diminué par rapport au groupe fictif. Dans le même temps, la capacité de prolifération des oligodendrocytes peut être reflétée par le rapport entre la prolifération des oligodendrocytes et le nombre total de cellules de la lignée oligodendrocytes. Le rapport plus élevé représente une plus grande prolifération d’oligodendrocytes après 10 jours après l’injection.
Les images représentatives montrent le parcours de nage des souris dans chaque groupe, en présence de la plate-forme et après avoir retiré la plate-forme. Les résultats suggèrent que la mémoire spatiale des souris démyélinisées est significativement altérée dans le modèle d’injection LPC à deux points. Tout en essayant cette procédure, assurez-vous que le taux d’injection est précis et gardez l’aiguille dans chaque site pendant 10 minutes supplémentaires.
