私たちのモデルは、脱髄疾患、特に多発性硬化症に非常に関連しています。また、関連する臨床的に関連する研究の進展に貢献することができます。これは、外科的処置によってマウスに迅速かつ安定して重度の脱髄を直接引き起こす可能性のある詳細なプロトコルです。
この手法を初めて試すときは、辛抱強く、座標が正確であることを確認してください。32ゲージの針を5マイクロリットルの注射器に接続することから始めます。注射の準備のために5マイクロリットルのLPC溶液を回収する。
次に、呼吸が滑らかな状態での足指挟み反射の欠如によりマウスの麻酔深度を確認します。背側を上にしてマウスを脳定位固定装置フレームに配置し、ノーズコーンと歯のクランプで頭を固定します。マウスを両側のイヤーバーで固定装置に固定します。
イヤーバーが水平で、頭が水平で安定していることを確認してください。ヨードフォアで拭いて頭の皮膚を消毒します。次にメスを使用して、頭皮の正中線に沿って約1.5センチメートルに小さな切開を切り、頭蓋骨を露出させます。
ブレグマ、ラムダ、および後部泉門が露出するまで、1%過酸化水素に浸した綿棒でスキルを拭きます。注射器を定位固定装置に置きます。動物の頭の水平位置を確認し、脳梁を見つけます。
注射部位が決まったら、座標を記録し、頭蓋骨にマーカーで印を付けます。マークされた部位を頭蓋骨ドリルでそっと開けます。出血しないように注意してください。
針を指定された座標までゆっくりと動かします。脳梁脱髄を誘発するには、各注射部位に毎分0.4マイクロリットルの速度で2マイクロリットルのLPC溶液を注入します。注射後、針をさらに10分間各部位に保ちます。
最後に、4-0縫合糸で皮膚を縫合し、動物が10分以内に目覚めるのを待ちます。代表的な画像は、ルクソール高速青色染色による白質軍団の検出を示しています。この結果から、注射後10日目および28日目に脳梁の安定した脱髄が見られる。
異なる時点での脱髄領域の定量化をここに示す。免疫蛍光染色により、分解されたミエリン塩基性タンパク質は、注射後10日目にLPC注射群でdMBPの顕著な増加が観察され、これは脳梁のミエリン喪失を表しています。ミエリン塩基性タンパク質、またはMBPのウエスタンブロット分析は、発現がLPCの注射後にMBPの有意な喪失を示した。
ベータアクチンは、ベースライン発現を測定するための負荷対照として使用されました。電子顕微鏡画像は、偽群とLPC注入群の脳梁における有髄超微細構造を確認します。GST-piは、希突起膠細胞前駆細胞(OPC)の分化成熟のマーカーです。
LPC注射の10日後、GST-piは偽群と比較して減少した。同時に、希突起膠細胞の増殖能力は、増殖する希突起膠細胞と全希突起膠細胞系統細胞の比率によって反映され得る。より高い比率は、注射後10日後の希突起膠細胞のより多くの増殖を表す。
代表的な画像は、各グループ、プラットフォームの存在下、およびプラットフォームを取り外した後のマウスの水泳経路を示しています。結果は、脱髄マウスの空間記憶が2点LPC注射モデルで著しく損なわれていることを示唆しています。この手順を試みるときは、注入速度が正確であることを確認し、針をさらに10分間各部位に保持します。
