Modelimiz demiyelinizasyon hastalıkları, özellikle multipl skleroz ile oldukça ilgilidir. Ve klinik olarak ilgili araştırmaların ilerlemesine katkıda bulunabilir. Cerrahi prosedürle farelerde hızlı ve istikrarlı bir şekilde doğrudan ciddi demiyelinizasyona neden olabilecek ayrıntılı bir protokoldür.
Bu tekniği ilk kez denerken, sabırlı olun ve koordinatların doğru olduğundan emin olun. 32 gauge'lik bir iğneyi 5 mikrolitrelik bir şırıngaya bağlayarak başlayın. Enjeksiyonun hazırlanması için 5 mikrolitre LPC çözeltisi çekin.
Daha sonra, solunum pürüzsüzken ayak parmağı sıkışma refleksinin eksikliği ile farenin anestezi derinliğini onaylayın. Fareyi stereotaksik çerçeveye sırt tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve kafayı bir burun konisi ve diş kelepçesi ile sabitleyin. Fareyi iki taraflı kulak çubuklarıyla stereotaksik aparata sabitleyin.
Kulak çubuklarının düz olduğundan ve başın yatay ve sabit olduğundan emin olun. İyodofor ile silerek baş derisini dezenfekte edin. Ardından, kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinin orta çizgisi boyunca yaklaşık 1,5 santimetreye kadar küçük bir kesi kesmek için neşter kullanın.
Bregma, lambda ve posterior fontanelle açığa çıkana kadar% 1 hidrojen peroksit içine batırılmış bir pamuklu çubukla beceriyi silin. Şırıngayı stereotaksik aparata yerleştirin. Hayvanın başının yatay olarak konumlandırıldığından emin olun ve korpus kallozumu bulun.
Enjeksiyon bölgesi belirlendikten sonra, koordinatları kaydedin ve kafatası üzerinde bir işaretleyici ile bir işaret yapın. İşaretli bölgeyi bir kafatası matkabı ile nazikçe delin. Herhangi bir kanamayı önlemeye özen gösterin.
İğneyi yavaşça verilen koordinatlara hareket ettirin. Korpus kallozum demiyelinizasyonunu indüklemek için, her enjeksiyon bölgesine dakikada 0.4 mikrolitre hızında 2 mikrolitre LPC çözeltisi enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun.
Son olarak, cildi 4-0 dikişle dikin ve hayvanın 10 dakika içinde uyanmasını bekleyin. Temsili görüntü, Luxol hızlı mavi boyama yoluyla beyaz madde lejyonlarının tespitini göstermektedir. Sonuçlardan, korpus kallozumun stabil demiyelinizasyonu enjeksiyondan 10 ve 28 gün sonra görülebilir.
Demiyelinasyon alanının farklı zaman noktalarında nicelleştirilmesi burada gösterilmiştir. İmmünofloresan boyama yoluyla bozulmuş miyelin bazik proteini, LPC enjekte edilen grupta, enjeksiyondan 10 gün sonra kayda değer bir dMBP artışı gözlenmiştir, bu da korpus kallozumda miyelin kaybını temsil eder. Miyelin bazik proteininin veya MBP'nin batı leke analizi, LPC enjeksiyonundan sonra önemli miktarda MBP kaybı gösterdi.
Beta-aktin, temel ifadeyi ölçmek için yükleme kontrolü olarak kullanıldı. Elektron mikroskobu görüntüleri, sahte grup ve LPC enjekte edilen grubun korpus kallozumundaki miyelinli ultrayapıyı doğrulamaktadır. GST-pi, oligodendrosit öncü hücresinin veya OPC, farklılaşma olgunlaşmasının belirtecidir.
10 günlük LPC enjeksiyonundan sonra, GST-pi sahte gruba kıyasla azaldı. Aynı zamanda, oligodendrositlerin proliferasyon kabiliyeti, oligodendrositlerin çoğalma oranı ve toplam oligodendrosit soy hücreleri ile yansıtılabilir. Daha yüksek oran, enjeksiyondan 10 gün sonra oligodendrositlerin daha fazla çoğalmasını temsil eder.
Temsili görüntüler, farelerin yüzme yolunu her grupta, platformun varlığında ve platformu kaldırdıktan sonra göstermektedir. Sonuçlar, iki noktalı LPC enjeksiyon modelinde demiyelinli farelerin uzamsal hafızasının önemli ölçüde bozulduğunu göstermektedir. Bu prosedürü denerken, enjeksiyon hızının doğru olduğundan emin olun ve iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun.
